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H6亚型禽流感病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：8
1
作者 周辰瑜 谢芝勋 +7 位作者 宋杨 彭宜 陈安莉 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1855-1861,共7页
建立一种快速、敏感、特异的检测H6亚型禽流感病毒(AIV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据H6亚型AIV血凝素(HA)基因序列的保守区8个位点设计了6条特异性LAMP引物,以H6亚型AIV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,对反应条件和... 建立一种快速、敏感、特异的检测H6亚型禽流感病毒(AIV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据H6亚型AIV血凝素(HA)基因序列的保守区8个位点设计了6条特异性LAMP引物,以H6亚型AIV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,对反应条件和反应体系进行优化。结果表明该方法的特异性良好,对其他呼吸道病原体均无扩增反应。该方法灵敏度高,最低可检测到H6亚型AIV RNA为0.01 pg,该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的H6亚型AIV检测方法。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 逆转录环介导等温扩增 特异性 敏感性
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检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用
2
作者 万志敏 龚简汐 +7 位作者 赵喆泓 汤婷 李亚锋 谢泉 李拓凡 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期34-39,共6页
为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检... 为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检测效果。结果显示:该ELISA方法只与H6亚型禽流感病毒反应,而与H1、H3、H4、H5、H7、H9、H10、H12等其他亚型禽流感病毒,血清4型禽腺病毒、血清8b型禽腺病毒、血清3型鸭腺病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、传染性法氏囊病病毒以及禽白血病病毒均无交叉反应;该ELSIA方法可检测2.32×10^(4)TCID50/mLH6亚型禽流感病毒,批间和批内重复试验变异系数均小于10%;该ELISA方法和RT-PCR方法对活禽市场采集的48份咽拭子样品检测结果一致,进一步检测攻毒鸡的咽拭子显示该方法可有效检测咽拭子中H6亚型禽流感病毒。研究表明,基于两株单克隆抗体建立的检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,适用于H6亚型禽流感病毒感染的临床检测。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 单克隆抗体 血凝素蛋白 双抗体夹心ELISA
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H6亚型禽流感病毒的分离鉴定与生物学特性分析 被引量：4
3
作者 罗思思 谢芝勋 +6 位作者 周辰瑜 刘加波 谢志勤 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 《中国家禽》 北大核心 2015年第2期54-56,共3页
为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集... 为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集尿囊液进行HA和HI试验,结果显示这7株只与H6亚型AIV的阳性血清发生反应,产生血凝抑制现象,初步鉴定为H6亚型AIV。通过HA和NA基因的克隆与测序鉴定,进一步确定为H6亚型AIV,与NA基因存在5种组合,包括H6N1、H6N2、H6N5、H6N6和H6N8。鸡致病性试验表明分离株可感染但不致死SPF鸡,并通过咽喉和泄殖腔排毒,结合HA裂解位点附近的氨基酸序列,表明所分离到的7株H6亚型AIV符合LPAIV的特征。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 分离 鉴定
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2016-2018年广州市H6亚型禽流感病毒外环境分离株HA基因遗传特征分析 被引量：2
4
作者 曹蓝 李魁彪 +4 位作者 鲁恩洁 陈艺韵 刘艳慧 夏丹 狄飚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1106-1109,1116,共5页
目的对广州禽类市场外环境H6亚型禽流感病毒进行分离和测序,分析HA基因遗传进化特点。方法通过接种鸡胚分离H6亚型禽流感病毒,采用RT-PCR方法扩增HA基因全长序列并测序,通过DNA Star7.1和MEGA 4.0软件,分析HA基因遗传特征。结果2016-201... 目的对广州禽类市场外环境H6亚型禽流感病毒进行分离和测序,分析HA基因遗传进化特点。方法通过接种鸡胚分离H6亚型禽流感病毒,采用RT-PCR方法扩增HA基因全长序列并测序,通过DNA Star7.1和MEGA 4.0软件,分析HA基因遗传特征。结果2016-2018年广州禽类市场外环境分离到6株H6亚型禽流感病毒,HA基因核苷酸同源性在81.0%~99.1%之间。基因序列特征分析显示,所有分离株裂解位点序列相对保守,只有1个碱性氨基酸插入,呈现低致病性禽流感病毒分子特点。受体结合位点均为226Q和228G,为禽类呼吸道上皮受体结合位点。2016年分离株发现183-NNT糖基化位点的缺失。进化分析显示,广州早期分离株属于广东常见的ST2853-like分支,但2018年监测发现了ST339-like新流行分支病毒。结论广州地区H6亚型禽流感病毒尚为禽类低致病性病毒,本研究毒株HA基因变异较大,2018年毒株出现多遗传分支进化趋势,因此需要继续监测H6亚型禽流感病毒的流行和变异。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 hA基因 变异
