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KLF转录因子家族与脂肪细胞分化 被引量:16
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作者 张志威 李辉 王宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期983-990,共8页
Kruppel样转录因子(Kruppel-like factors,KLF)是一类具有锌指结构的转录因子,其典型结构特征是在其羧基端具有3个C2H2锌指结构.KLF广泛参与细胞增殖、凋亡、分化以及胚胎发育等多个生命活动的调控.近年来脂肪细胞分化研究的结果显示,KL... Kruppel样转录因子(Kruppel-like factors,KLF)是一类具有锌指结构的转录因子,其典型结构特征是在其羧基端具有3个C2H2锌指结构.KLF广泛参与细胞增殖、凋亡、分化以及胚胎发育等多个生命活动的调控.近年来脂肪细胞分化研究的结果显示,KLF家族的多个成员参与脂肪细胞分化过程的调控,既有促进脂肪细胞分化的,也有抑制脂肪细胞分化的.其中KLF4通过与Krox20协同作用,激活C/EBPβ(CCAAT-enhancer-binding proteinβ)基因表达,促进脂肪细胞分化;KLF5和KLF15都通过直接结合到氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)基因的启动子,激活PPARγ基因表达,促进脂肪细胞分化;而KLF6则通过抑制前脂肪细胞因子(pre-adipocyte factor1,PREF1)基因表达,促进脂肪细胞分化.抑制脂肪细胞分化的KLF2通过结合于PPARγ的启动子,抑制PPARγ基因表达,从而抑制脂肪细胞的分化;KLF3通过募集辅助抑制因子C-末端结合蛋白(c-terminal binding protein,CtBP)形成KLF3-CtBP抑制复合体,结合于C/EBPα(CCAAT-enhancer-binding proteinα)基因的启动子,抑制C/EBPα表达,进而抑制脂肪细胞的分化;KLF7通过抑制葡萄糖转运蛋白2(glucosetransporter2,GLUT2)基因的表达抑制脂肪细胞的成熟.本文综述这些KLF转录因子在脂肪细胞分化过程的作用及其作用的机制. 展开更多
关键词 kruppel样转录因子(kruppel-like factor klf) 锌指结构 脂肪细胞分化 转录调控
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The toxicity of hydroxylated and carboxylated multi-walled carbon nanotubes to human endothelial cells was not exacerbated by ER stress inducer 被引量:1
2
作者 Zhen Li Ting Liu +4 位作者 Jimin Long Yang Wu Biao Yan Ping Ma Yi Cao 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2019年第3期582-586,共5页
Hydroxylated multi-walled carbon nanotubes(h-MWCNTs) and carboxylated MWCNTs(c-MWCNTs)have potential applications in biomedicine, but their toxicity to human endothelial cells under stressed conditions associated with... Hydroxylated multi-walled carbon nanotubes(h-MWCNTs) and carboxylated MWCNTs(c-MWCNTs)have potential applications in biomedicine, but their toxicity to human endothelial cells under stressed conditions associated with chronic diseases was less studied in vitro. This study stressed human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) with ER stress inducer thapsigargin(TG), and investigated the toxicity of h-MWCNTs and c-MWCNTs to normal and stressed HUVECs. h-MWCNTs and c-MWCNTs modestly reduced cellular viability, significantly promoted soluble ICAM-1(sICAM-1),soluble VCAM-1(sVCAM-1) as well as intracellular ROS, and decreased the expression of transcription factor KLF2 and KLF4. Pre-treatment with TG significantly reduced cellular viability, promoted IL-6 and THP-1 monocyte adhesion, and increased the expression of a panel of ER stress genes. ANOVA indicated no interaction between MWCNTs and TG pre-treatment on most of the endpoints. It was concluded that the toxicity of h-MWCNTs and c-MWCNTs to HUVECs might not be exacerbated by ER stress 展开更多
