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食管鳞状细胞癌患者微小RNA-561的表达及其临床意义 被引量：4
1
作者 赵铮 李毅 杨飞翔 《中国医师进修杂志》 2019年第12期1107-1111,共5页
目的探讨微小RNA(miR)-561在食管鳞状细胞癌中的临床意义及其表达。方法选取2015年1月至2016年2月在湖北医药学院附属东风医院行手术治疗的食管鳞癌患者癌旁组织及癌组织标本96例,检测miR-561的表达水平;细胞培养实验检测Het-1a、Kyse15... 目的探讨微小RNA(miR)-561在食管鳞状细胞癌中的临床意义及其表达。方法选取2015年1月至2016年2月在湖北医药学院附属东风医院行手术治疗的食管鳞癌患者癌旁组织及癌组织标本96例,检测miR-561的表达水平;细胞培养实验检测Het-1a、Kyse150及Eca109等细胞株中miR-561表达水平;统计食管鳞癌的临床特征与miR-561表达水平的相关性;分析食管鳞癌患者miR-561的表达水平与预后的关系。结果食管鳞癌细胞株Eca109、Kyse150中miR-561相对表达量显著低于细胞株Het-1a(1.61±0.30、1.21±0.28比2.56±0.51),差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌患者癌组织中的miR-561相对表达量明显低于癌旁组织中的表达量(0.80±0.17比1.51±0.42),差异有统计学意义(P<0.05)。有无饮酒史、淋巴结转移、分化程度及肿瘤分期均与食管鳞癌组织中miR-561表达水平有相关性(P<0.05)。Cox多因素回归分析结果显示,影响患者预后的独立危险因素为miR-561表达、TNM分期及淋巴结转移(P<0.05)。miR-561表达未下降食管鳞癌患者随访3生存率明显高于miR-561表达下降患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在食管鳞状细胞癌患者中miR-561存在低水平表达,而且食管鳞癌的发展、发生及预后都与其关系密切。 展开更多
关键词 食管肿瘤 微小RNA-561 ECA109 Kyse150 het-1a
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脱氧胆酸对正常食管细胞及食管癌细胞增殖能力的影响 被引量：1
2
作者 文卉 徐文 +4 位作者 杨志豪 刘晓波 金曙 李胜保 童强 《临床消化病杂志》 CAS 2020年第6期343-347,共5页
[目的]研究脱氧胆酸(DCA)对正常食管细胞及食管癌细胞增殖能力影响及机制。[方法]采用不同浓度:0μmol/L(对照组)、100μmol/L、200μmol/L的DCA分别处理永生化的正常食管细胞株Het-1 A和食管癌细胞株EC109。利用CCK8增殖实验检测5 d内... [目的]研究脱氧胆酸(DCA)对正常食管细胞及食管癌细胞增殖能力影响及机制。[方法]采用不同浓度:0μmol/L(对照组)、100μmol/L、200μmol/L的DCA分别处理永生化的正常食管细胞株Het-1 A和食管癌细胞株EC109。利用CCK8增殖实验检测5 d内不同浓度DCA对Het-1 A和EC109的增殖能力影响;提取细胞RNA,利用逆转录PCR检测不同浓度DCA对Het-1 A和EC109中细胞增殖相关基因EGFR及AKT1的表达情况变化。[结果]CCK8增殖实验结果显示:与对照组相比,200μmol/L DCA处理细胞3~5 d与对照组相比,细胞增殖能力明显受到抑制(第3天P=0.000,第4天P=0.001,第5天P=0.015),而100μmol/L DCA组细胞增殖仅在第5天时明显受到抑制(P=0.045),100μmol/L DCA处理组的细胞EC109(2~5 d:P>0.05)的增殖能力不受影响。200μmol/L DCA处理组与对照组相比,EGFR和AKT1的mRNA表达均显著降低(EGFR:P=0.039,AKT1:P=0.013);100μmol/L DCA组与对照组相比,EGFR和AKT1的mRNA表达也都显著降低(EGFR:P=0.035,AKT1:P=0.050),在Het-1 A差异无统计学意义(P=0.076)。[结论]脱氧胆酸可能通过抑制食管细胞中增殖相关基因EGFR和AKT1的表达而抑制食管细胞的增殖能力,但存在时间及浓度依赖性。 展开更多
