生物制品中支原体污染的快速检测 被引量：11

1

作者 应蓓蓓 陆诗华 +2 位作者 吴维寿 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第5期53-56,共4页

用两步ＰＣＲ法（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）及ＤＮＡ荧光染色技术（ＨｏｅｃｈｓｔＳｔａｉｎｉｎｇ），检测了８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较。ＰＣＲ阳性检出率为３８．３％，Ｈｏｅｃｈ... 用两步ＰＣＲ法（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）及ＤＮＡ荧光染色技术（ＨｏｅｃｈｓｔＳｔａｉｎｉｎｇ），检测了８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较。ＰＣＲ阳性检出率为３８．３％，Ｈｏｅｃｈｓｔ阳性检出率为１９％。这些结果表明ＰＣＲ法较Ｈｏｅｃｈｓｔ染色法更敏感。 展开更多

关键词 支原体污染 nestedpcr DNA荧光染色法 生物制品

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Nested PCR检测狂犬病病毒方法的建立及病毒在小鼠体内的移行动态 被引量：4

2

作者 罗廷荣 源宣之 金城俊夫 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期535-538,共4页

应用建立的 Nested PCR特异地检出狂犬病病毒株 CVS、 HEP-Flury、ERA、RC-HL、 1 0 88、Komatsugawa的 RNA,但对类狂犬病病毒 Lagos bat、Duvenhage、Mokola及水泡性口膜炎病毒、轮状病毒、犬瘟热病毒均为阴性。该法敏感性很高 ,能检出... 应用建立的 Nested PCR特异地检出狂犬病病毒株 CVS、 HEP-Flury、ERA、RC-HL、 1 0 88、Komatsugawa的 RNA,但对类狂犬病病毒 Lagos bat、Duvenhage、Mokola及水泡性口膜炎病毒、轮状病毒、犬瘟热病毒均为阴性。该法敏感性很高 ,能检出 3TCID5 0 或 0 .8pg的狂犬病病毒 RNA。用该法测定了小鼠脑内感染 CVS株后的病毒增殖和移行动态 ,对感染小鼠的主要内脏器官进行了病毒 RNA检测 ,结果发现小鼠脑内感染 CVS 5d以后在其心、肝、脾、肺等内脏器官均检出了病毒 RNA。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 nestedpcr RNA 小鼠 移行动态

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Nested PCR检测微量隐孢子虫卵囊 被引量：2

3

作者 严若峰 周金林 李培英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期570-572,共3页

根据隐孢子虫 18S r DNA序列 ,设计出隐孢子虫属和鼠隐孢子虫种的特异性引物 ,进行 PCR和 Nested PCR反应 ,先后分别扩增出 1条 5 4 0 bp和 1条 2 5 0 bp的条带。研究表明 ,Nested PCR具有高度的特异性和敏感性。应用Nested PCR可检测 1... 根据隐孢子虫 18S r DNA序列 ,设计出隐孢子虫属和鼠隐孢子虫种的特异性引物 ,进行 PCR和 Nested PCR反应 ,先后分别扩增出 1条 5 4 0 bp和 1条 2 5 0 bp的条带。研究表明 ,Nested PCR具有高度的特异性和敏感性。应用Nested PCR可检测 1～ 10个鼠隐孢子虫卵囊 ,其敏感性是饱和蔗糖漂浮法的 10 5倍以上。 展开更多

