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马尾松EST-SSR PCR体系的优化 被引量:11
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作者 邵俊培 李志辉 +3 位作者 杨模华 黄丽群 洪永辉 黄以法 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期159-163,共5页
用单因素法研究马尾松EST-SSR PCR体系中各成分及退火温度对扩增结果的影响。结果显示优化后的反应体系为:2μL 10×Buffer(Mg2+Free),30 ng模板DNA,0.187 5 mmol/L-1 dNTPs,3.75 mmol·L-1 Mg2+,8 pmol引物,1.0 U Taq DNA聚合... 用单因素法研究马尾松EST-SSR PCR体系中各成分及退火温度对扩增结果的影响。结果显示优化后的反应体系为:2μL 10×Buffer(Mg2+Free),30 ng模板DNA,0.187 5 mmol/L-1 dNTPs,3.75 mmol·L-1 Mg2+,8 pmol引物,1.0 U Taq DNA聚合酶,加水至20μL。退火温度为56℃。并用21个马尾松DNA检验这一优化体系。检测试验表明,优化后的EST-SSR PCR反应体系稳定、可靠、可重复性强。 展开更多
关键词 马尾松 EST-SSR分子标记 单因素法 pcr体系
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CYP2C19基因多态性PCR扩增体系的正交优化与验证 被引量:3
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作者 王梅 赵晨迪 +3 位作者 胡忠良 廖忠意 黄江 吴敬杰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1990-1996,共7页
本实验通过建立CYP2C19*2、*3和*17基因多态性PCR反应体系和条件,筛选出4μL体系中各因素最佳水平。采用SNaPshot技术对CYP2C19基因3个SNP位点*2、*3和*17同时进行复合扩增检测,利用L9(34)正交实验设计,对影响PCR反应体系和条件的3个因... 本实验通过建立CYP2C19*2、*3和*17基因多态性PCR反应体系和条件,筛选出4μL体系中各因素最佳水平。采用SNaPshot技术对CYP2C19基因3个SNP位点*2、*3和*17同时进行复合扩增检测,利用L9(34)正交实验设计,对影响PCR反应体系和条件的3个因素(PCR Mix, Taq DNA聚合酶,循环次数)在3个水平上进行优化,结果采用综合评分法和极差分析法进行分析。用3组已知样本对正交优化所得条件进行重复性和稳定性验证。结果表明CYP2C19*2、*3和*17基因PCR扩增体系的影响因素依次为:PCR Mix>循环数>Taq DNA聚合酶。最佳反应体系为PCR Mix 2.0μL、Taq DNA聚合酶0.2μL、循环次数32次。3组样本验证效果满意。优化的CYP2C19*2、*3和*17基因PCR反应体系稳定性高,重复性和经济性较好,为该基因多态性的大规模调查奠定了基础。 展开更多
关键词 正交设计 CYP2C19 pcr体系 体系优化 基因多态性 SNAPSHOT
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哈蟆油快速鉴定的开发与应用 被引量:2
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作者 李亚茹 孙淼 +4 位作者 刘琳 艾金霞 李明成 高丽君 孙丽媛 《中药材》 CAS 北大核心 2022年第3期555-560,共6页
目的:构建哈蟆油药材真伪可视化鉴定的方法,尝试解决哈蟆油药材的鉴别难题。方法:根据改良SDS法,提取哈蟆油DNA。根据GenBank下载中国林蛙基因序列,设计并筛选出特异性最佳的引物;构建蛙类通用引物与特异性引物的PCR双重体系;利用荧光... 目的:构建哈蟆油药材真伪可视化鉴定的方法,尝试解决哈蟆油药材的鉴别难题。方法:根据改良SDS法,提取哈蟆油DNA。根据GenBank下载中国林蛙基因序列,设计并筛选出特异性最佳的引物;构建蛙类通用引物与特异性引物的PCR双重体系;利用荧光素及生物素标记特异性引物,评价试纸条可视化检测核酸产物的可行性。结果:成功设计并筛选出哈蟆油特异性引物,构建了双重PCR体系。利用标记成功的特异性引物成功构建了核酸产物可视化试纸条,在10 min左右可观察检测结果。通过大量实验样本验证了该种方法的特异性及稳定性。结论:该研究利用核酸产物试纸条进行哈蟆油药材的真伪鉴定,为哈蟆油的快速鉴定提供新的思路和新的方法,同时也具有较高的推广和应用价值。 展开更多
关键词 哈蟆油 改良SDS法 pcr体系 检测试纸条
