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PRRSV-2 NSP7间接ELISA检测方法的建立
1
作者 赵孟孟 沙惠阳 +1 位作者 张航 黄良宗 《佛山科学技术学院学报（自然科学版）》 CAS 2022年第3期51-56,共6页
为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒-2(PRRSV-2)抗体检测方法,试验采用原核表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7蛋白,并以该蛋白为基础建立间接ELISA方法,对该方法的特异性、重复性、敏感性以及与爱德士商品化试剂盒符合率进行比较。试验结果表... 为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒-2(PRRSV-2)抗体检测方法,试验采用原核表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7蛋白,并以该蛋白为基础建立间接ELISA方法,对该方法的特异性、重复性、敏感性以及与爱德士商品化试剂盒符合率进行比较。试验结果表明,PRRSV-2 NSP7蛋白表达良好,可获得可溶蛋白,建立NSP7间接ELISA方法特异性、重复性、敏感性良好,与爱德士商品化试剂盒的符合率96.2%,说明PRRSV-2 NSP7间接ELISA检测方法建立成功。 展开更多
关键词 prrsv-2 间接ELISA NSP7 血清 爱德士
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核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制中的作用
2
作者 殷杰 赵永祥 +3 位作者 薛江东 刘锴 李彬 马德慧 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期686-693,共8页
为研究宿主细胞核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制中的作用,本研究通过荧光定量PCR和Western-blotting等方法,检测了PRRSV感染对Marc-145细胞中RPL12表达... 为研究宿主细胞核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制中的作用,本研究通过荧光定量PCR和Western-blotting等方法,检测了PRRSV感染对Marc-145细胞中RPL12表达的影响,以及过表达或敲减RPL12对PRRSV复制的影响。结果显示,PRRSV感染可上调Marc-145细胞中RPL12基因的表达。过表达RPL12可促进PRRSV的复制,而敲减RPL12可抑制PRRSV的复制。通过免疫共沉淀和共聚焦显微镜检测,进一步研究发现RPL12蛋白与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,并共定位于细胞质中。本研究首次发现了宿主蛋白RPL12能够促进PRRSV复制,并与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,为进一步研究PRRSV的感染与复制机制以及与宿主的相互作用提供了新的切入点,为抗病毒药物的研发提供了有益的探索。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 核糖体蛋白L12(RPL12) prrsv GP2b蛋白
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高致病性PRRSV SC-JX01株Nsp2基因的序列分析和抗原表位预测 被引量：1
3
作者 郭杨 林华 +1 位作者 郭宇飞 郭万柱 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第4期10-13,共4页
将扩增SC-JX01株得到的Nsp2基因cDNA片段克隆于pMD-T载体中。提取pMD-Nsp2质粒,测序后利用DNAStar软件进行序列分析。结果表明,SC-JX01株Nsp2基因与GenBank已发表的高致病性PRRSV Nsp2基因序列的相似性为98.1%~99.1%,氨基酸的相似性为95... 将扩增SC-JX01株得到的Nsp2基因cDNA片段克隆于pMD-T载体中。提取pMD-Nsp2质粒,测序后利用DNAStar软件进行序列分析。结果表明,SC-JX01株Nsp2基因与GenBank已发表的高致病性PRRSV Nsp2基因序列的相似性为98.1%~99.1%,氨基酸的相似性为95.9%~98.0%,具有相同的30个氨基酸缺失。本研究表明,SC-JX01株Nsp2基因与分离自不同地区高热病毒株的Nsp2基因序列具有相同的缺失。由于SC-JX01株的Nsp2基因存在氨基酸的缺失,与VR2332株比较,其亲水性、抗原指数均发生了大的变化。 展开更多
关键词 高致病性prrsv NSP2基因 序列分析
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一株Nsp2蛋白自然缺失123个氨基酸的PRRSV分离和鉴定 被引量：15
4
作者 韦莹 洪绍锋 +6 位作者 覃艳然 黄加滨 林思远 韦苗苗 陈樱 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2015年第10期34-38,共5页
