重组人胰岛素治疗2型糖尿病免疫原性研究 被引量：13

1

作者 李发贵 吴兆芳 +2 位作者 迟庆霞 乔秀丽 王书军 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2013年第20期55-59,共5页

目的探讨重组人胰岛素治疗2型糖尿病的免疫原性及其临床意义。方法应用放射免疫法检测179例重组人胰岛素治疗的2型糖尿病患者及429例未用胰岛素治疗的2型糖尿病患者胰岛素抗体(INS-Ab)的阳性率,并分析INS-Ab阳性患者的临床特征及其危险... 目的探讨重组人胰岛素治疗2型糖尿病的免疫原性及其临床意义。方法应用放射免疫法检测179例重组人胰岛素治疗的2型糖尿病患者及429例未用胰岛素治疗的2型糖尿病患者胰岛素抗体(INS-Ab)的阳性率,并分析INS-Ab阳性患者的临床特征及其危险因素。结果 (1)重组人胰岛素治疗组中INS-Ab阳性率为36.31%,而未用重组人胰岛素组INS-Ab阳性率为0.23%,差异具有统计学意义(χ2=166.19,P=0.000)。(2)Logistic回归分析显示在应用重组人胰岛素的患者中INS-Ab阳性的危险因素分别为胰岛素治疗时间(OR=1.201,P=0.006)及糖尿病病程(OR=1.07,P=0.004)。应用重组人胰岛素半年以上、糖尿病病程5年以上并已接受重组人胰岛素治疗时,INS-Ab阳性率明显升高(P<0.05)。重组人胰岛素治疗组中,INS-Ab阳性组HOMR-IR明显高于INS-Ab阴性组(18.48±21.58 vs.6.90±14.39,t=3.68,P=0.000),高胰岛素血症组INS-Ab阳性率也明显高于无高胰岛素血症组(59.26%vs.20.99%,χ2=33.684,P=0.000)。(3)INS-Ab阳性患者空腹胰岛素及餐后2 h胰岛素水平均明显高于INS-Ab阴性者(P<0.05),低血糖发生次数明显高于阴性者(Z=-6.109,P=0.000)。(4)INS-Ab阳性组糖化血红蛋白达标率明显低于阴性组(χ2=4.422,P=0.035)。(5)诺和灵30R、甘舒林30R及优泌林30R胰岛素抗体阳性率分别为37.25%、38.46%、28.13%,差异无统计学意义(χ2=0.948,P=0.623)。结论 (1)重组人胰岛素治疗2型糖尿病仍具有免疫原性,在应用重组人胰岛素的患者中重组人胰岛素应用超过半年、低血糖频发、糖尿病病程5年以上的应及时检测INS-Ab。(2)已经使用重组人胰岛素的糖尿病患者也应常规查血清胰岛素水平,及时发现高胰岛素血症及免疫性胰岛素抵抗。(3)INS-Ab是胰岛素抵抗的危险因素,是影响糖尿病患者糖化血红蛋白达标率的因素之一。 展开更多

关键词 糖尿病 2型 胰岛素抗体 重组人胰岛素 免疫原性

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胸膜肺炎放线杆菌ApxII毒素结构基因的原核表达以及重组蛋白的免疫原性分析 被引量：7

2

作者 王春来 刘思国 +3 位作者 王牟平 彭永刚 宫强 孔宪刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期63-66,共4页

猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因... 猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA进行了全基因克隆和测序,并利用原核表达载体pGEX-6P-1在E.coli中进行了原核表达。表达产物以包涵体形式存在,包涵体蛋白经过洗涤后作为抗原用于Western-blotting免疫印迹实验,结果表明重组的ApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ毒素 原核表达 免疫原性

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3种甲肝疫苗在儿童中应用的安全性及免疫效果观察 被引量：8