关键词 鼠隐孢子虫卵囊 微量检测 nestedpcr 隐孢子虫病

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生殖支原体母婴垂直传播的研究 被引量：4

4

作者 俞信忠 方敏 +5 位作者 袁江英 许平 曾艳 王菊仙 王惠卿 郑淑芳 《疾病监测》 CAS 2002年第6期205-207,共3页

为了解绍兴地区孕妇生殖支原体感染和母婴垂直传播状况。采用套式聚合酶链反应 (nestedPCR)技术 ,对 877例孕妇宫颈拭子标本进行了生殖支原体检测。结果表明 ,检测出 36例孕妇呈阳性 ,阳性率为 4 1%(36 / 877) ,同时 ,对上述 36例阳性... 为了解绍兴地区孕妇生殖支原体感染和母婴垂直传播状况。采用套式聚合酶链反应 (nestedPCR)技术 ,对 877例孕妇宫颈拭子标本进行了生殖支原体检测。结果表明 ,检测出 36例孕妇呈阳性 ,阳性率为 4 1%(36 / 877) ,同时 ,对上述 36例阳性孕妇中已分娩的 32例新生儿咽拭子标本进行了检测 ,检测出 8例呈阳性 ,阳性率 (即母婴垂直传播率 )为 2 5 %。孕妇生殖支原体感染及母婴垂直传播状况应引起围产和优生工作者的关注。 展开更多

关键词 生殖支原体 母婴垂直传播 套式聚合酶链反应 nestedpcr

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“龙头凤尾”铁皮石斛基因鉴别及复方胶囊降血糖研究 被引量：2

5

作者 莫建梅 刘莺燕 +2 位作者 李庆国 李进进 廖俊杰 《江苏农业科学》 2019年第1期182-185,共4页

利用目标起始密码子多态性(start codon targeted polymorphism,简称SCo T)和巢式(Nested) PCR 2种分子标记技术建立"龙头凤尾"铁皮石斛DNA分子鉴别的方法,并研究其复方制剂的降血糖作用。用SCo T标记设计1对引物SC3,开发特... 利用目标起始密码子多态性(start codon targeted polymorphism,简称SCo T)和巢式(Nested) PCR 2种分子标记技术建立"龙头凤尾"铁皮石斛DNA分子鉴别的方法,并研究其复方制剂的降血糖作用。用SCo T标记设计1对引物SC3,开发特异性检测"龙头凤尾"铁皮石斛的Nested PCR方法,建立分子鉴别质量标准;利用鉴别后的石斛制备复方胶囊,对链脲佐菌素加高脂饲料复制的胰岛素抵抗/脂代谢紊乱型糖尿病大鼠进行降血糖药效学研究,观察其对模型大鼠空腹血糖、糖耐量、血清胆固醇、胰岛素等的影响。结果显示,用设计的特异性引物SC3对其进行SCo T-Nested PCR扩增后,仅在睿绅2号中扩增出1条清晰的目标条带,而在其他铁皮石斛品种中均没有出现目标条带,从而实现特异性鉴别。其复方石斛胶囊降血糖作用的规律为:与正常对照组比较,造模组大鼠血糖水平、血糖曲线下面积、总胆固醇含量显著增加(P <0. 01),血清胰岛素含量显著减少(P <0. 01);与造模组比较,复方胶囊高、中剂量组大鼠血糖水平、血糖曲线下面积、总胆固醇含量显著减少(P <0. 05),大鼠体质量、血清胰岛素含量显著增加(P <0. 05)。说明SCo T-Nested PCR分子标记可以利用1对引物SC3对"龙头凤尾"铁皮石斛睿绅2号进行特异性鉴别;其制备的复方胶囊高、中剂量组对链脲佐菌素加高脂饲料致胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱型模型大鼠具有一定的降血糖作用,增加胰岛素分泌,降低血清胆固醇含量。能够提高该品种石斛的质量标准,其制剂产品具有较好的降血糖作用。 展开更多