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环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感监测 被引量：2
5
作者 黄建龙 王昌建 +5 位作者 邓国华 范仲鑫 何世成 朱春霞 唐小明 刘道新 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期299-302,共4页
为了解环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感病毒的分布和流行情况,分别于2009—2011年对环洞庭湖地区活禽批发市场、2011—2013年对水禽场的H6亚型禽流感进行了系统监测。对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡... 为了解环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感病毒的分布和流行情况,分别于2009—2011年对环洞庭湖地区活禽批发市场、2011—2013年对水禽场的H6亚型禽流感进行了系统监测。对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI),并与RT–PCT方法相结合鉴定病毒的亚型。检测结果显示:在环洞庭湖区的5个活禽批发市场上都分离到H6亚型禽流感,并且在鸡、鸭、鹅拭子中都分离到该病毒,总的分离率为6.49%;水禽场H6亚型禽流感病毒群体阳性率达3.6%,拭子的H6亚型病毒分离率为0.29%,活禽批发市场鸭拭子H6亚型禽流感病毒分离率为9.58%,表明市场环节水禽H6亚型禽流感的隐性带毒率比养殖环节高,在一定程度上说明禽流感在活禽批发市场存在水平传播的风险。 展开更多
关键词 活禽批发市场 水禽场 h6亚型禽流感病毒 洞庭湖区
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两株H6亚型禽流感病毒变异株的生物学特性分析 被引量：1
6
作者 程凯慧 于志君 +12 位作者 忻悦 张坤 丁洁 黄靖 杨霞 乔军 王铁成 杨松涛 黄耕 赵永坤 高玉伟 华育平 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第5期389-392,422,共5页
目的研究两株H6亚型禽流感病毒变异株对小鼠的致病性,并建立H6亚型禽流感病毒变异株感染BALB/c小鼠动物模型,为病毒的致病机理、抗病毒药物研究及其疫苗评价提供实验平台。方法 106EID50/50μl～101EID50/50μl病毒经鼻内接种小鼠,在攻... 目的研究两株H6亚型禽流感病毒变异株对小鼠的致病性,并建立H6亚型禽流感病毒变异株感染BALB/c小鼠动物模型,为病毒的致病机理、抗病毒药物研究及其疫苗评价提供实验平台。方法 106EID50/50μl～101EID50/50μl病毒经鼻内接种小鼠,在攻毒后第3、5d分别剖杀小鼠,无菌取脏器,分析病毒在不同时间不同脏器的复制水平,观察小鼠临床症状、脏器的病毒滴定水平,小鼠体重变化情况及生存率,评估变异株病毒对小鼠的易感性和致病性,同时对肺脏进行病理学检查和免疫组化分析。结果与亲代毒株相比较,小鼠感染两变异株后体重明显下降直至死亡,组织滴定显示病毒不仅能在肺和鼻甲骨复制,还能入侵小鼠的脑组织。免疫组化显示感染后小鼠肺脏有变异株病毒分布。结论经小鼠肺脏传代获得的2株H6亚型禽流感病毒变异株对小鼠具有易感性和致病性。建立的小鼠动物模型可用于H6亚型禽流感病毒致病机制、感染特点、病毒疫苗的研制及药物效果的评价。 展开更多
关键词 h6亚型禽流感病毒 致病性 动物模型
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H7亚型禽流感病毒概述 被引量：67
7
作者 朱闻斐 高荣保 +3 位作者 王大燕 杨磊 朱云 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期245-249,共5页
自2002年以来,全球报道的人感染H7亚型禽流感病毒病例超过100人,波及荷兰、意大利、加拿大、美国以及英国等国家。人感染H7亚型禽流感病毒的临床表现由结膜炎至轻微的上呼吸道疾病,甚至是肺炎。2013年3月31日,中国报道了上海市和安徽省... 自2002年以来,全球报道的人感染H7亚型禽流感病毒病例超过100人,波及荷兰、意大利、加拿大、美国以及英国等国家。人感染H7亚型禽流感病毒的临床表现由结膜炎至轻微的上呼吸道疾病,甚至是肺炎。2013年3月31日,中国报道了上海市和安徽省两地共3例H7N9亚型禽流感病毒(AIVs)感染死亡病例。由于从家禽中分离到的H7亚型流感病毒不断增加,而且H7亚型AIVs感染人所导致的严重的临床症状,因此该亚型流感病毒对人类健康造成严重威胁,所以我们必须提高对H7亚型AIVs的认识,并要加强人群和动物中流感病毒的持续监测以及疫苗和药物的研究,以应对可能由于H7亚型AIVs引起的流感大流行。 展开更多
关键词 h7亚型禽流感病毒 人感染h7亚型 h7N9 h7病原学特征
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我国部分地区H9亚型禽流感病毒血凝素基因序列比较与遗传发生关系分析 被引量：35
8
作者 刘红旗 程坚 +3 位作者 彭大新 贾立军 张如宽 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期288-297,共10页