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N基因特异性SSR标记筛选及晒烟对烟草花叶病毒病抗性鉴定 被引量:2
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作者 冯月 陈爽 +3 位作者 朴世领 金哲 王家川 李久道 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期50-57,共8页
为早期鉴定晒烟TMV抗性,寻找抗TMV优良品种,试验以"吉烟九号"DNA为模板,选用1对N基因特异性引物,采用25μL PCR反应体系,对影响N基因的SSR-PCR反应体系的主要因子进行单因素优化,用所优化的体系对7对N基因特异性引物和25个烟... 为早期鉴定晒烟TMV抗性,寻找抗TMV优良品种,试验以"吉烟九号"DNA为模板,选用1对N基因特异性引物,采用25μL PCR反应体系,对影响N基因的SSR-PCR反应体系的主要因子进行单因素优化,用所优化的体系对7对N基因特异性引物和25个烟草品种进行SSR-PCR扩增,并结合25个烟草品种的人工接种抗性鉴定结果,验证体系的稳定性和可靠性。试验结果表明:烟草N基因SSR-PCR最适反应条件为25μL体系中含20 ng/μL模板DNA,0.20μmol/L引物,1.5 mmol/L Mg2+,0.20 mmol/Ld NTPs,1.0 U Taq酶。由分子标记鉴定和人工鉴定结果可知,凡能扩增出特异性条带的品种,其人工抗性鉴定为TMV免疫。由此可见,N基因分子标记抗性鉴定与人工接种鉴定结果吻合,说明SSR分子标记鉴定N基因控制的烟草TMV抗性方法科学可靠,可以作为早期鉴定TMV抗性的有效辅助手段。 展开更多
关键词 晒烟 烟草花叶病毒 分子标记 pcr体系 人工接种
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小麦高分子量谷蛋白14亚基基因的PCR体系及原核表达研究 被引量:1
5
作者 金伟波 吴方丽 郭蔼光 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期45-50,共6页
小麦高分子量谷蛋白14亚基(HMW-GS1Bx14)被认为可能对面团加工品质有很大贡献的亚基.为了验证其功能,本研究欲通过PCR方法扩增14亚基基因,并使其在大肠杆菌中大量表达,为下一步用掺粉实验验证其功能奠定基础.但是由于HMW-GS1Bx14基因由2... 小麦高分子量谷蛋白14亚基(HMW-GS1Bx14)被认为可能对面团加工品质有很大贡献的亚基.为了验证其功能,本研究欲通过PCR方法扩增14亚基基因,并使其在大肠杆菌中大量表达,为下一步用掺粉实验验证其功能奠定基础.但是由于HMW-GS1Bx14基因由2388bp个碱基组成,GC含量较高,并且在基因中包含约1.6kb的重复区,所有这些都使常规PCR难以成功扩增出HMW-GS1Bx14基因.本研究采取以下三种措施①设计一对高Tm值的特异引物;②采用二段法PCR反应程序;③改良PCR反应的缓冲体系、添加有机溶剂(DMSO,甜菜碱等)和Taq酶保护剂(BSA等);最后成功地扩增出目的片段.此外由于不同生物间对密码子使用存在很大差异,因此HMW-GS1Bx14基因很难在大肠杆菌中得到有效大量的表达.本研究选用万能菌株Rosetta(DE3)plysS作为表达用菌,从而克服了不同生物间密码子使用偏爱性的问题,成功的使HMW-GS1Bx14得到表达,为下一步研究HMW-GS1Bx14的基因功能奠定了基础. 展开更多
关键词 小麦 14亚基 pcr体系 原核表达
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4种PCR体系对湖北海棠DNA扩增效果的对比 被引量:1
6
作者 陈琳琳 吴瑞姣 +2 位作者 罗思谦 刘连芬 钱关泽 《山西农业科学》 2013年第8期771-773,共3页
用4种PCR体系(2×Taq MasterMix,Forward Primer,Reverse Primer,Template DNA,RNase-free Water;2×PCR buffer,2 mmol/L dNTPs,Forward Primer,Reverse Primer,KOD FX,Template DNA,RNase-free Water;10×Bufferfor Blend... 用4种PCR体系(2×Taq MasterMix,Forward Primer,Reverse Primer,Template DNA,RNase-free Water;2×PCR buffer,2 mmol/L dNTPs,Forward Primer,Reverse Primer,KOD FX,Template DNA,RNase-free Water;10×Bufferfor Blend Taq,Blend Taq,Template,Forward Primer,Reverse Primer,dNTPs,RNase-free Water;10×Taq PCR Buffer,dNTP Mix,Forward Primer,Reverse Primer,MgCl2,Template DNA,Taq DNA Polymerase,RNase-free Water),分别对不同含量和质量的湖北海棠DNA进行PCR实验。结果表明,DNA稀释几倍后对4种PCR体系的影响不大,扩增的条带清晰;但不同质量DNA对4种PCR体系影响很大,低质量DNA只能在混合酶体系下才可以扩增出清晰、明亮的条带,而其他3个体系下的扩增产物均不清晰。 展开更多
