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槲皮素诱导HeLa细胞凋亡及caspase-3、caspase-8活化对凋亡影响的研究 被引量：13
1
作者 顾超 徐水凌 +3 位作者 唐文稳 朱逢佳 徐倩 高帆 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期595-599,共5页
目的研究槲皮素(quercetin)诱导HeLa细胞(人宫颈癌细胞)凋亡的作用,以及caspase-3、caspase-8活化对凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察槲皮素对HeLa细胞(人宫颈癌细胞)和L-02细胞(正常人肝细胞)的生长抑制作用;DA-PI染色后荧光显... 目的研究槲皮素(quercetin)诱导HeLa细胞(人宫颈癌细胞)凋亡的作用,以及caspase-3、caspase-8活化对凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察槲皮素对HeLa细胞(人宫颈癌细胞)和L-02细胞(正常人肝细胞)的生长抑制作用;DA-PI染色后荧光显微镜观察细胞的形态学变化;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;比色法测定槲皮素诱导HeLa细胞凋亡过程中caspase-3、caspase-8活性变化。结果 MTT结果显示,槲皮素可选择性抑制HeLa细胞的生长,并呈剂量、时间依赖性,而正常人肝细胞L-02不出现生长抑制(P>0.05)。160.0μmol.L-1槲皮素处理HeLa细胞72 h,DAPI染色也可见核浓缩及边缘现象,DNA电泳出现特征性的凋亡条带。160.0μmol.L-1槲皮素处理HeLa细胞24、48和72 h的凋亡率分别为(9.4±2.1)%、(30.1±6.5)%和(59.8±9.5)%,caspase-3活性在48 h达最高(1.68±0.07)U.μg-1,而caspase-8活性则在24 h达最高(1.83±0.06)U.μg-1,两者与对照组相比均具有显著性差异(P<0.05)。结论槲皮素可特异性地诱导人HeLa细胞凋亡,其诱导凋亡的机制可能与caspase-3、caspase-8活化有关。 展开更多
关键词 槲皮素 hela细胞 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
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PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响
2
作者 曹博威 张文斌 《大医生》 2024年第17期1-5,共5页
目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时... 目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证PPP2R1A参与调控的肿瘤转移相关基因和选择性剪接基因(ASGs)。结果与对照组比较,过表达PPP2R1A可显著抑制Hela细胞的增殖。PPP2R1A调控细胞黏附、病毒应答、细胞生长调节等数百个基因的表达水平,同时还调节参与细胞周期、连接黏附、子宫内膜癌和RNA转运基因的AS。结论PPP2R1A可能通过AS调控潜在转录来调控肿瘤的进展。 展开更多
关键词 PPP2R1A hela细胞系 癌症 选择性剪接 细胞增殖
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三氧化二砷对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响 被引量：2
3
作者 周曦 陈忠东 《南华大学学报（医学版）》 2007年第4期525-528,共4页
目的研究1.0、2.0和3.0μmol/L的三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响,并初步探讨其机制。方法应用1.0、2.0和3.0μmol/L As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞系,采用MTT比色法检测细胞生长情况;运用流式细胞术检测细胞凋亡率;... 目的研究1.0、2.0和3.0μmol/L的三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响,并初步探讨其机制。方法应用1.0、2.0和3.0μmol/L As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞系,采用MTT比色法检测细胞生长情况;运用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用免疫组化SABC法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果As2O3能抑制宫颈癌Hela细胞的体外生长,诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。As2O3能引起细胞内Bcl-2蛋白表达下调和Bax蛋白表达上调(P<0.05)。结论As2O3对宫颈癌Hela细胞体外生长具有明显抑制作用,并诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,可能与其引起细胞内Bcl-2蛋白表达下调和Bax蛋白表达上调有关。 展开更多
关键词 AS2O3 宫颈癌 hela细胞 凋亡 BCL-2蛋白 BAX蛋白
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不同剂量、剂量率^(32)P照射下HeLa细胞发生凋亡及其与细胞杀伤效应的关系 被引量：5
