山羊胎儿成纤维细胞转染人t-PA指形区缺失基因及其核移植研究 被引量：5

1

作者 赵晓娥 安志兴 +4 位作者 马保华 武浩 高立功 刘新颖 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第1期1-5,共5页

采用阳离子脂质体法将人t-PA指形区缺失基因乳腺特异性表达载体(pEBT)导入山羊胎儿成纤维细胞,以山羊胎儿成纤维细胞和转染的山羊胎儿成纤维细胞作供体,构建核移植胚,对其体外发育情况进行了研究,比较了2种供体细胞(山羊胎儿成纤维细胞... 采用阳离子脂质体法将人t-PA指形区缺失基因乳腺特异性表达载体(pEBT)导入山羊胎儿成纤维细胞,以山羊胎儿成纤维细胞和转染的山羊胎儿成纤维细胞作供体,构建核移植胚,对其体外发育情况进行了研究,比较了2种供体细胞(山羊胎儿成纤维细胞和转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞)及转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞饥饿处理与否对核移植胚胎体外发育的影响。结果表明,早期核移植胚有荧光蛋白(GFP)的表达;以山羊胎儿成纤维细胞作供体细胞时,核移植胚的桑葚胚率(50.3%)及囊胚率(16.0%)均高于以转人t-PA指形区缺失基因胎儿成纤维细胞为供体时的桑葚胚率(48.4%)和囊胚率(10.9%),但差异不显著(P>0.05);转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿处理后,其核移植胚胎的卵裂率(73.6%)与不饥饿时的卵裂率(73.9%)差异不显著;饥饿处理后核移植胚胎的桑葚胚率(48.5%)和囊胚率(11.2%)均高于不饥饿处理的桑葚胚率(39.2%)和囊胚率(9.2%),但差异不显著(P>0.05)。本研究成功地构建了转人t-PA指形区缺失基因的体细胞核移植胚胎,体外囊胚率为11.2%。 展开更多

关键词 山羊 血清饥饿 t-pa基因 转基因核移植胚 囊胚率

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H5N1亚型禽流感病毒聚合酶酸性蛋白真核表达载体的构建与表达 被引量：4

2

作者 单云峰 李燕 +1 位作者 迟莹 卞倩 《江苏预防医学》 CAS 2014年第3期1-3,共3页

目的构建甲型禽流感病毒H5N1亚型聚合酶酸性蛋白(PA)的真核表达载体,并表达其编码蛋白PA。方法采用RT-PCR法扩增PA基因,克隆至pMD18-T载体中构pMD18-T-PA质粒。双酶切pMD18-T-PA质粒与pXJ40-HA质粒后,胶回收并连接目的片段,构建真核表... 目的构建甲型禽流感病毒H5N1亚型聚合酶酸性蛋白(PA)的真核表达载体,并表达其编码蛋白PA。方法采用RT-PCR法扩增PA基因,克隆至pMD18-T载体中构pMD18-T-PA质粒。双酶切pMD18-T-PA质粒与pXJ40-HA质粒后,胶回收并连接目的片段,构建真核表达载体pXJ40-HA-PA,鉴定后转染293T细胞。采用免疫印迹法(Western blot)鉴定重组PA蛋白的表达。结果成功构建了禽流感病毒H5N1亚型PA基因的真核表达载体,并在真核细胞中成功表达出分子量为75kD的重组蛋白。结论成功构建禽流感病毒H5N1亚型PA基因的真核表达载体,为后期进一步研究PA蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 H5N1禽流感病毒 pa基因 真核表达 克隆

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RNA干扰对流感病毒NP和PA基因表达及病毒增殖的抑制 被引量：2

3

作者 李瑶琛 赵志刚 李康生 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2006年第8期681-685,共5页