关键词 pcr体系 湖北海棠 DNA含量 DNA质量 混合酶体系
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松江湿地沉积物细菌T-RFLP分析中PCR体系的建立与优化 被引量:1
7
作者 李莹 臧淑英 +1 位作者 马大龙 鄂立思 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期327-331,共5页
细菌是微生物的重要组成部分,其对保持湿地生态系统平衡起着重要作用,在沉积物细菌T-RFLP(terminal restriction fragment length polymorphism)分析中建立与优化PCR体系对进一步研究沉积物细菌群落组成具有重要意义。此次研究以松江湿... 细菌是微生物的重要组成部分,其对保持湿地生态系统平衡起着重要作用,在沉积物细菌T-RFLP(terminal restriction fragment length polymorphism)分析中建立与优化PCR体系对进一步研究沉积物细菌群落组成具有重要意义。此次研究以松江湿地沉积物细菌基因组DNA为模板,采用正交和单因素试验对PCR体系中各因素(模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶)进行优化,系统分析各因素对PCR扩增结果的影响,建立最佳PCR反应体系。在20μL反应体系中,DNA模板30 ng、Mg2+2.0 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq酶0.5 U。该优化体系确保了沉积物细菌T-RFLP分析过程中PCR产物的质量与效果。 展开更多
关键词 细菌 体系优化 末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)分析 pcr体系
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正交设计优化CYP2C19基因多态性PCR体系 被引量:1
8
作者 赵冠人 刘震 冯端浩 《解放军药学学报》 CAS 2011年第6期480-483,共4页
目的建立通用的CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的最佳水平,并确定最佳退火温度。方法采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系进行实验,... 目的建立通用的CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的最佳水平,并确定最佳退火温度。方法采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果 CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应的最佳反应条件为25μl体系中包含:Mg2+(25 mmol/L)1.0μl、dNTPs(2.5 mmol/L)2.0μl、上游引物和下游引物(2.5μmol/L)各1.5μl、模板DNA约30 ng、10×PCR缓冲液2.5μl、Taq酶2 U、染料2.0μl,退火温度为55℃。结论建立了CYP2C19基因多态性检测方法的通用PCR反应条件。 展开更多
关键词 正交设计 基因多态性 pcr体系 CYP2C19
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正交优化乙醛脱氢酶2基因多态性PCR体系 被引量:1
9
作者 吴珂 蔡泓敏 +2 位作者 刘震 赵冠人 冯端浩 《中国药物警戒》 2013年第11期643-646,共4页