4
作者 冯惠茹 田嘉禾 +1 位作者 张锦明 江国春 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期311-315,共5页
研究了放射性核素3 2 P照射HeLa细胞 ,在不同剂量、剂量率条件下凋亡的发生 ,以及凋亡与杀伤效果的关系。用3 2 P放射性贴片照射细胞 ,观察照射后细胞凋亡、增殖能力变化、细胞周期再分布 ,研究不同剂量、剂量率、照射时间时细胞放射响... 研究了放射性核素3 2 P照射HeLa细胞 ,在不同剂量、剂量率条件下凋亡的发生 ,以及凋亡与杀伤效果的关系。用3 2 P放射性贴片照射细胞 ,观察照射后细胞凋亡、增殖能力变化、细胞周期再分布 ,研究不同剂量、剂量率、照射时间时细胞放射响应的特点。用荧光显微镜观察凋亡细胞形态学特点 ,并进行漂浮细胞凋亡定量分析 ;流式细胞仪凋亡定量分析及平行检测细胞周期变化 ;电镜观察凋亡亚细胞形态学特点 ;克隆形成率和细胞群体倍增大小 ,评价肿瘤细胞增殖能力。结果显示 ,在研究剂量范围内 ,HeLa细胞死亡的主要方式为凋亡 ,主要发生在照射后 4 8- 72h ,随G2期阻滞的下降 ,凋亡率逐渐增加。单次照射与分次照射的比较显示 ,前者凋亡率高于分次照射 ,与克隆形成率不一致。提示 ,在不同照射方式下 。 展开更多
关键词 ^32P 放射生物学 细胞凋亡 细胞增殖 细胞周期 磷32 β辐照 放射免疫治疗 剂量率 肿瘤细胞 杀伤效应
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三氧化二砷对宫颈癌的抑制作用与NDRG1基因的相关性 被引量：5
5
作者 全丽娜 耿晓星 +1 位作者 马荣 唐丽萍 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2010年第5期390-394,共5页
目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌HeLa细胞株生长的影响及其机制,以及HeLa细胞株NDRG1基因的表达变化情况。方法采用不同浓度As2O3作用于人宫颈癌HeLa细胞,光镜和电镜观察细胞形态改变,MTT比色法和流式细胞仪检测细胞生长和凋亡情况... 目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌HeLa细胞株生长的影响及其机制,以及HeLa细胞株NDRG1基因的表达变化情况。方法采用不同浓度As2O3作用于人宫颈癌HeLa细胞,光镜和电镜观察细胞形态改变,MTT比色法和流式细胞仪检测细胞生长和凋亡情况,半定量RT-PCR和Westernblot检测As2O3对HeLa细胞NDRG1基因表达的影响。结果 As2O3能够抑制宫颈癌HeLa细胞的生长,呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。半定量RT-PCR和Westernblot检测表明,As2O3能够使宫颈癌HeLa细胞NDRG1基因的表达上调。结论 As2O3能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,该抑制作用与NDRG1基因的表达上调相关。 展开更多
关键词 三氧化二砷 宫颈癌 hela细胞 NDRG1
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阿司匹林诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及机制 被引量：4
6
作者 李盛 严浩 黄志琨 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期675-678,共4页
目的:探讨阿司匹林对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及机制。方法:体外培养HeLa细胞,分别以0.5,1.0,5.0mmol.L-1阿司匹林干预。采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测凋亡;碘化丙锭(PI)染色法检测细胞周期;Western-blot法检测NF-κB p65蛋... 目的:探讨阿司匹林对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及机制。方法:体外培养HeLa细胞,分别以0.5,1.0,5.0mmol.L-1阿司匹林干预。采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测凋亡;碘化丙锭(PI)染色法检测细胞周期;Western-blot法检测NF-κB p65蛋白表达。结果:0.5,1.0,5.0mmol.L-1的阿司匹林均能使Hela细胞凋亡率明显增加,S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,细胞中NF-κB p65蛋白表达水平明显下降,且上述作用均呈剂量依赖性。结论:阿司匹林在体外可以通过下调NF-κB p65蛋白表达,影响细胞周期,诱导Hela细胞凋亡。 展开更多
关键词 阿司匹林 hela细胞 凋亡
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姜黄素通过Notch途径抑制人宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖 被引量：3
7
作者 夏美慧 谷爽 +1 位作者 孙际童 刘爱民 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2008年第18期2588-2590,共3页
