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Huh7.5.1细胞感染HCV观察干扰素治疗后miRNA表达谱变化 被引量：1
1
作者 鲁兖 邢小康 +1 位作者 宋广忠 陈智 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期598-602,共5页
目的:探寻可能对丙型肝炎病毒(HCV)有作用的mi-RNA。方法:用体外转录得到的HCV感染正常的Huh-7.5.1细胞,然后加入干扰素作用,采用mi-RNA表达谱芯片技术,分别测定Huh-7.5.1细胞正常组和HCV感染组及干扰素作用组的mi-RNA的表达,采用2(-Δ... 目的:探寻可能对丙型肝炎病毒(HCV)有作用的mi-RNA。方法:用体外转录得到的HCV感染正常的Huh-7.5.1细胞,然后加入干扰素作用,采用mi-RNA表达谱芯片技术,分别测定Huh-7.5.1细胞正常组和HCV感染组及干扰素作用组的mi-RNA的表达,采用2(-ΔΔCT)法分析组间microRNA的表达情况。结果:以正常Huh-7.5.1细胞中表达的mi-RNA为基准,经过筛选发现13种mi-RNA在HCV感染后表达上调,而在干扰素治疗后则出现下调;另外还有7种mi-RNA则在HCV感染后出现表达下调,而在干扰素治疗后则发生上调。结论:mi-RNA10a、mi-RNA21、mi-RNA149和mi-RNA152及mi-RNA210可能与HCV的复制转录有关。 展开更多
关键词 干扰素α/治疗应用 微RNAs/遗传学 肝炎病毒属/遗传学 基因表达 丙肝病毒 mi-RNA
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siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究 被引量：1
2
作者 邢小康 何继亮 陈智 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期582-587,共6页
目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白... 目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达。将针对HCV NS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200 nmol/L,时间为24 h、48 h和72 h),将4、40和200 nmol/L siRNA转染正常Huh-7.5.1细胞,并设空白对照、脂质体对照、无关siRNA对照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)组,用荧光定量PCR检测细胞内HCV RNA和PKRmRNA水平。结果:HCV感染的Huh-7.5.1细胞中检测出HCV核心蛋白表达。40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h组及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h组,HCV RNA水平分别降至58%、54%、29%、17%、17%、33%、22%、19%,明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。1 000 IU/mlIFN的各时间组HCV RNA水平均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。各浓度siRNA组的PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:针对HCV NS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制,而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活。 展开更多
关键词 肝炎病毒属/遗传学 RNA 小分子干扰/遗传学 丙型肝炎 RNA干扰 小干扰RNA(siRNA) HCV复制 NS5B 感染细胞
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