目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对流感病毒NP或/和PA基因的siRNA抑制NP或/和PA基因的表达及抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖.方法:分别构建针对NP,PA及同时干扰NP和PA的三种siRNA表达质粒pEG-FP/NP,pGenesil/PA和pEGFP/NP+PA,转染MDC... 目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对流感病毒NP或/和PA基因的siRNA抑制NP或/和PA基因的表达及抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖.方法:分别构建针对NP,PA及同时干扰NP和PA的三种siRNA表达质粒pEG-FP/NP,pGenesil/PA和pEGFP/NP+PA,转染MDCK后,H5N1亚型流感病毒感染细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测NP及PA蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点检测细胞培养上清中的血凝值(HA),观察siRNA抑制流感病毒增殖的能力.结果:荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达65.0%.蛋白质印迹结果表明,重组质粒pEGFP/NP和pEGFP/NP+PA均能抑制NP蛋白在MDCK细胞内的表达,两者的抑制率分别为64.5%和69.6%.半定量RT-PCR检测到pEGFP/NP质粒在MDCK细胞内对NP基因的转录抑制率为66.0%;pGenesil/PA质粒对PA基因的转录抑制率为63.0%;pEGFP/NP+PA质粒对NP和PA基因的转录同时抑制率,分别为71.4%和69.3%.而对照质粒pEGFP/HK对NP或/和PA基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用.HA结果表明,三种质粒均能抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖,以pEGFP6/NP+PA的作用最为显著,它们抑制流感病毒增殖的能力分别为87.0%,75.0%和96.9%.结论:NP或/和PA基因的siRNA质粒可明显抑制NP或/和PA基因的转录和表达,并有效地抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖. 展开更多

关键词 RNA干扰 正粘病毒科 MDCK细胞株 NP基因 pa基因

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炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测技术的建立和应用 被引量：2

4

作者 王素华 帅江冰 +4 位作者 李舟 袁淑辉 吴绍强 吕继洲 赵治国 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1658-1665,共8页

为快速和准确检测炭疽杆菌,本研究以炭疽杆菌染色体上的BA5345基因和pXO1质粒上的PA基因为靶基因设计特异性引物和探针,建立了炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与常规PCR方法一起对临床... 为快速和准确检测炭疽杆菌,本研究以炭疽杆菌染色体上的BA5345基因和pXO1质粒上的PA基因为靶基因设计特异性引物和探针,建立了炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与常规PCR方法一起对临床样品进行检测。结果显示,所建立方法特异性强,与蜡样芽胞杆菌群中其他芽胞杆菌无交叉反应;对BA5345基因和PA基因的最低检测限分别为8.0和7.8拷贝·μL^-1,标准曲线相关系数大于0.99,组内和组间CV均小于1.5%。对35份污染皮毛样品检测显示BA5345基因和PA基因的检出率分别为80.0%和82.9%,与常规PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为炭疽杆菌的检测和流行病学调查提供了一种快速、准确的检测方法。 展开更多

关键词 炭疽杆菌 BA5345基因 pa基因 双重荧光定量PCR 检测方法

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2006年人禽流感H5N1毒株PA基因特性、变异和进化 被引量：1

5

作者 黄平 方苓 +6 位作者 莫艳玲 舒跃龙 李晖 邹丽容 柯昌文 陈秋霞 俞守义 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1103-1106,共4页

目的通过对人禽流感H5N1毒株PA基因序列的变异分析,揭示毒株PA基因特征、变异与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株PA基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株PA基因序列,采用MEGA4.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株PA基因核苷... 目的通过对人禽流感H5N1毒株PA基因序列的变异分析,揭示毒株PA基因特征、变异与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株PA基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株PA基因序列,采用MEGA4.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株PA基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果PA蛋白呈酸性,等电点pH5.4。1997-2006年52株毒株PA基因核苷酸序列同源性分成两组,1997年毒株为第一组(G1),2003-2006年香港、越南、泰国、印尼、中国大陆毒株、土耳其、伊拉克、阿塞拜疆、埃及毒株为第二组(G2)。PA基因114个氨基酸位点置换,占15.9(114/716),其中2003-2006年毒株PA基因有17个氨基酸位点不同于1997年毒株。PA基因Ks值为30.9×10-6～46.1×10-6Nt/d,Ka值为4.50×10-6～8.13×10-6Nt/d;而PA基因的同义突变速度是错义突变速度的5.7～6.9倍,显示PA基因受到机体免疫压力较小;检验发现PA基因进化存在负选择性压力。PA基因中潜在的7个糖基化位点基本稳定,毒株IDNS-569H-06的PA基因半胱氨酸发生置换(S224C)。结论PA基因进化分成两系列,PA基因进化特点是自发突变较快,而受到机体免疫机制压力较小;A基因与其它多聚酶基因(PB2和PB1)比较,核苷酸序列同源性和进化在时间特征和地区特征方面具有一致性;来自中国大陆的毒株进化值得关注。人禽流感H5N1毒株PA基因在自然界变异频繁,可能影响HN毒株致病性和在人-人传播能力。 展开更多