通过RT-PCR方法检测到一份猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性肺组织病料。将该病料研磨、过滤后感染Marc-145细胞,连续传代都能产生明显的细胞病变。为鉴定细胞病变是否由PRRSV引起,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法成功的检测到了PRRS... 通过RT-PCR方法检测到一份猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性肺组织病料。将该病料研磨、过滤后感染Marc-145细胞,连续传代都能产生明显的细胞病变。为鉴定细胞病变是否由PRRSV引起,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法成功的检测到了PRRSV基因。同时用间接免疫荧光方法证实了感染的细胞内有PRRSV N蛋白的表达。将成功分离的毒株命名为GXYL1403株。对分离株的ORF5基因和Nsp2高变区进行扩增、克隆和遗传进化分析,结果发现该毒株Nsp2高变区与NCBI登录的参考序列VR-2332氨基酸同源性为68.6%,JXA1的同源性为90.8%。通过ORF5遗传进化分析该分毒株为北美型PRRSV,且与高致病性PRRSV分布在同一个小分支上。Nsp2序列对比显示该分离株Nsp2蛋白含有高致病性PRRSV特异的1+29个氨基酸的缺失。特别的是,在缺失29个氨基酸区域的上游,含有连续20个氨基酸缺失,在下游更出现了连续73个氨基酸的缺失。该PRRSV毒株的分离和Nsp2蛋白部分序列的缺失鉴定,为下一步研究Nsp2部分氨基酸缺失对病毒生物学特性影响奠定了基础。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离和鉴定 NSP2基因 氨基酸缺失
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猪IL-2真核表达质粒构建及对PRRSV-ORF5基因疫苗免疫佐剂作用的研究 被引量：7
5
作者 希尼尼根 程安春 +7 位作者 汪铭书 陈希文 豆文波 李雪梅 刘伍梅 张平英 刘菲 陈孝跃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1003-1008,共6页
本研究应用真核表达载体pcDNA3.1(+)和猪白细胞介素2(IL-2)基因成功构建了IL-2的真核表达质粒(pcDNA-IL-2),探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)免疫猪的增强作用。经间接EL... 本研究应用真核表达载体pcDNA3.1(+)和猪白细胞介素2(IL-2)基因成功构建了IL-2的真核表达质粒(pcDNA-IL-2),探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)免疫猪的增强作用。经间接ELISA法、MTT比色法及流式细胞仪分别对pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪、pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪、pcDNA3.1(+)空载体和灭菌水免疫对照猪的血清抗PRRSV抗体IgG、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4+和CD8+细胞比例进行检测,结果表明pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪的IgG含量、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4+和CD8+细胞比例与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪相比有显著差异(P<0.05)。说明pcDNA-IL-2能显著增强pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫猪的体液和细胞免疫应答,可作为PRRSV基因疫苗的良好佐剂。 展开更多
关键词 IL-2 pcDNA-prrsv-SC2-ORF5基因疫苗 免疫
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三联PCR诊断猪3种繁殖障碍性疾病的方法研究 被引量：1
6
作者 曹洪志 颜其贵 李成贤 《四川畜牧兽医》 2010年第7期20-22,共3页
本试验建立了一种三联PCR方法,可以同时检测猪伪狂犬病、蓝耳病和猪圆环病毒2型感染。利用该方法对来自26个发病猪场的30个病料进行了检测,检测结果再与单联PCR方法检测结果对比,得出两者平均符合率为93%。表明该方法是一种高度敏感、... 本试验建立了一种三联PCR方法,可以同时检测猪伪狂犬病、蓝耳病和猪圆环病毒2型感染。利用该方法对来自26个发病猪场的30个病料进行了检测,检测结果再与单联PCR方法检测结果对比,得出两者平均符合率为93%。表明该方法是一种高度敏感、特异性强的检测方法,可以运用于临床诊断。 展开更多
关键词 猪 PRV、prrsv和PCV2 三联PCR诊断
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一株湖北HP-PRRSV分离株nsp2基因遗传变异分析
7
作者 陈盛楠 陈奎蓉 +3 位作者 赵雯娟 杨永磊 赵一苹 曹素芳 《现代牧业》 2018年第3期1-8,共8页