3

作者 刘卫民 陈国翠 白满娥 《中国初级卫生保健》 2006年第11期36-38,共3页

目的观察不同种类的甲型肝炎疫苗在儿童体内的接种反应及免疫效果。方法筛选2～3岁的甲肝易感儿童193人,分别接种进口灭活甲肝疫苗、国产灭活甲肝疫苗和国产冻干减毒甲肝疫苗,观察接种后48h内的局部反应和全身反应,并于完成免疫后1～2个... 目的观察不同种类的甲型肝炎疫苗在儿童体内的接种反应及免疫效果。方法筛选2～3岁的甲肝易感儿童193人,分别接种进口灭活甲肝疫苗、国产灭活甲肝疫苗和国产冻干减毒甲肝疫苗,观察接种后48h内的局部反应和全身反应,并于完成免疫后1～2个月,采集血清标本检测抗-HAV-IgG抗体。结果193名观察对象在接种第1针和第2针后均未见严重不良反应,仅有4例出现轻微局部反应和全身反应。完成免疫接种后进口灭活甲肝疫苗、国产灭活甲肝疫苗和国产冻干减毒甲肝疫苗抗-HAV-IgG抗体阳转率分别为92.86%、67.61%和61.25%,GMT(ELASA法)平均滴度分别为1∶28.28、1∶53.39和1∶5.76。结论3种疫苗在儿童中的应用是安全的、有效的。 展开更多

关键词 甲肝疫苗 安全性 免疫原性

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生物制剂和生物仿制药的特殊性及其风险管理 被引量：6

4

作者 师少军 陈东生 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2012年第5期326-329,386,共5页

近年来,生物制剂发展迅速,临床广泛用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、炎性肠病、银屑病关节炎和系统性红斑狼疮等炎症疾病的治疗。作为一类新型药物,生物制剂具有某些特殊的风险(如免疫原性),并可引发一些严重感染、结核和机会性感染... 近年来,生物制剂发展迅速,临床广泛用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、炎性肠病、银屑病关节炎和系统性红斑狼疮等炎症疾病的治疗。作为一类新型药物,生物制剂具有某些特殊的风险(如免疫原性),并可引发一些严重感染、结核和机会性感染。最近几年,欧洲药品管理局(EMA)、世界卫生组织(WHO)和美国食品药品监督管理局(FDA)均颁布了有关生物制剂及生物仿制药临床试验和上市的相应法规与审批程序。本文分析了生物制剂和生物仿制药面临的用药风险及其特殊性。我国应借鉴欧美国家的经验,进一步规范生物制剂和生物仿制药的审批和评价体系,加强该类药物的用药风险监管。 展开更多

关键词 生物制剂 生物仿制药 免疫原性 特殊性 风险管理

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流行性感冒病毒裂解疫苗在18岁以上健康人群中应用的安全性及免疫原性研究 被引量：5

5

作者 王萍 张昕伟 +6 位作者 宋宇飞 殷洪博 刘丽杰 车雷 李辉 刘研 陈江婷 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期120-124,共5页

目的 评价流感病毒裂解疫苗安尔来福（R）的免疫原性及安全性.方法 2010年8-9月在沈阳市开展开放式临床试验,选择18～60岁及＞60岁健康成年人接种安尔来福（R）进行安全性观察,并采集受试者免疫前及免疫后21 d 血清标本,采用血凝抑制试... 目的 评价流感病毒裂解疫苗安尔来福（R）的免疫原性及安全性.方法 2010年8-9月在沈阳市开展开放式临床试验,选择18～60岁及＞60岁健康成年人接种安尔来福（R）进行安全性观察,并采集受试者免疫前及免疫后21 d 血清标本,采用血凝抑制试验（HI）进行流感病毒裂解疫苗甲型H1N1、甲型H3N2及乙型3个型别抗体检测.结果 130名观察对象完成疫苗接种并进行安全性观察,其中120人完成免疫前及免疫后采血.总体不良反应发生率为2.3%（3/130）,均为全身不良反应,未出现严重不良反应.接种疫苗后21 d,成年组甲型H1N1、甲型H3N2及乙型3个型别抗体阳转率分别为82.5%、93.7%、92.1%,GMT增长倍数分别为20.2、32.0、11.4,保护率分别为92.1%、98.4%、98.4%;老年组3个型别抗体阳转率分别为89.5%、91.2%、87.7%,GMT增长倍数分别为23.9、39.8、15.1,保护率分别为93.0%、94.7%、96.5%.结论 疫苗安尔来福（R）接种后甲型H1N1、甲型H3N2及乙型3个型别抗体各项指标均超过欧盟标准,表明其免疫原性及安全性良好. 展开更多

关键词 流感病毒裂解疫苗 成人剂型 免疫原性 安全性

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人H5N1流感病毒血凝素蛋白DNA疫苗的构建及其免疫原性研究 被引量：3

6

作者 郇丽芳 姚立红 +8 位作者 陈爱珺 程从升 贾润清 田青 薄洪 郭建强 王敏 舒跃龙 张智清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期366-370,共5页