关键词 人禽流感 H5N1毒株 pa基因 交异 进化

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H9N2亚型禽流感病毒PA基因的克隆与序列分析 被引量：1

6

作者 易华山 侯顺利 +5 位作者 胡永浩 独军政 刘萍 王光华 高闪电 常惠芸 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期12-16,共5页

对甘肃H9N2亚型的A/Chicken/GanSu/2/99(A/CK/GS/2/99)株PA基因进行了克隆、测序及分子进化分析.结果表明:该病毒PA基因开放阅读框由2 151个碱基组成,编码716个氨基酸;其与A/Quail/HongKong/NT28/99(H9N2)株和A/Duck/HongKong/Y280/97(H... 对甘肃H9N2亚型的A/Chicken/GanSu/2/99(A/CK/GS/2/99)株PA基因进行了克隆、测序及分子进化分析.结果表明:该病毒PA基因开放阅读框由2 151个碱基组成,编码716个氨基酸;其与A/Quail/HongKong/NT28/99(H9N2)株和A/Duck/HongKong/Y280/97(H9N2)株的核苷酸同源性分别为98.4%和98.5%,氨基酸同源性分别为98.7%和98.7%;与A/HongKong/156/97(H5N1)和A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的核苷酸同源性分别为89.0%和87.8%,氨基酸同源性分别为为93.9%和94.3%. 展开更多

关键词 禽流感病毒(H9N2株) pa基因 克隆 序列分析

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流感病毒聚合酶PA亚单位抗血清的制备 被引量：1

7

作者 葛叶 邓国华 +4 位作者 李雪平 高玉伟 姚秋成 唐艳玲 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期314-317,共4页

本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/11/00中分段及全长扩增PA基因片段,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证正确后,获得重组阳性质粒,将重组质粒转化BL21细菌后诱导,实现质粒在大肠杆菌中... 本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/11/00中分段及全长扩增PA基因片段,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证正确后,获得重组阳性质粒,将重组质粒转化BL21细菌后诱导,实现质粒在大肠杆菌中的表达,重组表达蛋白经Ni+柱纯化后分别与弗氏免疫佐剂乳化成油乳剂苗免疫新西兰大耳白兔,获得抗PA的免疫抗血清。Western blot检测结果表明抗血清与目的蛋白发生特异性反应。同时,将PA全长基因插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞,通过激光共聚焦显微镜发现,抗血清与PA基因的真核表达产物发生反应,出现特异性荧光,在细胞核与细胞浆中均出现荧光,进一步表明PA亚单位在细胞核与细胞浆均有分布。 展开更多

关键词 禽流感病毒 pa基因 抗血清

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t-PA基因Alu重复序列I / D多态性在云南彝族人群中的分布 被引量：1

8

作者 王乐 范志祥 +5 位作者 陈志彬 彭红瑜 张延洁 张璐 万瑞雪 龙莉 《昆明医科大学学报》 CAS 2020年第2期7-11,共5页

目的研究云南省彝族人群t-PA基因Alu重复序列插入/缺失(I/D)多态性分布情况,为探讨t-PA基因相关性疾病的发病机制奠定基础。方法采用PCR-RFLP技术对云南省晋宁县275例彝族健康个体的t-PA基因Alu重复序列插入/缺失(I/D)多态性进行分析,计... 目的研究云南省彝族人群t-PA基因Alu重复序列插入/缺失(I/D)多态性分布情况,为探讨t-PA基因相关性疾病的发病机制奠定基础。方法采用PCR-RFLP技术对云南省晋宁县275例彝族健康个体的t-PA基因Alu重复序列插入/缺失(I/D)多态性进行分析,计算II、ID、DD基因型频率和I、D等位基因频率,与其他人群进行比较。结果云南省晋宁县彝族人群t-PA基因的II、ID、DD基因型频率分别为24.36%、48.36%、27.27%,I和D等位基因频率分别为48.55%、51.45%。与报道的巴基斯坦人、印度人、韩国人、日本人和美国白种人的人群相比较,基因型分布和等位基因频率均无统计学差异(P>0.05)。与英国白种人人群相比较,无论基因型分布还是等位基因频率均差异有统计学意义(P<0.05)。结论t-PA基因Alu重复序列I/D多态性的分布在不同种族之间存在差异。 展开更多

