hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位

1

作者 沈涛 梁峰 +4 位作者 杨礼庆 李妍 粱爽 薛峰 付勤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期141-143,共3页

目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细... 目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot。最后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位。结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功。Western blot检测GFP-hCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000。pEG-FP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。 展开更多

关键词 hcap WESTERN BLOT 绿色荧光蛋白 质粒构建

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急诊医疗保健相关性肺炎与社区获得性肺炎的多中心比较研究 被引量：2

2

作者 周明 姬文卿 +3 位作者 刘妍 郭伟 郭树彬 赵斌 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期576-581,共6页

目的探讨急诊医疗保健相关性肺炎(healthcare-associated pneumonia,HCAP)与社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)的差别,分析HCAP在我国急诊科是否为一个相对独立的肺炎类型。方法回顾性分析首都医科大学附属北京天坛医... 目的探讨急诊医疗保健相关性肺炎(healthcare-associated pneumonia,HCAP)与社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)的差别,分析HCAP在我国急诊科是否为一个相对独立的肺炎类型。方法回顾性分析首都医科大学附属北京天坛医院、首都医科大学附属北京朝阳医院和北京积水潭医院回龙观院区2018年9月至2019年5月入住急诊的HCAP及CAP患者的临床资料,采集患者一般资料、基础疾病种类、入院24 h内实验室检查、病原学检查结果、经验性抗感染治疗方案、是否机械通气、临床转归等。应用肺炎严重指数(pneumonia severity index,PSI)对肺炎严重程度进行评估。计量资料采用均数±标准差表示,两组间比较采用t检验,计数资料比较采用χ^(2)检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果纳入HCAP和CAP患者各105例。HCAP组合并两种以上基础疾病例数较多,外周血白细胞计数、血红蛋白水平异常人数及血乳酸水平两组间差异有统计学意义(均P<0.05);HCAP组PSI评分为(134.0±26.3)分,高于CAP组(113.0±16.4)分,Ⅳ级少于CAP组,Ⅴ级多于CAP组,差异有统计学意义(均P<0.05)。HCAP组分离多耐药菌株73株(69.52%),CAP组55株(52.38%);HCAP组鲍曼不动杆菌多于CAP组,CAP组肺炎链球菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌多于HCAP组;HCAP组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为22.2%,高于CAP组的10.0%,鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率为27.3%,低于CAP组的54.5%,其对美罗培南耐药率为45.5%,低于CAP组的72.7%;HCAP组初始经验性抗感染治疗应用碳青霉烯比例为21.00%,高于CAP组的10.48%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HCAP组有创机械通气比例(21.00%),高于CAP组(7.62%),HCAP组病死率(21.00%),高于CAP组(8.57%),均P<0.05。结论急诊HCAP患者合并多种基础疾病;病原菌耐药率高,初始经验性抗感染治疗需要更高级的药物;机械通气比例和病死率高。在我国急诊HCAP是一个相对� 展开更多

关键词 急诊 hcap 社区获得性肺炎 病原学 预后

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莫西沙星治疗卫生保健相关性肺炎1例 被引量：1

3

作者 周新 《中国实用内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期282-283,共2页

关键词 莫西沙星 卫生保健相关性肺炎

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急诊中青年医疗保健相关性肺炎与社区获得性肺炎的多中心比较研究

