端粒酶催化亚单位基因启动子调控Hsv—tk/GCV系统对肺癌细胞A549选择性杀伤作用的研究 被引量：11

1

作者 唐小军 王艳萍 +3 位作者 周清华 车国卫 陈小禾 朱大兴 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期148-152,共5页

目的研究人端粒酶催化亚单位（human telomerase catalytic subunit，hTERT）基因启动子调控单纯疱疹胸苷激酶／更昔洛韦（herpes simplex virus-thymidine kinase／ganciclovir，Hsv-tk／GCV）治疗系统对人肺癌细胞株A549的选择体外杀... 目的研究人端粒酶催化亚单位（human telomerase catalytic subunit，hTERT）基因启动子调控单纯疱疹胸苷激酶／更昔洛韦（herpes simplex virus-thymidine kinase／ganciclovir，Hsv-tk／GCV）治疗系统对人肺癌细胞株A549的选择体外杀伤作用。方法（1）用脂质体法将hTERT启动子和sv40启动子调控的比基因表达质粒（pGL3-hTp-tk和pGL3-sv40-tk）转染端粒酶阳性的人肺腺癌细胞株A549及端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞株MRC-5，用逆转录-PCR方法检测转染细胞中此基因的表达情况；（2）用MTT法检测GCV对上述转染细胞体外增殖的抑制作用；（3）用流式细胞仪检测GCV对上述转染细胞凋亡和细胞周期的影响。结果（1）转染pGCS-sv40-tk的细胞A549、MRG5和转染pGCS-hTp-tk的A549均有tk mRNA表达，转染pGL3-hTp-tk的MRC-5无tk mRNA表达；（2）GCV对转染pGL3-sv40-tk的细胞A549、MRC-5和转染pGCS—hTp-tk的A549体外增殖均有明显抑制作用，对转染pGL3-hTp-tk的MRG-5无明显抑制作用；（3）转染pGL3-sv40-tk的A549、MRC-5和转染pGL3-hTp-tk的A549细胞，GCV处理后细胞凋亡指数（21．58％、9．35％和23．19％）均显著高于转染pGL3-hTp的A549和MRC-5细胞（0．78％和0．55％）及空白对照A549和MRC-5细胞（2．17％和0．60％），转染pGL3-hTp-tk的MRC-5细胞凋亡指数（0．88％）无明显升高。结论hTERT启动子调控Hsv-tk基因可以在肺癌细胞中选择性表达，hTERT调控的Hsv-tk／GCV治疗系统对肺癌细胞体外增殖具有靶向性抑制作用。 展开更多

关键词 肺癌 自杀基因 端粒酶催化亚单位 选择性表达

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重度子痫前期患者胎盘组织hTERT和bFGF的表达及意义 被引量：6

2

作者 林娟 王晨虹 许多 《华南国防医学杂志》 CAS 2012年第1期36-39,共4页

目的探讨重度子痫前期患者胎盘组织中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达及其意义。方法用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(st... 目的探讨重度子痫前期患者胎盘组织中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达及其意义。方法用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-perosidase,SP)检测重度子痫前期30例(早产17例,足月产13例)和25例无并发症的对应孕周孕妇(早产14例,足月11例)胎盘组织中hTERT和bFGF表达水平。结果重度子痫前期组胎盘中hTERT水平(45.09±11.10)显著降低于对照组hTERT(59.90±4.64),P<0.05。早产重度子痫前期组胎盘bFGF表达(74.71±11.87)显著高于早产组(54.38±19.52),P<0.05;足月重度子痫前期bFGF表达(47.57±8.83)与正常足月组(46.10±16.25)无统计学差异(P>0.05)。结论重度子痫前期胎盘hTERT的表达降低,可能是重度子痫前期胎盘滋养细胞侵入异常的主要原因,而在重度子痫前期bFGF表达显著增加可能在其发病中起到保护性作用。 展开更多

关键词 端粒酶活性亚单位 碱性成纤维细胞生长因子 胎盘 子痫前期

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稳转hTERT绵羊睾丸细胞系的建立

3

作者 杨雪 任善会 +5 位作者 王相伟 龚真莉 殷相平 孙跃峰 陈豪泰 万学瑞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期43-48,共6页