目的:探讨姜黄素对人宫颈癌细胞株HeLa细胞体外增殖抑制及凋亡诱导作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度姜黄素对HeLa细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测HeLa细胞Notch1、Notch2、Jagged1、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果:姜黄素对HeLa... 目的:探讨姜黄素对人宫颈癌细胞株HeLa细胞体外增殖抑制及凋亡诱导作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度姜黄素对HeLa细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测HeLa细胞Notch1、Notch2、Jagged1、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果:姜黄素对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。随着姜黄素剂量的增加,Notch1、Notch2、Bcl-2mRNA的表达逐渐下降,Bax mRNA的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax亦逐渐减小,Jagged1mRNA无明显变化。结论:姜黄素可能通过Notch信号途径改变凋亡蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖。 展开更多
关键词 姜黄素 hela细胞 NOTCH信号 凋亡 基因
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塞来昔布对3种肿瘤细胞株放射增敏效应的研究 被引量：2
8
作者 李晓庆 徐晓婷 +2 位作者 秦颂兵 王利利 周菊英 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第3期487-490,共4页
目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对3种不同肿瘤细胞株(肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE)的放射增敏作用。方法选择适当浓度的塞来昔布进行放射增敏实验,设置对照组(C)、药物组(D)、单纯照射组(R)和照射+药物组(... 目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对3种不同肿瘤细胞株(肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE)的放射增敏作用。方法选择适当浓度的塞来昔布进行放射增敏实验,设置对照组(C)、药物组(D)、单纯照射组(R)和照射+药物组(R+D),采用集落形成法分别检测塞来昔布对肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE的放射增敏效应,并绘制细胞存活曲线。结果塞来昔布对3种肿瘤细胞株均显示出放射增敏效应,R+D组与R组相比较,反映放射敏感性指标的SF2、D0.01、D0、Dq出现不同程度的下调。30μmol/L塞来昔布作用A549细胞、HeLa细胞、CNE细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.26和1.34、1.25和1.33、1.24和1.32;当塞来昔布浓度增加到50μmol/L时,放射增敏比SERD0和SERDq分别增至1.74和1.84、1.36和1.47、1.33和1.61。结论塞来昔布在体外实验中可提高3种肿瘤细胞株的放射敏感性,呈浓度依赖性。塞来昔布有望作为放射增敏剂在临床广泛应用。 展开更多
关键词 放射增敏 塞来昔布 肺腺癌细胞株A549 宫颈癌细胞株hela 鼻咽癌细胞株CNE
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稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系的建立 被引量：3
9
作者 刘燕飞 那雷 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期893-898,共6页
为建立基于CRISPR-Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究利用慢病毒载体pMD2.G、pSPAX2(HIV-1的gag-pol表达质粒)和lentiCRISPR v2-Hyg包装慢病毒,感染HeLa细胞2 d后用400μg/mL潮霉素培养液筛选两周,获得稳定表达Cas9蛋白的多克隆细胞系... 为建立基于CRISPR-Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究利用慢病毒载体pMD2.G、pSPAX2(HIV-1的gag-pol表达质粒)和lentiCRISPR v2-Hyg包装慢病毒,感染HeLa细胞2 d后用400μg/mL潮霉素培养液筛选两周,获得稳定表达Cas9蛋白的多克隆细胞系。利用流式细胞分选系统分选及western blot鉴定获得9株HeLa-Cas9单克隆细胞系。为获得具有高效率敲除内源基因的HeLa细胞系,利用同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP sgRNA的慢病毒感染HeLa-Cas9单克隆细胞系,经1μg/mL嘌呤霉素培养液筛选一周,流式细胞术检测表达绿色荧光蛋白细胞的百分比,以计算HeLa细胞株的敲除效率,进而建立了一株稳定表达Cas9蛋白的具有高敲除效率的HeLa单克隆细胞系。该细胞的Cas9敲除效率为87%,CCK-8检测结果表明其具有很好的细胞活性。本研究获得的具有高敲除效率的稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系可以用于CRISPR敲除文库的转导,建立基因敲除细胞文库,为筛选参与特定功能的未知蛋白提供细胞平台。 展开更多