4

作者 刘京铭 周明 +1 位作者 李建国 郭伟 《中国急救复苏与灾害医学杂志》 2021年第5期549-553,559,共6页

目的探讨比较急诊中青年医疗保健相关性肺炎(healthcare associated pneumonia,HCAP)与社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)的特点与差异,以指导临床精细化诊疗.方法收集首都医科大学附属北京天坛医院、首都医科大学附属... 目的探讨比较急诊中青年医疗保健相关性肺炎(healthcare associated pneumonia,HCAP)与社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)的特点与差异,以指导临床精细化诊疗.方法收集首都医科大学附属北京天坛医院、首都医科大学附属北京朝阳医院、北京积水潭医院回龙观院区自2018年9月—2019年5月入住急诊符合纳排标准的中青年HCAP和CAP患者的临床资料,统计分析比较两组患者的人口学基本信息、基础疾病、临床表现、辅助检查、CURB-65评分、病原学特征、临床转归等.结果根据纳排标准,纳入HCAP组患者29例,CAP组患者38例.人口学基本信息,HCAP组患者平均年龄为51.66岁高于CAP组的45.58岁(P<0.05),男女比例分布无显著统计学差异.基础疾病及临床表现两组无显著统计学差异.辅助检查及病情评分,HCAP组患者的降钙素原增高比例为75.86%高于CAP组的68.42%(P<0.05),其余白细胞计数、乳酸、肺部影像学、CURB-65评分等两组无显著统计学差异.病原学方面HCAP组鲍曼不动杆菌的感染比例为44.83%高于CAP组的10.53%(P<0.05),HCAP组多耐药比例为65.52%高于CAP组的15.79%(P<0.05).临床转归两组无显著统计学差异,HCAP组住院时间则多集中在1~2周,而CAP组则分布较为分散(P<0.05).结论急诊中青年HCAP和CAP患者基础疾病、临床表现、多数辅助检查等方面无显著差异,但中青年HCAP患者较CAP患者发病平均年龄偏高、降钙素原更容易升高,且易感染如鲍曼不动杆菌这类易产生多耐药的细菌,如得到及时敏感抗生素治疗,预后多数良好且住院时间可控制在2周以内. 展开更多

关键词 急诊 中青年 医疗保健相关性肺炎 社区获得性肺炎

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肝癌相关基因HCAP1的定位克隆和初步功能研究 被引量：7

5

作者 王俊茹 覃文新 +5 位作者 任功一 潘勇 何祥火 胡建 万大方 顾健人 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期263-267,共5页

目的　克隆和筛选位于染色体 17p13.3缺失区内的肝癌相关基因。方法　采用定位克隆的策略 ,通过PAC筛库和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法克隆新基因 ;通过多组织膜片Northern杂交分析其组织表达谱 ,Southern杂交分析其在肝癌组... 目的　克隆和筛选位于染色体 17p13.3缺失区内的肝癌相关基因。方法　采用定位克隆的策略 ,通过PAC筛库和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法克隆新基因 ;通过多组织膜片Northern杂交分析其组织表达谱 ,Southern杂交分析其在肝癌组织DNA水平上的变化 ,然后通过克隆集落形成实验与MTS法测定细胞生长速度 ,初步筛选其作为肿瘤相关基因的可能性。结果　克隆到一个基因HCAP1(HCC associatedprotein 1,先前又称HC5 6 ) ,GenBank登录号为AF177341。多组织膜片杂交显示该基因在多种组织中表达 ,其中胎盘、肝脏和肌肉中表达较高。Southern杂交结果显示HCAP1基因在肝癌组织中存在缺失 ,比例为 2 5 .3% ;克隆集落形成实验与生长抑制率测定实验初步表明该基因能抑制肝癌细胞株Hep3B细胞的生长 ,抑制率为 31.8%。结论　HCAP1可能与肝癌的发生发展相关 ,是一个新的肝癌相关基因的侯选者。 展开更多

关键词 肝癌 hcap1基因 基因克隆 基因缺失

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抗菌肽LL-37的研究进展 被引量：7

6

作者 王永东 《国际免疫学杂志》 CAS 2007年第1期47-51,共5页

抗菌肽是机体天然免疫的重要组成部分，LL-37是人体内发现的唯一一种Cathelicidin类抗菌肽，其前体肽hCAP-18主要由中性粒细胞释放，经丝氨酸蛋白酶3切割产生有活性的LL-37。LL-37的表达及活性作用受到体内、体外多种因素的影响。LL-37... 抗菌肽是机体天然免疫的重要组成部分，LL-37是人体内发现的唯一一种Cathelicidin类抗菌肽，其前体肽hCAP-18主要由中性粒细胞释放，经丝氨酸蛋白酶3切割产生有活性的LL-37。LL-37的表达及活性作用受到体内、体外多种因素的影响。LL-37除了直接杀菌作用外，还能调节免疫和炎症介质的释放、引起免疫细胞分化及趋化、伤口愈合、细胞因子和组氨酸释放、中和内毒京和抗肿瘤.LL-37的直接杀菌作用并不是它最重要的免疫方式，后几种作用才是LL-37参与免疫反应的主要途径。人们通过分析LL-37的结构，设计类似LL-37多肽的新型多肽，发现它们也有相似的免疫作用。 展开更多

关键词 抗菌肽LL-37 作用机制 类似LL-37多肽 hcap-18

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抗菌肽hCAP 18／LL-37在卵巢癌微环境中的作用及表达调控机制 被引量：9