关键词 Multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) Human UMBILICAL VEIN endothelial cells (HUVECs) ER stress kruppel-like factor (klf) TOXICITY
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Kruppel样因子4在胃癌细胞中的表达及KLF4基因启动子区的生物信息学分析
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作者 杨菁 周力 许钟 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2350-2352,共3页
目的检测Kruppel样因子KLF4基因在人胃癌细胞株MKN-45及人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1的表达情况,并应用生物信息学方法分析KLF4基因启动子区序列,预测胃癌发生中其涉及的转录调控因子。方法采用实时荧光定量PCR方法检测MKN-45及GES-1中K... 目的检测Kruppel样因子KLF4基因在人胃癌细胞株MKN-45及人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1的表达情况,并应用生物信息学方法分析KLF4基因启动子区序列,预测胃癌发生中其涉及的转录调控因子。方法采用实时荧光定量PCR方法检测MKN-45及GES-1中KLF4mRNA的表达;利用多种在线软件获取并分析人KLF4基因启动子序列,预测其转录因子结合位点和胃癌组织中相关的转录因子。结果实时定量PCR检测结果显示:KLF4 mRNA在人胃癌细胞株MKN-45中的表达低于在人正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达(4.24±0.15 vs 6.66±0.23)(P<0.01);KLF4基因启动子序列全长为4 915 bp,共涉及183个转录因子结合位点,在胃癌中异常表达的转录因子有17个,包括AP-1、AP-2、HIF-1、SP3等。结论 KLF4 mRNA在胃癌细胞株MKN-45中表达下调,生物信息学分析提示在胃癌发生中AP-1、AP-2、HIF-1、SP3转录因子等可能参与调控KLF4的表达。 展开更多
关键词 kruppel样因子4 胃肿瘤 启动子 生物信息学
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Kruppel样因子4对内毒素所致IL-6基因表达的调控及机制研究 被引量:8
4
作者 冯衍生 刘梅冬 +4 位作者 刘瑛 刘俊文 陈广文 张华莉 肖献忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1313-1318,共6页
探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究.使用RT-PCR和Westernblot检测KLF4mRNA和蛋白质的表达.采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4... 探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究.使用RT-PCR和Westernblot检测KLF4mRNA和蛋白质的表达.采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4的表达,用RT-PCR和ELISA检测内毒素(LPS)刺激后IL-6mRNA和蛋白质的表达.采用荧光素酶报告基因检测RAW264.7细胞中KLF4过表达对IL-6基因启动子报告基因转录活性的影响.使用EMSA法检测细胞中KLF4与IL-6基因启动子区KLF4元件的结合.结果表明:LPS可以诱导RAW264.7巨噬细胞KLF4的表达以及IL-6蛋白表达.KLF4过表达明显抑制IL-6的mRNA和蛋白质的表达,而KLF4缺失使这种作用消失.荧光素酶报告基因的结果显示,KLF4可以抑制LPS所致的IL-6基因启动子的转录活性.EMSA显示KLF4不能与IL-6启动子区的KLF4结合元件直接结合.结果表明,LPS可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞KLF4的表达和IL-6的释放.KLF4能抑制LPS诱导的IL-6表达和释放,其机制是抑制IL-6启动子的转录活性,但KLF4的抑制作用不是通过直接与IL-6基因的启动子区相结合而实现的. 展开更多
关键词 kruppel样因子4(klf4) 内毒素(LPS) 白介素6(IL-6) 炎症
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KLF4和KLF5在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义 被引量:4
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作者 崔乃鹏 闫伟涛 +5 位作者 刘彩云 史建红 问明 马振峰 王娅南 陈保平 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2013年第12期1087-1090,共4页
