核因子-κB圈套寡核苷酸对核因子-κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响 被引量：6

1

作者 梁华平 徐祥 +4 位作者 杨文军 王付龙 刘东擘 胡承香 王正国 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期724-729,共6页

目的　探讨核因子 (NF) -κB圈套寡核苷酸 (ODN)对NF -κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响。　方法　利用电泳迁移率改变实验 (EMSA) ,测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF -κB的DNA结合能力的竞争抑制作用 ;利用NF -κB反应性... 目的　探讨核因子 (NF) -κB圈套寡核苷酸 (ODN)对NF -κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响。　方法　利用电泳迁移率改变实验 (EMSA) ,测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF -κB的DNA结合能力的竞争抑制作用 ;利用NF -κB反应性报告细胞株HEK -不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP) ,观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响。Wistar大鼠 96只 ,随机分为对照组、创伤性炎症组、圈套ODN组和无关ODN组。利用EMSA检测各组肝脏组织NF -κB的DNA结合活性 ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测大鼠肝脏组织TNF -α、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )mRNA水平 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测大鼠肝脏组织肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、IL - 6的蛋白水平。　结果　设计的环状哑铃形圈套ODN对NF -κB的DNA结合能力具有竞争抑制作用 ,1 μg ml和 2 μg ml圈套ODN瞬时转染HEK -d2EGFP ,可明显抑制p6 5蛋白诱导的d2EGFP表达。大鼠创伤性炎症后 3h ,肝脏NF -κB活性开始升高 ,伤后 1 2h达高峰。肝脏组织TNF -α、IL - 6mRNA水平和蛋白水平也明显上升 ,与NF -κB的活性改变一致。圈套ODN治疗后 ,大鼠肝脏组织TNF -α、IL - 6的表达明显下降 ,肝脏功能明显好转 ,而无关ODN则没有治疗效果。　结论　设计的靶向NF 展开更多

关键词 odn NF—κB 鼠肝 大鼠 TNF—α 肝脏功能 IL-6 DNA结合 EGFP 肝脏组织

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脂质体转染NF-κB诱捕物寡核苷酸抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤 被引量：1

2

作者 李峥 吴黎 +1 位作者 周雁荣 魏翔 《临床消化病杂志》 2010年第6期331-334,共4页

目的探讨转染NF-κB诱捕物寡核苷酸(decoy ODN)对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法制作20只肝脏缺血再灌注SD大鼠模型,无序ODN对照组、decoy ODN实验组各10只。阻断肝脏血流后,实验组行脂质体包裹的NF-κBdecoy ODN溶液门静脉注射转染,... 目的探讨转染NF-κB诱捕物寡核苷酸(decoy ODN)对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法制作20只肝脏缺血再灌注SD大鼠模型,无序ODN对照组、decoy ODN实验组各10只。阻断肝脏血流后,实验组行脂质体包裹的NF-κBdecoy ODN溶液门静脉注射转染,对照组行脂质体包裹的无序ODN门静脉注射。开放肝脏血流后3h取出肝脏,应用病理学、EMSA和RT-PCR分别检测移植肝脏病理改变、肝脏组织NF-κB转录活性和TNF-αmRNA表达情况。结果实验组肝脏损伤减轻,肝细胞NF-κB转录活性、TNF-α mRNA表达较对照组明显减小或减少(均P<0.01)。结论 NF-κBdecoy ODN可有效抑制肝脏细胞NF-κB的激活从而抑制肝脏缺血再灌注损伤。 展开更多

关键词 NF-κB decoy odn 缺血再灌注 肝脏 基因治疗

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NF-κB诱捕ODN促进宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究 被引量：2