7

作者 卢茜 权文强 +4 位作者 吴军录 张霰 马伟 庞丽 李冬 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期725-730,共6页

目的：探讨抗菌肽hCAP18／LL-37在卵巢癌微环境中的作用及表达调控机制。方法采用侵袭实验检测巨噬细胞对卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响。采用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）和Western blot检测hCAP18／LL-37和versican V1蛋白的表达。... 目的：探讨抗菌肽hCAP18／LL-37在卵巢癌微环境中的作用及表达调控机制。方法采用侵袭实验检测巨噬细胞对卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响。采用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）和Western blot检测hCAP18／LL-37和versican V1蛋白的表达。采用干扰质粒抑制 SKOV3细胞中versican V1的表达，分析巨噬细胞hCAP18／LL-37的表达及SKOV3细胞的侵袭能力。结果共培养组（SKOV3细胞与巨噬细胞共培养）的侵袭穿膜数为（112．8±17．1）个，高于SKOV3培养组[SKOV3细胞单独培养，（8．2±1．9）个]，差异有统计学意义（P＜0．05）。 hCAP18／LL-37中和抗体共培养组（SKOV3细胞、巨噬细胞和hCAP18／LL-37中和抗体共培养）的侵袭穿膜细胞数为（22．2±5．6）个，少于对照IgG共培养组[SKOV3细胞、巨噬细胞和对照IgG共培养，（100．6±25．2）个]，差异有统计学意义（P＜0．05）。与SKOV3细胞共培养后，巨噬细胞中 hCAP18／LL-37蛋白和 mRNA水平均升高，而在SKOV3细胞中无变化。与巨噬细胞共培养后，卵巢癌细胞中versican V1蛋白的表达和分泌均升高。干扰卵巢癌SKOV3细胞中versican V1的表达（ SKOV3ver－／－细胞）后，巨噬细胞中hCAP18／LL-37蛋白和mRNA水平均低于对照细胞株（ SKOV3ver＋／＋细胞）；与巨噬细胞共培养后，SKOV3ver－／－细胞的穿膜细胞数[（24．8±4．6）个]低于SKOV3ver＋／＋细胞[（104．6±16．0）个]，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论卵巢癌微环境中，巨噬细胞表达分泌的抗菌肽hCAP18／LL-37促进卵巢癌细胞的侵袭，其表达受到肿瘤细胞分泌的versicanV1蛋白调控。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 巨噬细胞 肿瘤浸润 hcap18/LL-37 VERSICAN V1

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持续血液透析患者肺部感染的临床观察 被引量：6

8

作者 郭凯 梁显泉 +3 位作者 王新华 周荣斌 张丽利 商娜 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期486-489,共4页

目的了解持续血液透析患者一般状况、肺部感染及抗菌治疗现状等，为该类人群肺部感染的防治提供理论依据。方法采用自行设定的病例报告表，对2009-01-2010-12北京军区总医院血液净化中心124例持续透析患者回顾调查，并分析其临床特点。... 目的了解持续血液透析患者一般状况、肺部感染及抗菌治疗现状等，为该类人群肺部感染的防治提供理论依据。方法采用自行设定的病例报告表，对2009-01-2010-12北京军区总医院血液净化中心124例持续透析患者回顾调查，并分析其临床特点。结果北京军区总医院持续血液透析患者平均年龄（57．06±16．80）岁，男女比例为57．26％和42．74％。原发疾病以慢性肾小球肾炎最高。持续血液透析患者肺部感染发生率为41．94％，以55岁以上年龄者最为高发。肺部感染暴露组和未暴露组年龄构成差异有统计学意义（P=0．043）。肺部感染和心血管疾病呈正相关（rs=0．188，P=0．036，Ot=0．05）。初始治疗最常选择的抗菌方案为单药治疗，最常选择的抗生素类别为呼吸喹诺酮类，联合治疗中最常选择的抗菌方案为B内酰胺类＋大环内酯类，临床有效率为92．3l％。结论持续血液透析患者肺部感染发生率约为41．94％，以55岁以上年龄者高发，男女发病比例约为1．34：1，原发疾病以慢性肾小球肾炎最高，合并疾病以心血管事件最多。该类患者肺部感染的治疗与其他医疗保健性肺炎（HCAP）人群不同，不可完全遵循HCAP指南。应先按照社区获得性肺炎（CAP）模式管理，同时进行个体化评估，注意有无医院获得性肺炎（HAP）发生的危险因素和特殊病原菌，进而优化抗菌治疗方案。 展开更多