为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律 ,本研究汇集近年来从我国 1 2个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的 2 3株H9亚型禽流感病毒 ,通过RT -PCR方法和核苷酸序列测定获得了 2 3个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷... 为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律 ,本研究汇集近年来从我国 1 2个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的 2 3株H9亚型禽流感病毒 ,通过RT -PCR方法和核苷酸序列测定获得了 2 3个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷酸和推导的氨基酸序列同源性比较结果表明 ,这些毒株HA基因的核苷酸序列同源性为 94.1 %～1 0 0 % ,氨基酸序列同源性为 95 .4%～ 1 0 0 % ;将这 2 3个毒株和来自亚洲及世界其它地区的另外 3 1株的HA基因cDNA序列同源性进行比较发现 ,分离自香港的HK1 70 4 99株与日本的 2个毒株关系较近 ;氨基酸序列分析发现 ,CKGS1 99、CKTJ1 96、CKTJ2 96、CKSH3 0 0和CKBJ1 97五个毒株各发生了一个潜在的糖基化位点的丢失。 5 4株H9亚型AIVHA基因 5 5bp～ 1 1 5 2bp的氨基酸序列分析发现 ,裂解位点尽管有 1 0种基序 ,但本研究中的 2 3株和近年来从我国大陆和香港地区的分离的毒株则均为RSSR↓GLF ;构成受体结合位点的 1 91位氨基酸有一个规律 ,即所有中国大陆毒株与部分香港毒株都为N ,其它毒株均为H ,1 41aa～ 1 43aa处的糖基化位点有与 1 91aa类似的规律 ,即 :凡是 1 91aa为N的毒株 ,该处均为NVS(CKBJ1 94除外 ) ,凡是1 91aa为H的毒株 ,则该处均为NVT ;遗传发生关系分析 ,中国大陆? 展开更多
关键词 h9亚型禽流感病毒 血凝素基因 遗传发生关系 同源性 序列分析 中国
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在DNA芯片平台上探测AIV不同亚型cDNA 被引量：33
9
作者 王秀荣 邓国华 +5 位作者 于康震 石锐 刘丽玲 乔传玲 陈化兰 孔宪刚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期394-398,共5页
对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/African　starling/983/79(H7N1)和　A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)。通过RT-PCR获得大约500... 对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/African　starling/983/79(H7N1)和　A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)。通过RT-PCR获得大约500　bp的禽流感病毒基因cDNAs片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。在病毒RNA反转录过程中,用Cy5标记样品　cDNAs。样品　cDNAs是一个包括禽流感病毒HA和M基因的混合物。依据M基因鉴别型,依据HA基因鉴别亚型。扫描芯片上探针结合位点,杂交信号与预期设想基本一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV诊断方法。 展开更多
关键词 h9亚型禽流感病毒 鉴别 M基因 DNA芯片 快速诊断技术 基因芯片技术 hA基因 AIV 禽流感病毒 h5N1
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H5亚型禽流感病毒单抗——生物素捕获ELISA的建立 被引量：16
10
作者 王传彬 田新生 +5 位作者 曹振 遇秀玲 孙明 陈西钊 王宏伟 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期204-207,共4页
目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生... 目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生物素标记的单抗和酶标亲和素来检测病毒血凝素抗原,经方阵试验优化ELISA反应体系。用该方法检测H1—H15亚型AIV标准毒株和H5、H7、H9亚型AIV分离株,并与血凝和血凝抑制试验比较,评价其敏感性和特异性。结果纯化后的单抗具有良好的反应活性,生物素标记单抗工作浓度为1∶5000;ELISA对H5亚型AIV的检出限为025个血凝单位。该ELISA反应体系能检出H5N3标准株和所有20株国内H5亚型AIV分离株,而与其他14个血凝素亚型的AIV标准株、15个H9亚型AIV分离株和2个H7亚型AIV分离株均无交叉反应。结论初步建立了检测H5亚型禽流感病毒的单抗—生物素捕获ELISA方法,为研制试剂盒和进一步应用试验提供了基础。 展开更多
关键词 单抗 ELISA 亲和素 h5亚型禽流感病毒 血凝素 单克隆抗体 AIV h9亚型 分离株 生物素标记
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TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒 被引量：19
11
作者 卢亦愚 严菊英 +3 位作者 冯燕 徐昌平 史雯 茅海燕 《中国病毒学》 CSCD 2006年第5期472-476,共5页
