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腭裂相关基因MCPR1在大肠杆菌中的融合表达及抗体制备
被引量：
2
1
作者
轩东英
金岩
+3 位作者
金明
轩昆
孙强
胡世颉
《临床口腔医学杂志》
2004年第8期469-472,共4页
目的 :MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因 ,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列 ,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX -T -easy ,再酶切得到MCPR1片...
目的 :MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因 ,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列 ,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX -T -easy ,再酶切得到MCPR1片段定向克隆到 pGEX -4T -1载体中 ,构建融合表达载体pGEX -4T-MCPR1,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达 ,得到GST -MCPR1融合蛋白 ,进行初步纯化及SDS -PAGE电泳 ,直接割胶 ,将其作为抗原免疫兔子。结果 :成功构建融合表达载体pGEX -4T -MCPR1,得到初步纯化的GST-MCPR1融合蛋白 ,免疫兔子 1个月后 ,获得免疫血清 ,初步纯化得到多克隆抗体。Western印迹分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6。结论 :MCPR1多克隆抗体的获得性为在蛋白水平研究新MCPR1的功能提供了实验基础 ,后续实验可以利用免疫分析技术研究MCPR1蛋白与其它蛋白质的相互作用 ,从而为阐明MCPR1在胚胎发育及腭裂形成中所发挥的作用提供实验手段。
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关键词
mcpr
1
基因
原核表达
融合蛋白
多克隆抗体
原文传递
mcpr1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
2
作者
轩东英
金岩
+2 位作者
金明
轩昆
张蓉
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期554-557,共4页
目的 :构建mcpr1基因原核表达载体 ,表达MCPR1蛋白。 方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出mcpr1基因的蛋白编码序列 ,克隆到中间载体中 ,再经双酶切 ,亚克隆到表达载体中 ,构建该基因的融合表达载体pGEX 4T mcpr1,在大肠杆菌中用IPTG...
目的 :构建mcpr1基因原核表达载体 ,表达MCPR1蛋白。 方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出mcpr1基因的蛋白编码序列 ,克隆到中间载体中 ,再经双酶切 ,亚克隆到表达载体中 ,构建该基因的融合表达载体pGEX 4T mcpr1,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳。 结果 :酶切和测序鉴定 ,表明融合表达载体内插入片段正确 ,在大肠杆菌中诱导后 ,出现一条 3 60 0 0的新蛋白带 ,主要存在于细菌沉淀中 ,占总蛋白的3 9 %。结论 :研究表明mcpr1基因编码的蛋白质能够在原核细胞中表达 。
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关键词
mcpr
1
基因
基因
表达
融合蛋白
蛋白纯化
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职称材料
腭裂相关基因mcpr1在小鼠腭突发育及腭裂发生中的表达研究
3
作者
轩东英
章锦才
谢宝仪
《广东牙病防治》
2011年第9期455-458,共4页
目的检测mcpr1基因的蛋白在正常腭突及小鼠腭裂模型腭突发育中的时空表达模式。方法实验组管饲含全反式维甲酸的植物油诱导建立小鼠腭裂模型,对照组小鼠管饲植物油。2组取胎龄12、13、14、16 d的胎鼠各3只,包埋切片,HE染色观察2组胎鼠...
目的检测mcpr1基因的蛋白在正常腭突及小鼠腭裂模型腭突发育中的时空表达模式。方法实验组管饲含全反式维甲酸的植物油诱导建立小鼠腭裂模型,对照组小鼠管饲植物油。2组取胎龄12、13、14、16 d的胎鼠各3只,包埋切片,HE染色观察2组胎鼠腭部发育的形态学变化,免疫组织化学方法观察MCPR1蛋白在2组胎鼠腭突中的表达差异。结果成功建立小鼠腭裂模型。切片HE染色观察发现实验组双侧腭突体积较对照组小,两侧腭突未接触;而对照组腭突融合,腭骨形成。免疫组织化学检查结果表明对照组小鼠胎龄12 d时MCPR1蛋白在腭突上皮细胞呈强阳性表达;而实验组小鼠胎龄12 d时腭突间充质细胞内MCPR1蛋白的表达较强,实验组胎龄16 d小鼠仅在上皮细胞附近的间充质细胞中有阳性表达。同一时间点比较,MCPR1蛋白的表达在实验组均强于对照组(P<0.05)。结论 MCPR1蛋白的表达变化随腭部发育存在时空表达差异。
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关键词
腭裂
腭突
mcpr
1
基因
免疫组化
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职称材料
题名
腭裂相关基因MCPR1在大肠杆菌中的融合表达及抗体制备
被引量：
2
1
作者
轩东英
金岩
金明
轩昆
孙强
胡世颉
机构
第四军医大学口腔医学院组织病理教研室