3

作者 方春丽 林莉 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期582-585,共4页

目的探讨NF-κB在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织以及宫颈癌组织中的表达情况以及NF-κB诱捕ODN对宫颈癌He La细胞增殖、凋亡的影响。方法选取2013年2月至2014年2月南京医科大学第二附属医院妇产科收治的42例宫颈癌患者,以及同期诊... 目的探讨NF-κB在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织以及宫颈癌组织中的表达情况以及NF-κB诱捕ODN对宫颈癌He La细胞增殖、凋亡的影响。方法选取2013年2月至2014年2月南京医科大学第二附属医院妇产科收治的42例宫颈癌患者,以及同期诊治的宫颈上皮内瘤样病变患者22例、正常宫颈组织12例,进行免疫组织化学检测NF-κB信号激活情况;在体外培养的宫颈癌HeLa细胞株中,分别转染NF-κB特异诱捕ODN和错义ODN,使用MTT和流式细胞技术检测细胞增殖、凋亡情况。结果宫颈癌组织中NF-κB的表达明显增加;使用NF-κB诱捕ODN阻断NF-κB信号激活能够显著抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并增强顺铂诱导的细胞凋亡。结论 NF-κB诱捕ODN可以通过阻断NF-κB信号活化,从而抑制细胞增殖并增强顺铂诱导的细胞凋亡,为宫颈癌治疗提供了新的作用靶点和治疗方向。 展开更多

关键词 宫颈癌 核转录因子ΚB 诱捕 odn 凋亡

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NF-κB寡核苷酸诱骗策略构建胶原诱导性关节炎大鼠耐受性DC 被引量：2

4

作者 田娅玲 宁丽常 +1 位作者 岳萍 蒋红梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期906-911,共6页

目的:探讨NF-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)策略构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠脾脏来源的稳定的耐受性树突状细胞(DC),并对其成熟状态进行评估。方法:取CIA大鼠脾脏细胞,运用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(I... 目的:探讨NF-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)策略构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠脾脏来源的稳定的耐受性树突状细胞(DC),并对其成熟状态进行评估。方法:取CIA大鼠脾脏细胞,运用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4两种细胞因子诱导培养DC,并分为4组:单纯DC组、Decoy-DC组、LPS刺激DC组、LPS刺激Decoy-DC组。对4组细胞进行形态学观察、活力评价、表型鉴定及耐受性评估。结果:各组DC活力均>90%。OX-62表达率>55%。Decoy-DC组表面共刺激分子CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力及IFN-γ分泌能力均显著低于Control-DC组(P<0. 05),而IL-10分泌能力显著高于Control-DC组(P<0. 05)。LPS刺激Decoy-DC组CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力及IFN-γ分泌能力均显著低于LPS-DC组(P<0. 05),而IL-10分泌能力显著高于LPS-DC组(P<0. 05)。LPS-Decoy-DC组CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力与Decoy-DC组比,无显著性差异(P>0. 05)。结论:CIA大鼠脾脏细胞经NF-κB ODN Decoy策略成功构建出形态、表型及功能稳定的耐受性DC。 展开更多

关键词 树突状细胞 寡核苷酸诱骗剂 CIA大鼠 免疫耐受

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CRE-decoy ODN对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞中相关信号分子的影响

5

作者 段立华 张瑾 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1032-1037,共6页

目的:以环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(Cyclic-AMP response-element-binding protein,CREB)为靶点,体外合成CRE转录因子诱骗寡核苷酸(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoy ODN),观察其对慢性吗啡作用... 目的:以环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(Cyclic-AMP response-element-binding protein,CREB)为靶点,体外合成CRE转录因子诱骗寡核苷酸(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoy ODN),观察其对慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的人神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH)细胞cAMP含量、磷酸化CREB-1及CREB-1表达的影响,为在分子水平上寻找阿片类依赖的干预靶点提供实验依据。方法:体外合成CRE-decoy ODN,以DOTAP(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium propane)为转移介质,将CRE-decoy ODN与慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK-N-SH细胞共同孵育,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测CRE-decoy ODN与转录因子CREB结合的序列特异性;采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测CRE-decoy ODN细胞摄取;放射免疫分析法(RIA)检测细胞cAMP含量;Western blot检测CREB-1及磷酸化CREB-1表达。结果:单纯吗啡组较生理氯化钠溶液对照组细胞cAMP水平显著升高(P<0.05),单纯CRE-decoy ODN组与生理氯化钠溶液对照组无明显差异(P>0.05),但能明显抑制吗啡及纳络酮组的cAMP水平(P<0.05);单纯吗啡组与生理氯化钠溶液对照组比较,磷酸化CREB-1表达明显增高(P<0.01),吗啡+纳络酮组较单纯吗啡组轻度降低,与对照组比较仍有显著差异(P<0.01);CRE-decoyODN可抑制单纯吗啡组及吗啡+纳络酮组磷酸化CREB-1表达明显增高(P均<0.05)。结论:CRE-decoyODN可抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断引起SK-N-SH细胞cAMP和磷酸化CREB表达的升高。 展开更多