关键词 脱氧胆酸 het-1 A EC109 细胞增殖 EGFR/AKT信号通路
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4种交链孢毒素对人食管上皮细胞Het－1 A的体外毒性研究 被引量：6
3
作者 韩小敏 韩春卉 李凤琴 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2018年第1期1-5,共5页
目的研究交链孢酚(AOH)、交链孢酚单甲醚(AME)、交链孢菌酮酸(Te A)和腾毒素(TEN)4种交链孢毒素对人食管上皮细胞Het-1 A的体外急性毒性作用。方法将Het-1 A用不同浓度的4种交链孢毒素处理,分别采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四... 目的研究交链孢酚(AOH)、交链孢酚单甲醚(AME)、交链孢菌酮酸(Te A)和腾毒素(TEN)4种交链孢毒素对人食管上皮细胞Het-1 A的体外急性毒性作用。方法将Het-1 A用不同浓度的4种交链孢毒素处理,分别采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin VFITC/PI)双染法、PI单染法和分光光度法研究其对Het-1 A的增殖抑制、细胞凋亡、周期分布和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性的影响。结果 4种交链孢毒素对Het-1 A的半数抑制浓度(IC--_(50))值分别为54.31、43.38、121.91和141.96μmol/L,均可引起细胞凋亡,并可通过引起G_2-M期比例上升而影响细胞的周期分布。AOH和AME可通过剂量依赖增强caspase-3活性引发细胞凋亡。结论 AOH、AME、Te A和TEN可通过抑制细胞增殖、引起细胞凋亡、诱导G_2-M周期阻滞等对Het-1 A产生急性毒性。 展开更多
关键词 交链孢毒素 人食管上皮细胞het-1 A 急性毒性 体外试验
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HPV联合MNNG对Het-1A细胞恶性转化的影响 被引量：2
4
作者 马月 郑雨虹 +3 位作者 赵超 刘冉 浦跃朴 尹立红 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2018年第6期422-429,434,共9页
目的:探讨人乳头状瘤病毒(HPV)全长基因转染与N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)染毒联合作用对食管正常上皮Het-1A细胞恶性转化的影响,为食管癌的发病机制提供理论依据。方法:以Het-1A细胞为靶细胞,设4组,包括空载体转染对照组、转染HP... 目的:探讨人乳头状瘤病毒(HPV)全长基因转染与N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)染毒联合作用对食管正常上皮Het-1A细胞恶性转化的影响,为食管癌的发病机制提供理论依据。方法:以Het-1A细胞为靶细胞,设4组,包括空载体转染对照组、转染HPV-18组(HPV)、MNNG染毒组(MNNG)、HPV与MNNG联合作用组(HPV+MNNG),其中MNNG染毒剂量为2μmol/L,每代染毒1次,每次24h;选取第10代、20代及35代细胞进行形态学观察和功能学试验。采用CCK-8法检测各代各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各代细胞周期分布,用增殖指数表示细胞的增殖状况。并采用AnnexinV-APC/PI双染法检测细胞凋亡,通过侵袭迁移能力以及软琼脂集落形成试验检测细胞恶性转化表型,最后通过裸鼠成瘤试验观察恶性转化细胞在体内的增殖状况。