为了解湖北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况和分子流行病学情况,从湖北地区某猪场采集疑似病料进行处理,接种Marc-145细胞,待细胞发生病变后收获病毒,提取病毒总RNA,应用RT-PCR法对PRRSV nsp2部分基因进行扩增,经序列... 为了解湖北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况和分子流行病学情况,从湖北地区某猪场采集疑似病料进行处理,接种Marc-145细胞,待细胞发生病变后收获病毒,提取病毒总RNA,应用RT-PCR法对PRRSV nsp2部分基因进行扩增,经序列测定,并与美洲株VR-2332、欧洲株Lelystad virus及国内各PRRSV分离株进行核苷酸及其推导的氨基酸进行同源性比较,并绘制系统进化树。结果表明,经RT-PCR扩增获得了PRRSV湖北分离株(命名为HDZZ1)的nsp2基因,核苷酸序列分析显示,获得的nsp2核苷酸与VR-2332的同源性为77. 7%,与Lelystad virus的同源性为44. 3%。其氨基酸与VR-2332的同源性为64. 58%,与Lelystad virus的同源性为13. 93%。证明所获得PRRSV仍为美洲型。与我国分离的高致病性PRRSV毒株07BJ、BJ0708、GD、GDYC、HEB1、Henan-1、HN-HW、HPBEDV、HUB1、HUN4、JXA1、SX-1、SX2009核苷酸同源性高达97. 3%~98. 8%,氨基酸同源性为96. 40%~98. 8%,氨基酸序列分析结果显示,Nsp2蛋白在222位和274-302位两处出现了30个氨基酸的不连续缺失,其Nsp2蛋白的抗原表位发生了改变。系统发生树结果表明,HDZZ1株与高致病性PRRSV毒株位于同一大分支中,与欧洲代表株(Lv)、美国NADC30株和国内NADC30-like HNjz15株处于不同分支中。由此断定,HDZZ1毒株为高致病性PRRSV毒株。 展开更多
关键词 prrsv NSP2基因 遗传变异分析
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含CpG序列PRRSV SD2 E基因真核表达载体质粒构建及表达 被引量：1
8
作者 温建新 李俊 +6 位作者 周顺 任慧英 刘文华 邹玲 徐文 牛钟相 王金宝 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期1-6,共6页
为了提高猪生殖与呼吸综合征病毒山东株(PRRSV SD2株)基因免疫的效果,将PRRSV SD2 E基因插入哺乳动物表达载体PVAX1中,构建出PVAX1-E质粒。再将已筛选出的CpG-ODN序列通过在其两端的粘性酶切末端定向插入含PVAX 1-E的真核表达载体,构建... 为了提高猪生殖与呼吸综合征病毒山东株(PRRSV SD2株)基因免疫的效果,将PRRSV SD2 E基因插入哺乳动物表达载体PVAX1中,构建出PVAX1-E质粒。再将已筛选出的CpG-ODN序列通过在其两端的粘性酶切末端定向插入含PVAX 1-E的真核表达载体,构建含CpG基因序列真核重组表达质粒CpG-pVAX 1-E。将重组质粒转染COS-7细胞,经RT-PCR检测E基因mRNA的转录和间接免疫荧光试验(IFA)证实:CpG-pVAX 1-E可表达PRRSV GP5蛋白。试验结果为进一步研究PRRSV SD2 ORF5动物免疫反应奠定基础。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒山东SD2株 E基因 真核表达载体 瞬时表达
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PCV-2 ORF2和PRRSV GP5双基因共表达重组腺病毒的构建及小鼠免疫试验
9
作者 林初文 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第4期82-87,共6页
为构建猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5双基因共表达重组腺病毒,将扩增的ORF2基因和GP5基因通过IRES元件串联,构建重组腺病毒穿梭质粒。然后用PmeⅠ酶切穿梭质粒,使其线性化,将线性化质粒转化pAdeasy-1的BJ... 为构建猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5双基因共表达重组腺病毒,将扩增的ORF2基因和GP5基因通过IRES元件串联,构建重组腺病毒穿梭质粒。然后用PmeⅠ酶切穿梭质粒,使其线性化,将线性化质粒转化pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,同源重组后筛选重组腺病毒质粒,经PacⅠ酶切后转染293A细胞进行包装,获得重组腺病毒。PCR鉴定表明重组腺病毒含有ORF2和GP5基因,Western blot检测结果表明ORF2基因和GP5基因在293A细胞内获得表达。重组腺病毒经293A细胞连续传30代,TCID50稳定为10-9.0/mL。初步动物免疫试验结果表明,该重组腺病毒能够刺激机体分别产生PCV-2和PRRSV的特异性抗体免疫应答反应。该重组腺病毒可以作为PCV-2与PRRSV二联基因工程疫苗研究的候选毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 重组腺病毒 免疫应答
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