关键词 吗啡 SK—N—SH细胞株 CRE转录因子诱骗寡核苷酸(CRE—decoy odn)CRE—decoy odn 环 磷酸腺苷(cAMP) cAMP反应元件结合蛋白-1(CREB-1) 磷酸化CREB-1

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诱杀NF-κB的寡脱氧核苷酸对多发性骨髓瘤的影响 被引量：3

6

作者 史珂慧 蒋红利 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期132-136,共5页

目的:本研究探讨靶向核因子-κB(nuclear factor of Kappa B,NF-κB)的"诱杀性"寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)对小鼠多发性骨髓瘤的影响。方法:给予严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficient,SCID)小鼠... 目的:本研究探讨靶向核因子-κB(nuclear factor of Kappa B,NF-κB)的"诱杀性"寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)对小鼠多发性骨髓瘤的影响。方法:给予严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficient,SCID)小鼠皮下注射骨髓瘤细胞,当出现可测量的瘤组织时将成瘤小鼠随机分为3组:即治疗1组,治疗2组,对照组;给予治疗1组5μg/g脂质体-NF-κB"诱杀性"ODN,给予治疗2组10μg/g脂质体-NF-κB"诱杀性"ODN,给予对照组10μg/g脂质体-NF-κB无关的ODN,每周2次,共治疗4周。当小鼠濒死或瘤直径大于2 cm时即将其处死。结果:脂质体-NF-κB诱杀性ODN可以特异性抑制NF-κB结合DNA的活性;治疗组较对照组IL-6表达减少、瘤体积缩小、中位生存时间明显延长。结论:NF-κB诱杀性ODN可能成为治疗多发性骨髓瘤的新方法。 展开更多

关键词 核因子-κB诱杀性odn 脂质体 多发性骨髓瘤

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核因子-κB寡聚脱氧核苷酸诱骗剂处理树突状细胞对大鼠胶原诱导性关节炎治疗作用研究 被引量：4

7

作者 胡恒贵 尹向飞 蒋红梅 《蚌埠医学院学报》 CAS 2012年第6期633-635,638,共4页

目的:探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)寡聚脱氧核苷酸(ODN)诱骗剂处理的树突状细胞(dendritic cells,DC)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠的治疗作用及机制。方法:建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,... 目的:探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)寡聚脱氧核苷酸(ODN)诱骗剂处理的树突状细胞(dendritic cells,DC)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠的治疗作用及机制。方法:建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,NF-κB诱骗剂处理SD大鼠脾脏来源的DC,在初次免疫第5天经尾静脉注射到CIA大鼠体内,并设空白对照组、CIA模型组和Decoy-DC组。42 d后观察各组关节肿胀程度、关节炎指数和病理指标。结果:经rr GM-CSF和rr IL-4刺激后诱导的各组DC表面OX62的表达在70%以上,差异无统计学意义(P>0.05);Decoy-DC组与LPS-DC组的CD80阳性细胞百分率差异有统计学意义(P<0.05),在Decoy-DC组的CD80荧光强度明显低于LPS-DC组(P<0.01);Decoy-DC组的CD86荧光强度亦均明显低于LPS-DC组(P<0.01),初次免疫第7天后,Decoy-DC组和CIA模型组的关节炎指数开始增高;从第21天后开始,Decoy-DC组的关节指数均明显低于CIA模型组(P<0.01)。结论:NF-κB诱骗剂处理的DC有效地减轻CIA大鼠关节炎症状及组织病理损害,对类风湿性关节炎有较好的治疗作用。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿性 胶原诱导关节炎 核因子-κB诱骗剂 大鼠

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脂质体介导NF-κB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对下游粘附分子及趋化因子基因表达的影响 被引量：1