目的建立通用的ALDH2基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的最佳水平。方法采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对ALDH2基因PCR反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析,利用梯度PCR... 目的建立通用的ALDH2基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的最佳水平。方法采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对ALDH2基因PCR反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果 ALDH2基因PCR反应的最佳反应条件为:为25 L体系中包含:Mg2+(25 mM)2.5 L、dNTPs(2.5 mM)2.0 L、引物上游和引物下游各(2.5 M)3.0 L、模板DNA 3.0μL、10×PCR buffer 2.5 L、Taq酶1.5U,退火温度为60℃。结论这一通用PCR反应条件的建立为实现ALDH2基因多态性检测建立了基础。 展开更多
关键词 ALDH2 基因多态性 正交设计 pcr体系
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强筋小麦分子标记多重PCR体系的应用分析
10
作者 刘国圣 《南方农业》 2016年第14期1-2,共2页
小麦的面筋强度与其高低分子量的谷蛋白亚基种类的组合有着密切的关系。选取12个已知的亚基基因所组成的品种为对照,以基因(位点)Dx5、Bx7OE、Axnull、Glu-B3i、Glu-B3与G1u-A3d的标记,来构建多重的PCR体系。已知基因型与构建的多重... 小麦的面筋强度与其高低分子量的谷蛋白亚基种类的组合有着密切的关系。选取12个已知的亚基基因所组成的品种为对照,以基因(位点)Dx5、Bx7OE、Axnull、Glu-B3i、Glu-B3与G1u-A3d的标记,来构建多重的PCR体系。已知基因型与构建的多重PCR体系所检查对照的结果完全一致,一次的PCR可同时检测6个和强筋有关的基因(位点)Dx5、Axl/Ax2*、Bx7OE、Glu-B3i、Glu-B3与Glu-A3d。对58个某省的小麦品种检查的结果表明,优质强筋的亚基基因(位点)Dx5、Axl/Ax2*、Glu-B3i、Glu-B3与Glu-A3d的比例分别是9.5%、56.6%、1.7%、64.3%、33.8%,检查的58个品种均不含有Bx7OE基因(位点),携带0个、1个、2个、3个及以上的基因(位点)品种所占的百分比分别为6.4%、33.8%、48.4%和11.2%。这表明对于强筋亚基基因(位点)的品种,通过聚合优质亚基基因的育种,可以改善小麦品种的面筋强度和品质。研究的强筋小麦分子标记多重PCR体系的检测结果可靠和稳定,可用于强筋小麦品种的选育和小麦品种资源的快速选择。 展开更多
关键词 强筋小麦 小麦品种 pcr体系 亚基基因
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龙眼SCoT-PCR反应体系的优化 被引量:48
11
作者 陈虎 何新华 +2 位作者 罗聪 高美萍 朱建华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期970-974,共5页
目标起始密码子多态(start condon tardeted polymorphism,SCoT)分子标记结合了ISSR标记和RAPD标记的优点,具有操作简单﹑成本低廉﹑多态性丰富﹑重复性好﹑引物设计简单且通用性良好等诸多优点。本实验以石硖龙眼的新鲜叶片为试材,... 目标起始密码子多态(start condon tardeted polymorphism,SCoT)分子标记结合了ISSR标记和RAPD标记的优点,具有操作简单﹑成本低廉﹑多态性丰富﹑重复性好﹑引物设计简单且通用性良好等诸多优点。本实验以石硖龙眼的新鲜叶片为试材,采用单因素试验的方法分别研究模版、引物、rTaqDNA聚合酶、dNTPs、缓冲液(Mg2+)及退火温度共6因素各8个水平对龙眼SCoT-PCR扩增结果的影响。结果表明:龙眼SCoT标记的20μL优化反应体系为:10×BufferⅡ(含Mg2+)2.0μL、DNA模板30ng、引物浓度为30μmol/L、rTaqD-NA聚合酶用量为0.45U、dNTP浓度为4.0mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性4min;95℃变性50s,49.5℃退火40s,72℃复性2min,36个循环;最后72℃延伸10min。利用24个龙眼品种验证该反应体系,1.5%琼脂糖电泳检测结果显示,扩增产物在400-2200bp之间,不同品种间DNA谱带具有多态性,反应体系具有良好的稳定性和可重复性。 展开更多
关键词 龙眼 SCoT pcr体系优化
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基于COI与SRY序列建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的分子鉴别方法 被引量:16
12
作者 魏艺聪 蒋超 +3 位作者 袁媛 赵玉洋 金艳 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第23期4588-4592,共5页