建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量RT-PCR方法,用于检测H5亚型禽流感病毒。针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与TaqMan-MGB荧光探针,筛选并优化荧光定量RT-PCR反应体系与反应条件,用以提高方法的特异... 建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量RT-PCR方法,用于检测H5亚型禽流感病毒。针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与TaqMan-MGB荧光探针,筛选并优化荧光定量RT-PCR反应体系与反应条件,用以提高方法的特异性、敏感性与准确性;并通过体外克隆技术建立病毒基因拷贝数进行定量分析。结果表明:引物与探针的优化浓度分别640nmol/L和480nmol/L,体系具有良好的保守性和特异性,与其他呼吸道病毒均无交叉反应。方法检测灵敏度为100拷贝/反应,标准曲线线性范围为107～102拷贝/反应,从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,操作简便,重现性好。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异、敏感、快速,适合于临床实验室进行H5亚型禽流感病毒的快速定量检测。 展开更多
关键词 荧光定量RT-PCR TAQMAN-MGB探针 h5亚型禽流感病毒(AIV h5)
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共表达H5亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力 被引量：10
12
作者 陈素娟 孙蕾 +2 位作者 刘武杰 孙学辉 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期111-114,共4页
为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同... 为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p11SH5ANA。将p11SH5ANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5ANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-11SH5ANA。通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用105PFU的rFPV-11SH5NA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明,该重组病毒能使经肌肉注射攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%,显示出一定的应用前景。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 重组鸡痘病毒 血凝素 神经氨酸酶
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以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性 被引量：13
13
作者 张小荣 焦新安 +4 位作者 潘志明 张晓明 刘秀梵 黄金林 张如宽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期157-161,共5页
根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染... 根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染P815细胞 ,经间接免疫荧光试验证实 ,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0得到两种运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4 5 5 0 (pVAX1 HA)和X4 5 5 0 (asd pVAX1 HA) ,以 1× 10 9CFU 只的剂量两次口服免疫BALB c小鼠 ,免疫小鼠不仅可以检测到HA特异性的血清抗体应答 ,而且还能抵抗稳定表达H5亚型禽流感病毒HA基因的P815肥大细胞瘤的攻击 ,说明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒 ,并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 h5亚型禽流感病毒 DNA疫苗 免疫原性 小鼠 hA基因序列 RT-PCR 免疫应答
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共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒 被引量：11
14
作者 韦栋平 刘玉良 +2 位作者 邵卫星 卢建红 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期286-290,共5页
应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列... 应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF ,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE L和合成启动子PS调控。最后将P1 1 LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF ,用以转染已预先感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。通过在含有X Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒。PCR和Southernblot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组 ;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白。 展开更多
关键词 新城疫病毒 h9亚型禽流感病毒 重组鸡痘病毒 融合蛋白 血凝素
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H7亚型和N9亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量：14