8

作者 丰贵文 于立新 +1 位作者 张宏涛 赵显国 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第11期84-87,91,共5页

目的探讨在Euro-Collin's(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下脂质体(invivoLiposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的转染效率以及复氧后对其细胞分子表达的影响。方法ECV-304在10%FBS的RPMI164... 目的探讨在Euro-Collin's(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下脂质体(invivoLiposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的转染效率以及复氧后对其细胞分子表达的影响。方法ECV-304在10%FBS的RPMI1640培养液,37℃、5%CO2条件下培养,生长至单层融合后进行试验。使用前配制Liposome/decoyODN和scrambledODN复合物,Liposome与ODN的+/-电荷比率为2。应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在4℃条件下,ODN浓度1.0μM的ECs缺氧保存6h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照,观察Liposome介导ODN对ECV-304的转染效率。利用RT-PCR方法检测各组ECV-304的ICAM-1、VCAM-1、IL-8、MCP-1以及P-selectin的mRNA表达。结果在ECs中、4℃缺氧保存ECV-3046h后,Liposome介导ODN对ECV-304转染的MFI为1072.71±33.14,是裸ODN转染的91.1倍,细胞对ODN的摄取率为93.06±2.60%,是裸ODN转染的71.5倍。Liposome介导ODN转染的ECV-304,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞浆,胞核内可见强荧光颗粒;而裸ODN转染的ECV-304,胞浆内偶见少量荧光,胞核内未见荧光颗粒。RT-PCR检测显示Liposome/decoyODN转染ECV-304后,其ICAM-1,VCAM-1,IL-8,MCP-1以及P-selectin的mRNA的? 展开更多

关键词 ECV-304 低温缺氧保存 复氧 Liposome/decoy odn 转染 基因表达

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NF-κB哑铃形诱骗剂ODN对骨髓瘤细胞生长及IL-6表达的抑制作用 被引量：3

9

作者 蒋红利 薛武军 +1 位作者 刘华 陈葳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期47-50,共4页

目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂ODN,分析靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂对NF-κB转录活性、多发性骨髓瘤细胞8266的生长及其分泌的IL-6的抑制效应。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)体外检测诱骗剂ODN对NF-κB转录活性的抑制效应。将... 目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂ODN,分析靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂对NF-κB转录活性、多发性骨髓瘤细胞8266的生长及其分泌的IL-6的抑制效应。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)体外检测诱骗剂ODN对NF-κB转录活性的抑制效应。将8266细胞随机分为传代培养的8266细胞组;诱骗剂ODN处理组及脂质体处理组。通过阳离子脂质体以2mg/L、4mg/L、8mg/L不同剂量诱骗剂ODN转染8266细胞。转染后8、12、18h,ELISA法检测8266细胞培养上清中IL-6的表达。用MTT比色检查诱骗剂ODN对IL-6刺激的8266细胞生长的影响。结果硫代磷酸的诱骗剂ODN在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;2mg/L、4mg/L、8mg/L等不同浓度的脂质体-ODN复合物对8266细胞表达IL-6的抑制程度不同。脂质体-ODN复合物对8266细胞的生长及IL-6的活性均有抑制作用。结论靶向NF-κB的诱骗剂ODN在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而抑制8266细胞的生长,降低瘤细胞中IL-6的表达。 展开更多

关键词 NF—κB 诱骗剂odn IL-6 多发性骨髓瘤

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核因子-κB诱捕物ODN对大鼠移植肾的转染及对细胞因子基因表达的影响 被引量：1