关键词 持续血液透析 肺部感染 医疗保健性肺炎(hcap)

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HCAP1两种基因型对肝癌细胞系Hep3B基因表达的影响 被引量：3

9

作者 王俊茹 覃文新 +4 位作者 何祥火 潘勇 胡建 万大方 顾健人 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1173-1181,共9页

背景与目的:HCAP1(HCC-associatedprotein1)基因是我们室克隆的一个新基因,HCAP1基因有N和M两种基因型,本研究旨在探讨HCAP1N和HCAP1M基因型对肝癌细胞基因表达的影响。方法:用脂质体转染试剂,将HCAP1M与HCAP1N分别转染Hep3B-Tet-on肝... 背景与目的:HCAP1(HCC-associatedprotein1)基因是我们室克隆的一个新基因,HCAP1基因有N和M两种基因型,本研究旨在探讨HCAP1N和HCAP1M基因型对肝癌细胞基因表达的影响。方法:用脂质体转染试剂,将HCAP1M与HCAP1N分别转染Hep3B-Tet-on肝细胞性肝癌细胞株;为了获得高诱导表达HCAP1N或HCAP1M的细胞株,通过Westernblot方法筛选被转染的细胞。然后,通过人cDNAarray膜片杂交技术分析HCAP1N或HCAP1M诱导表达前后的细胞基因表达谱。杂交结果用复日Smartview2001图像分析软件进行分析比较。结果:建立了HCAP1N和HCAP1M过表达前后的差异基因表达谱。结果表明HCAP1M过表达引起参与细胞增殖的基因表达上调(如c-erbB2受体和转录因子DP2),以及起凋亡作用基因(caspase9)及DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达下调;而HCAP1N过表达引起抑制细胞生长基因(如snoN和WAF1)和DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达上调,以及抗凋亡基因(HSPs)的表达下调。结论:HCAP1M基因过表达可能促进细胞过度增殖,HCAP1N过表达可能抑制细胞生长。 展开更多

关键词 hcap1 基因型 肝癌细胞系 Hep3B基因 表达

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肝癌相关蛋白HCAP1的表达、抗体制备及其亚细胞定位 被引量：3

10

作者 王俊茹 覃文新 +4 位作者 李锦军 杨艳华 潘勇 万大方 顾健人 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期26-28,共3页

目的 :肝癌相关基因HCAP1蛋白产物的表达、抗体的制备及其亚细胞定位。方法 :原核表达HCAP1蛋白 ;纯化的HCAP1蛋白免疫新西兰大白兔 ,制备多抗血清 ;Westernblot分析其在肝癌细胞株的表达 ;通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位。结果 :... 目的 :肝癌相关基因HCAP1蛋白产物的表达、抗体的制备及其亚细胞定位。方法 :原核表达HCAP1蛋白 ;纯化的HCAP1蛋白免疫新西兰大白兔 ,制备多抗血清 ;Westernblot分析其在肝癌细胞株的表达 ;通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位。结果 :获得了较纯的HCAP1表达蛋白和高效价的、高特异性的抗HCAP1的多抗血清 ,并且发现HCAP1大部分位于胞浆 ,少量分布于核仁。结论 :表达的HCAP1蛋白和抗HCAP1的多抗血清可用于HCAP1基因功能的研究 ;HCAP1功能场所可能位于核仁。 展开更多

关键词 肝癌 抗体 制备 hcap1 表达 抗hcap1多抗 亚细胞定位

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健康护理相关性肺炎新进展 被引量：3

11

作者 曹国辉(综述) 吴圣(综述) 陈旭岩(审校) 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期865-868,共4页

健康护理相关性肺炎（HCAP）作为肺炎的一种独立类型，其多重耐药病原体感染风险、初始抗菌药物治疗及临床预后有别于社区获得性肺炎（CAP）及医院获得性肺炎（HAP）。本文综述近几年HCAP研究新进展及目前对其病原学和临床预后的争议，... 健康护理相关性肺炎（HCAP）作为肺炎的一种独立类型，其多重耐药病原体感染风险、初始抗菌药物治疗及临床预后有别于社区获得性肺炎（CAP）及医院获得性肺炎（HAP）。本文综述近几年HCAP研究新进展及目前对其病原学和临床预后的争议，以加深临床医师对HCAP的认识。 展开更多