羊睾丸原代细胞的体外培养是探究牛羊病毒致病机理的重要材料,实际科研工作中常受困于此类细胞传代性差、性质不稳定等缺点。外源性导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)可以促使端粒酶活性的表达,延长细胞体外培养寿命是一种有效建立细胞... 羊睾丸原代细胞的体外培养是探究牛羊病毒致病机理的重要材料,实际科研工作中常受困于此类细胞传代性差、性质不稳定等缺点。外源性导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)可以促使端粒酶活性的表达,延长细胞体外培养寿命是一种有效建立细胞永生化的方法。本试验中,通过RT-PCR获得hTERT。利用同源重组的技术,成功的构建了hTERT的真核表达质粒和慢病毒质粒。利用慢病毒表达系统,建立了稳转hTERT绵羊的睾丸细胞系。间接免疫荧光和蛋白免疫印迹试验研究结果均显示,hTERT基因已成功整合进入绵羊睾丸基因组中并稳定表达。第30代次的羊睾丸细胞生长较快,性状较稳定,表明已成功构建了具有永生化特性的绵羊睾丸细胞系,为草食动物病毒的相关研究提供重要的细胞模型。 展开更多

关键词 绵羊 睾丸原代细胞 人端粒酶逆转录酶基因 HTERT 永生化细胞系

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幽门螺杆菌培养液对SGC7901胃癌细胞表达hTERT和Bcl-2的影响 被引量：4

4

作者 刘锁贵 王毅超 安员 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期550-552,共3页

目的研究幽门螺杆菌(HP)培养滤液对SGC7901胃癌细胞表达hTERT、Bcl-2蛋白的影响。方法在HP培养滤液诱导前后,采用流式细胞仪检测SGC7901胃癌细胞hTERT、Bcl-2蛋白的表达。结果对照组SGC7901胃癌细胞表达hTERT和Bcl-2蛋白的阳性细胞数和... 目的研究幽门螺杆菌(HP)培养滤液对SGC7901胃癌细胞表达hTERT、Bcl-2蛋白的影响。方法在HP培养滤液诱导前后,采用流式细胞仪检测SGC7901胃癌细胞hTERT、Bcl-2蛋白的表达。结果对照组SGC7901胃癌细胞表达hTERT和Bcl-2蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于经HP培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组(P<0.05)。经HP培养滤液处理的SGC7901胃癌细胞24、36、48 h表达hTERT和Bcl-2蛋白的阳性细胞数和荧光指数呈递增趋势,且相互间有显著差异(P<0.05)。结论HP感染不仅通过激活端粒酶促进细胞永生化,而且通过促进Bcl-2表达使细胞凋亡减少,进而促进胃癌的发生、发展,这可能是HP感染致癌的重要机制之一。 展开更多

关键词 胃癌 端粒酶 端粒酶催化亚单位 BCL-2

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反义端粒酶催化亚单位抑制喉癌细胞生长的离体实验研究 被引量：5

5

作者 陈始明 陶泽璋 +3 位作者 肖伯奎 刘剑锋 侯炜 杨占秋 《临床耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期226-228,共3页

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义寡核苷酸对人喉癌细胞株Hep-2的生长抑制作用。方法:用脂质体包裹hTERT反义寡核苷酸转染体外培养的Hep-2细胞,分别于转染后24、48、72h用MTT法检测细胞增殖活性,转染后72h行HE染色及端粒酶活性... 目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义寡核苷酸对人喉癌细胞株Hep-2的生长抑制作用。方法:用脂质体包裹hTERT反义寡核苷酸转染体外培养的Hep-2细胞,分别于转染后24、48、72h用MTT法检测细胞增殖活性,转染后72h行HE染色及端粒酶活性测定。结果:转染后细胞增殖活性降低;细胞生长密度下降;端粒酶活性受到抑制。结论:hTERT反义寡核苷酸短期内可以降低端粒酶活性、抑制喉癌细胞的生长。 展开更多

关键词 端粒酶催化亚单位 反义寡核苷酸 喉肿瘤 基因治疗

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人端粒酶催化亚单位和c-myc蛋白在胃癌及癌前病变中的表达及意义 被引量：4