为了建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的特异性PCR鉴别方法。采集不同来源的梅花鹿、马鹿鹿及其杂交鹿的鹿角或鹿茸样品共48份,其中24份为市场流通的待测样品。分别利用COI与SRY基因序列作为其父母本的鉴别标记,对已知样品的COI与SRY基因... 为了建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的特异性PCR鉴别方法。采集不同来源的梅花鹿、马鹿鹿及其杂交鹿的鹿角或鹿茸样品共48份,其中24份为市场流通的待测样品。分别利用COI与SRY基因序列作为其父母本的鉴别标记,对已知样品的COI与SRY基因进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异鉴别引物,分别基于COI与SRY基因建立对梅花鹿、马鹿及其杂交鹿的鹿茸的特异PCR鉴定方法,并随机对市场流通的24份待测鹿茸样品进行鉴别分析。该实验所构建双位点特异PCR体系,基于COI的鉴别位点,可通过PCR扩增获得232 bp的梅花鹿特异片段,而产生518 bp的马鹿特异片段;而基于SRY的鉴别位点,通过PCR扩增获得803 bp的梅花鹿特异片段,而产生425 bp的马鹿特异片段。随机抽取市场流通中的24个待测鹿茸样品,经鉴定有3个样品属于马·花杂交的鹿茸样品。该实验建立对梅花鹿、马鹿及其杂交鹿的鹿茸的PCR鉴别方法简便、可靠。 展开更多
关键词 梅花鹿 马鹿 杂交 双位点特异pcr体系 COI SRY
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RAPD-PCR稳定性的探索 被引量:6
13
作者 王兵益 孙静贤 +1 位作者 刘开庆 杨小琴 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2003年第4期368-372,共5页
以滇牡丹(Paeoniadelevayi)为实验材料,分别测试了Mg2+、模板DNA、聚合酶、引物等反应成分对产物的影响,以期探索RAPD-PCR体系中各成分对产物的影响,以及各成分之间相互作用的规律,为利用RAPD进行生物学研究的人们提供一些参考.
关键词 RAPD-pcr体系 滇牡丹 聚合酶 多聚酶链式反应 pcr技术 DNA多态性检测技术 随机扩增多态性DNA 滇牡丹
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快速PCR法鉴别鱼腥草与百部还魂的方法研究 被引量:11
14
作者 魏艺聪 袁媛 +3 位作者 陈建雄 车苏容 赵玉洋 梁一池 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2163-2166,共4页
目的建立鉴别鱼腥草Houttuynia cordata与百部还魂Gymnotheca chinensis的特异性PCR方法。方法采集不同产地的鱼腥草与百部还魂样品各8份,所有样品提取总DNA。通过对其mat K片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异鉴... 目的建立鉴别鱼腥草Houttuynia cordata与百部还魂Gymnotheca chinensis的特异性PCR方法。方法采集不同产地的鱼腥草与百部还魂样品各8份,所有样品提取总DNA。通过对其mat K片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异鉴别引物,建立特异PCR鉴别方法,并通过加入SYBR Green I染料法对2种中药进行快速检测。另外,构建多重PCR体系,只经一个PCR反应,就能对鱼腥草与百部还魂进行快速分子鉴定。结果所构建特异PCR与多重PCR体系均能产生鱼腥草185 bp的特异鉴别条带,百部还魂389 bp的特异鉴别条带,SYBR Green I染料可进行快速检测方法。结论建立的鱼腥草与百部还魂2种中药的快速PCR鉴别方法简便、可靠。 展开更多
关键词 鱼腥草 百部还魂 特异性pcr 多重pcr体系 MATK
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三疣梭子蟹微卫星多重PCR技术建立及条件的优化 被引量:10
15
作者 任宪云 刘萍 +3 位作者 李健 李晓萍 韩智科 刘磊 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期76-83,共8页
选择三疣梭子蟹22个多态性高的微卫星标记,经过引物间的搭配、组合测试以及反应条件的优化(退火温度、Mg2+含量、dNTPs的浓度等参数),构建了多重PCR扩增技术体系。本研究最终建立了47个二重PCR组合,并在47个二重引物的组合基础上建立15... 选择三疣梭子蟹22个多态性高的微卫星标记,经过引物间的搭配、组合测试以及反应条件的优化(退火温度、Mg2+含量、dNTPs的浓度等参数),构建了多重PCR扩增技术体系。本研究最终建立了47个二重PCR组合,并在47个二重引物的组合基础上建立15个三重PCR组合,3个四重PCR组合。该多重PCR技术体系的建立为三疣梭子蟹品种选育、种系评估提供快速、有效分子检测技术。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 SSR 多重pcr体系