10

作者 张宏涛 赵显国 丰贵文 《中国血液净化》 2005年第3期157-161,共5页

目的　探讨核因子 -κB(NFκB)诱补物寡聚核苷酸 (ODN)对大鼠供肾的转染效率及对移植肾细胞因子基因表达影响。方法　建立大鼠移植肾模型 ,应用含有 1 μMLiposome/ODNEuro -Collins保存液(Ecs)灌注移植肾并低温缺氧保存 6h后移植到受... 目的　探讨核因子 -κB(NFκB)诱补物寡聚核苷酸 (ODN)对大鼠供肾的转染效率及对移植肾细胞因子基因表达影响。方法　建立大鼠移植肾模型 ,应用含有 1 μMLiposome/ODNEuro -Collins保存液(Ecs)灌注移植肾并低温缺氧保存 6h后移植到受体大鼠 ;2 4只大鼠分成 4组 :假手术组 (control组 ) ,ECs组 ,NFκB诱补物 (decoyODN)组 ,错配ODN(scrambledODN)组。应用荧光显微镜和多光子共聚焦显微镜观察转染有FITC标记的ODN移植肾 ,并观看其分布 ;用RT -PCR技术 ,检测术后移植肾中ICAM - 1、VCAM- 1、CINC的mRNA表达。结果　移植术后 1 5min ,FITC标记的decoyODN主要分布在移植肾的肾小球 ,并且有部分ODN进入细胞核 ;在术后 6h时 ,诱补物ODN主要分布在肾小球和近曲肾小管中 ,并且大部分进入细胞核。而不含有脂质体诱补物ODN复合物的Ecs保存的移植肾中则无荧光颗粒 ;与control组相比 ,ECs组移植肾 ,ICAM - 1、VCAM - 1、CINC的mRNA水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ;与ECs组相比 ,NF -κB诱捕物ODN处理组移植肾的ICAM - 1、VCAM - 1、CINC的mRNA水平显著下降 (P <0 .0 5 ) ,而Scram .ODN处理组移植肾的ICAM - 1、VCAM - 1、CINC的mRNA表达则未见抑制 (P >0 .0 5 )。结论　诱捕物ODN脂质体复合物在ECs中及低温缺氧条件下可? 展开更多

关键词 NFKB诱补物odn 细胞因子 肾移植

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针对SP1的圈套寡脱氧核苷酸抑制NIH_3T_3细胞活力和Ⅲα_1胶原基因表达的研究

11

作者 张世新 杨松林 +3 位作者 万伟东 史毅 邓辰亮 金由辛 《中国美容医学》 CAS 2008年第2期217-221,共5页

目的:研究针对转录因子SP1的圈套寡脱氧核苷酸(Decoy-Oligodeoxynucleotide,Decoy-ODN)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的活力和Ⅲα1胶原基因表达的影响,探讨圈套寡脱氧核苷酸用于病理性瘢痕基因治疗的可能性及机理。方法:设计合成针对SP... 目的:研究针对转录因子SP1的圈套寡脱氧核苷酸(Decoy-Oligodeoxynucleotide,Decoy-ODN)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的活力和Ⅲα1胶原基因表达的影响,探讨圈套寡脱氧核苷酸用于病理性瘢痕基因治疗的可能性及机理。方法:设计合成针对SP1的特异性哑铃形Decoy-ODN。用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞。分别用流式细胞仪检测ODN转染效率,激光共聚焦显微镜观察ODN在细胞中的分布,电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证ODN与SP1的特异性结合。用WST-8检测ODN对细胞活力的影响。用RT-PCR检测ODN对细胞胶原基因表达的抑制作用。结果:分别转染25nM、50nM、100nM、150nM SP1 Decoy-ODN,48h后,细胞活力依次为0.9331±0.0203、0.7479±0.0868、0.577±0.0347、0.4703±0.0147;转染100nMSP1Decoy-ODN可明显抑制Ⅲα1胶原mRNA的表达(P<0.01),抑制效果达60%。结论:Decoy-ODN可以通过拮抗核转录因子SP1的活性而抑制NIH3T3细胞的活力和Ⅲα1胶原基因的表达。 展开更多

关键词 圈套寡脱氧核苷酸(decoy—odn) 转录因子SP1 细胞活力 Ⅲα1胶原 成纤维细胞

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CRE-decoy ODN对SK-N-SH细胞中cAMP含量的影响

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作者 段立华 张瑾 《河北医药》 CAS 2007年第7期668-670,共3页