关键词 “龙头凤尾”铁皮石斛 SCoT标记 nestedpcr 降血糖 基因鉴别

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巢式聚合酶链反应对霍乱弧菌肠毒素快速检测方法的建立

6

作者 陈悦 周名权 《上海预防医学》 CAS 2000年第1期15-16,共2页

[目的]　建立霍乱弧菌肠毒素快速检测的检验技术。[方法]　运用巢式聚合酶链反应(NESTED-PCR)检测霍乱弧菌肠毒素基因CTX。[结果]　检测霍乱弧菌特异性强,检测下限达4cfu/mL(100cfu/mL级水平)。[结论]　NESTED-PCR检定霍乱弧菌简便、快... [目的]　建立霍乱弧菌肠毒素快速检测的检验技术。[方法]　运用巢式聚合酶链反应(NESTED-PCR)检测霍乱弧菌肠毒素基因CTX。[结果]　检测霍乱弧菌特异性强,检测下限达4cfu/mL(100cfu/mL级水平)。[结论]　NESTED-PCR检定霍乱弧菌简便、快速、敏感度高且准确性好。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 肠毒素 巢式聚合酶链反应 CTX 特异性 应对 快速检测方法 nestedpcr 检验技术

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FD耐热逆转录酶介导的逆转录 nestedPCR检测丙型肝炎病毒

7

作者 郑佐华 张丽萍 +3 位作者 赵炜 张炜 陈燃 毛裕民 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期445-447,共3页

目的　为检测丙型肝炎病毒，建立 Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介导的逆转录ｎｅｓｔｅｄ Ｐ Ｃ Ｒ 系统。方法　用该系统对１０８ 例可疑患者的血液进行检测，并与 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法的结果进行比较。结果　实验表明， Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介... 目的　为检测丙型肝炎病毒，建立 Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介导的逆转录ｎｅｓｔｅｄ Ｐ Ｃ Ｒ 系统。方法　用该系统对１０８ 例可疑患者的血液进行检测，并与 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法的结果进行比较。结果　实验表明， Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介导的逆转录ｎｅｓｔｅｄ Ｐ Ｃ Ｒ 比 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检出了更高的阳性率。结论　该系统是一种灵敏、有效、特异的 Ｈ Ｃ Ｖ 检测方法。 展开更多

关键词 FD 耐热逆转录酶 nestedpcr 丙型肝炎病毒

原文传递

用于PCR检测的临床标本和石蜡切片的简便处理法

8

作者 易广才 单祥年 +1 位作者 邵振堂 蒋清 《中国优生与遗传杂志》 1996年第6期23-24,22,共3页

本文以套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ为例研究了用于ＰＣＲ检测的全血和血清、口腔和宫颈粘液、羊水、新鲜组织及石蜡切片等标本的多种处理方法，并对各种方法的特点进行比较，这些方法的特点是简便快速，所需试剂和仪器低廉适合于基层医院推... 本文以套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ为例研究了用于ＰＣＲ检测的全血和血清、口腔和宫颈粘液、羊水、新鲜组织及石蜡切片等标本的多种处理方法，并对各种方法的特点进行比较，这些方法的特点是简便快速，所需试剂和仪器低廉适合于基层医院推广使用。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 临床检验 临床标本 石蜡切片

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黄土高原油松根际土壤酶活性及真菌群落多样性研究——以黄龙山林场为例 被引量：20

9

作者 褚洪龙 李莎 唐明 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期154-161,共8页

为了解黄土高原油松林根际土壤酶活性和真菌群落多样性,本研究分析了陕西黄龙县不同样区油松根际土壤脲酶、碱性磷酸酶、多酚氧化酶和过氧化氢酶活性,并采用巢式PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术研究了油松根际土壤中真菌群落多样性... 为了解黄土高原油松林根际土壤酶活性和真菌群落多样性,本研究分析了陕西黄龙县不同样区油松根际土壤脲酶、碱性磷酸酶、多酚氧化酶和过氧化氢酶活性,并采用巢式PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术研究了油松根际土壤中真菌群落多样性。结果表明,该地区油松根际真菌群落相似性较高,但受坡向、海拔、土壤水分及人类扰动等诸多因素的影响,不同样区的真菌群落多样性和土壤酶活性存在差异。油松根际各土壤酶活性均表现出坡顶样地高于坡底样地,阴面样地高于阳面样地,林区路旁样地由于采样环境不同于林中样地,酶活性介于其他样地之间;丰富度(S)、Shannon-Wiener指数(H)、Simpson指数(D)、均匀度指数(EH)分析表明,该区域油松根际土壤真菌群落多样性分布特征与酶活性分布特征相一致。相关性分析表明,除过氧化氢酶外,其余酶活性之间、以及与真菌多样性均呈显著正相关(p<0.05);土壤含水量与真菌多样性和土壤酶活性除多酚氧化酶外均呈显著正相关(p<0.05);而土壤p H与各种酶活性之间均未达显著相关水平(p>0.05)。土壤含水量是影响该地区真菌群落多样性与土壤酶活性主要因素之一。 展开更多