6

作者 滕小春 刘海峰 王国安 《现代肿瘤医学》 CAS 2010年第2期327-329,共3页

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)和c-myc蛋白在胃癌和胃癌前病变中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学技术检测71例慢性胃炎和胃癌中hTERT和c-myc蛋白的表达,其中慢性胃炎伴萎缩者18例,伴肠... 目的:探讨人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)和c-myc蛋白在胃癌和胃癌前病变中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学技术检测71例慢性胃炎和胃癌中hTERT和c-myc蛋白的表达,其中慢性胃炎伴萎缩者18例,伴肠化生者16例,伴中、重度不典型增生者16例,胃癌21例。结果:hTERT和c-myc蛋白的表达率在胃癌组织中均高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在不典型增生组织中均显著高于肠化生、萎缩性胃炎组织(P<0.05);在肠化生组织中均显著高于萎缩性胃炎组织(P<0.05)。hTERT蛋白表达率在c-myc蛋白阳性患者中显著高于c-myc蛋白阴性患者(P<0.01)。结论:hTERT与c-myc蛋白在胃癌发生发展过程中,均可能发挥重要作用,对胃癌的发生、发展起促进作用,c-myc表达增加可能是胃黏膜上皮细胞端粒酶激活的重要机制之一。 展开更多

关键词 胃癌 人端粒酶催化亚单位 c—myc

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胃黏膜端粒酶活化与细胞凋亡的关系 被引量：2

7

作者 王国安 刘海峰 +3 位作者 房殿春 腾小春 何俊堂 陈刚 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期785-787,共3页

目的研究胃癌及胃癌前病变组织端粒酶催化亚单位的表达,探讨端粒酶活性与细胞凋亡的关系,以揭示端粒酶活化和细胞凋亡在胃癌发生中的作用。方法选择64例慢性胃炎及胃癌患者,其中慢性胃炎伴萎缩者16例,伴肠上皮化生者15例,伴中、重度异... 目的研究胃癌及胃癌前病变组织端粒酶催化亚单位的表达,探讨端粒酶活性与细胞凋亡的关系,以揭示端粒酶活化和细胞凋亡在胃癌发生中的作用。方法选择64例慢性胃炎及胃癌患者,其中慢性胃炎伴萎缩者16例,伴肠上皮化生者15例,伴中、重度异型增生者14例,胃癌19例。采用SP法检测hTERT蛋白表达,采用TUNEL染色法原位检测细胞凋亡。结果萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织hTERT蛋白表达率分别为25.0%、46.7%、64.4%和78.9%,呈递增趋势,两两比较均有显著性差异(P<0.05)。萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织细胞凋亡指数(%)分别为11.54±2.28、17.05±2.88、7.41±1.32和5.03±2.23,呈递减趋势,两两比较均有显著性差异(P<0.05)。hTERT蛋白阳性患者细胞凋亡指数为8.45%±5.30%,显著低于hTERT蛋白阴性患者(11.86%±4.24%,P<0.05)。结论胃癌前病变至胃癌的演化过程中,端粒酶激活并诱导细胞凋亡异常,二者同时存在,破坏了胃黏膜上皮的稳定性,这可能是胃黏膜细胞癌变的机制之一。 展开更多

关键词 胃肿瘤 端粒 末端转移酶 端粒酶催化亚单位 细胞凋亡

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胃癌前病变组织和胃癌中hTERT的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系 被引量：1

8

作者 王国安 刘海峰 房殿春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第19期1759-1761,共3页

目的　探讨胃癌前病变组织及胃癌中人端粒酶催化亚单位 (humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)的表达状况及其与幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori ,Hp)感染的关系。方法　应用免疫组织化学技术检测 45例慢性胃炎和 19例胃癌中hTERT蛋... 目的　探讨胃癌前病变组织及胃癌中人端粒酶催化亚单位 (humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)的表达状况及其与幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori ,Hp)感染的关系。方法　应用免疫组织化学技术检测 45例慢性胃炎和 19例胃癌中hTERT蛋白的表达 ,用快速尿素酶法和Warthin Starry银染色法检测Hp。结果　hTERT蛋白的表达率在胃癌组织( 78 95 % )中显著高于异型增生 ( 64 2 9% ,P <0 0 5 )、肠化生 ( 4 6 67% ,P <0 0 5 )和萎缩性胃炎组织 ( 2 5 0 0 % ,P <0 0 5 ) ,在异型增生组织 ( 64 2 9% )中显著高于肠化生 ( 4 6 67% ,P <0 0 5 )和萎缩性胃炎组织 ( 2 5 .0 0 % ,P <0 0 5 ) ,在肠化生组织( 4 6 67% )中显著高于萎缩性胃炎组织 ( 2 5 .0 0 % ,P <0 0 5 )。Hp阳性患者中hTERT蛋白的表达率为 77 42 % ,Hp阴性患者中hTERT蛋白的表达率为 3 3 3 3 % ,二者之间差异非常显著 (P <0 0 1)。结论　在胃癌和胃癌前病变阶段 ,端粒酶 (telom erase)均可能发挥重要作用 ,促进了胃癌的发生、发展。Hp可能是胃粘膜上皮细胞端粒酶激活的主要机制之一。 展开更多