将我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005作为研究对象,扩增其HA和HA1基因片段并克隆至真核表达载体pStar,构建成真核表达质粒。通过Western blot和间接免疫荧光检测方法确认,构建的重组质粒在真核细胞中成功地表达了目的蛋... 将我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005作为研究对象,扩增其HA和HA1基因片段并克隆至真核表达载体pStar,构建成真核表达质粒。通过Western blot和间接免疫荧光检测方法确认,构建的重组质粒在真核细胞中成功地表达了目的蛋白HA和HA1。将重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测免疫后外周血中HA/HA1特异性抗体的效价,并比较HA和HA1的免疫原性。结果表明,重组质粒免疫后成功地诱导了体液免疫反应,且二者的血清抗体效价无显著性差异。 展开更多

关键词 流感病毒 H5N1 血凝素 HA 免疫原性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒的构建及其免疫原性 被引量：3

7

作者 周井祥 薛江东 +3 位作者 张嘉保 刘殿峰 袁宝 扈荣良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期217-220,225,共5页

目的构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒,并检测其免疫原性。方法用RT-PCR法扩增PRRSV的GP5和M蛋白基因片段,克隆至真核表达载体pIRES-neo中,构建真核表达质粒pIRES-G和pIRES-M,制备核酸疫苗,以其... 目的构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒,并检测其免疫原性。方法用RT-PCR法扩增PRRSV的GP5和M蛋白基因片段,克隆至真核表达载体pIRES-neo中,构建真核表达质粒pIRES-G和pIRES-M,制备核酸疫苗,以其单独或联合免疫小鼠,检测其免疫原性。结果真核表达质粒pIRES-G和pIRES-M经酶切鉴定证明构建正确。第1次免疫后4周,各重组质粒免疫组小鼠血清ELISA抗体水平均显著升高,其中pIRES-G + pIRES-M组抗体水平最高;第1次免疫后9周,pIRES-G + pIRES-M组小鼠血清中和抗体效价(1∶16)高于pIRES-G组(1∶8)和pIRES-M组(1∶4),但均低于灭活疫苗组(1∶64);第1次免疫后9周,与pIRES-neo组相比,各组免疫小鼠脾细胞经特异性(PRRSV)和非特异性(ConA)抗原刺激后,均有明显的增殖,对非特异性刺激反应比特异性刺激反应略强。结论已成功构建PRRSV GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒,二者联合免疫效果更好。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 M基因 核酸疫苗 免疫原性

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DNA疫苗免疫增强效应研究进展 被引量：4

8

作者 赵芳芳 翟永贞 冯国和 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2018年第2期124-128,共5页

DNA疫苗技术近年来迅速发展，但当被实际应用于人体试验时免疫原性不足仍是其最大的弱点。国内外科研工作者尝试了多种策略来解决这一问题，包括重组质粒载体的构建及编码抗原的基因优化，电穿孔疫苗免疫、接种方案优化、与能增强转染... DNA疫苗技术近年来迅速发展，但当被实际应用于人体试验时免疫原性不足仍是其最大的弱点。国内外科研工作者尝试了多种策略来解决这一问题，包括重组质粒载体的构建及编码抗原的基因优化，电穿孔疫苗免疫、接种方案优化、与能增强转染基因表达和疫苗诱导免疫的分子佐剂共免疫等。熟悉DNA疫苗的作用机制能更好地利用宿主天然免疫应答以增强疫苗的免疫原性。该综述总结了DNA疫苗免疫效应增强技术的新进展，以及这些进展对DNA疫苗未来发展方向可能产生的影响。 展开更多

关键词 疫苗 DNA 免疫原性 质粒 分子佐剂

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聚乙二醇化重组人生长激素的免疫原性及药动学研究 被引量：4

9

作者 陈金武 王荣海 +1 位作者 戎隆富 宋礼华 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期777-780,共4页