目的探讨转录因子Kruppel样因子(KLF)4和KLF5在乳腺浸润性导管癌中的表达,分析其表达与乳腺浸润性导管癌的发生、发展及临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测30例乳腺浸润性导管癌组织及10例对应癌旁正常组织中KLF4和KLF5... 目的探讨转录因子Kruppel样因子(KLF)4和KLF5在乳腺浸润性导管癌中的表达,分析其表达与乳腺浸润性导管癌的发生、发展及临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测30例乳腺浸润性导管癌组织及10例对应癌旁正常组织中KLF4和KLF5蛋白的表达,分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 KLF4和KLF5均主要表达于细胞核。乳腺浸润性导管癌组织中KLF4低表达,阳性表达率为6.7%,低于癌旁正常乳腺组织(70.0%),差异有统计学意义(P<0.05);KLF5在乳腺癌组织中高表达,阳性表达率为90.0%,高于癌旁正常乳腺组织(30.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中KLF4和KLF5的表达与年龄、绝经情况、组织学分级、淋巴结转移、ER及PR表达无关(P>0.05),而KLF5与HER-2表达水平有关(P<0.05)。KLF4和KLF5在乳腺浸润性导管癌中的表达无相关性(r=-0.356,P=0.053)。结论 KLF4和KLF5表达与乳腺浸润性导管癌的发生密切相关,可以作为预测乳腺浸润性导管癌发生、发展及转移的评价指标之一。 展开更多
关键词 乳腺浸润性导管癌 kruppel样因子4 kruppel样因子5
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Tcf7l1 promotes transcription of Kruppel-like factor 4 during Xenopus embryogenesis 被引量:5
6
作者 Qing Cao Yan Shen +2 位作者 Wei Zheng Hao Liu Chen Liu 《The Journal of Biomedical Research》 CAS CSCD 2018年第3期215-221,共7页
Kruppel-like factor 4(Klf4) is a zinc finger transcription factor and plays crucial roles in Xenopus embryogenesis.However, its regulation during embryogenesis is still unclear. Here, we report that Tcf711, a key do... Kruppel-like factor 4(Klf4) is a zinc finger transcription factor and plays crucial roles in Xenopus embryogenesis.However, its regulation during embryogenesis is still unclear. Here, we report that Tcf711, a key downstream transducer of the Wnt signaling pathway, could promote Klf4 transcription and stimulate Klf4 promoter activity in early Xenopus embryos. Furthermore, cycloheximide treatment showed a direct effect on Klf4 transcription facilitated by Tcf711. Moreover, the dominant negative form of Tcf711(dnTcf711), which lacks N-terminus of the β-catenin binding motif, could still activate Klf4 transcription, suggesting that this regulation is Wnt/β-catenin independent.Taken together, our results demonstrate that Tcf711 lies upstream of Klf4 to maintain its expression level during Xenopus embryogenesis. 展开更多
关键词 kruppel-like factor 4(klf4) Tcf711 transcription regulation Xenopus laevis
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急性缺血性脑卒中患者血清Kruppel样转录因子2水平表达与脑梗死体积及预后的相关性研究
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作者 钟曌 郭继勃 +3 位作者 郭昊 韩晓婷 张丽萍 祝刚 《现代检验医学杂志》 CAS 2023年第6期1-5,12,共6页
