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拟南芥Mg^(2+)转运蛋白AtMGT10的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1
1
作者 周亚媚 梁爽 +1 位作者 齐亚飞 刘夏燕 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第5期168-174,共7页
【目的】在大肠杆菌系统中原核表达拟南芥叶绿体Mg^(2+)转运蛋白AtMGT10,通过免疫健康成年家兔,获得针对AtMGT10蛋白的多克隆抗体,为研究AtMGT10蛋白在植物生长发育中的功能奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆AtMGT10基因编码区187~786b... 【目的】在大肠杆菌系统中原核表达拟南芥叶绿体Mg^(2+)转运蛋白AtMGT10,通过免疫健康成年家兔,获得针对AtMGT10蛋白的多克隆抗体,为研究AtMGT10蛋白在植物生长发育中的功能奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆AtMGT10基因编码区187~786bp的cDNA片段,连接到pET-28a中构建原核表达载体pET-28aAtMGT10^(63-262),转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达带有His标签的His-AtMGT10^(63-262)截短重组蛋白。用镍柱亲和纯化后的重组蛋白作为抗原皮下注射免疫家兔,制备针对AtMGT10蛋白的多抗血清。提取拟南芥野生型叶片总蛋白,用AtMGT10多抗血清进行蛋白免疫印迹检测。【结果】经PCR扩增获得了600bp的AtMGT10基因cDNA片段,成功构建原核表达载体pET-28a-AtMGT10^(63-262),在大肠杆菌系统中表达出His-AtMGT10^(63-262)蛋白,经亲和纯化后免疫家兔获得了Anti-AtMGT10多抗血清。在拟南芥野生型总蛋白中用Anti-AtMGT10经免疫印迹检测到大约50ku的蛋白条带,利用抗原竞争试验进一步证明检测到的信号就是拟南芥内源AtMGT10蛋白。【结论】原核表达了His-AtMGT1063-262蛋白,成功制备了特异性较强的AtMGT10蛋白多克隆抗体。 展开更多
关键词 mg2+转运蛋白 AtmgT10蛋白 拟南芥 原核表达 抗体制备
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系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞Mg^(2+)转运蛋白1水平表达及临床价值研究
2
作者 孔滔 饶舜 +2 位作者 朱伟 玉坎哈 余超 《现代检验医学杂志》 CAS 2024年第3期157-163,共7页
目的探讨Mg^(2+)转运蛋白1(magnesium transporter protein 1,MagT1)在系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞中的表达情况,并阐述其临床意义。方法选取西双版纳傣族自治州人民医院2019年1月~2021年6月... 目的探讨Mg^(2+)转运蛋白1(magnesium transporter protein 1,MagT1)在系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞中的表达情况,并阐述其临床意义。方法选取西双版纳傣族自治州人民医院2019年1月~2021年6月收治的79例SLE患者作为研究对象,依据SLE疾病活动指数(SLE disease activityindex,SLEDAI)评分将SLE患者分为中重度组(SLEDAI≥10,n=32)和轻度组(SLEDAI<10,n=47),另选取同期体检健康者40例作为对照组。记录患者临床生化和血清免疫相关指标水平;采用实时定量PCR(quantitative realtimePCR,qRT-PCR)法和Western Blot法检测患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达情况;Pearson相关性分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白与生化免疫相关指标表达的关系;绘制受试者工作特征(receiver operatingcharacteristic,ROC)曲线分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达对SLE及其严重程度的诊断价值。结果与对照组比较,轻度组和中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA[0.65(0.36,0.99),0.23(0.07,0.36)vs 1.20(0.83,1.37)]和MagT1蛋白[0.35(0.22,0.42),0.22(0.15,0.27)vs 0.53(0.40,0.63)]表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.247,7.078;5.128,7.257,均P<0.05);与轻度组比较,中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.169,3.599,均P<0.05)。