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茄子基因组DNA提取及RAPD-PCR体系的优化 被引量:7
16
作者 易金鑫 侯喜林 冷月祥 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2004年第3期50-52,共3页
在CTAB基础上 ,系统地比较了提取缓冲液主要成分浓度的变化对提取茄子基因组DNA的质量及得率的影响 ,并以SDS法为对照 ,提出了一种适用于茄子基因组DNA的提取方法。进一步利用梯度PCR比较了RAPD -PCR反应体系中几个重要成分的浓度对PCR... 在CTAB基础上 ,系统地比较了提取缓冲液主要成分浓度的变化对提取茄子基因组DNA的质量及得率的影响 ,并以SDS法为对照 ,提出了一种适用于茄子基因组DNA的提取方法。进一步利用梯度PCR比较了RAPD -PCR反应体系中几个重要成分的浓度对PCR产物的影响 ,优化茄子RAPD -PCR反应体系 ,建立了茄子基因组适用的简单、稳定和重复性较好的RAPD 展开更多
关键词 茄子 DNA提取 梯度pcr RAPD-pcr体系优化
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强筋小麦分子标记多重PCR体系的构建与应用 被引量:8
17
作者 梁强 张晓科 +4 位作者 尉倩 王晓龙 张晶 孙道杰 付晓洁 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1942-1948,共7页
面筋强度与小麦高低分子量谷蛋白亚基种类(组合)密切相关。以12个已知亚基基因组成的品种为对照,选用基因(位点)Axnull、Bx7OE、Dx5、Glu-A3d、Glu-B3i和Glu-B3的标记,构建多重PCR体系。以该体系检测对照的结果与已知基因型完全一致,一... 面筋强度与小麦高低分子量谷蛋白亚基种类(组合)密切相关。以12个已知亚基基因组成的品种为对照,选用基因(位点)Axnull、Bx7OE、Dx5、Glu-A3d、Glu-B3i和Glu-B3的标记,构建多重PCR体系。以该体系检测对照的结果与已知基因型完全一致,一次PCR可同时间接检测7个与强筋有关基因(位点)Ax1/Ax2*、Bx7OE、Dx5、Glu-A3d、Glu-B3i和Glu-B3。对62个陕西小麦品种的检测结果表明,优质强筋亚基基因(位点)Ax1/Ax2*、Dx5、Glu-A3d、Glu-B3i和Glu-B3的比例依次为56.5%、9.6%、33.9%、1.6%和64.4%,所有品种均不含Bx7OE,携带0、1、2和3个及以上基因(位点)的品种分别占6.5%、33.9%、48.3%和11.3%。说明聚合多个强筋亚基基因(位点)的品种频率较低,通过优质亚基基因的聚合育种,可望改善陕西小麦品种的面筋品质。本研究所构建的强筋小麦分子标记检测的多重PCR体系检测结果稳定且可靠,可用于小麦种质资源的快速评价和强筋小麦分子辅助选育。 展开更多
关键词 陕西省小麦品种 分子标记 多重pcr体系
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Optimization and Testing for PCR System of Rice by Orthogonal Design 被引量:8
18
作者 程芳艳 李春光 +5 位作者 刘永巍 孟巧霞 张景龙 宋冬明 刘华招 孟昭河 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第2期61-64,共4页
[Objective] This study was to screen the economic or stable PCR system of rice and detect the generality of the selected system in different molecular markers based on PCR.[Method] With DNA extracted from rice leaves ... [Objective] This study was to screen the economic or stable PCR system of rice and detect the generality of the selected system in different molecular markers based on PCR.