目的 研究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清Kruppel样转录因子2(kruppel-like factor 2,KLF2)水平表达与脑梗死体积及预后的关系,探讨KLF2对AIS脑梗死体积及预后不良的预测价值,并分析KLF2诱导AIS发生的可能机制。... 目的 研究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清Kruppel样转录因子2(kruppel-like factor 2,KLF2)水平表达与脑梗死体积及预后的关系,探讨KLF2对AIS脑梗死体积及预后不良的预测价值,并分析KLF2诱导AIS发生的可能机制。方法 收集2021年4月~2022年11月在空军军医大学第二附属医院收治的141例AIS患者为研究对象,并收集同期行健康体检者50例作为对照。根据Pullicino公式计算AIS脑梗死体积,分为小梗死灶组、中梗死灶组和大梗死灶组;根据改良Rankin量表(modified rankin scale,mRS)评分分为预后良好组和预后不良组;采用Pearson相关性分析血清KLF2表达与AIS患者脑梗死体积、预后及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SphK1)和鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)表达的相关性;绘制ROC曲线评估血清KLF2对AIS预后不良的预测价值。结果 AIS组患者血清KLF2(194.37±32.37pg/ml)水平显著低于对照组(242.85±17.39pg/ml);IL-6(13.70±2.89pg/ml),S1P(432.58±101.37pg/ml)和SphK1(2.65±0.58pg/ml)水平显著高于对照组(9.92±2.45pg/ml,259.15±78.24pg/ml,1.48±0.36 pg/ml),差异具有统计学意义(t=10.076,-8.253,-10.986,-13.367,均P <0.05)。小梗死灶组、中梗死灶组和大梗死灶组血清KLF2水平分别为217.69±33.14pg/ml,196.48±29.53pg/ml和168.94±31.62pg/ml,差异有统计学意义(F=25.753,P<0.001)。AIS预后良好组血清KLF2水平为211.83±28.46pg/ml,明显高于预后不良组的170.12±25.34pg/ml,差异有统计学意义(t=8.982,P<0.001)。血清KLF2水平与AIS脑梗死体积、预后及IL-6,SphK1水平呈负相关性(r=-0.607,-0.586,-0.480,-0.522,均P<0.05),与S1P水平无明显相关性(r=0.172,P>0.05);血清SphK1与S1P水平呈明显正相关(r=0.480,P<0.05)。血清KLF2预测AIS脑梗死体积(中~大梗死灶)和预后不良的AUC值分别为0.871和0.889,当截断值分别取206.1 pg/ml和192.37 pg/ml时,诊断灵敏度和特异度较高。结论 AIS血清中KLF2� 展开更多
关键词 急性缺血性卒中 kruppel样转录因子2 脑梗死体积 白细胞介素6 鞘氨醇激酶1/鞘氨醇-1-磷酸
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Krüppel样因子7(KLF7)生物学功能研究进展 被引量:3
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作者 孙婴宁 王维禹 +3 位作者 张志威 邵淑丽 李波 王宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第11期972-980,共9页
Krüppel样因子7(Krüppel-like factor 7,KLF7)是Sp1样或Krüppel样转录因子家族(specificity protein/Krüppel-like factor,SP/KLF)成员,在多种生物学过程中发挥重要作用,该基因完全敲除小鼠出生时大部分死亡.KLF7... Krüppel样因子7(Krüppel-like factor 7,KLF7)是Sp1样或Krüppel样转录因子家族(specificity protein/Krüppel-like factor,SP/KLF)成员,在多种生物学过程中发挥重要作用,该基因完全敲除小鼠出生时大部分死亡.KLF7是肥胖症、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病、癌症、面部发育异常、氧化磷酸化缺陷和Ⅰ型自身免疫性胰腺炎等疾病的相关基因.功能分析显示,KLF7是神经系统发育和脂肪形成的关键因子,同时也在肌肉再生和造血作用中发挥功能.在SP/KLF家族中,KLF7研究相对较少,大部分作用机制尚不清楚.本文从结构和功能方面详述了KLF7的最新研究进展,为其和KLFs家族深入研究提供重要的科学依据. 展开更多
关键词 Krüppel样因子7(klf7) 转录因子 神经系统 脂肪形成 Ⅱ型糖尿病
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siRNA沉默KLF4的表达促进食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移 被引量:3
9
作者 黄邵洪 胡昆鹏 +1 位作者 严淑红 叶升 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期301-305,共5页