关键词 t-pa基因 基因多态性 彝族

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禽流感病毒PA基因的原核表达载体的构建及鉴定

9

作者 赵翠君 黄会岭 +3 位作者 杜聚朝 王连群 李云 高慧芳 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期95-98,103,共5页

以重组质粒pcDNA-PA为模板扩增PA全基因,并构建原核表达载体pGEX-6p-1-PA。根据GenBank公开发表的禽流感病毒PA基因的序列设计引物,用PCR方法从重组质粒pcDNA-PA中扩增禽流感病毒的PA基因,将该基因定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1中,... 以重组质粒pcDNA-PA为模板扩增PA全基因,并构建原核表达载体pGEX-6p-1-PA。根据GenBank公开发表的禽流感病毒PA基因的序列设计引物,用PCR方法从重组质粒pcDNA-PA中扩增禽流感病毒的PA基因,将该基因定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1中,然后将连接产物转化宿主菌DH5α,挑取阳性克隆进行PCR和BamHⅠ、NotⅠ双酶切鉴定并测序。测序结果表明,禽流感病毒PA基因全长2151 bp,编码717个氨基酸,原核表达载体pGEX-6p-1-PA已构建成功。从而为禽流感蛋白PA的表达及其多克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 pa基因 原核表达载体

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A型流感病毒H7N9株PA和PAX基因的克隆和真核表达

10

作者 潘红 罗斌汉 +5 位作者 罗千慧 岑曼益 侯俊达 赵睿明 蔡葵蒸 蔺国珍 《畜牧兽医科技信息》 2020年第6期40-42,共3页

本试验旨在克隆A型流感病毒H7N9株的PA和PAX基因并构建真核表达载体对其进行真核表达。从苏州分离株的鸡胚尿囊液中提取禽流感病毒RNA,通过RT-PCR技术获取PA以及PAX全长基因,经琼脂糖凝胶电泳获得纯化的目的基因;构建目的基因重组真核... 本试验旨在克隆A型流感病毒H7N9株的PA和PAX基因并构建真核表达载体对其进行真核表达。从苏州分离株的鸡胚尿囊液中提取禽流感病毒RNA,通过RT-PCR技术获取PA以及PAX全长基因,经琼脂糖凝胶电泳获得纯化的目的基因;构建目的基因重组真核表达质粒,并利用双酶切及测序鉴定重组质粒;质粒DNA转染293T细胞真核表达,让其表达的蛋白产物通过Western Blot鉴定。其结果成功地在293T细胞内表达了PA与PAX蛋白,为进一步研究A型流感病毒PA与PAX蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 A型流感病毒 pa基因 paX基因 真核表达

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新疆油鸡禽流感病毒Xj14分离株PA基因的克隆与序列分析

11

作者 武军元 黄忠武 +1 位作者 康强 姚礼文 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第8期20-22,共3页

为了从分子水平上掌握新疆油鸡H9N2亚型禽流感病毒PA基因的遗传进化情况,采用RT-PCR技术对新疆油鸡分离株Xj14的PA基因进行克隆、测序及分子进化分析,将PA基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列与Gen Bank中已经公布的参考序列进行同源性... 为了从分子水平上掌握新疆油鸡H9N2亚型禽流感病毒PA基因的遗传进化情况,采用RT-PCR技术对新疆油鸡分离株Xj14的PA基因进行克隆、测序及分子进化分析,将PA基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列与Gen Bank中已经公布的参考序列进行同源性比较。结果表明,新疆油鸡分离株的PA基因由2 151个碱基组成,编码716个氨基酸,与AIV A/Duck/Hong Kong/Y439/97的PA基因处于同一分支,其核苷酸和氨基酸水平的同源性依次为89.9%和96.9%,在系统进化上属于欧亚分支中的Y439谱系。 展开更多