关键词 Cas9蛋白 hela细胞系 基因敲除效率
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光动力疗法合并化学疗法治疗恶性肿瘤的实验研究
10
作者 刘以诚 朱平 +2 位作者 吉田孝人 林泰 松尾哲道 《中国激光医学杂志》 CAS CSCD 1997年第4期198-200,共3页
我们对人癌ＨｅＬａ细胞株的裸鼠接种瘤进行了光动力疗法（ＰＤＴ）联合应用肿瘤ＤＮＡ合成酶抑制剂，目的在于探讨增强ＰＤＴ作用的有效途径。观察到在本实验条件下，仅做激光照射或单纯采用抗癌剂，对这种移植癌均无抗肿瘤作用；ＰＤ... 我们对人癌ＨｅＬａ细胞株的裸鼠接种瘤进行了光动力疗法（ＰＤＴ）联合应用肿瘤ＤＮＡ合成酶抑制剂，目的在于探讨增强ＰＤＴ作用的有效途径。观察到在本实验条件下，仅做激光照射或单纯采用抗癌剂，对这种移植癌均无抗肿瘤作用；ＰＤＴ组的肿瘤生长阻止率为３５．１％～４７．９％，而ＰＤＴ并用化疗组的肿瘤生长阻止率达８０％～９５％。研究表明，ＰＤＴ合并应用化学疗法比单独实施ＰＤＴ对抑制肿瘤生长。 展开更多
关键词 光动力疗法 OPO hela细胞株 恶性肿瘤
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Hela细胞增殖抑制模型结合离心超滤质谱筛选中药抗癌药物 被引量：2
11
作者 魏忠宝 马蕾 +3 位作者 刘舒 刘志强 石毅 曲晓波 《质谱学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期494-502,共9页
采用基于MTT比色法的Hela细胞增殖抑制模型评价中药提取物的抗癌活性,并利用离心超滤质谱方法对活性最强的中药提取物中抗癌活性成分进行筛选和鉴定。结果表明,长春花提取物对Hela细胞增殖的抑制活性最强,与阳性对照药阿霉素相当,且抑... 采用基于MTT比色法的Hela细胞增殖抑制模型评价中药提取物的抗癌活性,并利用离心超滤质谱方法对活性最强的中药提取物中抗癌活性成分进行筛选和鉴定。结果表明,长春花提取物对Hela细胞增殖的抑制活性最强,与阳性对照药阿霉素相当,且抑制活性与给药浓度呈正相关。延胡索提取物在3个不同给药浓度下也可以显著抑制Hela细胞的增殖。三尖杉、黄连和喜树果提取物在高浓度时能够显著抑制Hela细胞的增殖,而刺五加提取物则没有明显抑制作用。利用离心超滤质谱从长春花提取物中筛选得到2种存活素基因启动子片段结合剂和6种钙调蛋白结合剂,经多级串联质谱分析鉴定,分别为蛇根碱、鸡骨常山碱、它波宁、环氧长春碱、长春新碱和21’-氧代环氧长春碱。本研究可为中药抗癌药物的筛选提供一种简便、快速的方法。 展开更多
关键词 离心超滤质谱 hela细胞 中药 筛选 抗癌
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EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究
12
作者 薛玉珍 吕会增 +2 位作者 张璇 李能 陈忠东 《湘南学院学报（医学版）》 2008年第2期18-21,共4页
目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和... 目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO/EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO/EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg/mL作用48 h出现典型"梯形"DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。 展开更多
关键词 EVn-50 宫颈癌 hela细胞 细胞凋亡 细胞增殖
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塞来昔布抑制宫颈癌细胞株Hela体外迁移效应的研究
13
作者 刘利波 程青 +1 位作者 唐忠志 陈书琴 《实用临床医药杂志》 CAS 2011年第19期114-116,共3页
目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)抑制宫颈癌细胞株Hela体外迁移的效应。方法选用宫颈癌细胞株Hela作为研究对象。选择适当浓度的Celecoxib,设置对照组(C)、药物组(D)、单纯照射组(R)和药物+照射组(R+D),细胞划痕试验观察H... 目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)抑制宫颈癌细胞株Hela体外迁移的效应。方法选用宫颈癌细胞株Hela作为研究对象。选择适当浓度的Celecoxib,设置对照组(C)、药物组(D)、单纯照射组(R)和药物+照射组(R+D),细胞划痕试验观察Hela细胞的体外迁移力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2的含量。结果 D组较C组,D+R组较R组的细胞迁移力均明显下降,且随药物浓度增加,抑制细胞迁移力增强,R组较C组的细胞迁移力无明显改变;ELISA检测发现细胞培养上清液中MMP-2的含量D组较C组、R+D组较R组均明显下降(P<0.05),但R组与C组对细胞分泌MMP-2的抑制效应并无明显统计学差异。结论塞来昔布可能通过抑制宫颈癌细胞株Hela分泌MMP-2,从而抑制细胞体外迁移力。 展开更多
关键词 塞来昔布 划痕试验 MMP-2 宫颈癌细胞株hela