目的:探讨体外沉默Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)基因的表达对食管癌KYSE140细胞增殖及迁移的影响。方法:Western blotting法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4蛋白的表达,化... 目的:探讨体外沉默Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)基因的表达对食管癌KYSE140细胞增殖及迁移的影响。方法:Western blotting法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4蛋白的表达,化学合成2对靶向KLF4的siRNA(KLF4-siRNA1,KLF4-siRNA2),并设对照siRNA(Ctrl-siRNA),分别体外转染至高表达KLF4的食管癌KYSE140细胞中,形成KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140及Ctrl-siRNA-KYSE140细胞,通过MTT实验、Transwell实验分别检测转染后食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移。结果:食管癌细胞株KYSE140中KLF4蛋白的表达明显高于KYSE150、EC109及EC9706细胞株[(5.62±0.02)vs(1.71±0.23)、(3.24±0.35)、(3.16±0.41),均P<0.05]。KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140与Ctrl-siRNA-KYSE140细胞相比,KLF4蛋白表达明显降低[(0.49±0.18)、(0.32±0.09)vs(0.98±0.19),均P<0.05],细胞增殖能力明显增高[(1.2±0.8)、(1.4±0.1)vs(0.6±0.1),均P<0.05],迁移细胞数量也明显增加[(780±22)、(475±25)vs(83±17)个,P<0.05]。结论:KLF4在人食管癌细胞的增殖和迁移过程中起着负调控作用。 展开更多
关键词 kruppel样因子4基因 食管癌 KYSE140细胞 增殖 迁移
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转录因子KLF5调控宫颈癌细胞上皮-间充质转化的分子机制 被引量:1
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作者 杨文博 李芊芊 +1 位作者 王键 曲鑫建 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第3期183-191,225,共10页
上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。为了探究Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)调控宫颈癌细胞发生EMT过程的分子机制,首... 上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。为了探究Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)调控宫颈癌细胞发生EMT过程的分子机制,首先在宫颈癌HeLa细胞瞬时转染Flag-KLF5质粒进行KLF5过表达,并通过MTT法、细胞划痕和Transwell实验证实,KLF5可以显著地抑制HeLa细胞的侵袭和迁移能力。然后采用Western-blot和实时定量PCR技术检测HeLa细胞中EMT相关基因的表达水平,结果显示E-cadherin表达升高,N-cadherin和MMP9表达降低;而且,E-cadherin基因的上游调控因子如SNAI1、SLUG、ZEB1/2和TWIST1等的mRNA表达下降。进一步开展对比研究,在SiHa细胞中用siRNA沉默KLF5基因,再次验证了KLF5对EMT相关基因表达水平的影响。随后构建不同长度的SNAI1启动子截短体,用荧光素酶报告基因实验检测KLF5对SNAI1启动子活性的影响,结果显示KLF5可以抑制SNAI1启动子区域的活性,并且在HeLa细胞中过表达SNAI1基因后,可显著地促进细胞的EMT过程。以上结果表明,KLF5可通过调控SNAI1基因的表达来调节宫颈癌细胞的EMT过程,进而抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 kruppel样因子5(klf5) 宫颈癌 上皮-间充质转化(EMT) SNAI1
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KLF6mRNA Expression in Primary Hepatocellular Carcinoma
11
作者 王少平 陈孝平 +1 位作者 张万广 裘法祖 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2004年第6期585-587,共3页
Summary: To investigate the expression of KLF6mRNA in primary hepatocellular carcinoma (HCC), nomal liver tissues and the tissues adjacent to the cancers, reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was e... Summary: To investigate the expression of KLF6mRNA in primary hepatocellular carcinoma (HCC), nomal liver tissues and the tissues adjacent to the cancers, reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was employed to investigate the expression of the KLF6 gene in HCC, the corresponding adjacent non-cancerous tissues and normal liver tissue. Our results showed that an amplified fragment of 427 bp DNA was detected in 18 of 19 (94.7 %) adjacent non-cancerous tissues and normal liver tissue, and in 12 (85.7 %) of 14 HCC. There were no significant differences in the levels of KLF6 mRNA between normal liver and liver tumors (P>0.05). It is concluded that KLF6 mRNA is generally expressed in HCC. 展开更多