目的研究聚乙二醇化重组人生长激素的免疫原性及药动学。方法用rhGH及其两种mPEG修饰物PGH1、PGH2免疫家兔,检测兔血清中的抗体滴度;对家兔单次背部皮下给药,定时取血清,建立rhGH及其修饰物的ELISA双抗夹心检测法,检测血清中的药物浓度... 目的研究聚乙二醇化重组人生长激素的免疫原性及药动学。方法用rhGH及其两种mPEG修饰物PGH1、PGH2免疫家兔,检测兔血清中的抗体滴度;对家兔单次背部皮下给药,定时取血清,建立rhGH及其修饰物的ELISA双抗夹心检测法,检测血清中的药物浓度,并计算药动学参数。结果经过mPEG修饰后,明显降低了rhGH的抗体滴度,缩短了抗体持续时间。在药动学研究中发现,其t1/2β从3.1h显著延长到PGH1的9.9h和PGH2的22.5h,其AUC也有很大的提高。结论mPEG修饰后可明显降低rhGH的免疫原性,延长药物在动物体内的半衰期,降低清除率,改善其药动学性质。且改善程度随mPEG相对分子质量的增大而增强。 展开更多

关键词 重组人生长激素 聚乙二醇 免疫原性 ELISA 药动学

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鸡缩胆囊素-33串联体的构建、原核表达及免疫原性研究 被引量：4

10

作者 舒鼎铭 覃健萍 +1 位作者 曹永长 毕英佐 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期96-99,共4页

根据鸡缩胆囊素(choleystok in in,cck)-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子,设计了大肠杆菌表达系统偏爱的cck基因序列.将cck-33基因克隆至pRSET A质粒上,利用载体上的同尾酶构建cck基因四串联体并在大肠杆菌E.coliBL 21中成功表达... 根据鸡缩胆囊素(choleystok in in,cck)-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子,设计了大肠杆菌表达系统偏爱的cck基因序列.将cck-33基因克隆至pRSET A质粒上,利用载体上的同尾酶构建cck基因四串联体并在大肠杆菌E.coliBL 21中成功表达.将所表达的融合蛋白进行纯化后,以纯化的蛋白为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡.结果表明,CCK蛋白主动免疫肉鸡后,抗血清水平显著升高,P/N值远远大于2. 展开更多

关键词 缩胆囊素 串联体 原核表达 免疫原性

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1型和14型肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中糖链长度与免疫原性的相关性 被引量：3

11

作者 张萍 王欣茹 +3 位作者 张新庄 侯亚莉 杜琳 谢贵林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第10期736-740,共5页

目的探讨1型、14型肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中糖链长度和免疫原性的相关性,以解决多糖结合物难以纯化的问题。方法肺炎球菌荚膜多糖经过乙酸水解成为寡糖,与原糖采用相同的方法与破伤风类毒素结合,免疫小鼠后检测抗体水平,并与原糖结... 目的探讨1型、14型肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中糖链长度和免疫原性的相关性,以解决多糖结合物难以纯化的问题。方法肺炎球菌荚膜多糖经过乙酸水解成为寡糖,与原糖采用相同的方法与破伤风类毒素结合,免疫小鼠后检测抗体水平,并与原糖结合物进行比较。结果小鼠体内均能产生较高的抗体水平,且具有免疫加强效应,寡糖结合物与原糖结合物的免疫原性差异无显著意义。结论1型、14型肺炎球菌的荚膜多糖经酸水解降解,不影响结合物的免疫原性。 展开更多

关键词 肺炎球菌 多糖 结合物 免疫原性

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重组卡介苗和传统卡介苗免疫原性的比较 被引量：3

12

作者 刘海涛 夏术阶 +3 位作者 孙晓文 韩邦旻 阮渊 卓见 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期358-360,共3页

目的观察分泌人白细胞介素（IL）-2的重组卡介苗（rBCG）和传统卡介苗（BCG）对小鼠免疫应答的影响，评价其免疫原性，初步探讨rBCG免疫治疗的作用机制。方法连续6周对BALB／C小鼠尾静脉注射rBCG和BCG，分别在第2、4和6周后杀死小鼠取... 目的观察分泌人白细胞介素（IL）-2的重组卡介苗（rBCG）和传统卡介苗（BCG）对小鼠免疫应答的影响，评价其免疫原性，初步探讨rBCG免疫治疗的作用机制。方法连续6周对BALB／C小鼠尾静脉注射rBCG和BCG，分别在第2、4和6周后杀死小鼠取腹腔巨噬细胞和脾脏。以一氧化氮（NO）释放量检测巨噬细胞吞噬活性，以淋巴细胞刺激指数（SI）反映细胞增殖能力，以流式细胞仪测定T淋巴细胞CD亚群分化和酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清细胞因子分泌的变化，比较rBCG治疗组和BCG治疗组之问的差异。结果在连续6周观察期间，随着免疫时间的延长，rBCG对小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖能力逐渐增强，CD4＋、CD8＋T细胞和CD4＋／CD8＋的比例逐渐增高，腹腔巨噬细胞的吞噬活性逐渐增高，诱导小鼠脾淋巴细胞分泌的Th1型和Th2型细胞因子逐渐增多。在同一时点上，不同rBCG和BCG的上述作用均高于空白对照组（P均0．01），差异有统计学意义；rBCG治疗组的上述作用均高于BCG治疗组。结论rBCG具有良好的免疫原性，能明显增强BALB／c小鼠的免疫应答反应。rBCG诱导的T细胞免疫应答主要是CD4＋T细胞依赖的，CD4＋细胞免疫应答主要是以Th1型细胞因子参与为主，Th2型细胞因子也发挥一定作用。 展开更多

