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新型鸭细小病毒SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：6
1
作者 周洁文 汤傲星 +4 位作者 戚睿斌 朱杰 李传峰 郭鑫 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第4期47-51,共5页
本研究以新型鸭细小病毒VP3基因保守区域克隆至pMD19-T载体上获得的阳性质粒作为标准阳性质粒,建立一种检测新型鸭细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果显示:在5.17×10^1~5.17×10^7拷贝数呈良好的线性关系,相关系数R^2... 本研究以新型鸭细小病毒VP3基因保守区域克隆至pMD19-T载体上获得的阳性质粒作为标准阳性质粒,建立一种检测新型鸭细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果显示:在5.17×10^1~5.17×10^7拷贝数呈良好的线性关系,相关系数R^2为0.999、斜率为3.595,灵敏度可达到5.17拷贝数;该方法用于检测鸭常见传染病呼肠孤(DRV)、禽流感(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭病毒性肝炎(DHV)、鸭星状病毒(DAstV)无非特异性扩增,特异性良好;对安徽、山东、江苏等地鸭场采集的疑似病料进行初步检测,发现48份样品中阳性率达70.8%,与普通PCR方法检测结果相比,本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法更灵敏。本研究成功建立了一种检测新型鸭细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量方法,为新型鸭细小病毒的监测奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 新型鸭细小病毒 SYBR GreenⅠ荧光定量pcr 普通pcr
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不同PCR引物扩增咽拭子检测在儿童肺炎支原体感染诊断中的价值 被引量：6
2
作者 王廷廷 陈曦 +5 位作者 刘继涛 韩雪 吴亮 阴晴 姜旭淦 陈盛霞 《中国妇幼保健》 CAS 2019年第6期1366-1368,共3页
目的探讨采用普通PCR法建立检测咽拭子中儿童肺炎支原体(MP),为儿童MP感染的早期诊断提供参考依据。方法采集临床疑似MP感染儿童咽拭子并抽提基因组DNA,根据MP P1基因和16S rRNA基因设计引物扩增标本,通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。结... 目的探讨采用普通PCR法建立检测咽拭子中儿童肺炎支原体(MP),为儿童MP感染的早期诊断提供参考依据。方法采集临床疑似MP感染儿童咽拭子并抽提基因组DNA,根据MP P1基因和16S rRNA基因设计引物扩增标本,通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。结果 P1基因引物可以扩增出209 bp大小产物,16S rRNA基因引物可以扩增出277 bp大小产物。P1基因引物检测结果优于16S rRNA基因引物结果,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论基于MP P1基因的普通PCR可以用于临床MP感染的诊断。 展开更多
关键词 咽拭子 儿童 肺炎支原体 普通pcr
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耐除草剂玉米G1105E-823C定性检测方法 被引量：4
3
作者 温洪涛 杨洋 +3 位作者 丁一佳 苑冉 张秀杰 张瑞英 《生物技术进展》 2020年第6期688-695,共8页
转基因耐除草剂玉米G1105E-823C是经过改造的转mG 2-aroA基因耐草甘膦玉米新品系,具有更高的草甘膦耐受性,目前已完成生产性试验,具有重要的产业化应用前景。但目前尚无针对G1105E-823C的转化体特异性检测方法的相关报道,这十分不利于... 转基因耐除草剂玉米G1105E-823C是经过改造的转mG 2-aroA基因耐草甘膦玉米新品系,具有更高的草甘膦耐受性,目前已完成生产性试验,具有重要的产业化应用前景。但目前尚无针对G1105E-823C的转化体特异性检测方法的相关报道,这十分不利于对该品系的检测及监管。基于此,以G1105E-823C转化体特异性序列为靶标,建立了转基因耐除草剂玉米G1105E-823C的普通PCR和实时荧光PCR定性检测方法。结果表明,2种方法均能检测出转基因耐除草剂玉米G1105E-823C转化体成分,且具有较高的特异性。普通PCR检测方法检出限达0.1%,实时荧光PCR检测方法检出限达0.05%。研究建立的2种定性检测方法为转基因耐除草剂玉米G1105E-823C的精准检测提供了新的技术手段,可为农业转基因监管提供技术支撑。 展开更多
关键词 转基因玉米 G1105E-823C转化体 定性检测 普通pcr 实时荧光pcr
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茶叶中掺杂小麦DNA的提取及检测方法的比较 被引量：2
4
作者 张吉红 潘登 +1 位作者 余澍琼 陈建国 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第6期148-150,154,共4页