关键词 禽流感病毒 油鸡 pa基因 克隆 序列分析

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纳米t-PA基因涂层支架对犬冠状动脉损伤后血栓形成和再狭窄的影响 被引量：1

12

作者 李军 章玲 +4 位作者 梁新剑 周阳泱 曾碧媚 芦爱霞 赵洪磊 《山东医药》 CAS 2019年第34期46-48,52,共4页

目的探讨纳米t-PA基因载体涂层支架对犬冠状动脉血栓形成和支架再狭窄的影响。方法选取健康雄性家犬22只制作冠状动脉内膜损伤模型后,立即随机分为观察组12只和对照组10只,分别置入载纳米t-PA基因涂层支架和裸金属支架。术后动物均不用... 目的探讨纳米t-PA基因载体涂层支架对犬冠状动脉血栓形成和支架再狭窄的影响。方法选取健康雄性家犬22只制作冠状动脉内膜损伤模型后,立即随机分为观察组12只和对照组10只,分别置入载纳米t-PA基因涂层支架和裸金属支架。术后动物均不用抗凝治疗。两组分别于术前及术后1、2、4、8周取血检测t-PA和D-二聚体含量,术后8周行冠状动脉造影和血管内超声检查;超声检查后处死动物,苏木素-伊红染色法染色显微镜下观察局部血管腔内血栓形成、支架内血栓形成和血管壁病理改变。结果两组术前血液t-PA、D-二聚体水平比较差异无统计学意义(P均>0.05);观察组置入支架后1、2、4、8周t-PA、D-二聚体水平均高于对照组(P均<0.05)。支架置入术后8周观察组支架管腔丢失、内膜增生面积、内膜增生容积均优于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。术后8周肉眼及显微镜下观察,对照组支架冠状动脉内膜明显不规则增厚,内膜中增生细胞不规则,排列紊乱,细胞间基质堆积多,见散在炎性细胞。与对照组比较,观察组支架冠状动脉内膜明显变薄,内膜细胞多为长梭形,PCNA阳性细胞少;对照组血栓形成率100%,观察组血栓形成率16.67%,两组血管支架内血栓形成率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论纳米t-PA基因载体涂层支架可有效携带和释放药物,抑制术后冠状动脉支架内再狭窄发生。 展开更多

关键词 支架置入术 冠状动脉 血栓形成 纳米t-pa基因载体 涂层支架 犬

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生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究

13

作者 王晓利 李银聚 +3 位作者 廖成水 程相朝 张春杰 吴庭才 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期410-414,共5页

目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌... 目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和ELISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性。结果注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量最高,为10.4μg.mL-1,活性相当于50.2μg.mL-1标准品t-PA。结论研究表明,减毒沙门氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 apo—t—pa基因 卵黄

原文传递

心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅱ．Pro－UK和t－pA基因的体外表达

14

作者 姚阿卿 孙双丹 +6 位作者 李岱宗 温进坤 王贵春 周爱儒 黄培堂 俞炜源 汤健 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 1994年第S1期115-119,共5页

构建了带有人的全长Ｐｒｏ－ＵＫ或ｔ－ｐＡ基因ｃＤＮＡ的逆转录病毒质粒ｐＮ２－ＣＭＶ－ＵＫ或ｐＮ２－ＣＭＶ－ｔＰＡ。重组质粒转染包装细胞ＰＡ３ｌ７后获得含假病毒的培养上清。用假病毒上清感染培养的血管平滑肌细胞（ＶｓＭＣ... 构建了带有人的全长Ｐｒｏ－ＵＫ或ｔ－ｐＡ基因ｃＤＮＡ的逆转录病毒质粒ｐＮ２－ＣＭＶ－ＵＫ或ｐＮ２－ＣＭＶ－ｔＰＡ。重组质粒转染包装细胞ＰＡ３ｌ７后获得含假病毒的培养上清。用假病毒上清感染培养的血管平滑肌细胞（ＶｓＭＣ），经Ｇ４ｌ８筛选得到抗性集落。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，Ｐｒｏ－ＵＫ或ｔ－ｐＡ基因已整合到宿主细胞染色体。在转染的ＶＳＭＣ中，Ｐｒｏ－ＵＫ和ｔ－ｐＡ的含量分别为２６５ｎｇ／１０７细胞／２４小时和５．６ｎｇ／１０７细胞／２４小时。溶圈法测定结果证明，Ｐｒｏ－ＵＫ基因导入细胞后可以表达出有生物活性的尿激酶原。 展开更多