关键词 卡介苗 免疫原性 免疫应答

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LHRH-PE40的免疫原性及其抗体对细胞毒作用的影响 被引量：3

13

作者 吴广谋 张国利 +4 位作者 岳玉环 何畅 孟锐奇 李俊植 朱平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期252-254,共3页

目的观察连续静脉注射重组毒素LHRH-PE40所引起的家兔抗LHRH-PE40抗体产生的规律以及该抗体对细胞毒作用的影响。方法将家兔分为3组,第1组隔日连续静脉注射LHRHPE40,第2组用弗氏佐剂乳化的LHRHPE40皮下注射为阳性对照组,第3组静脉注射... 目的观察连续静脉注射重组毒素LHRH-PE40所引起的家兔抗LHRH-PE40抗体产生的规律以及该抗体对细胞毒作用的影响。方法将家兔分为3组,第1组隔日连续静脉注射LHRHPE40,第2组用弗氏佐剂乳化的LHRHPE40皮下注射为阳性对照组,第3组静脉注射人血白蛋白为阴性对照组。用ELISA检测血清中的抗体水平,XTT检测LHRH-PE40与血清中和后对Hela细胞的细胞毒作用。结果抗LHRHPE40抗体水平随静脉注射时间的延长而升高,8d可以检测到抗LHRH-PE40抗体,在24d基本达到最高水平。血清中和后LHRHPE40对Hela细胞的半数抑制量较阴性血清提高1～2倍,而阳性血清较阴性血清提高14倍。结论连续静脉注射LHRH-PE40产生较低水平的抗体,这种抗体未造成LHRHPE40对Hela细胞半数抑制量产生严重影响,这为临床连续使用LHRH-PE40提供了依据。 展开更多

关键词 LHRH-PE40 免疫原性 抗体 细胞毒性

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鮰爱德华菌外膜蛋白ompN2基因的克隆表达、分子特性与免疫原性分析 被引量：2

14

作者 王二龙 王兴丽 +4 位作者 杨帆 秦振阳 汪开毓 陈德芳 耿毅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期56-65,69,共11页

利用特异性引物扩增了分离自斑点叉尾鮰的鮰爱德华菌外膜蛋白ompN2基因并进行分子克隆,应用生物信息学工具对ompN2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分子特性分析,并进行了目的蛋白的原核表达和免疫原性检测。结果显示:ompN2基因... 利用特异性引物扩增了分离自斑点叉尾鮰的鮰爱德华菌外膜蛋白ompN2基因并进行分子克隆,应用生物信息学工具对ompN2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分子特性分析,并进行了目的蛋白的原核表达和免疫原性检测。结果显示:ompN2基因全长1 122bp(GenBank登录号为KP159419),包含1个完整的开放阅读框,编码373个氨基酸,其序列具有极高的保守性,与鮰爱德华菌外膜穿孔蛋白ompC同源性最高,序列一致性为100%,进化树聚为一支;具有1个革兰阴性菌穿孔蛋白(Gram-neg-porins)保守结构域,存在1个信号肽,不含跨膜区,是一种膜外蛋白;具有与蛋白翻译后修饰功能相关的磷酸化位点20个和N-糖基化位点4个;具有9个与免疫相关的抗原决定簇区域,表明可以作为潜在的候选疫苗。此外,SDS-PAGE检测发现,该蛋白主要以包涵体形式表达在沉淀中,Western-bolt结果显示重组蛋白表达成功,且具有较好的免疫原性。以上结果为筛选ompN2作为斑点叉尾鮰抵抗鮰爱德华氏菌感染的疫苗候选基因并进行相应蛋白的表达提供了理论依据,同时为研究ompN2蛋白的生物学功能,了解ompN2基因结构与功能的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 鮰爱德华菌 ompN2基因 克隆表达 生物信息学 免疫原性

