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土壤中淀粉酶产生菌的筛选及产酶条件优化 被引量:16
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作者 雷晓燕 《沈阳化工大学学报》 CAS 2010年第3期203-208,共6页
为筛选淀粉酶的高产菌株,利用淀粉水解圈作为筛选模型,从淀粉厂附近土壤中筛选得到产淀粉酶能力较强的细菌B5.对其产酶条件进行优化,最终得到最佳碳源为质量分数为2.0%的淀粉,最佳氮源为质量分数为0.5%的酵母膏加质量分数为0.5%的蛋白胨... 为筛选淀粉酶的高产菌株,利用淀粉水解圈作为筛选模型,从淀粉厂附近土壤中筛选得到产淀粉酶能力较强的细菌B5.对其产酶条件进行优化,最终得到最佳碳源为质量分数为2.0%的淀粉,最佳氮源为质量分数为0.5%的酵母膏加质量分数为0.5%的蛋白胨,最适初始pH值为6.0,最适培养温度为37℃,最适溶氧量为50 mL摇瓶装15 mL培养基,最佳产酶时间为48 h,培养基中同时补充质量分数为0.05%的MgSO4、质量分数为0.05%的CaCl2和质量分数为0.005%的FeSO4时可大幅提高酶活力.菌株B5液体发酵产酶活力最高可达158.89 U/g,该淀粉酶最适反应温度为42℃,最适反应pH值为5.0. 展开更多
关键词 淀粉酶 水解圈 酶活力
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基于磷脂酶水解圈定向筛选高效聚对苯二甲酸乙二醇酯降解酶
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作者 徐翰 蔡忆梅 +4 位作者 陈晓倩 黄青松 吴敬 陈晟 颜正飞 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期745-754,共10页
【目的】目前自然环境中聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate,PET)废弃物的积累严重威胁生态健康,因此PET的降解问题已成为全球性的热点问题。生物酶法降解PET技术以其绿色环保而备受关注,但天然PET降解酶的催化活性普遍偏... 【目的】目前自然环境中聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate,PET)废弃物的积累严重威胁生态健康,因此PET的降解问题已成为全球性的热点问题。生物酶法降解PET技术以其绿色环保而备受关注,但天然PET降解酶的催化活性普遍偏低,亟待进一步定向改造。现阶段定向进化为快速提高PET降解酶催化性能提供了可能,其中筛选方法是成功获得高性能突变体的关键所在。本研究旨在提出一种新型高效灵敏的筛选方法并应用于褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)来源角质酶Tfu-0883的定向改造,以期快速获得PET降解活性提高的突变体。【方法】基于易错PCR构建突变体文库,涂布于卵黄磷脂平板,以水解圈的大小作为筛选指标获得PET降解活性提高的突变体;对突变体进行酶学定性并筛选出潜在的分子改造位点,最终获得高性能突变体。【结果】从卵黄磷脂平板中挑取水解圈直径最大的单菌落,即突变体H10(N2D/D94H/A149E),其PET降解能力是野生型的1.5倍,最适温度与pH分别为60℃和8.0。突变体H10中第2位和第149位氨基酸残基远离底物结合凹槽,其突变会导致酶蛋白稳定性下降;第94位氨基酸残基则位于底物结合凹槽附近,由负电荷氨基酸Asp突变为正电荷氨基酸His,有利于吸附在带负电荷的PET表面,是突变体H10降解能力提升的关键因素;随后将野生型的第94位氨基酸残基Asp分别突变为His及同为正电荷且空间位阻更小的Lys和Arg,突变体D94H、D94K和D94R对PET降解能力均有提升,其中,突变体D94K降解PET能力是野生型的3.6倍。【结论】本研究基于磷脂酶水解圈构建了一种新的PET降解酶定向筛选方法,以此获得了降解活性提高的突变体,并证实角质酶Tfu-0883第94位氨基酸残基位点具有提升其PET降解活性的潜在能力。 展开更多
关键词 定向进化 PET降解 水解圈 热稳定性 分子改造
原文传递
DCE-01菌株果胶酯酶基因克隆与表达 被引量:4
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作者 成莉凤 李琦 +5 位作者 刘正初 段盛文 冯湘沅 郑科 郑霞 程毅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期162-165,共4页