Pearson相关性结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平与血清血红蛋白(hemoglobin,HGB)及补体3(complement 3,C3)和补体4(complement 4,C4)水平呈正相关(r=0.496,0.637,0.588,均P<0.05);与红细胞沉降速率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、超敏C反应蛋白(hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)、免疫球蛋白(immunoglobulin G,IgG)水平和SLEDAI呈负相关(r=-0.598,-0.476,-0.646,-0.514,均P<0.05)。ROC曲线结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平诊断SLE曲线下面积为0.893(95%CI:0.838~0.948),敏感度和特异度分别为90.0%,67.1%,诊断 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 mg^(2+) 转运蛋白1 系统性红斑狼疮疾病活动指数 外周血T 淋巴细胞
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兔抗弓形虫CorA家族Mg^(2+)转运蛋白多肽抗体的制备及鉴定 被引量：3
3
作者 肖斌 陈瑜 +2 位作者 李林海 罗树红 郝文波 《生物技术通讯》 CAS 2016年第6期778-782,共5页
目的:制备并鉴定兔抗弓形虫CorA家族Mg^(2+)转运蛋白(TgMg)的特异性多克隆抗体。方法:设计并合成一段的具有较好免疫原性的、来源于TgMg氨基酸序列的短肽,短肽与KLH偶联后免疫新西兰大耳白兔,收集兔血清并分离纯化TgMg多克隆抗体,利用间... 目的:制备并鉴定兔抗弓形虫CorA家族Mg^(2+)转运蛋白(TgMg)的特异性多克隆抗体。方法:设计并合成一段的具有较好免疫原性的、来源于TgMg氨基酸序列的短肽,短肽与KLH偶联后免疫新西兰大耳白兔,收集兔血清并分离纯化TgMg多克隆抗体,利用间接ELISA、Western印迹、间接免疫荧光等多种分子生物学方法鉴定多抗的效价、特异性及TgMg蛋白的亚细胞定位。结果:间接ELISA测定多抗效价为1∶160000;Western印迹显示该多抗能识别相对分子质量约为174×103的单一条带,表明抗体的特异性较好;用间接免疫荧光法发现TgMg定位于细胞质,与预期结果相符。结论:运用人工合成多肽结合经典的多克隆抗体制备技术制备了抗TgMg多克隆抗体,为深入研究TgMg蛋白的生物学特性及代谢功能提供了有效工具。 展开更多
关键词 弓形虫 mg^(2+)转运蛋白 多克隆抗体 免疫荧光
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植物Mg^(2+)转运蛋白与相关基因及其功能的研究进展 被引量：7
4
作者 郭照辉 张德元 +1 位作者 毛丹丹 李咏梅 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第3期207-210,共4页
镁离子是植物细胞中最丰富的二价阳离子,在植物的生长发育中起着重要的作用.对Mg2+独特的几何和化学性质,Mg2+对植物细胞体内中动态平衡的影响,植物中Mg2+转运相关蛋白与相关基因及其功能的研究进展进行了综述.
关键词 镁离子 动态平衡 mg^2+转运蛋白与相关基因
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慢性乙型肝炎病毒感染者Mg2+转运蛋白1表达水平对CD8+T细胞耗竭的影响 被引量：8
5
作者 林晓娥 吴景华 +3 位作者 王宁 张勇 谌晓楠 祝朝前 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第13期2070-2073,2077,共5页
目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD8^+T细胞中Mg^2+转运蛋白1(MagT1)的表达水平及其表达对CD8^+T 细胞耗竭的影响。方法选取2016年6月至2018年1月本院收治的未经抗病毒治疗的HBV感染者86例,根据外周血HBV DNA水平将慢性HBV... 目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD8^+T细胞中Mg^2+转运蛋白1(MagT1)的表达水平及其表达对CD8^+T 细胞耗竭的影响。方法选取2016年6月至2018年1月本院收治的未经抗病毒治疗的HBV感染者86例,根据外周血HBV DNA水平将慢性HBV感染者分为高病毒载量组(45例)与低病毒载量组(41例),并设置健康对照组(20例)。采集外周血、分离CD8^+T细胞,检测各组外周血及CD8^+T 细胞中Mg^2+含量;采用Western blot 和实时荧光定量PCR 法检测各组CD8^+T 细胞中MagT1 蛋白和mRNA表达水平;采用流式细胞术检测各组CD8^+T细胞表面分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)、程序性死亡受体1(PD-1)、自然杀伤细胞活化受体(NKG2D)和CD38的表达水平;并分析MagT1蛋白表达水平与CD8^+T细胞表面分子表达水平的相关性。