关键词 黄土高原 油松 酶活性 真菌群落多样性 巢式PCR-DGGE

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猪瘟病毒RT-nested PCR检测方法的优化和应用 被引量：14

10

作者 朱小甫 张志 +2 位作者 李晓成 陈德坤 吴旭锦 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第6期11-14,共4页

为了优化猪瘟病毒的RT-nested PCR检测方法,对福建省猪瘟流行情况进行了调查。根据GenBank上发表的猪瘟病毒Shimen株基因序列设计并合成了2对引物,优化了猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的RT-nested PCR检测方法,并对所优化... 为了优化猪瘟病毒的RT-nested PCR检测方法,对福建省猪瘟流行情况进行了调查。根据GenBank上发表的猪瘟病毒Shimen株基因序列设计并合成了2对引物,优化了猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的RT-nested PCR检测方法,并对所优化的RT-nested PCR特异性进行了检验。结果表明,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为1×10-7ng/mL,只有CSFV扩增出了272 bp的目的条带,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)阳性毒和健康猪脾、肝组织及阴性PK-15细胞均未扩增出特异性条带,说明该方法特异性强。应用此方法对福建省133份病料进行检测,结果有60份病料为阳性,阳性率为45.1%。结果提示优化的检测方法灵敏度高,特异性强;福建省猪群CSFV感染率高,需要加强CSF预防控制工作。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 RT-nestedpcr 检测方法

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稻曲病菌的Nested PCR检测(英文) 被引量：8

11

作者 周永力 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期102-108,共7页

为设计稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)专化性PCR引物,测定了1991-2001年采集的多个水稻品种、不同水稻产区的菌株的ITS和5.8S rDNA区序列。U. virens的ITS1、ITS2和5.8S rDNA区域的长度为 624-625bp, 序列高度保守。在与麦角菌科其它... 为设计稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)专化性PCR引物,测定了1991-2001年采集的多个水稻品种、不同水稻产区的菌株的ITS和5.8S rDNA区序列。U. virens的ITS1、ITS2和5.8S rDNA区域的长度为 624-625bp, 序列高度保守。在与麦角菌科其它种比较的基础上,设计了U. virens专化性嵌合引物。采用PCR方法可以灵敏地检测目标真菌,并且与传统的组织观察结果很好地吻合。这一结果为深入研究稻曲病的侵染规律和建立田间早期诊断技术提供了可能。 展开更多

关键词 稻曲病菌 nestedpcr检测 PCR引物 专化性嵌合引物

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利用nested PCR-DGGE技术分析江苏啤酒大麦真菌群落结构 被引量：4

12

作者 梁小刚 蔡国林 +2 位作者 张中华 商曰玲 陆健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1-6,共6页

为了探索真菌群落对啤酒大麦麦芽的影响,首先要了解啤酒大麦真菌群落结构。文中采用9种不同方法提取了啤酒大麦总DNA,利用嵌套聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(nested PCR-DGGE)技术,分析了啤酒大麦真菌群落结构,明确了啤酒大麦中优势... 为了探索真菌群落对啤酒大麦麦芽的影响,首先要了解啤酒大麦真菌群落结构。文中采用9种不同方法提取了啤酒大麦总DNA,利用嵌套聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(nested PCR-DGGE)技术,分析了啤酒大麦真菌群落结构,明确了啤酒大麦中优势真菌种属信息。不同DNA提取方法,nested PCR-DGGE分析结果有显著差异。啤酒大麦中的主要真菌为Cochliobolus sativus、Alternaria alternata、Fusarium sporotrichioides、Coniothyrium fuckelii、Aspergillus sp.和Saccharomyces cerevisiae等子囊菌门真菌以及Sporobolomyces roseus、Cryptococcus magnus和Entorrhiza fineranae等担子菌门真菌。该研究丰富了对啤酒大麦真菌群落结构的认识,同时也证明nested PCR-DGGE技术是一种能够快速有效地研究啤酒大麦真菌群落结构的技术。 展开更多