从麻类脱胶高效菌株DCE-01中克隆果胶酯酶基因并进行原核表达。根据全基因组测序注释结果设计引物,PCR扩增果胶酯酶基因连接到pEASY-E1载体上,导入大肠杆菌进行诱导表达,采用水解圈法进行选择和定量分析。结果表明:克隆出全长1107bp的... 从麻类脱胶高效菌株DCE-01中克隆果胶酯酶基因并进行原核表达。根据全基因组测序注释结果设计引物,PCR扩增果胶酯酶基因连接到pEASY-E1载体上,导入大肠杆菌进行诱导表达,采用水解圈法进行选择和定量分析。结果表明:克隆出全长1107bp的果胶酯酶基因(GenBank登录号:KC422449),编码368个氨基酸;该基因表达蛋白质序列的前26个氨基酸为信号肽,前导蛋白的分子量约为39.6ku,成熟蛋白为36.9ku,pI为9.1;基因工程菌株以高度酯化橘子果胶为底物的发酵液粗酶活为1.5IU/mL,是原始菌株DCE-01的22.4倍。本研究成功发掘出果胶酯酶基因,其表达产物果胶酯酶能降解高甲氧基果胶,在低甲氧基果胶制备方面具有重要应用前景。 展开更多
关键词 果胶酯酶 基因克隆 原核表达 水解圈
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土壤中产高活性淀粉酶细菌的分离与纯化 被引量:4
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作者 文狄 褚丹维 +2 位作者 罗绍娇 丁淑金 蒙帮明 《安徽农业科学》 CAS 2018年第27期6-9,41,共5页
[目的]从土壤中分离纯化产高活性淀粉酶细菌,并研究其产酶条件。[方法]利用淀粉水解圈平板筛选法,从都匀市23份不同地点的土样中分离并筛选到一株产胞外淀粉酶的菌株Z_3,其水解圈/菌落直径比达5.50;通过形态学、染色等方法,结合16S r DN... [目的]从土壤中分离纯化产高活性淀粉酶细菌,并研究其产酶条件。[方法]利用淀粉水解圈平板筛选法,从都匀市23份不同地点的土样中分离并筛选到一株产胞外淀粉酶的菌株Z_3,其水解圈/菌落直径比达5.50;通过形态学、染色等方法,结合16S r DNA序列的比对鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。并对Z_3菌株产酶条件进行了研究。[结果]Z3菌株在1.0%淀粉的碳源、1.0%酵母膏+1.0%牛肉膏的氮源、0.2%的Ca Cl_2·2H_2O、30 m L装液量于250 m L摇瓶中的溶氧量,p H为7.0,培养温度为37℃的条件下,产酶能力最强。此外,Z3菌株所产淀粉酶的酶学分析显示,其最适酶反应p H为8.0,最适反应温度为39℃。[结论]该菌株是产淀粉酶较好的材料,具有一定的应用前景。 展开更多
关键词 淀粉酶 水解圈 酶活力 产酶条件
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土壤中淀粉酶产生菌的筛选 被引量:2
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作者 晏爱芬 余丽 林连兵 《保山学院学报》 2013年第5期36-38,共3页
利用平板透明圈法,从高黎贡山百花岭地区土壤中筛选到23株产淀粉酶的菌株,它们在淀粉选择平板上都产生明显的淀粉水解透明圈。23株菌的水解圈直径与菌落直径之比约在1.9-5.5之间。这些产淀粉酶菌株的获得为进一步研究淀粉酶的酶活性、... 利用平板透明圈法,从高黎贡山百花岭地区土壤中筛选到23株产淀粉酶的菌株,它们在淀粉选择平板上都产生明显的淀粉水解透明圈。23株菌的水解圈直径与菌落直径之比约在1.9-5.5之间。这些产淀粉酶菌株的获得为进一步研究淀粉酶的酶活性、产酶条件优化等相关性质奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 淀粉酶 高黎贡山 水解圈
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湘西陈年腊肉微生物群落分析及高产脂肪酶细菌的筛选 被引量:19
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作者 陈竞适 刘静 +1 位作者 任海姣 侯爱香 《肉类研究》 北大核心 2017年第3期1-6,共6页
为筛选肉源高产脂肪酶菌株,本研究以湘西陈年腊肉为样品,采用稀释平板计数法分析湘西腊肉的微生物结构,利用产脂肪菌株在罗丹明B筛选平板上形成变色圈的方法进行初筛,采用对硝基苯酚棕榈酸酯比色法比较初筛菌株脂肪酶活力进行复筛,通过... 为筛选肉源高产脂肪酶菌株,本研究以湘西陈年腊肉为样品,采用稀释平板计数法分析湘西腊肉的微生物结构,利用产脂肪菌株在罗丹明B筛选平板上形成变色圈的方法进行初筛,采用对硝基苯酚棕榈酸酯比色法比较初筛菌株脂肪酶活力进行复筛,通过形态学和分子生物学相结合的方法鉴定复筛菌株。结果表明:湘西陈年腊肉有丰富的微生物群落,是产脂肪酶菌株的良好菌源,酵母菌、霉菌和微球菌是其主要微生物群落;腊肉中的微生物经罗丹明B平板初筛后得1号菌株,变色圈最大为2.6 cm,11、12号菌株次之,为2.4 cm;复筛得酶活力最高的菌株为1号菌株达13.8 U/mL,与初筛预测结果一致,经构建其16S rD NA区域系统发育树,鉴定1号目的菌株为寡养单胞菌属。 展开更多
关键词 腊肉 微生物菌群 平板水解圈法 酶活力测定 高产脂肪酶细菌
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