关键词 胃癌 癌前病变 幽门螺杆菌 端粒酶 端粒酶催化亚单位

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特异性人端粒酶催化亚单位基因小干扰RNA对HeLa细胞生长的抑制作用 被引量：1

9

作者 李欣 沈志伟 +2 位作者 薛晓荣 刘民 汤华 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第6期861-866,共6页

通过设计并化学合成人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性siRNA,观察其对hTERT表达水平及肿瘤细胞生长的影响。将hTERT-siRNA以脂质体法转染入HeLa细胞,应用RT-PCR、实时定量TRAP、Western印迹、软琼脂克隆形成实验、荷瘤裸鼠肿瘤内注射等... 通过设计并化学合成人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性siRNA,观察其对hTERT表达水平及肿瘤细胞生长的影响。将hTERT-siRNA以脂质体法转染入HeLa细胞,应用RT-PCR、实时定量TRAP、Western印迹、软琼脂克隆形成实验、荷瘤裸鼠肿瘤内注射等方法检测细胞内hTERTmRNA、蛋白质表达水平及对肿瘤细胞生长的影响。RT-PCR、实时定量TRAP和Western印迹的结果显示hTERT-siRNA明显降低了HeLa细胞内hTERT的mRNA及蛋白质表达水平并伴随有端粒酶活性的下降。克隆形成实验表明hTERT-siRNA组的体外肿瘤形成能力受到抑制。荷瘤裸鼠肿瘤内注射hTERT-siRNA使肿瘤平均体积显著小于对照组。TUNEL凋亡检测表明hTERT-siRNA转染组的凋亡率明显高于对照组。研究表明hTERT特异性siRNA可以明显抑制HeLa细胞内hTERT的表达水平,对其生长有明显抑制作用,是一种有前途的肿瘤治疗新方法。 展开更多

关键词 端粒酶 RNA干扰 人端粒酶催化亚单位 HELA细胞

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人端粒酶催化亚基肿瘤相关性研究

10

作者 贾振华 唐红伟 +1 位作者 彭智 梁杰 《医学综述》 2009年第16期2428-2431,共4页

人端粒酶催化亚基（hTERT）基因转录的从头激活是端粒酶活化的主要限速步骤，受到多种癌基因或抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体，使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达，有望用于肿瘤... 人端粒酶催化亚基（hTERT）基因转录的从头激活是端粒酶活化的主要限速步骤，受到多种癌基因或抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体，使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达，有望用于肿瘤基因治疗。 展开更多

关键词 端粒酶 人端粒酶催化亚基 肿瘤 基因治疗

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PCR-ELISA定量检测as-hTERT对HepG2.2.15细胞端粒酶活性的抑制作用 被引量：1

11

作者 刘素侠 孙汶生 +2 位作者 马春红 韩丽辉 宋静 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2002年第4期292-293,共2页

目的 :采用PCR ELISA方法探讨人类端粒酶催化亚单位 (hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸 (as hTERT)对HepG2 .2 .1 5细胞端粒酶活性的抑制作用。方法 :通过PCR合成as hTERT及无关对照序列 ,体外作用于HBVDNA转染的HepG2 .2 .1 5细胞 ,用... 目的 :采用PCR ELISA方法探讨人类端粒酶催化亚单位 (hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸 (as hTERT)对HepG2 .2 .1 5细胞端粒酶活性的抑制作用。方法 :通过PCR合成as hTERT及无关对照序列 ,体外作用于HBVDNA转染的HepG2 .2 .1 5细胞 ,用PCR ELISA定量检测反义核酸作用后的端粒酶活性 ,MTT法观察as hTERT对细胞生长的抑制作用 ,ELISA法检测as hTERT对HBsAg和HBeAg表达的影响。结果 :as hTERT作用浓度为 1 0 μmol/L时 ,定量检测端粒酶活性 ,A450 nm值为 0 .42 ,低于无关序列与生理盐水对照的A450 nm值 (分别为 1 .46、1 .49) ,as hTERT可抑制细胞生长 ,对HBsAg和HBeAg的最佳抑制率分别为 76%和5 6%。结论 :as hTERT在体外可明显降低HepG2 .2 .1 5细胞的端粒酶活性 ,抑制细胞的生长 ,并可影响HBV抗原表达。 展开更多