结果:随着染毒代数增加,HPV+MNNG组与MNNG组细胞形态发生了明显的改变,连接松散、细长、伴伪足。CCK-8检测结果与细胞周期检测结果一致,与对照组比较,HPV+MNNG组和MNNG组的细胞增殖活性出现了先升高再下降最后升高的趋势(P均<0.05),且HPV+MNNG组细胞变化更明显。与MNNG单独作用组比较,HPV+MNNG联合作用组细胞的抗凋亡能力增强(P<0.05)。侵袭和迁移试验结果显示HPV+MNNG组穿膜细胞数均显著高于其他各组(P<0.05),MNNG组次之;软琼脂集落形成试验中,HPV+MNNG组细胞集落形成率[(30.8±0.2)%]高于MNNG组[(27.1±0.3)%](P<0.05)。HPV+MNNG组与MNNG组裸鼠成瘤率均为100%,瘤体大小无显著性差异。HPV单独作用组与对照组裸鼠未成瘤。结论:HPV与MNNG联合作用可致食管正常上皮细胞Het-1A恶性转化,使细胞增殖能力、抗凋亡能力、侵袭迁移能力及非锚定独立生长能力均显著增强,参与并促进恶性转化进程。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 MNNG het-1A细胞 恶性转化
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KLF4与Notch1在脱氧胆酸诱导Barrett食管形成过程的作用 被引量：2
5
作者 李婧文 徐胤 +8 位作者 夏一菊 王璞 沈才飞 张安然 邵顺子 于晓娜 张昊祥 闫武 房殿春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期878-882,共5页
目的探讨Krüppel样锌指转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)和Notch1在Barrett食管组织中的表达以及脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)对正常食管鳞状上皮Het-1A细胞KLF4与Notch1表达水平的影响。方法免疫组化S-P法检测49例... 目的探讨Krüppel样锌指转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)和Notch1在Barrett食管组织中的表达以及脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)对正常食管鳞状上皮Het-1A细胞KLF4与Notch1表达水平的影响。方法免疫组化S-P法检测49例人正常食管组织、26例食管炎和22例Barrett食管组织中KLF4、Notch1的表达水平;采用不同浓度(0、100、200μmol/L)的DCA对永生化的正常食管鳞状上皮Het-1A细胞分别处理4、8、12 h,RT-PCR和Western blot检测KLF4、Notch1 mRNA及蛋白表达。结果免疫组化检测发现,与正常人食管鳞状上皮组织相比,食管炎与Barrett食管组织中KLF4呈现高表达,且Barrett食管组织表达最高(P<0.05),而Notch1的表达则无明显差异。RT-PCR及Western blot结果显示,随DCA浓度的增高以及处理时间的增加,Het-1A细胞表达KLF4、Notch1的mRNA和蛋白的水平逐渐升高(P<0.05)。结论 DCA可能通过促进KLF4、Notch1表达而参与正常食管上皮转化为Barrett食管的过程。 展开更多
关键词 脱氧胆酸 Krtippel样锌指转录因子4 NOTCH1 het-1A细胞 BARRETT食管
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HFT-1型土工布渗透率智能测试仪的研制 被引量：3
6
作者 张慧 李伟锋 《中原工学院学报》 CAS 2002年第2期12-14,共3页
根据土工布在以排水为主的工程中 ,必须预先测定平面内水流量的需要 .研制了土工布渗透率智能测试仪 .介绍了该仪器的结构和测试原理 ,分析了仪器特点和相关数据 .