关键词 kruppel-like factor 6 (klf6) hepatocellular carcinoma (HCC)reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)
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转录因子KLF6对大鼠趋化因子CCL5基因启动子活性的影响及其可能的结合部位
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作者 刘玉 虞天一 +7 位作者 张婧 何风霞 卢燕来 周梦雅 王璐璐 赵聃 邱文 王迎伟 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2015年第6期461-465,共5页
目的:构建大鼠趋化因子CCL5基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,检测大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中过表达Kruppel样转录因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)对CCL5基因启动子活性的影响。同时,筛选KLF6与CCL... 目的:构建大鼠趋化因子CCL5基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,检测大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中过表达Kruppel样转录因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)对CCL5基因启动子活性的影响。同时,筛选KLF6与CCL5基因启动子区的结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠CCL5基因启动子全长序列(-1744nt^-14nt)插入荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得CCL5基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-CCL5-FL)。然后,将p GL3-CCL5-FL与大鼠野生型KLF6表达质粒(p IRES2/KLF6)共转染GMC,测定其荧光素酶活性。另用生物信息学软件预测CCL5基因启动子上KLF6潜在的结合位点,并据此构建出4个CCL5基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即p GL3-CCL5-1~4)。将上述CCL5基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒分别与KLF6过表达质粒共转染GMC,再行荧光素酶活性的测定,初筛KLF6可能的结合部位。结果:菌液PCR以及核酸测序结果证实,上述所有启动子荧光素酶报告质粒均构建成功。p GL3-CCL5-FL和p IRES2/KLF6共转染GMC结果显示,CCL5基因启动子的活性显著增强。p GL3-CCL5-FL、p GL3-CCL5-1~4分别与p IRES2/KLF6共转染GMC后发现,p GL3-CCL5-4的启动活性显著降低。提示KLF6可能结合在CCL5基因启动子的-343nt^-191nt区域。结论:本实验成功构建了大鼠CCL5基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出KLF6在CCL5基因启动子上可能的结合部位在-343nt^-191nt区域。 展开更多
关键词 kruppel样转录因子6 CCL5 肾小球系膜细胞 荧光素酶报告质粒 启动子活性
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过表达KLF4重组质粒的构建及其在白血病K562细胞中的表达
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作者 李波 胡海艳 谭明贤 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第2期125-129,共5页