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猪细小病毒VP2融合IFN-γ提高其在小鼠体内免疫原性 被引量：2

15

作者 张雪花 华涛 +4 位作者 陆吉虎 梅梅 张道华 侯继波 唐应华 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期35-42,共8页

为了检验细胞因子IFN-γ与猪细小病毒VP2融合蛋白的免疫效力,通过重叠延伸PCR技术将IFN-γ与PPV的VP2基因融合到一起,利用杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒r Bac-VP2、r Bac-VP2-IFN-γ,并在小鼠上验证了免疫原性。猪细小病毒ELISA... 为了检验细胞因子IFN-γ与猪细小病毒VP2融合蛋白的免疫效力,通过重叠延伸PCR技术将IFN-γ与PPV的VP2基因融合到一起,利用杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒r Bac-VP2、r Bac-VP2-IFN-γ,并在小鼠上验证了免疫原性。猪细小病毒ELISA抗体和中和抗体检测结果显示,VP2-IFN-γ组明显高于VP2和PPV灭活苗组;淋巴细胞增殖试验结果表明,VP2-IFN-γ组淋巴细胞数明显高于不加IFN-γ组。上述结果表明IFN-γ可提高猪细小病毒亚单位疫苗体液和细胞免疫应答,为重组IFN-γ的猪细小病毒病亚单位疫苗开发提供理论依据。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2 IFN-Γ 重组杆状病毒 免疫原性

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减毒沙门氏菌递呈的TGEVS／N融合基因疫苗的口服免疫原性 被引量：2

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作者 黄小波 张鑫淼 +4 位作者 曹三杰 文心田 李春松 梁恩涛 崔婷婷 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期594-600,共7页

目的研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性。方法将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N)。将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1&#... 目的研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性。方法将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N)。将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1×109 CFU/只灌胃免疫小鼠,测定免疫小鼠诱导的抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平,同时测定42d免疫小鼠的干扰素水平。结果菌株SL7207(pVAX-S/N)构建成功,首免后2～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌SL7207)的血清IgG,第4～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的肠道粘膜IgA,SL7207(pVAX-S/N)诱导的IgG和IgA抗体最高滴度均略高于SL7207(pVAX-S),但差异不明显(P>0.05)。SL7207(pVAX-S/N)免疫42d小鼠诱导的干扰素浓度为659.45pg/mL,低于SL7207(pVAXD-S)组。结论 S/N融合基因疫苗SL7207(pVAX-S/N)具有良好的口服免疫原性,但与SL7207(pVAX-S)无明显差异。 展开更多

关键词 减毒沙门氏菌 猪传染性胃肠炎病毒 融合双基因 构建 免疫原性

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从cDNA感染性克隆产生冷适应重配A型人流感病毒及免疫原性的初步研究 被引量：2

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作者 叶艺 杨鹏辉 +5 位作者 罗德炎 吴朔 周朋 刘秀梵 王希良 于三科 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期373-377,共5页

目的从cDNA感染性克隆产生冷适应重配A型人流感病毒株,并对其生物学特性和免疫原性进行初步测定。方法采用RT-PCR技术,分别扩增2006至2007年疫苗株A/New Caledonia/20/99的HA、NA全长基因片段,构建转录表达双向载体pMDV-A-HA、pMDV-A-NA... 目的从cDNA感染性克隆产生冷适应重配A型人流感病毒株,并对其生物学特性和免疫原性进行初步测定。方法采用RT-PCR技术,分别扩增2006至2007年疫苗株A/New Caledonia/20/99的HA、NA全长基因片段,构建转录表达双向载体pMDV-A-HA、pMDV-A-NA,将这2个质粒与冷适应拯救系统的6个质粒共转染COS-1细胞,并对拯救的重配病毒的生物学特性和免疫原性进行初步鉴定。结果拯救出具有冷适应表型和温度敏感型的A型人流感弱毒株,初步测定了重配病毒的生物学特性和免疫原性。结论成功拯救具有冷适应和温度敏感表型的A型人流感弱毒株,并初步测定其免疫原性,为我国弱毒疫苗株的拯救和弱毒疫苗的发展奠定了基础。 展开更多