关键词 Pro-UK或t-pa基因 基因治疗 血管平滑肌细胞

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禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4(H5N1)的PB1、PB2和PA基因测序及进化分析

15

作者 汪萍 沙依兰古丽 +4 位作者 符子华 盛卓君 巴哥得力 陆桂丽 成进 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第3期331-334,344,共5页

通过RT-PCR技术对禽流感病毒新疆株A/Duck/X J/4（H5N1）的PB1、PB2和PA基因分别进行了扩增及克隆，测序结果表明该毒株的PB2、PB1和PA基因全长核苷酸序列分别为2341 bp、2282 bp和2187 bp。同源性分析表明A/Duck/X J/4（H5N1）株与禽... 通过RT-PCR技术对禽流感病毒新疆株A/Duck/X J/4（H5N1）的PB1、PB2和PA基因分别进行了扩增及克隆，测序结果表明该毒株的PB2、PB1和PA基因全长核苷酸序列分别为2341 bp、2282 bp和2187 bp。同源性分析表明A/Duck/X J/4（H5N1）株与禽源、野生鸟类和猪源的禽流感毒株均有很高的同源性（86.3%-99.6%）。与人源毒株相比，PB2和PA与A/HK/156/97（H5N1）株的同源性较低（86.3%-88.7%）;与A/V ietnam/CL01/2004（H5N1）株和A/hum an/Zhejiang/16/2006（H5N1）株的同源性较高（93.0%-98.8%）;PB1与人源毒株A/HK/156/97（H5N1）、A/V ietnam/CL01/2004（H5N1）、A/hum an/Zhejiang/16/2006（H5N1）同源性为91.1%-93.2%。 展开更多

关键词 禽流感病毒 PB1 PB2和pa基因 RT—PCR 序列分析

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联合转染t-PA基因与PCNA反义寡核苷酸防治血管重建术后再狭窄研究

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作者 时德 吴忠均 《重庆医学》 CAS CSCD 2003年第11期1468-1468,共1页

关键词 联合转染 t—pa基因 PCNA反义寡核苷酸 防治 血管重建术 再狭窄 术后

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组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：14

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作者 廖建民 张瑾 沈子龙 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第2期95-98,共4页

通过PCR的方法从人t PA基因上扩增到r PA基因的编码序列 ,并克隆到 pMD18 T载体中 ,DNA测序与文献报道完全一致。该基因被克隆到多用途表达载体pET2 8a中 ,重组表达载体r PA/ pET 2 8a转化E coliBL2 1(DE3) ,培养表达 ,SDS PAGE分析可见... 通过PCR的方法从人t PA基因上扩增到r PA基因的编码序列 ,并克隆到 pMD18 T载体中 ,DNA测序与文献报道完全一致。该基因被克隆到多用途表达载体pET2 8a中 ,重组表达载体r PA/ pET 2 8a转化E coliBL2 1(DE3) ,培养表达 ,SDS PAGE分析可见Mr 约 390 0 0的蛋白条带 ,约占细胞内总蛋白的 30 %以上。体外溶圈法测定活性表明该重组蛋白具有较好的纤溶活性。 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 突变体 Reteplase(r-pa)基因 克隆 大肠杆菌 聚合酶链式反应

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豌豆清蛋白1(PA1)基因的克隆及对苜蓿的转化 被引量：12

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作者 张改娜 贾敬芬 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期117-125,共9页

