目的探讨 Id4基因甲基化作为检测急性白血病(AL)微量残留病变指标的可行性。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)技术对细胞系中不同比例的白血病细胞以及正常人、初诊和完全缓解期的 AL 患者骨髓进行 Id4基因甲基化状态检测。结...目的探讨 Id4基因甲基化作为检测急性白血病(AL)微量残留病变指标的可行性。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)技术对细胞系中不同比例的白血病细胞以及正常人、初诊和完全缓解期的 AL 患者骨髓进行 Id4基因甲基化状态检测。结果 MS-PCR 方法可在低于1%白血病细胞中检测到Id4基因甲基化。Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态,初治急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中甲基化比例分别为84%和86%。Id4基因在完全缓解的 ALL 患者中甲基化比例达60.9%,高于完全缓解状态的 AML 患者。Id4基因甲基化检测阳性的14例 ALL 患者中有8例在12个月内复发,而甲基化检测阴性的9例 ALL 患者仅有1例复发。Id4基因呈甲基化状态的8例 AML 患者中有5例在12个月内复发,而 Id4基因呈非甲基化的20例 AML患者中12个月内仅有2例复发。结论 MS-PCR 检测 Id4基因甲基化有可能作为 AL 微量残留病的检测方法。展开更多
尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白...尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白血病。本研究在前期建立的甲基化定量PCR体系的基础上,用该方法检测患者骨髓样本,探讨ID4甲基化定量指标(percentage of methylated reference,PMR)的临床意义。采集我院门诊及住院确诊的初治、完全缓解、复发3个阶段的急性白血病患者骨髓样本及正常对照者骨髓样本。应用ID4甲基化定量PCR体系对样本进行检测。按初治、完全缓解、复发分组比较PMR值。比较相同病例不同疾病状态的PMR的动态变化。结果表明,初治组PMR最高,其次为复发组,而完全缓解组最低。初治组PMR与完全缓解组比较存在统计学差异。4例随访病例的PMR值波动与病情变化一致。在1例复发病例中,PMR升高早于骨髓细胞学检查确认复发1.7个月。结论:本研究通过ID4基因启动子区甲基定量检测的方法初步验证:甲基化水平的量化指标PMR值与急性白血病患者肿瘤细胞负荷关系密切。PMR动态监测波动与疾病变化一致,可能具有预测复发的作用,但ID4甲基化定量指标的临床价值还有待进一步研究证据的支持。展开更多
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,...多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。展开更多
目的 研究淋巴瘤细胞DNA结合抑制因子4（inhibitor of DNA binding,Id4）基因甲基化及As2O3去甲基化效应.方法 体外培养人Burkitt＇s淋巴瘤细胞系Raji细胞,设对照组和用不同浓度As2O3处理Raji细胞不同时间的实验组.用甲基化特异性聚合...目的 研究淋巴瘤细胞DNA结合抑制因子4（inhibitor of DNA binding,Id4）基因甲基化及As2O3去甲基化效应.方法 体外培养人Burkitt＇s淋巴瘤细胞系Raji细胞,设对照组和用不同浓度As2O3处理Raji细胞不同时间的实验组.用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）检测各组Raji细胞Id4基因甲基化程度;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同浓度As2O3处理前后Raji细胞Id4mRNA的表达情况.应用MTT比色法检测细胞增殖情况;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡并分析As2O3对细胞周期的影响.结果 ①Raji细胞Id4基因呈完全甲基化状态,Raji细胞Id4基因高甲基化状态可被As2O3逆转,且与As2O3的剂量有关.②不同浓度As2O3处理Raji细胞48 h后,随着药物浓度增加,Raji细胞中Id4基因mRNA的相对表达量逐渐增加,呈一定剂量依赖关系.③不同浓度As2O3处理Raji细胞24、48、72 h后细胞增殖抑制率为12.15%～92.17%,且作用呈时间剂量依赖性（P＜0.05）;④FCM检测细胞凋亡结果显示,As2O3处理Raji细胞48 h后均出现明显的凋亡峰,对照组未见凋亡峰或仅有低平的凋亡峰;⑤FCM细胞周期分析结果显示,不同浓度As2O3处理Raji细胞48 h后,细胞阻滞于G0/G1期,且随着As2O3浓度的增加,阻滞作用增强,呈一定剂量依赖关系.结论 ①人Burkitt＇s淋巴瘤细胞系Raji细胞中Id4基因呈完全甲基化状态.②As2O3可以逆转Raji细胞Id4基因的高甲基化状态,使Id4 mRNA重新表达.③Raji细胞Id4基因呈高甲基化状态是其恶性增殖的原因之一.展开更多
文摘目的探讨 Id4基因甲基化作为检测急性白血病(AL)微量残留病变指标的可行性。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)技术对细胞系中不同比例的白血病细胞以及正常人、初诊和完全缓解期的 AL 患者骨髓进行 Id4基因甲基化状态检测。结果 MS-PCR 方法可在低于1%白血病细胞中检测到Id4基因甲基化。Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态,初治急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中甲基化比例分别为84%和86%。Id4基因在完全缓解的 ALL 患者中甲基化比例达60.9%,高于完全缓解状态的 AML 患者。Id4基因甲基化检测阳性的14例 ALL 患者中有8例在12个月内复发,而甲基化检测阴性的9例 ALL 患者仅有1例复发。Id4基因呈甲基化状态的8例 AML 患者中有5例在12个月内复发,而 Id4基因呈非甲基化的20例 AML患者中12个月内仅有2例复发。结论 MS-PCR 检测 Id4基因甲基化有可能作为 AL 微量残留病的检测方法。
文摘尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白血病。本研究在前期建立的甲基化定量PCR体系的基础上,用该方法检测患者骨髓样本,探讨ID4甲基化定量指标(percentage of methylated reference,PMR)的临床意义。采集我院门诊及住院确诊的初治、完全缓解、复发3个阶段的急性白血病患者骨髓样本及正常对照者骨髓样本。应用ID4甲基化定量PCR体系对样本进行检测。按初治、完全缓解、复发分组比较PMR值。比较相同病例不同疾病状态的PMR的动态变化。结果表明,初治组PMR最高,其次为复发组,而完全缓解组最低。初治组PMR与完全缓解组比较存在统计学差异。4例随访病例的PMR值波动与病情变化一致。在1例复发病例中,PMR升高早于骨髓细胞学检查确认复发1.7个月。结论:本研究通过ID4基因启动子区甲基定量检测的方法初步验证:甲基化水平的量化指标PMR值与急性白血病患者肿瘤细胞负荷关系密切。PMR动态监测波动与疾病变化一致,可能具有预测复发的作用,但ID4甲基化定量指标的临床价值还有待进一步研究证据的支持。
文摘多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。