关键词 健康护理相关性肺炎(hcap) 社区获得性肺炎(CAP) 医院获得性肺炎(HAP) 危险因素 病原学 初始治疗

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Jurkat细胞转染外源HCAP1基因后的增殖抑制 被引量：2

12

作者 吴向华 王嵘 +5 位作者 杜均样 牧启田 郭列平 郑佩娥 万大方 顾建人 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期454-457,共4页

HCAP1基因系人类染色体 17p13 .3区带克隆的新肝癌相关基因。已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失。本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞。用台盼蓝拒染试... HCAP1基因系人类染色体 17p13 .3区带克隆的新肝癌相关基因。已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失。本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞。用台盼蓝拒染试验计数活细胞 ,绘制生长曲线 ,进行软琼脂集落形成试验。结果显示 :与转染空载体质粒 pBK/CMV的细胞比较 ,转染外源HCAP1基因的Jurkat细胞增殖速率明显减慢 ,细胞倍增时间延长 ,在软琼脂上的集落形成能力下降 (P <0 .0 1)。结论 :外源HCAP1基因产物对Jurkat细胞的增殖有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 hcap1基因 基因转染 Jurkat细胞系 细胞增殖

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奥希替尼辅助DP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及其对血清hCAP18及Pokemon表达的影响 被引量：5

13

作者 陈振洋 李欣 +2 位作者 贾玉凤 夏东晖 唐利 《药物评价研究》 CAS 2021年第9期1927-1933,共7页

目的探讨奥希替尼辅助DP方案(多西他赛联合顺铂)治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效及其对患者血清抗菌肽人类阳离子抗菌蛋白18(hCAP18)及POK红细胞髓性致癌因子(POK)表达的影响。方法选取2017年3月—2... 目的探讨奥希替尼辅助DP方案(多西他赛联合顺铂)治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效及其对患者血清抗菌肽人类阳离子抗菌蛋白18(hCAP18)及POK红细胞髓性致癌因子(POK)表达的影响。方法选取2017年3月—2019年1月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的70例晚期NSCLC患者作为研究对象,按照随机分组的方法分为对照组和观察组两组,每组各35例。对照组患者给予DP方案治疗,在第1、8天静脉滴注多西他赛注射液,60 mg/m^(2)与250 mL的0.9%氯化钠溶液进行充分的混匀,1次/d;第1~4天静脉滴注注射用顺铂,30 mg/m^(2),1次/d。所有患者均以3周为1个化疗周期,连续2个周期。观察组在对照组的基础上口服甲磺酸奥希替尼片,80 mg/d,连续治疗2个疗程后进行临床疗效等指标的评价。观察两组患者的近期疗效,比较两组治疗前后的癌胚抗原(CEA)、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞角质蛋白19片段(CYFRA21-1)等肿瘤标志物的水平,血清中的hCAPI8、Pokemon表达情况,远期的生存情况和不良反应的发生情况。结果治疗后,观察组的客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)分别为62.9%和85.7%,对照组的ORR和DCR分别为28.6%和60.0%,观察组的ORR和DCR均显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组CEA、VEGF、CYFRA21-1水平较治疗前有明显的下降(P<0.05);治疗后,观察组的CEA、VEGF、CYFRA21-1水平显著低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者血清hCAP18、Pokemon的水平有明显的下降(P<0.05);治疗后,观察组hCAP18、Pokemon水平下降更显著(P<0.05)。观察组生存率显著高于对照组(P<0.05)。结论奥希替尼辅助DP方案可以有效降低晚期非小细胞肺癌患者CEA、VEGF、CYFRA21-1水平,高效改善患者的近期疗效及远期生存情况,且治疗过程安全有效,具有一定的临床推广应用价值。 展开更多

关键词 奥希替尼 DP方案 晚期非小细胞肺癌 抗菌肽人类阳离子抗菌蛋白18 POK红细胞髓性致癌因子

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高龄医疗保健相关性肺炎患者的临床特征、病原学特点及预后 被引量：5

14

作者 周恩飞 陈轶娟 马青 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第22期6483-6484,共2页