结果各组外周血中Mg^2+浓度差异无统计学意义(P>0.05)。与健康对照组比较,慢性HBV 感染者CD8^+T细胞中Mg^2+浓度、MagT1 蛋白和mRNA 表达水平以及表面分子NKG2D和CD38均显著下降(均P<0.05),PD-1和Tim-3表达显著增加(均P<0.05)。并且,CD8^+T细胞中MagT1蛋白与PD-1、Tim-3表达呈负相关(均P<0.05),与NKG2D、CD38表达呈正相关(均P<0.05)。结论慢性HBV感染者CD8^+T细胞耗竭与CD8^+T细胞中MagT1表达下调所致的Mg^2+内流障碍有关。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎病毒 mg^2+转运蛋白1 CD8^+T细胞 耗竭
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急性髓系白血病患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞中MagT1水平监测的临床价值 被引量：5
6
作者 王晶 向健 +2 位作者 胡淑芳 朱艳坤 钟玉钗 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第8期991-996,共6页
目的探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞中Mg^(2+)转运蛋白1(MagT1)水平监测的临床价值。方法收集2014年3月至2018年12月收治的新发AML患者197例,同期体检者60例。分离外周血单个核细胞(PBMCs)... 目的探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞中Mg^(2+)转运蛋白1(MagT1)水平监测的临床价值。方法收集2014年3月至2018年12月收治的新发AML患者197例,同期体检者60例。分离外周血单个核细胞(PBMCs)和CD8^(+)T细胞备用。全自动生化分析仪检测血清Mg^(2+)浓度,RT-qPCR检测PBMCs中MagT1 mRNA表达。根据NCCN AML指南将AML患者分为低、中、高风险组,RT-qPCR和Western blot检测患者CD8^(+)T细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞PD-1和Tim-3表达水平;Spearson相关性分析MagT1蛋白与PD-1和Tim-3表达的相关性;Kaplan-Meier曲线分析CD8^(+)T细胞MagT1蛋白表达与患者无事件生存期(EFS)和总生存期(OS)的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估MagT1蛋白表达水平对AML患者风险分层及预后的预测价值。结果与对照组比较,AML患者外周血中Mg;浓度降低,PBMCs中MagT1 mRNA相对表达量下调。与低风险组比较,中、高风险组患者CD8^(+)T细胞中MagT1 mRNA和蛋白相对表达量降低,而PD-1和Tim-3表达水平升高。CD8^(+)T细胞中MagT1蛋白与PD-1和Tim-3表达水平呈负相关;MagT1蛋白高表达患者的EFS和OS高于MagT1蛋白低表达患者;MagT1表达水平对AML患者预后(AUC=0.866,95%CI:0.817~0.915)及风险分层(AUC=0.724,95%CI:0.642~0.806)均具有一定的评估价值。结论AML患者外周血CD8^(+)T细胞中MagT1的表达降低与患者不良风险分层、CD8^(+)T淋巴细胞耗竭和不利的生存状况相关,对评估AML患者风险及预测预后有重要价值。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 CD8^(+)T淋巴细胞 mg^(2+)转运蛋白1 预后
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拟南芥AtMGT3基因转运功能研究 被引量：5
7
作者 邓沛怡 田连福 +2 位作者 陈键 栾升 李东屏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2007年第4期328-333,共6页
对拟南芥AtMGT3基因的Mg2+转运功能进行了初步研究.AtMGT3转录本的半定量分析表明,AtMGT3在根、茎、叶、花、角果中均有表达,但在花中表达量最高,根中最少.MM281功能互补和液体生长曲线结果表明:At-MGT3功能互补细菌Mg2+转运突变株,具有... 对拟南芥AtMGT3基因的Mg2+转运功能进行了初步研究.AtMGT3转录本的半定量分析表明,AtMGT3在根、茎、叶、花、角果中均有表达,但在花中表达量最高,根中最少.MM281功能互补和液体生长曲线结果表明:At-MGT3功能互补细菌Mg2+转运突变株,具有Mg2+转运能力;AtMGT3介导Mg2+的低亲和性吸收,是一个低亲和性Mg2+转运蛋白;AtMGT3可能还能转运Fe2+,但转运Fe2+浓度超出了正常的生理浓度.在正常生理条件下,At-MGT3的主要生理功能是作为Mg2+转运蛋白起作用. 展开更多
关键词 AtmgT3 功能互补分析 低亲和mg^2+转运蛋白
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