关键词 抑制作用 人类端粒酶催化亚单位 反义寡核苷酸类 聚合酶链反应-酶联免疫分析

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胃癌前病变组织中人端粒酶催化亚单位的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

12

作者 关劼 房青 +2 位作者 刘芳 李红艳 徐波 《中日友好医院学报》 2010年第6期325-327,359,共4页

目的:探讨胃癌前病变组织中人端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达状况及其与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:采用实时定量荧光RT-PCR方法检测胃黏膜中hTERT表达水平,将hTERT与GAPDH拷贝数之比的100倍作为标准化hTERT(NhTERT),用快速尿素酶... 目的:探讨胃癌前病变组织中人端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达状况及其与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:采用实时定量荧光RT-PCR方法检测胃黏膜中hTERT表达水平,将hTERT与GAPDH拷贝数之比的100倍作为标准化hTERT(NhTERT),用快速尿素酶法和Warthin-Starry银染色法检测Hp。结果:伴肠上皮化生的萎缩性胃炎组织中hTERT表达明显增高(80.9±6.36),而肠上皮化生的Hp感染率明显高于无肠上皮化生者(69%vs31%),Hp阳性患者hTERT表达水平为(101.5±13.50),Hp阴性患者hTERT表达水平为(49.6±8.58),二者相比有统计学意义(P<0.01)。结论:在胃癌前病变阶段,Hp感染与端粒酶表达水平之间有直接关系,呈正相关,提示端粒酶、Hp感染在胃癌的发生、发展中起重要作用。 展开更多

关键词 胃癌前病变 幽门螺杆菌 端粒酶 人端粒酶催化亚单位

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hTERT基因表达在肝细胞肝癌发生发展中的作用及意义 被引量：4

13

作者 郭悦青 周旭 +2 位作者 刘恩宇 卢星榕 易继林 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第6期14-16,共3页

目的　研究端粒酶催化亚单位 (h TERT)基因表达在肝细胞肝癌 (HCC)发生发展中的作用及意义。方法　应用免疫组化 (SP法 )和半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)同步检测 6 2例 HCC及其对应癌旁组织、8例正常肝组织中 h TERT及 h TERTm ... 目的　研究端粒酶催化亚单位 (h TERT)基因表达在肝细胞肝癌 (HCC)发生发展中的作用及意义。方法　应用免疫组化 (SP法 )和半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)同步检测 6 2例 HCC及其对应癌旁组织、8例正常肝组织中 h TERT及 h TERTm RNA的表达情况 ,分析 h TERT基因表达与 HCC临床病理参数的关系。结果　 h TERT蛋白主要定位于肝癌细胞胞浆内 ,偶见核内染色。h TERT和 h TERTm RNA在 HCC中的阳性率分别为 88.71%、82 .2 6 % ,分别明显高于癌旁肝组织的阳性率 9.6 8%、6 .4 5 % ,差异具有非常显著性 (P <0 .0 1)。 h TERT及其 m RNA在 8例正常肝组织均未见表达。统计学分析显示 ,HCC中的 h TERT基因表达与肿瘤分期分级、门静脉有无癌栓、血清中甲胎蛋白表达水平、是否合并 HBV感染等有关 (P <0 .0 5 )。结论　h TERT基因可能在 HCC的发生发展中起着重要作用 ,其表达有望成为 HCC的重要分子生物学指标。 展开更多

关键词 HTERT基因 端粒酶催化亚单位 肝细胞肝癌 甲胎蛋白 分子生物学

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端粒酶催化亚单位Ex2-659A/G多态性与食管癌易感性的研究 被引量：4