为了构建过表达锌指转录因子Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因的重组质粒pEGFP-KLF4,观察其在白血病K562细胞中的表达,以RT-PCR法扩增人KLF4基因,构建pEGFP-KLF4重组质粒;经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-KLF4质... 为了构建过表达锌指转录因子Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因的重组质粒pEGFP-KLF4,观察其在白血病K562细胞中的表达,以RT-PCR法扩增人KLF4基因,构建pEGFP-KLF4重组质粒;经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-KLF4质粒电穿孔转染白血病K562细胞(K562/pEGFP-KLF4组),设pEGFP-C1空质粒转染K562细胞(K562/pEGFP-C1组)及空白K562细胞作为对照,荧光显微镜观察EGFP-KLF4融合蛋白的表达情况,同时用抗生素G418筛选阳性克隆并扩大培养建立稳定过表达KLF4基因的K562细胞株,随后用RT-PCR检测3组K562细胞中KLF4的m RNA表达水平。实验结果显示,pEGFP-KLF4重组质粒构建成功。该质粒转染K562细胞24 h后能观察到较高强度的绿色荧光;经G418筛选出的阳性克隆扩大培养后建立了稳定过表达KLF4基因的K562细胞株;与对照组相比,K562/pEGFP-KLF4细胞组KLF4的m RNA表达水平明显升高,其过表达率为65.71%(P<0.05)。实验中构建的过表达KLF4基因的重组质粒pEGFP-KLF4能在K562细胞中高效表达,为进一步研究其在白血病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 锌指转录因子Krüppel样因子4基因(klf4) 过表达质粒 电穿孔转染 白血病 K562细胞
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氧化应激对C_2C_(12)肌原细胞中KLF4表达的影响
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作者 张丽丽 刘瑛 《长治医学院学报》 2009年第4期241-243,共3页
目的:观察心肌细胞氧化应激反应对KLF4表达的影响。方法:采用过氧化氢处理的小鼠C2C12肌原细胞模拟相应的氧化应激细胞模型;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测C2C12肌原细胞中KLF4 mRNA的表达情况;采用蛋白免疫印迹技术(Western blot... 目的:观察心肌细胞氧化应激反应对KLF4表达的影响。方法:采用过氧化氢处理的小鼠C2C12肌原细胞模拟相应的氧化应激细胞模型;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测C2C12肌原细胞中KLF4 mRNA的表达情况;采用蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测KLF4蛋白的表达情况。结果:不同浓度H2O2处理C2C12肌原细胞12 h后,KLF4 mRNA和蛋白的表达水平均明显增多,呈剂量依赖性;1mMH2O2处理肌原细胞不同时间后KLF4 mRNA和蛋白的表达水平均明显增加,具有时间依赖性。结论:细胞氧化应激反应能显著诱导C2C12肌原细胞中KLF4的高表达。 展开更多
关键词 氧化应激 C2C12肌原细胞 klf4
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卵巢浆液性腺癌组织中ELOVL6及KLF4的表达水平与预后的关系
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作者 李海鹏 《中国性科学》 2020年第10期39-43,共5页
目的探讨卵巢浆液性腺癌组织中超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6)及锌指转录调节蛋白4(KLF4)的表达水平及其与预后的关系。方法选取2012年5月至2014年5月青海红十字医院诊治的105例卵巢浆液性腺癌患者作为研究对象。其中高级别患者设为高级别... 目的探讨卵巢浆液性腺癌组织中超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6)及锌指转录调节蛋白4(KLF4)的表达水平及其与预后的关系。方法选取2012年5月至2014年5月青海红十字医院诊治的105例卵巢浆液性腺癌患者作为研究对象。其中高级别患者设为高级别组(n=75),低级别患者设为低级别组(n=30)。另选择因其他疾病行手术切除的正常卵巢组织和输卵管组织的患者设为对照组(n=25)。采用免疫组化法检测患者组织中ELOVL6及KLF4蛋白阳性表达,使用Spearman分析相关性,患者5年生存率采用Kaplan-Meier单因素分析,影响患者预后的独立危险因素采用Cox多因素分析。结果ELOVL6和KLF4蛋白在低级别组患者中的阳性表达率(53.33%、30.00%)显著低于对照组卵巢组织的阳性率(80.00%、64.00%),差异具有统计学意义(P<0.05),在高级别组患者中的阳性表达率(42.67%、16.00%)显著低于对照组输卵管组织的阳性率(88.00%、80.00%),差异具有统计学意义(P<0.05);高级别组患者Ⅲ期+Ⅳ期中ELOVL6和KLF4蛋白阳性表达率显著低于Ⅰ期+Ⅱ期,术后有残留灶患者的KLF4蛋白阳性表达率显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);高级别组患者ELOVL6和KLF4阳性表达率呈正相关,差异具有统计学意义(r=0.041,P=0.035);高级别组患者的ELOVL6蛋白阳性者5年生存率为40.6%,显著高于阴性者的21.8%,KLF4蛋白阳性者5年生存率为39.2%,显著高于阴性者的18.9%;Cox多因素分析显示KLF4低表达、FIGO分期均是影响高级别组患者预后的独立危险因素。结论卵巢浆液性腺癌患者组织中ELOVL6及KLF4蛋白低表达,FIGO分期和KLF4对患者预后有一定影响。 展开更多
关键词 卵巢浆液性腺癌 ELOVL6 klf4 预后
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