关键词 het-1型 土工布 渗透率 智能测试仪 结构 测试原理 技术特点
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抑制HIF-1α表达的siRNA序列长效shRNA抑制载体的构建 被引量：1
7
作者 郭欢 孙蕾 +6 位作者 汲翔 康巧珍 程道博 张聚真 赵立群 杨观瑞 汲振余 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第2期173-176,共4页
目的:设计特异抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白诱导表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建能长效抑制HIF-1α基因表达的HIF-1α的短发夹siRNA(shRNA)表达载体。方法:依据NCBI数据库获得HIF-1αmR-NA序列,利用Whitehouse、SiDirect和Rati... 目的:设计特异抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白诱导表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建能长效抑制HIF-1α基因表达的HIF-1α的短发夹siRNA(shRNA)表达载体。方法:依据NCBI数据库获得HIF-1αmR-NA序列,利用Whitehouse、SiDirect和Rationalsi RNA Design软件及Blast设计和优化siRNA序列;将siRNA序列转换成编码shRNA的DNA序列后克隆入pENTRTM/H1/TO载体,测序鉴定;将重组质粒pENTRTM/H1/TOHIF-1α转染食管上皮细胞Het-1A(实验组),并设阴性对照(转染阴性对照序列)、空白对照组和诱导对照组。实验、阴性对照和诱导对照组细胞经CoCl2化学诱导。Western blot法检测4组HIF-1α蛋白的表达。结果:以优化改造的含29核苷酸的干扰序列构建shRNA表达载体,经测序鉴定无误。4组细胞HIF-1α蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=66.863,P<0.001)。实验组Het-1A细胞HIF-1α蛋白表达较诱导对照和阴性对照组明显下降。结论:成功构建了HIF-1αshRNA表达载体。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子-1Α 小干扰RNA 短发夹RNA het-1A细胞
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应用Het-1A细胞系研究CDDO-Me对食管黏膜上皮屏障的保护作用 被引量：1
8
作者 程凌雪 范永强 +1 位作者 侯超 李文波 《天津医药》 CAS 北大核心 2021年第1期7-10,共4页
目的观察CDDO-Me对食管黏膜屏障的保护效应,探讨CDDO-Me作为黏膜屏障增强剂的可行性。方法分别以不同pH值的酸(pH4、pH5、pH6)处理Het-1A细胞系,处理时间为5、10、30、60 min,检测各组Het-1A细胞系跨上皮电阻抗(TEER)值的变化;以含不同... 目的观察CDDO-Me对食管黏膜屏障的保护效应,探讨CDDO-Me作为黏膜屏障增强剂的可行性。方法分别以不同pH值的酸(pH4、pH5、pH6)处理Het-1A细胞系,处理时间为5、10、30、60 min,检测各组Het-1A细胞系跨上皮电阻抗(TEER)值的变化;以含不同浓度的CDDO-Me(0、0.25、0.5、1、2.5、5μmol/L)预刺激Het-1A细胞系,再以酸处理Het-1A细胞系,观察TEER值的变化。结果pH为4、5、6时,不同处理时间对Het-1A细胞的TEER作用比较差异均有统计学意义(P<0.01),随着处理时间(10、30、60 min)的延长,TEER下降幅度越大。处理时间为10、30、60 min时,各组间差异均有统计学意义,以pH4组60 min时TEER下降最明显(P<0.01)。CDDO-Me预刺激后以pH4酸处理Het-1A细胞系,12、24、48 h时,不同浓度CDDO-Me预刺激组TEER比较差异均有统计学意义(P<0.05),24 h时,随着刺激浓度的增加,各组TEER逐渐升高,以5μmol/L组最明显(P<0.05);浓度为0.5、1、2.5、5μmol/L时,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论酸损害食管上皮屏障功能,与酸度和作用时间有关;CDDO-Me对于酸对食管上皮屏障的损害有保护作用。 展开更多
关键词 电阻抗 食管黏膜 胃食管反流 het-1A细胞 CDDO-Me 跨上皮电阻抗 食管黏膜上皮屏障
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脱氧胆酸通过KLF4上调CDX2的表达促进Barrett食管形成
9
作者 闫武 张昊翔 +8 位作者 沈才飞 夏一菊 王璞 张亚飞 李婧文 徐胤 邵顺子 于晓娜 房殿春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期702-707,共6页