14

作者 王国磊 王莉 +3 位作者 张瑞祥 蒋庆峰 丁志丹 李印 《中华实用诊断与治疗杂志》 2009年第12期1164-1166,共3页

目的:研究人端粒酶催化亚单位基因Ex2-659A/G位点单核苷酸多态性与食管癌患者遗传易感性的相关性。方法:采用PCR-限制性片段长度多态性对河南省汉族人群181例食管癌患者(食管癌组)和200例正常对照(对照组)进行基因型分析。结果:食管癌... 目的:研究人端粒酶催化亚单位基因Ex2-659A/G位点单核苷酸多态性与食管癌患者遗传易感性的相关性。方法:采用PCR-限制性片段长度多态性对河南省汉族人群181例食管癌患者(食管癌组)和200例正常对照(对照组)进行基因型分析。结果:食管癌组人端粒酶催化亚单位基因Ex2-659A/G位点A/A、A/G、G/G基因型的频率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与A/A基因型相比,G/G基因型能显著增加食管癌的发病风险(P<0.05);此外,G/G基因型可显著增加低年龄组(P<0.05)的发病风险。结论:人端粒酶催化亚单位基因Ex2-659G/G基因型可能为食管癌的易感因素。 展开更多

关键词 食管癌 端粒酶催化亚单位基因 单核苷酸多态性 遗传易感性

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特异性hTERT启动子在肿瘤细胞中启动效率研究 被引量：2

15

作者 李玮 谭建 +1 位作者 吴蓓 李宁 《生物医学工程与临床》 CAS 2010年第3期252-256,共5页

目的证明人端粒酶亚单位(hTERT)启动子可以引导目的基因在肿瘤细胞中表达。方法先使用RT-PCR检测各细胞系中hTERT mRNA的表达,再使用PCR方法扩增hTERT启动子基因的不同长度片段,并构建重组质粒,使用BglⅡ和HindⅢ双酶切鉴定重组质粒并... 目的证明人端粒酶亚单位(hTERT)启动子可以引导目的基因在肿瘤细胞中表达。方法先使用RT-PCR检测各细胞系中hTERT mRNA的表达,再使用PCR方法扩增hTERT启动子基因的不同长度片段,并构建重组质粒,使用BglⅡ和HindⅢ双酶切鉴定重组质粒并测序。最后使用Dual-Glo Luciferase Assay System激发荧光检测各细胞系中重组质粒中hTERT启动子的启动效率。结果 pGL3-204、pGL3-378、pGL3-1375重组质粒中的hTERT启动子序列与预期一致,质粒构建成功。hTERT启动子引导荧光基因的重组质粒在H460中启动效率最强可以达到SV40启动子的80%,而在FRO、U251中启动效率可以达到SV40启动子的30%左右。hTERT全长启动子序列的启动效率在ARO细胞系中比pGL3-204、pGL3-378中的启动子片段启动效率强,而在FRO、H460和U251细胞系中pGL3-204中的启动子片段启动效率最强。结论 hTERT启动子引导荧光基因的重组质粒,可以实现只在肿瘤细胞系中表达,但在正常细胞中不表达的效果。 展开更多

关键词 人端粒酶亚单位启动子 肿瘤 重组质粒

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胃粘膜病变中人端粒酶催化亚单位、c-myc蛋白的表达及其相互关系 被引量：2

16

作者 王国安 刘海峰 +3 位作者 房殿春 何俊堂 腾小春 陈刚 《消化外科》 CSCD 2005年第5期346-349,共4页

目的探讨胃粘膜病变中人端粒酶催化亚单位(humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)的表达状况及其与c-myc蛋白表达的关系。方法应用免疫组织化学技术检测45例慢性胃炎和19例胃癌中hTERT和c-myc蛋白的表达。结果hTERT蛋白的表达率在胃... 目的探讨胃粘膜病变中人端粒酶催化亚单位(humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)的表达状况及其与c-myc蛋白表达的关系。方法应用免疫组织化学技术检测45例慢性胃炎和19例胃癌中hTERT和c-myc蛋白的表达。结果hTERT蛋白的表达率在胃癌组织中显著高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在不典型增生组织中显著高于肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在肠化生组织中显著高于萎缩性胃炎组织(P<0.05)。c-myc蛋白的表达率在胃癌组织中显著高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在不典型增生组织中显著高于肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在肠化生组织中显著高于萎缩性胃炎组织(P<0.05)。hTERT蛋白表达率在c-myc蛋白阳性患者中显著高于c-myc蛋白阴性患者(P<0.01)。结论在胃癌和胃癌前病变阶段,端粒酶(telomerase)与c-myc均可能发挥重要作用,促进了胃癌的发生、发展;c-myc表达增加可能是胃粘膜上皮细胞端粒酶激活的主要机制之一。 展开更多