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^(32)P照射对Hela细胞杀伤效应的研究
14
作者 冯惠茹 田嘉禾 张锦明 《实用癌症杂志》 2001年第5期462-466,共5页
目的　研究在不同照射条件下肿瘤细胞生物学效应的特点及不同剂量与时间组合方式对肿瘤细胞的杀灭效果。方法　采用人宫颈癌Hela细胞系体外培养 ,制作32 P放射性贴片照射细胞 ,通过观察照射后细胞增殖能力变化 ,研究不同剂量、剂量率、... 目的　研究在不同照射条件下肿瘤细胞生物学效应的特点及不同剂量与时间组合方式对肿瘤细胞的杀灭效果。方法　采用人宫颈癌Hela细胞系体外培养 ,制作32 P放射性贴片照射细胞 ,通过观察照射后细胞增殖能力变化 ,研究不同剂量、剂量率、照射时间的细胞放射反应特点。应用克隆形成率和细胞群体倍增大小评价肿瘤细胞的增殖能力。结果　单次照射显示Hela细胞的剂量、时间、剂量率的阈值特点。照射时间在 2h以上、剂量和剂量率分别大于 14 8.0 0MBq·h、2 .78MBq·h才可以有效抑制Hela细胞增殖 ;总剂量一定时 ,一定范围内增加照射时间 ,细胞总体增殖数目减小。分次与单次照射的比较显示 ,分次照射组克隆增殖率明显低于单次照射组 (P <0 .0 5 ) ,间隔 4h的分次照射方案细胞杀伤效率最高。结论　32 Pβ射线照射Hela细胞的生物反应具有剂量、时间、剂量率的阈值特点。在一定剂量、一定剂量率范围内延长照射时间 ,可以更有效地杀伤肿瘤细胞。在现有的剂量范围内 ,一定总剂量。 展开更多
关键词 放射生物学 hela细胞系 细胞增殖 宫颈癌
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应用pIRES2-EGFP表达载体快速建立Hela细胞稳转细胞系
15
作者 徐宏 罗思凡 +3 位作者 罗思琛 周颖欣 谷夏斐 康海仙 《生物技术》 CAS 2019年第4期361-366,共6页
[目的]探索应用pIRES2-EGFP表达载体快速建立Hela细胞稳转细胞系的筛选方法。[方法]EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切,T4 DNA连接酶连接构建目的基因p IRES2-EGFP表达载体并测序确定,Lipofectamine3000转染Hela细胞分为Mock组(未转染组)、NC组(p... [目的]探索应用pIRES2-EGFP表达载体快速建立Hela细胞稳转细胞系的筛选方法。[方法]EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切,T4 DNA连接酶连接构建目的基因p IRES2-EGFP表达载体并测序确定,Lipofectamine3000转染Hela细胞分为Mock组(未转染组)、NC组(p IRES2-EGFP空载对照组)、重组质粒转染组,转染后24 h消化细胞进行初步筛选(900μg/m LG418),转染后14~16 d将长至肉眼可见的细胞克隆全部重新消化进行二次筛选(方法同初步筛选),转染后28~32 d挑选3个肉眼可见的细胞克隆,实时荧光定量PCR和WB检测目的基因过表达效率。[结果]双酶切及测序确定重组质粒成功构建,与Mock组相比,NC组无明显变化,重组质粒转染组各克隆目的基因mRNA水平分别升高109±8. 3、127±10. 5、122±9. 1倍,P <0. 01,蛋白水平分别升高33±3. 3、45±4. 7、47±4. 9倍,P <0. 01。[结论]该筛选方法 28~32d左右可快速建立Hela细胞稳转细胞系,过表达效率高,可直接进行后续实验。 展开更多
关键词 pIRES2-EGFP载体 快速构建 hela细胞 稳转细胞系
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敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建
16
作者 孙瑜 陈红霞 +6 位作者 齐永 李素芹 沈万鹏 饶继先 李佳萌 李晓玲 李越希 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第11期1197-1200,1206,共5页
目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重... 目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。 展开更多
关键词 SOSS基因 基因敲除 hela细胞株 CRISPR/Cas9n双切口酶
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HeLa细胞中miRNA-214靶基因Mek3的确定
17
作者 杨作臻 陈双 +3 位作者 栾雪晶 刘民 李欣 汤华 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期248-251,共4页
目的探索miRNA-214在HeLa细胞中的与其靶基因Mek3相互作用。方法通过miRNA靶基因预测网站寻找可能与miRNA-214相互作用的靶基因，合成miRNA-214和对照序列，将miRNA-214、对照序列、Mek3的3’非翻译区（3’UTR）以及突变的Mek3 3’UTR... 目的探索miRNA-214在HeLa细胞中的与其靶基因Mek3相互作用。方法通过miRNA靶基因预测网站寻找可能与miRNA-214相互作用的靶基因，合成miRNA-214和对照序列，将miRNA-214、对照序列、Mek3的3’非翻译区（3’UTR）以及突变的Mek3 3’UTR分别克隆到表达载体上，转染HeLa细胞，转染48h后提取蛋白，检测绿色荧光蛋白的表达水平；HeLa细胞转染miRNA-214后，Trizol抽提RNA，通过荧光定量PCR检测Mek3mRNA的表达水平；Western印迹检Mek3的蛋白表达水平。经过以上实验从mRNA和蛋白水平上验证了在HeLa细胞中miRNA-214对靶基因Mek3的作用效应。结果生物信息学方法显示miRNA-214和Mek3存在可能的结合位点。经过实验验证了miRNA-214可以下调Mek3的mRNA和蛋白水平。结论miRNA-214可以负调节靶基因Mek3的表达。 展开更多