目的研究高龄医疗保健相关性肺炎(HCAP)患者的临床特征、病原学特点与预后。方法对该院2012年4月至2015年4月收治的40例高龄HCAP患者的临床资料进行回顾性分析。结果 HCAP组患者的年龄、肺炎严重指数(PSI)评分、心血管疾病、慢性肺部疾... 目的研究高龄医疗保健相关性肺炎(HCAP)患者的临床特征、病原学特点与预后。方法对该院2012年4月至2015年4月收治的40例高龄HCAP患者的临床资料进行回顾性分析。结果 HCAP组患者的年龄、肺炎严重指数(PSI)评分、心血管疾病、慢性肺部疾病、慢性肾脏疾病、肿瘤、至少2种并发症发生率均显著高于社区获得性肺炎(CAP)组,铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、多耐药菌比例均显著高于CAP组,肺炎链球菌比例显著低于CAP组,单一抗生素比例显著低于CAP组,更换抗生素、初始治疗失败、需要机械通气、转入重症监护室、1个月内院内死亡比例均显著高于CAP组,住院时间显著长于CAP组(均P<0.05)。结论高龄HCAP患者具有较大的年龄、较多的基础疾病、较为严重的病情、较高的死亡率,革兰阴性菌是主要病原菌,预后较差。 展开更多

关键词 高龄hcap 临床特征 病原学特点

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人源抗菌肽LL-37/hCAP-18真核表达载体的构建及其在人乳腺癌细胞MCF-7中的表达 被引量：2

15

作者 韩艳非 袁红艳 +2 位作者 廖翔宇 刘超 常雅萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第11期945-947,共3页

目的构建人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞MCF-7中进行表达。方法以重组质粒pcDNA4.0-LL-37为模板,采用PCR法扩增LL-37/hCAP-18基因,连入pEGFP-c1质粒,构建真核表达载体pEGFP-c1-LL-37,瞬时转染人乳腺癌细胞MCF... 目的构建人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞MCF-7中进行表达。方法以重组质粒pcDNA4.0-LL-37为模板,采用PCR法扩增LL-37/hCAP-18基因,连入pEGFP-c1质粒,构建真核表达载体pEGFP-c1-LL-37,瞬时转染人乳腺癌细胞MCF-7,采用激光共聚焦显微镜观察重组质粒的转染效率,RT-PCR法检测目的基因的表达。结果所构建的抗菌肽LL-37/hCAP-18真核表达载体经双酶切和测序证明构建正确,在瞬时转染MCF-7细胞48h后,目的基因转染效率较高,约为40%,RT-PCR结果显示,重组质粒转染的细胞可扩增出339bp的目的基因条带。结论已成功构建了人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞中获得表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。 展开更多

关键词 抗菌肽 LL-37/hcap-18 真核表达 MCF-7细胞

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HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的作用 被引量：1

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作者 牧启田 吴向华 +5 位作者 王嵘 杜均祥 郭列平 张海伟 万大方 顾建人 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2003年第4期1-5,共5页

目的 :研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl- 2的作用。方法 :用脂质体介导的基因转移方法 ,把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中 ,用流式细胞术和Hochest 332 58荧光染色检测细胞凋亡 ;用Wester... 目的 :研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl- 2的作用。方法 :用脂质体介导的基因转移方法 ,把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中 ,用流式细胞术和Hochest 332 58荧光染色检测细胞凋亡 ;用Westernblot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl- 2蛋白表达的调节。结果 :外源HCAP1基因导入Raji细胞 2 4、4 8和 96h后 ,细胞凋亡率增加。Westernblot显示Bax/Bcl- 2蛋白表达比值明显增高。结论 :转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡 ,使Bax/Bcl- 2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一。 展开更多

关键词 hcap1基因 RAJI细胞 细胞凋亡 Bax/Bel-2蛋白

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hCAP-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响 被引量：1

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作者 袁红艳 许娜 +1 位作者 王凤丽 常雅萍 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第3期346-348,共3页