第四军医大学生物化学教研室
第四军医大学遗传与发育教研室
第四军医大学西京医院神经外科
出处
《临床口腔医学杂志》
2004年第8期469-472,共4页
文摘
目的 :MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因 ,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列 ,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX -T -easy ,再酶切得到MCPR1片段定向克隆到 pGEX -4T -1载体中 ,构建融合表达载体pGEX -4T-MCPR1,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达 ,得到GST -MCPR1融合蛋白 ,进行初步纯化及SDS -PAGE电泳 ,直接割胶 ,将其作为抗原免疫兔子。结果 :成功构建融合表达载体pGEX -4T -MCPR1,得到初步纯化的GST-MCPR1融合蛋白 ,免疫兔子 1个月后 ,获得免疫血清 ,初步纯化得到多克隆抗体。Western印迹分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6。结论 :MCPR1多克隆抗体的获得性为在蛋白水平研究新MCPR1的功能提供了实验基础 ,后续实验可以利用免疫分析技术研究MCPR1蛋白与其它蛋白质的相互作用 ,从而为阐明MCPR1在胚胎发育及腭裂形成中所发挥的作用提供实验手段。
关键词
mcpr
1
基因
原核表达
融合蛋白
多克隆抗体
Keywords
mcpr
1
gene
prokaryotic expression
fusion protein
polyclonal antibody
分类号
R782.2 [医药卫生—口腔医学]
Q786 [医药卫生—临床医学]
原文传递
题名
mcpr1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
2
作者
轩东英
金岩
金明
轩昆
张蓉
机构
第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心
第四军医大学口腔医学院生物化学教研室
第四军医大学口腔医学院药理教研室
出处
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期554-557,共4页
基金
西安第四军医大学创新基金重点课题资助CXO2F0 0 2
文摘
目的 :构建mcpr1基因原核表达载体 ,表达MCPR1蛋白。 方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出mcpr1基因的蛋白编码序列 ,克隆到中间载体中 ,再经双酶切 ,亚克隆到表达载体中 ,构建该基因的融合表达载体pGEX 4T mcpr1,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳。 结果 :酶切和测序鉴定 ,表明融合表达载体内插入片段正确 ,在大肠杆菌中诱导后 ,出现一条 3 60 0 0的新蛋白带 ,主要存在于细菌沉淀中 ,占总蛋白的3 9 %。结论 :研究表明mcpr1基因编码的蛋白质能够在原核细胞中表达 。
关键词
mcpr
1
基因
基因
表达
融合蛋白
蛋白纯化
Keywords
mcpr
1
gene
Fusion protein
Gene expression
Purifi cation
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
腭裂相关基因mcpr1在小鼠腭突发育及腭裂发生中的表达研究
3
作者
轩东英
章锦才
谢宝仪
机构
广东省口腔医院.南方医科大学附属口腔医院
出处
《广东牙病防治》
2011年第9期455-458,共4页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(30901691)
文摘
目的检测mcpr1基因的蛋白在正常腭突及小鼠腭裂模型腭突发育中的时空表达模式。方法实验组管饲含全反式维甲酸的植物油诱导建立小鼠腭裂模型,对照组小鼠管饲植物油。2组取胎龄12、13、14、16 d的胎鼠各3只,包埋切片,HE染色观察2组胎鼠腭部发育的形态学变化,免疫组织化学方法观察MCPR1蛋白在2组胎鼠腭突中的表达差异。结果成功建立小鼠腭裂模型。切片HE染色观察发现实验组双侧腭突体积较对照组小,两侧腭突未接触;而对照组腭突融合,腭骨形成。免疫组织化学检查结果表明对照组小鼠胎龄12 d时MCPR1蛋白在腭突上皮细胞呈强阳性表达;而实验组小鼠胎龄12 d时腭突间充质细胞内MCPR1蛋白的表达较强,实验组胎龄16 d小鼠仅在上皮细胞附近的间充质细胞中有阳性表达。同一时间点比较,MCPR1蛋白的表达在实验组均强于对照组(P<0.05)。结论 MCPR1蛋白的表达变化随腭部发育存在时空表达差异。
关键词
腭裂
腭突
mcpr
1
基因
免疫组化
Keywords
Cleft palate
Palatal shelves
mcpr
1
gene
Immunohistochemistry
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
腭裂相关基因MCPR1在大肠杆菌中的融合表达及抗体制备
轩东英
金岩
金明
轩昆
孙强
胡世颉
《临床口腔医学杂志》
2004
2
原文传递
2
mcpr1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
轩东英
金岩
金明
轩昆
张蓉
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
下载PDF
职称材料
3
腭裂相关基因mcpr1在小鼠腭突发育及腭裂发生中的表达研究
轩东英
章锦才
谢宝仪
《广东牙病防治》
2011
0
下载PDF
职称材料
已选择
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