关键词 反向遗传学 冷适应 弱毒疫苗株 重配病毒 免疫原性

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中国强毒赖型钩端螺旋体新基因OmpL17的表达及其免疫原性 被引量：2

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作者 朱庆平 赵计林 +3 位作者 鲍朗 张会东 赵明才 黎光 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期250-253,共4页

将Omp L17基因克隆于p GEX- 1λT载体,在大肠杆菌JM10 9中表达分子量约为5 4 KDa的GST-Omp L17融合蛋白,凝血酶切割后得到了大小约2 8KDa的Omp L17蛋白。用纯化的Omp L17蛋白免疫大白兔,制备了高滴度的特异性抗体(1∶4 896 )。本研究获... 将Omp L17基因克隆于p GEX- 1λT载体,在大肠杆菌JM10 9中表达分子量约为5 4 KDa的GST-Omp L17融合蛋白,凝血酶切割后得到了大小约2 8KDa的Omp L17蛋白。用纯化的Omp L17蛋白免疫大白兔,制备了高滴度的特异性抗体(1∶4 896 )。本研究获得了纯化的Omp L17及其特异性抗体,为该外膜蛋白致病作用及免疫保护力研究奠定基础。 展开更多

关键词 OmpL17 钩体外膜蛋白 GST融合表达 免疫原性 赖型钩端螺旋体 新基因 特异性抗体 中国 融合蛋白 JM109

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伤寒结合疫苗免疫原性和动物安全性研究 被引量：2

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作者 秦敏 杨国友 +3 位作者 涂小萍 杨蒲 林丽 黄锴 《微生物学免疫学进展》 2006年第3期5-8,共4页

伤寒V i多糖与白喉类毒素(DT)蛋白以己二酰肼(ADH)作连接臂,在碳二亚胺(EDAC)的作用下结合成V i-DT结合物,进行抗原性、免疫原性和动物安全性试验。结果显示,3批结合物抗体阳转率均为100%,加强免疫一针后GMT值明显升高(p<0.001),免... 伤寒V i多糖与白喉类毒素(DT)蛋白以己二酰肼(ADH)作连接臂,在碳二亚胺(EDAC)的作用下结合成V i-DT结合物,进行抗原性、免疫原性和动物安全性试验。结果显示,3批结合物抗体阳转率均为100%,加强免疫一针后GMT值明显升高(p<0.001),免疫剂量以0.75μg/只抗体增长最为明显,甚至以低剂量0.375μg/只仍能获得较高的抗体滴度,多项动物试验证明该结合物是安全的。显示V i-DT结合物有很好的动物安全性和免疫原性,为临床试验提供实验室依据。 展开更多

关键词 结合疫苗 伤寒 安全性 免疫原性

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树鼩γ干扰素在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性鉴定 被引量：2

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作者 丁晨 肖红剑 +6 位作者 龙琼 李智华 毕研伟 闫玲梅 李育中 姚月婷 寸韡 《生物技术通讯》 CAS 2018年第3期377-381,共5页

目的:克隆树鼩γ干扰素(IFNγ)基因,在大肠杆菌中高效表达纯化并鉴定其免疫原性。方法:提取树鼩肺组织总RNA,经RT-PCR扩增出树鼩IFNγ基因,再克隆到原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒p ET-30a(+)-IFNγ,转化大肠杆菌BL21(DE3)感... 目的:克隆树鼩γ干扰素(IFNγ)基因,在大肠杆菌中高效表达纯化并鉴定其免疫原性。方法:提取树鼩肺组织总RNA,经RT-PCR扩增出树鼩IFNγ基因,再克隆到原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒p ET-30a(+)-IFNγ,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达树鼩IFNγ;经金属螯合柱复性及纯化,Western印迹和ELISA检测其免疫原性,并检测不同组织中IFNγ的分布情况。结果:构建了重组表达质粒p ET-30a(+)-IFNγ,重组蛋白在30℃、1 mmol/L IPTG诱导4 h获得较高表达量,镍柱复性纯化后得到较高纯度的树鼩IFNγ。Western印迹显示IFNγ可与兔抗人IFNγ单克隆抗体特异性结合,应用Western印迹和ELISA分别检测树鼩IFNγ的免疫原性和抗体滴度,在树鼩的鼻、心、肝、肺、肾、气管中检测到IFNγ。结论:在大肠杆菌中高效表达了重组树鼩IFNγ,复性纯化后具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 树鼩 Γ干扰素 原核表达 亲和层析 免疫原性

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