关键词 啤酒大麦 DNA提取 nestedpcr—DGGE 真菌群落结构

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套式PCR法检测输卵管妊娠者的沙眼衣原体感染研究

13

作者 朱庆文 黄宇春 《中国优生与遗传杂志》 1999年第4期6-6,3,共2页

目的：为探讨输卵管妊娠与生殖道沙眼衣原体的关系。方法：采集５７例输卵管妊娠者的宫颈分泌物、输卵管组织、胚胎组织，并采集３２例卵巢囊肿者的宫颈分泌物、输卵管组织和２９例早孕人流者的宫颈分泌物、胚胎组织。应用套式ＰＣＲ法... 目的：为探讨输卵管妊娠与生殖道沙眼衣原体的关系。方法：采集５７例输卵管妊娠者的宫颈分泌物、输卵管组织、胚胎组织，并采集３２例卵巢囊肿者的宫颈分泌物、输卵管组织和２９例早孕人流者的宫颈分泌物、胚胎组织。应用套式ＰＣＲ法检测以上标本中的沙眼衣原体ＤＮＡ。结果：输卵管妊娠者的宫颈分泌物阳性率高达４０．４％，明显高于卵巢囊肿者的１２．５％和早孕人流者的１３．７％（Ｐ均＜０．０５），ＲＲ为４．４９；输卵管妊娠者的输卵管组织阳性率为２４．６％，明显高于卵巢囊肿者的６．３％，ＲＲ为４．９０；输卵管妊娠者的胚胎组织阳性率为２６．３％，明显高于早孕人流胚胎组织的６．９％，ＲＲ为４．８０。结论：输卵管妊娠与生殖道的沙眼衣原体感染相关。 展开更多

关键词 输卵管妊娠 沙眼衣原体 套式PCR

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猴泡沫病毒(SFV)RT-nestedPCR检测方法的建立及初步应用

14

作者 栗景蕊 付瑞 +1 位作者 李晓波 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第1期46-51,I0003,共7页

目的建立实验猴群及相关生物制品猴泡沫病毒(SFV)的PCR检测方法。方法选择SFV-1、SFV-3、SFVCPZ前病毒序列的pol基因同源性较高的区域设计嵌套引物对SFV-1毒种进行RT-nestedPCR扩增并克隆测序,以确定其准确性,通过验证方法的特异性和敏... 目的建立实验猴群及相关生物制品猴泡沫病毒(SFV)的PCR检测方法。方法选择SFV-1、SFV-3、SFVCPZ前病毒序列的pol基因同源性较高的区域设计嵌套引物对SFV-1毒种进行RT-nestedPCR扩增并克隆测序,以确定其准确性,通过验证方法的特异性和敏感性,初步应用该方法对恒河猴外周血淋巴细胞(PBLs),常用猴肾传代细胞及猴源性生物制品进行检测。结果经RT-nestedPCR扩增出的片断与SFV-1 cDNA序列同源性达到99%,对10只恒河猴的检测结果为5只阳性,5只阴性,对常用猴肾传代细胞及脊髓灰质炎疫苗的检测结果均为阴性。结论所建立的SFV RT-nestedPCR检测方法能准确的检测出恒河猴SFV的感染情况,对控制实验猴群的质量具有重要意义。该方法可用于检测猴源性生物制品中SFV的污染情况,为保证生物制品应用的安全性提供一定依据。 展开更多

关键词 猴泡沫病毒 逆转录-巢式PCR 外周血淋巴细胞

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