关键词 胃癌 C-MYC 端粒酶 人端粒酶催化亚单位

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人端粒酶催化亚单位基因单核苷酸多态性与胃癌的关系 被引量：2

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作者 万顺梅 房殿春 +3 位作者 杨仕明 汪荣泉 彭贵勇 陈文生 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期603-605,共3页

目的探讨人端粒酶催化亚单位基因（human telomerase catalytic subunit，hTERT）Ex2-659A／G位点单核苷酸多态性与胃癌患者发病风险的关系。方法对甘肃西部三家医院外科手术切除168例胃癌患者（病例组）和同期在上述医院查体的健康人群... 目的探讨人端粒酶催化亚单位基因（human telomerase catalytic subunit，hTERT）Ex2-659A／G位点单核苷酸多态性与胃癌患者发病风险的关系。方法对甘肃西部三家医院外科手术切除168例胃癌患者（病例组）和同期在上述医院查体的健康人群156例（对照组）进行病例对照研究；采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术（PCR—RFLP）对2组进行基因型分析，比较各基因型分布频率和发病风险的关系。结果病例组hTERT Ex2-659A／G位点AA、AG、GG基因型的频率与对照组相比无显著差异。病例组A、G等位基因频率分别为44．74％和55．26％，对照组为43．42％和56．58％，2组A、G等位基因型频率比较有显著性差异（χ^2=5．3734，P=0．0204）。与G／G基因型相比，A／G和A／A2种基因型的个体患胃癌的危险度（OR）分别为0．519（95％CI：0．310—0．870，P=0．013）、0．550（95％CI：0．255～1．188，P=0．128）。结论hTERT Ex2-659A／G单核苷酸多态性可能为胃癌的保护因素。 展开更多

关键词 胃癌 端粒酶催化亚单位基因 多态性 单核苷酸

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5-Aza-C对人鼻咽癌细胞hTERT基因表达及端粒酶活性的影响 被引量：1

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作者 王燕 张自雄 +3 位作者 戴梦源 陶泽璋 肖伯奎 陈始明 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期6-10,共5页

目的研究去甲基化药物5-氮杂胞嘧啶核苷(5-Azacytidine,5-Aza-C)对鼻咽癌细胞亚端粒区D4Z4甲基化状态、h TERT基因表达及端粒酶活性的影响。方法常规培养鼻咽癌CNE,CNE1,CNE2及5-8F细胞系。5-Aza-C处理鼻咽癌细胞后,甲基化测序聚合酶链... 目的研究去甲基化药物5-氮杂胞嘧啶核苷(5-Azacytidine,5-Aza-C)对鼻咽癌细胞亚端粒区D4Z4甲基化状态、h TERT基因表达及端粒酶活性的影响。方法常规培养鼻咽癌CNE,CNE1,CNE2及5-8F细胞系。5-Aza-C处理鼻咽癌细胞后,甲基化测序聚合酶链反应(MSP)法检测亚端粒区D4Z4甲基化;RT-PCR检测h TERT m RNA水平;端粒重复序列扩增法(telomeric repeat amplifi cation protocol,TRAP)法检测端粒酶活性。结果 5-Aza-C处理后,四种鼻咽癌细胞系的亚端粒区D4Z4序列的甲基化水平较处理前明显下降。2.5μmol/L 5-Aza-C处理后,四种鼻咽癌细胞h TERT m RNA的表达明显下调,端粒酶活性显著抑制。结论在鼻咽癌的发生中,亚端粒区的DNA甲基化水平紊乱起了一定的作用,去甲基化药物5-Aza-C能下调h TERT表达,抑制端粒酶活性。探讨鼻咽癌细胞中h TERT表达与亚端粒区Cp G岛甲基化状态之间的关系,可能为亚端粒区染色体结构异常在鼻咽癌发生中的作用提供深刻见解。 展开更多

关键词 鼻咽癌 5-Aza-C 人端粒酶反转录酶 端粒酶活性

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