目的探讨在脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)诱导Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)形成中,Krüppel样锌指转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)与同源异型框转录因子2(caudalrelated homeodomain transcription factor 2... 目的探讨在脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)诱导Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)形成中,Krüppel样锌指转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)与同源异型框转录因子2(caudalrelated homeodomain transcription factor 2,CDX2)的作用。方法采用免疫组化S-P法检测49例人正常食管组织和22例BE组织中KLF4、CDX2的表达;体外培养Het-1A细胞,依据DCA处理时间分为0 h组(未经DCA处理)、4 h组、8 h组、12 h组并进行DCA处理。分别设置空白对照组、阴性siRNA对照组、阴性siRNA+DCA处理12 h组、KLF4-siRNA干扰组、KLF4-siRNA干扰+DCA处理12 h组,进行相应处理。设置空白对照组、阴性病毒对照组、阴性病毒+DCA处理12 h组、KLF4过表达病毒组,进行相应处理。待上述各实验组处理结束后,运用Real-time PCR、Western blot检测各组KLF4、CDX2、MUC2mRNA及蛋白的表达。结果免疫组化检测发现:在22例BE组织中,KLF4阳性表达15例,阳性率68.18%,阳性染色主要集中在细胞核;CDX2阳性表达16例,阳性率72.73%,阳性染色也主要集中在细胞核。与人正常食管鳞状上皮组织比较,BE组织中KLF4、CDX2表达均增高(χ2=18.642,P<0.05;χ2=23.678,P<0.05)。Real-time PCR及Western blot检测结果显示:随DCA处理时间的增加,Het-1A细胞KLF4、CDX2、MUC2的表达逐渐升高(P<0.05);KLF4-siRNA干扰组及KLF4-siRNA干扰+DCA处理12 h组中,KLF4、CDX2、MUC2表达均下调,且不再随DCA处理的刺激而升高(P<0.05);此外,阴性病毒+DCA处理12 h组及KLF4过表达病毒组中,KLF4、CDX2、MUC2表达均上调,且KLF4过表达病毒组3个基因蛋白表达上调更为显著(P<0.05)。结论 DCA通过KLF4上调CDX2,间接引起BE标志性分子MUC2的表达上调,从而促进正常食管上皮向BE转化。 展开更多
关键词 BARRETT食管 het-1A细胞 脱氧胆酸 Krüppel样锌指转录因子4 同源异型框转录因子2
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人乳头状瘤病毒转染对甲基硝基亚硝基胍致人食管上皮Het-1A细胞增殖及凋亡的影响
10
作者 李仪楠 马月 +3 位作者 郑雨虹 刘冉 浦跃朴 尹立红 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期490-495,共6页
[目的]研究转染人乳头状瘤病毒18型(HPV18)后,甲基硝基亚硝基胍(MNNG)暴露对人食管上皮Het-1A细胞周期和增殖、凋亡功能的影响。[方法]通过慢病毒介导稳定转染HPV18 E6、E7基因到人食管上皮Het-1A细胞中,荧光定量PCR检测E6和E7相对表达... [目的]研究转染人乳头状瘤病毒18型(HPV18)后,甲基硝基亚硝基胍(MNNG)暴露对人食管上皮Het-1A细胞周期和增殖、凋亡功能的影响。[方法]通过慢病毒介导稳定转染HPV18 E6、E7基因到人食管上皮Het-1A细胞中,荧光定量PCR检测E6和E7相对表达量后得到稳定表达株。应用MTT法观察MNNG(0、1、5、10μmol/L)染毒处理24 h后对转染组和对照组细胞增殖功能的影响。应用流式细胞术检测转染组和对照组细胞染毒后细胞周期和凋亡的变化。[结果]HPV18转染组与对照组相比,细胞增殖能力增强,G1期延长,S期缩短(P<0.05),且凋亡率下降(P<0.05)。非转染细胞中MNNG染毒各组与未染毒组相比,细胞增殖活性受到抑制,G1期延长,细胞凋亡率增加(P<0.05)。HPV18转染后MNNG暴露,可导致G2期延长;MTT检测细胞增殖结果显示HPV18转染组细胞在MNNG作用下,细胞存活率均高于同浓度MNNG单独暴露的非转染组细胞;中、低浓度MNNG暴露后HPV18转染组较未转染组相比细胞凋亡率降低(P<0.05)。[结论]Het-1A细胞转染HPV18后暴露MNNG,细胞凋亡受到一定程度抑制,促进细胞增殖。由此可能导致细胞不断积累MNNG引起的基因突变和DNA损伤。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒18 甲基硝基亚硝基胍 人食管上皮het-1A细胞
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