目的研究人源阳离子抗菌肽(hCAP)-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响。方法将已构建的hCAP-18/LL-37全长肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞株,在转染后48 h收获培养上清;人外周血单个核细胞分离,... 目的研究人源阳离子抗菌肽(hCAP)-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响。方法将已构建的hCAP-18/LL-37全长肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞株,在转染后48 h收获培养上清;人外周血单个核细胞分离,体外定向诱导分化成树突状细胞(DC);将转染后收获的培养上清与体外培养的DC共同孵育,48 h收获DC,经流式细胞仪检测DC表面分子CD83、CD86、CD40及HLA-DR的表达。结果FCM结果显示:pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞培养上清与pcDNA4/Myc-His空载体转染细胞培养上清相比较,均可上调DC表面分子CD86、CD40及HLA-DR的表达。结论构建的hCAP-18/LL-37全长肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞株培养上清液均可上调DC表面分子CD86、CD40及HLA-DR的表达,促进DC的分化成熟。 展开更多

关键词 抗菌肽 hcap-18/LL-37 真核表达 树突状细胞

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转染外源HCAP1基因对Raji细胞化疗敏感性的作用

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作者 杜均祥 王嵘 +2 位作者 吴向华 万大方 顾建人 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2004年第6期330-332,共3页

目的　探讨外源HCAP1基因产物对B淋巴瘤 /白血病细胞系Raji细胞化疗敏感性的作用。 方法　用脂质体介导法 ,把HCAP1基因转染Raji细胞 ,经G4 18筛选后 ,分别与化疗药物DNR(daunoru bicin ,柔红霉素 )、VP16 (etoposide ,足叶乙甙 )和VCR(... 目的　探讨外源HCAP1基因产物对B淋巴瘤 /白血病细胞系Raji细胞化疗敏感性的作用。 方法　用脂质体介导法 ,把HCAP1基因转染Raji细胞 ,经G4 18筛选后 ,分别与化疗药物DNR(daunoru bicin ,柔红霉素 )、VP16 (etoposide ,足叶乙甙 )和VCR(vincristine,长春新碱 )联合培养 2 4小时 ,用苔盼兰拒染试验计数活细胞。结果　转染HCAP1的Raji细胞 ,在不同浓度的DNR(0 .0 1～ 10 .0 μg/ml)和VP16 (5～ 80 μg/ml)作用下 ,与转染空载体和未转染对照细胞比较 ,细胞活力的抑制作用明显增强 (P <0 .0 5 )、IC50 (半数抑制浓度 )值明显降低 ;但与不同浓度的VCR(12 .5～ 10 0 μg/ml)作用 ,细胞活力的抑制和IC50 值与对照细胞相似。结论　HCAP1过表达可明显增加Raji细胞对DNR、VP16作用的敏感性 。 展开更多

关键词 hcap1基因 基因转染 细胞活力 RAJI细胞

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真核表达hCAP-18／LL-37成熟肽对树突状细胞表面分子表达的影响 被引量：1

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作者 袁红艳 王凤丽 +1 位作者 许娜 常雅萍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期482-486,共5页

目的:研究真核表达的人源阳离子抗菌肽-18(hCAP-18)成熟肽LL-37对树突状细胞(DCs)表面分子表达的影响。方法:通过基因克隆方法构建hCAP-18成熟肽LL-37真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,转染人胚肾HEK293细胞株,转染48 h后收获培养上清... 目的:研究真核表达的人源阳离子抗菌肽-18(hCAP-18)成熟肽LL-37对树突状细胞(DCs)表面分子表达的影响。方法:通过基因克隆方法构建hCAP-18成熟肽LL-37真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,转染人胚肾HEK293细胞株,转染48 h后收获培养上清,与体外以rh-GM-CSF、rh-IL-4联合培养定向诱导分化的不成熟DCs共培养48 h,收获DCs;流式细胞仪检测DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达。结果:成功构建成熟肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,并实现在其真核细胞HEK293中的表达;流式细胞仪结果显示,pcDNA4/Myc-His-LL-37基因转染HEK293细胞培养上清刺激组DCs中CD40及HLA-DR的表达阳性率与对照组比较均明显升高(P<0.05)。结论:构建了真核表达的hCAP-18成熟肽LL-37,其可上调DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达,促进DCs功能的成熟。 展开更多

关键词 hcap-18/LL-37 成熟肽 树突状细胞 表面分子

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LL-37/hCAP-18基因克隆及其真核表达载体的构建

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作者 杨应华 符碧 《海南师范学院学报（自然科学版）》 2004年第3期265-269,共5页

LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phC... LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phCAP-18瞬时转染COS-7细胞,Westernblot证实,hCAP-18能在COS-7细胞中表达. 展开更多

关键词 LL-37/hcap-18 CDNA克隆 真核表达

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