目的本实验以环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB)为靶点,观察CREB转录因子decoy(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoyODN)对慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK-N-SH细... 目的本实验以环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB)为靶点,观察CREB转录因子decoy(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoyODN)对慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK-N-SH细胞cAMP含量,为在分子水平上寻找阿片类依赖的干预靶点提供实验依据。方法放射免疫分析法(RIA)检测细胞cAMP含量。结果单纯吗啡组较生理盐水对照组细胞cAMP水平显著升高(P<0.05),纳络酮戒断组较单纯吗啡组轻度降低,与对照组比较差异显著(P<0.05);单纯CRE-decoy ODN组与生理盐水对照组差异无显著性,(P>0.05),但能明显抑制吗啡及纳络酮组的cAMP水平(P<0.05),mismatch ODN、nonsense ODN和DOTAP对吗啡及纳络酮引起的cAMP水平改变无明显影响(P>0.05)。结论CRE-decoy ODN可抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断引起SK-N-SH细胞cAMP的升高。 展开更多

关键词 吗啡 SK-N-SH细胞株 CRE-decoy odn 环磷酸腺苷

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外源CRE顺式元件对慢性吗啡作用SK-N-SH细胞CREB蛋白表达及DNA结合活性的影响 被引量：1

13

作者 张国忠 马春玲 +6 位作者 苏彦君 张瑾 左敏 谷振勇 姚玉霞 李淑瑾 丛斌 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第6期492-496,共5页

目的: 研究以cAMP反应元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)为靶点的CREB转录因子诱骗 (CRE transcriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide、CRE decoyODN)对慢性吗啡作用SK N SH细胞CREB相关指标的影响.方法: 体外... 目的: 研究以cAMP反应元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)为靶点的CREB转录因子诱骗 (CRE transcriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide、CRE decoyODN)对慢性吗啡作用SK N SH细胞CREB相关指标的影响.方法: 体外合成含cAMP反应元件 (cAMPresponseelement,CRE)的单链寡核苷酸,以DOTAP为转移介质,将CRE decoyODN与慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK N SH细胞共同孵育,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测CRE decoyODN细胞掺入;EMSA检测CRE decoyODN与转录因子CREB结合的特异性以及其对慢性吗啡作用SK N SH细胞CREB的DNA结合活性影响;WesternBlot检测CREB 1及磷酸化CREB 1蛋白表达.结果: 以DOT AP为介质,将CRE decoyODN成功导入SK N SH细胞;慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断使SK N SH细胞CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1 蛋白表达明显增高 (P值均<0 01),CREB 1蛋白无明显改变,CRE decoyODN可抑制CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1蛋白表达的改变(P<0 01),对CREB 1蛋白表达无明显影响.结论: CRE de coyODN可特异抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断SK N SH细胞CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1蛋白表达的增高,对CREB 1蛋白表达无明显影响. 展开更多

关键词 吗啡 SK-N-SH细胞株 DNA结合蛋白质 环AMP反应性 CRE-decoy odn

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核因子-κB“圈套”策略对子痫前期大鼠模型母胎界面炎症的作用

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作者 卢敏 龚护民 +1 位作者 茹美艳 许艳 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2011年第27期4254-4257,共4页

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)"圈套"寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleitides,ODN)对子痫前期大鼠模型母胎界面炎症反应的影响。方法:①NF-κB"圈套"寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)的设计、合成及转染;②研究NF-κB de... 目的:探讨核因子-κB(NF-κB)"圈套"寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleitides,ODN)对子痫前期大鼠模型母胎界面炎症反应的影响。方法:①NF-κB"圈套"寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)的设计、合成及转染;②研究NF-κB decoy ODN对子痫前期大鼠模型母胎界面的作用:Wistar孕鼠100只,随机分成正常对照组、子痫前期组、ODN组、脂质体组、错配ODN组,检测母胎界面的NF-κB表达和炎症反应。结果:子痫前期大鼠母胎界面NF-κB的表达明显增强,同时炎症反应较重。NF-κB decoy ODN能有效抑制母胎界面的炎症反应,而错配ODN却没有该效果。结论:NF-κB decoy ODN能有效抑制NF-κB介导的各类炎症因子的表达和合成,减轻子痫前期母胎界面的炎症反应。 展开更多