关键词 miRNA-214 Mek3基因 hela细胞 靶基因
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稳定表达HCV 1a NS5A和NS5A-ΔISDR细胞株的构建
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作者 廖继佩 薛小平 +4 位作者 徐志凯 尹文 雷迎峰 吕欣 杨敬 《生物技术通讯》 CAS 2005年第1期1-4,共4页
以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-ΔISDR。对重组质粒进行酶... 以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-ΔISDR。对重组质粒进行酶切分析和序列测定。将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定。经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR。RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达。以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-ΔISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCVNS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 干扰素敏感决定区 hela细胞系 增强型绿色荧光蛋白 丙型肝炎 真核表达载体
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掌叶半夏提取物的有效部位对体外培养宫颈癌细胞的促凋亡作用 被引量：18
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作者 李桂玲 归绥琪 +3 位作者 陈松华 葛锡锐 林理根 叶阳 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期447-449,共3页
目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的两种宫颈癌细胞株的作用,力求寻找一种能有效防治女性宫颈病变的纯中药制剂。方法:将4种不同浓度PE分别作用于Hela和Caski细胞1-5天,用倒置相差显微... 目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的两种宫颈癌细胞株的作用,力求寻找一种能有效防治女性宫颈病变的纯中药制剂。方法:将4种不同浓度PE分别作用于Hela和Caski细胞1-5天,用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:PE对两种宫颈癌细胞株的生长均表现出明显的抑制作用,流式细胞术检测结果显示PE作用后两种细胞株均呈现出凋亡,且随着作用时间延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论:PE对两种宫颈癌细胞株有明显的抑制生长和促凋亡作用;为进一步研究PE的药物作用机制和新药的研制开发奠定了初步的基础。 展开更多
关键词 掌叶半夏 提取物 凋亡 宫颈癌 hela细胞株和CaSki细胞株
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UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响 被引量：6
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作者 孙迪 沈宜 +3 位作者 汪少华 向自武 谢莹珊 姜歆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期138-140,144,共4页
目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW... 目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW7 mRNA及蛋白在UO-126阻断丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein ki-nases,MAPK)信号通路前后的表达情况。结果:MTT结果显示各浓度UO-126具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。免疫荧光检测显示UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强。RT-PCR及West-ern blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞明显增高(P<0.05)。结论:MAPK信号通路阻断剂UO-126抑制HeLa细胞增殖,FBW7位于MAPK信号通路的下游。 展开更多
关键词 UO-126 宫颈癌细胞株(hela细胞) FBW7 MAPK
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