为探索茶叶中掺杂小麦的快速检测方法,对3种不同的核酸提取方法(标准CTAB提取法、改良CTAB提取法和试剂盒提取法)进行分析比较,根据小麦内源GAG56D基因比较了茶叶中掺杂小麦成分的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。结果表明:最适合掺杂小... 为探索茶叶中掺杂小麦的快速检测方法,对3种不同的核酸提取方法(标准CTAB提取法、改良CTAB提取法和试剂盒提取法)进行分析比较,根据小麦内源GAG56D基因比较了茶叶中掺杂小麦成分的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。结果表明:最适合掺杂小麦DNA的方法为标准的CTAB提取法。扩增结果显示,针对理论DNA浓度的检测灵敏度,实时荧光PCR的灵敏度能达到0.1%,普通PCR能达到1%,实时荧光PCR是普通PCR的10倍。 展开更多
关键词 茶叶 小麦 DNA提取 普通pcr 实时荧光pcr 检测方法
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掺杂玉米茶叶的基因组DNA提取与PCR检测方法建立 被引量：2
5
作者 余澍琼 张吉红 +1 位作者 赵旭东 陈建国 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第22期5615-5617,共3页
根据玉米内源ZEIN基因建立了茶叶中掺杂玉米的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。结果表明,标准CTAB法适合提取茶叶样品基因组DNA,实时荧光PCR的灵敏度能达到0.1%,普通PCR能达到1%,实时荧光PCR是普通PCR的10倍。两种方法都能达到检测要求。
关键词 茶叶(Camellia sinensis) 玉米(Zea mays) 普通pcr 实时荧光pcr 检测方法
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实时逆转录聚合酶链式反应检测活的金黄色葡萄球菌
6
作者 张冲 刘祥 陈计峦 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期170-175,共6页
针对基于DNA水平的聚合酶链式反应(DNA-PCR)检测食品中金黄色葡萄球菌时会出现假阳性结果的缺点,建立一种能够区分死、活金黄色葡萄球菌的检测方法。根据金黄色葡萄球菌的femA基因,自设计Taqman探针、引物,采用一步法逆转录聚合酶链式反... 针对基于DNA水平的聚合酶链式反应(DNA-PCR)检测食品中金黄色葡萄球菌时会出现假阳性结果的缺点,建立一种能够区分死、活金黄色葡萄球菌的检测方法。根据金黄色葡萄球菌的femA基因,自设计Taqman探针、引物,采用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以femA mRNA为检测对象,发现只有活的金黄色葡萄球菌显阳性,死亡的则呈阴性;纯培养时,重复检测变异系数为0.15,灵敏度为9×102CFU/mL,检出限可达1/3 CFU/3 mL。实验表明,该研究所建立的一步法逆转录聚合酶链式反应检测法,不仅灵敏度高、特异性强,而且能够有效地区分死、活金黄色葡萄球菌。 展开更多
关键词 逆转录聚合酶链式反应 金黄色葡萄球菌 死活菌 普通聚合酶链式反应
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新疆维吾尔族及哈萨克族经典型卡波氏肉瘤患者多种样本中人类疱疹病毒8型的初步研究
7
作者 王晓东 陈婧弘 +2 位作者 王慧 张巧巧 惠艳 《新疆医科大学学报》 CAS 2013年第5期584-587,共4页
目的探讨新疆经典型卡波氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma,KS)患者多种样本中人类疱疹病毒8型(Hu-man Herpesvirus-8,HHV-8)的病毒感染情况。方法对8例新疆地区经典型的Kaposi肉瘤患者冰冻肉瘤、血液、尿液、唾液标本进行基因组DNA抽提,PCR法扩... 目的探讨新疆经典型卡波氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma,KS)患者多种样本中人类疱疹病毒8型(Hu-man Herpesvirus-8,HHV-8)的病毒感染情况。方法对8例新疆地区经典型的Kaposi肉瘤患者冰冻肉瘤、血液、尿液、唾液标本进行基因组DNA抽提,PCR法扩增HHV-8ORF26基因片段。结果 HHV-8ORF26基因检测情况和8例新疆经典型Kaposi肉瘤组织、血液、尿液和唾液中均有HHV-8感染。结论 HHV-8感染是新疆经典型KS发病的主导因素,HHV-8感染可能与KS患者多器官损害的疾病。 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型(HHV-8) 普通pcr 经典型卡波氏肉瘤
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依赖解旋酶的等温扩增技术在手足口病检测中的应用研究 被引量：2
8
作者 王晓 唐美媛 《智慧健康》 2018年第5期10-11,共2页
目的探讨依赖解旋酶的等温扩增技术在手足口病检测中的应用研究。方法选取医院收治的手足口病儿童(EV71、CA16及HFMD其他EV病原体各40例)标本。对收集手足口病病人的标本使用依赖解旋酶恒温扩增技术检测,分析依赖解旋酶的恒温扩增(RT-t ... 目的探讨依赖解旋酶的等温扩增技术在手足口病检测中的应用研究。方法选取医院收治的手足口病儿童(EV71、CA16及HFMD其他EV病原体各40例)标本。对收集手足口病病人的标本使用依赖解旋酶恒温扩增技术检测,分析依赖解旋酶的恒温扩增(RT-t HDA)技术的特异性、灵敏度和符合率进行分析。结果检测均出现特异性扩增产物,具有典型的特异条带,检测标本病毒株均呈阳性,具有较强的检测特异性。阳性检测结果的符合率为91.28%~100.00%,平均为95.24%,阴性检测结果符合率为100.00%。结论依赖解旋酶恒温扩增技术具有快速、特异、简便、经济适用性高等优势,适用于基层医疗机构临床检测,值得临床借鉴与应用。 展开更多
关键词 依赖解旋酶 手足口病 普通RT-pcr
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