本研究用PCR方法从豌豆(食荚大菜豌)克隆出富含硫氨基酸、同时具有抗虫作用的双功能的蛋白质基因-豌豆清蛋白1(PA1)基因,并构建了植物表达载体pCAMBIAl301-PA1。采用农杆菌介导法转化了紫花苜蓿,并对其转化体系进行了优化,得到了多个转... 本研究用PCR方法从豌豆(食荚大菜豌)克隆出富含硫氨基酸、同时具有抗虫作用的双功能的蛋白质基因-豌豆清蛋白1(PA1)基因,并构建了植物表达载体pCAMBIAl301-PA1。采用农杆菌介导法转化了紫花苜蓿,并对其转化体系进行了优化,得到了多个转基因胚性愈伤组织及其再生植株。PCR和Southern杂交检测表明,PA1基因和潮霉素抗性基因已被整合到了宿主细胞。SDS-PAGE分析表明该基因在再生植株中有一定表达。游离氨基酸分析表明,PA1基因的表达转基因苜蓿中蛋氨酸和半胱氨酸的含量从0.1%提高到0.4%。 展开更多

关键词 豌豆清蛋白(pa1)基因 富硫氨基酸 苜蓿 遗传转化

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PA1864基因敲除对铜绿假单胞菌毒力及致病性的影响 被引量：4

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作者 张鸿 胥志敏 +5 位作者 陈炜 何晓梅 熊浚智 盛哈蕾 邱静 张克斌 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期465-473,共9页

目的评价PA1864基因在铜绿假单胞菌(PA)毒力及致病性中的作用。方法比较野生菌株(PAO1与PA1864基因敲除菌株(△PA1864)急性感染小鼠肺或A549肺癌细胞后细菌毒力表型及致病性的差异,包括小鼠的生存率、肺水肿、组织损伤,细胞活力,PAO1和... 目的评价PA1864基因在铜绿假单胞菌(PA)毒力及致病性中的作用。方法比较野生菌株(PAO1与PA1864基因敲除菌株(△PA1864)急性感染小鼠肺或A549肺癌细胞后细菌毒力表型及致病性的差异,包括小鼠的生存率、肺水肿、组织损伤,细胞活力,PAO1和△PA1864菌株分泌性毒力因子、Ⅲ型毒力蛋白分泌系统(T3SS)及群体感应(QS)系统表达情况等。结果 PA1864基因敲除后,菌体对宿主的致病性及细胞毒性降低,细菌泳动能力、T3SS相关蛋白(ExoS、PcrV)表达下调,而绿脓素合成量增加,喹诺酮QS系统信号分子合成增加。结论 PA1864基因可促进PA毒力,且该调节作用可能与喹诺酮QS系统有关。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 pa1864基因 基因敲除 致病性 细菌毒力 群体感应系统

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PA3573基因的结构功能预测及其在抗鲎素菌株中表达分析

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作者 洪军 田佳雯 +3 位作者 叶延欣 胡建业 黄玮玮 韩雨燕 《河南城建学院学报》 CAS 2023年第5期91-97,103,共8页

铜绿假单胞菌的耐药形势日益严峻,通过耐药泵将药物排出是铜绿假单胞菌产生耐药性的重要原因之一。采用生物信息学方法对PA3573基因编码蛋白进行结构功能预测以及编码蛋白与鲎素肽分子对接的模拟实验预测,并对PA3573基因在铜绿假单胞菌... 铜绿假单胞菌的耐药形势日益严峻,通过耐药泵将药物排出是铜绿假单胞菌产生耐药性的重要原因之一。采用生物信息学方法对PA3573基因编码蛋白进行结构功能预测以及编码蛋白与鲎素肽分子对接的模拟实验预测,并对PA3573基因在铜绿假单胞菌抗鲎素突变株中转录表达情况进行分析。结果表明,PA3573基因编码蛋白是碱性带正电的稳定非分泌的疏水性跨膜蛋白,主要含有α-螺旋结构、无信号肽和21个潜在的磷酸化位点。PA3573蛋白含有一个主要协同转运超家族(MFS)保守结构域,属于主要协同转运超家族。该蛋白与DR97-4591蛋白基因共表达,与阴沟肠杆菌、大肠杆菌等有较近的亲缘关系。研究发现PA3573基因在不同传代浓度诱导下获得的抗鲎素突变株中均有明显差异表达,且预测该编码蛋白与鲎素通过氢键和疏水作用相结合的方式发挥作用。该结果为进一步阐明PA3573基因编码蛋白在铜绿假单胞菌中的作用提供一定的理论指导。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 pa3573基因 结构功能预测 表达分析 鲎素 结合方式

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