[Method] With DNA extracted from rice leaves by CTAB method as the template,PCR system was optimized by L16(45)orthogonal design.[Result] Clear bands were amplified from 16 different combinations,but the amplification effects and yields had difference.The most economic and applicable system was as follows:20 ng DNA template,150 μmol/L dNT... 展开更多
关键词 RICE pcr system optimization Orthogonal design Dominant molecular markers testing
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单头赤眼蜂DNA提取方法比较及其PCR反应体系优化 被引量:8
19
作者 柳晓利 董辉 +2 位作者 丛斌 张柱亭 冮爽 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期170-174,共5页
为了探明有效的基因组DNA提取方法和PCR反应体系,从而得到符合分子生物学实验要求的基因组DNA模板的数量和质量,以单头松毛虫赤眼蜂为材料,应用CTAB法、SDS法和Chelex法进行基因组DNA提取效果的比较,并将核酸助沉剂用于赤眼蜂DNA的提取... 为了探明有效的基因组DNA提取方法和PCR反应体系,从而得到符合分子生物学实验要求的基因组DNA模板的数量和质量,以单头松毛虫赤眼蜂为材料,应用CTAB法、SDS法和Chelex法进行基因组DNA提取效果的比较,并将核酸助沉剂用于赤眼蜂DNA的提取中,然后将提取的基因组DNA采用L16(45)正交设计试验,对影响赤眼蜂基因组DNA PCR反应体系的5因素(Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、DNA模板、Taq聚合酶)4水平进行筛选。结果表明:CTAB法优于SDS法和Chelex法,且核酸助沉剂的加入明显增强了模板DNA提取效果。同时确立的ITS2的PCR优化反应体系为:总体积为25mL,Mg2+浓度为1.50mM,dNTPs浓度为0.25mM,引物浓度为0.30μM,DNA模板取2.00μL,Taq聚合酶量为2.00U。 展开更多
关键词 赤眼蜂 DNA提取 核酸助沉剂 正交设计 pcr体系优化
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松江鲈鱼ISSR-PCR反应体系的建立及优化研究 被引量:8
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作者 郁建锋 鲍峰 +1 位作者 韩晓磊 徐建荣 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第33期14420-14421,14465,共3页
[目的]建立及优化松江鲈鱼ISSR-PCR的反应体系。[方法]采用ISSR-63引物,通过正交试验设计,分别对TaqDNA聚合酶、Mg2+d、NTPs和引物浓度等4种PCR原料进行优化,以确立松江鲈鱼的ISSR-PCR反应最佳体系,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温... [目的]建立及优化松江鲈鱼ISSR-PCR的反应体系。[方法]采用ISSR-63引物,通过正交试验设计,分别对TaqDNA聚合酶、Mg2+d、NTPs和引物浓度等4种PCR原料进行优化,以确立松江鲈鱼的ISSR-PCR反应最佳体系,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温度。[结果]确定了松江鲈鱼的最适ISSR-PCR反应体系,20μl反应体系中含2.5 mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,1.0UTaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板及1×PCR buffer,确立退火温度为50.8℃。利用所建立的ISSR-PCR反应体系,通过对24份野生松江鲈鱼样本的检验,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带。[结论]该研究为松江鲈鱼的遗传多样性分析及种质资源研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 松江鲈鱼 正交试验 ISSR-pcr体系
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