关键词 NF-κB decoy odn 子痫前期 母胎界面 炎症

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大鼠骨髓源性耐受性树突状细胞的诱导培养

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作者 马贵兰 谭艳 +1 位作者 包伦敏 蒋红梅 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第2期143-151,共9页

目的探讨使用核因子-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)诱导培养大鼠骨髓来源的耐受性树突状细胞(tol DC)的方法。方法取雄性Sprague Dawley(SD)和Wistar大鼠各10只,麻醉处死SD大鼠取胫骨制备骨髓细胞悬液、培养8 d获得树突状细胞(D... 目的探讨使用核因子-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)诱导培养大鼠骨髓来源的耐受性树突状细胞(tol DC)的方法。方法取雄性Sprague Dawley(SD)和Wistar大鼠各10只,麻醉处死SD大鼠取胫骨制备骨髓细胞悬液、培养8 d获得树突状细胞(DC),分为Control-DC组[添加白细胞介素4(IL-4)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)定向诱导分化培养]、Decoy-DC组(Control-DC组基础上加5μmol/L NF-κB ODN Decoy)、脂多糖(LPS)-DC组(培养初加GM-CSF和IL-4诱导分化培养,第7天加LPS 10μg/L刺激)及LPS-Decoy-DC组(Decoy-DC组细胞培养至第7天加10μg/L LPS),采用倒置显微镜分别观察Control-DC组和Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞提取当天和培养第4~8天、LPS-DC组和LPS-Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞培养第8天DC的细胞形状、表面突起及集落等特征,采用吉姆萨染色评价培养第8天Control-DC组和Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性DC的形态特征,采用台盼蓝染色法检测Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞提取当天和培养第8天DC的活细胞比率,采用流式细胞术检测各组SD大鼠培养第8天时骨髓源性DC的免疫表型;麻醉处死Wistar大鼠后取脾脏淋巴细胞制备反应细胞,同时将培养第8天的Control-DC组、Decoy-DC组、LPS-DC组及LPS-Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC中加丝裂霉素C制备刺激细胞,调整刺激细胞与反应细胞比例为1∶5得混合淋巴细胞,分为空白对照组(单独加混合淋巴细胞)、Control-DC组、Decoy-DC组、LPS-DC组及LPS-Decoy-DC组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组混合淋巴细胞于490 nm处的光密度(OD490)值。结果镜下Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC集落较Control-DC组少且表面突起少见,LPS-DC组SD大鼠骨髓源性的DC形态较LPS-Decoy-DC组多样;台盼蓝染色显示提取当天和培养第8天Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC活细胞率均> 95%(P>0.05);流式细胞术显示各组SD大鼠骨髓源性DC的OX-62阳性表达率均> 95%(P>0.05),Decoy-DC组CD80、CD86的表 展开更多

关键词 大鼠 免疫耐受 骨髓 树突状细胞 核因子-κB寡核苷酸诱骗剂 诱导培养

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NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸对肾小球系膜细胞TNF-α的表达抑制作用的研究

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作者 张建国 王惠民 +2 位作者 国华 郝天智 杨文军 《华南国防医学杂志》 CAS 2004年第4期21-24,共4页

目的:本实验设计合成靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对肾小球系膜细胞TNF-α表达的抑制效应。方法:以NF-κB顺式作用元件κB序列为模板,设计包含两个拷贝的κB序列,长度为58个碱基的环状IDNs,合成后部分序列做FAM标记,行转染效率... 目的:本实验设计合成靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对肾小球系膜细胞TNF-α表达的抑制效应。方法:以NF-κB顺式作用元件κB序列为模板,设计包含两个拷贝的κB序列,长度为58个碱基的环状IDNs,合成后部分序列做FAM标记,行转染效率鉴定实验。提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组。采用阳离子脂质体将2、4、8 mg／L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6h后用LPS刺激,收集转染后8、12、18上清和细胞。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清TNF-α蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测TNF-αmRNA转录。结果:阳离子脂质体可将哑铃形圈套ODNs高效转染入肾小球系膜细胞;4、8mg／L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TNF-α转录和表达。结论:靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子TNF-α的表达具有抑制效应。 展开更多

关键词 肾小球系膜细胞 odn TNF-Α NF-κB 表达 大鼠 转染 合成 研究 高效

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