15
作者 罗思思 谢芝勋 +4 位作者 谢丽基 邓显文 谢志勤 黄娇玲 曾婷婷 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1176-1183,共8页
应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种H7亚型和N9亚型禽流感病毒(AIV)可视化快速检测方法。根据GenBank中H7亚型和N9亚型AIV HA和NA基因序列,在其保守区域设计筛选出H7亚型和N9亚型AIV的特异性LAMP引物各一套,优化反应条件,... 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种H7亚型和N9亚型禽流感病毒(AIV)可视化快速检测方法。根据GenBank中H7亚型和N9亚型AIV HA和NA基因序列,在其保守区域设计筛选出H7亚型和N9亚型AIV的特异性LAMP引物各一套,优化反应条件,建立能检测H7亚型和N9亚型AIV RT-LAMP方法,并进行特异性和敏感性检验。结果显示,该法用实时浊度仪63℃反应1h,能特异性地检测H7亚型和N9亚型AIV,而对其他15个H亚型和8个N亚型的AIV和禽类呼吸道病原体均无扩增,最低能检出10拷贝·μL-1目的基因。所建立的H7亚型和N9亚型RT-LAMP方法特异性强、敏感性高,结果可视化,操作简便、快速,为H7、N9和H7N9亚型AIV的有效防控提供技术支撑,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 h7亚型禽流感病毒 N9亚型禽流感病毒 反转录环介导等温扩增 可视化检测
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山东省部分地区鸡源大肠杆菌与低致病性H9亚型禽流感病毒混合感染的调查 被引量：8
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作者 刘香敏 纪鸿翔 +1 位作者 王建琳 尹燕博 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2016年第2期88-90,共3页
为了解近年来山东省鸡大肠杆菌与H9亚型禽流感病毒混合感染的情况,对2012年1月份至2014年3月份期间山东省部分地区送检的1 816份病料进行研究,通过大肠杆菌的分离鉴定和H9亚型禽流感病毒的血凝抑制试验,结果分离出大肠杆菌116例,占总病... 为了解近年来山东省鸡大肠杆菌与H9亚型禽流感病毒混合感染的情况,对2012年1月份至2014年3月份期间山东省部分地区送检的1 816份病料进行研究,通过大肠杆菌的分离鉴定和H9亚型禽流感病毒的血凝抑制试验,结果分离出大肠杆菌116例,占总病料的6.39%;检出H9亚型禽流感病毒495例,占总病料的27.26%;检出大肠杆菌和H9亚型禽流感病毒混合感染46例,占总病料的2.53%;且混合感染检出率在第一、四季度较高;青岛、聊城地区大肠杆菌与H9亚型禽流感混合感染检出率高于潍坊和烟台。调查结果表明临床鸡大肠杆菌和H9亚型禽流感病毒混合感染现象比较普遍,严重威胁着山东地区养殖业的发展。 展开更多
关键词 山东省 h9亚型禽流感病毒 鸡大肠杆菌 混合感染 调查分析
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2014-2019年中山市H9亚型禽流感监测及病例特征分析 被引量：7
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作者 陈楚莹 王曼 冯志锋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期122-127,共6页
目的分析中山市H9亚型禽流感病毒外环境监测情况及人感染H9N2禽流感病例特征,指导H9N2禽流感防控工作。方法2014-2019年采集监测镇区内的禽类批发市场、活禽销售市场和生鲜禽销售市场3类交易场所的外环境标本进行禽流感病毒核酸检测,并... 目的分析中山市H9亚型禽流感病毒外环境监测情况及人感染H9N2禽流感病例特征,指导H9N2禽流感防控工作。方法2014-2019年采集监测镇区内的禽类批发市场、活禽销售市场和生鲜禽销售市场3类交易场所的外环境标本进行禽流感病毒核酸检测,并对人感染H9N2禽流感报告病例进行流行病学分析。结果共采集和检测外环境标本9015份,检出H9亚型禽流感病毒阳性标本2171份,阳性率为24.08%。阳性率自2015年起呈逐年上升的趋势(趋势χ^(2)=785.258,P<0.001),不同季节均有一定程度流行。监测镇区均有阳性检出,总体阳性率较高的是五桂山、东升、沙溪、东凤、神湾和小榄等镇区。由不具备独立集中屠宰场供货的生鲜禽销售市场的阳性率最高(36.84%,231/627)。鸡与其它禽类混养阳性率增高(28.91%,920/3182)。采样部位为冰箱等生鲜禽存放器的阳性率最高(32.71%,105/321),其次是笼具(31.27%,491/1570)。期间报告3例人感染H9N2禽流感病例,均为常规监测所发现。病例发病时间在冬季或夏季,均有活禽暴露史。结论中山市涉禽环境中普遍存在H9亚型禽流感病毒,不同季节均有流行风险。生鲜上市设置独立屠宰区,禽类单独存养,注重冰箱、鸡笼等的消毒清洁,有助于提高防控效果。强化监测有利于及早发现感染病例。 展开更多
关键词 h9亚型禽流感病毒 人感染h9N2禽流感 外环境 监测 流行病学特征
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鸡血清4型禽腺病毒与HH9亚型禽流感病毒亚型禽流感病毒、新城疫病毒混合感染的鉴定 被引量：7
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作者 梅梅 陆吉虎 +2 位作者 张雪花 唐应华 侯继波 《中国家禽》 北大核心 2017年第22期59-62,共4页
试验对临床疑似血清4型禽腺病毒与H9亚型禽流感、新城疫混合感染鸡的病例进行了病毒分离与鉴定。通过接种鸡胚、血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验、PCR鉴定,确定该病例为三种病毒混合感染。动物回归试验证明,1 000 ELD_(50)病毒量对2日... 试验对临床疑似血清4型禽腺病毒与H9亚型禽流感、新城疫混合感染鸡的病例进行了病毒分离与鉴定。通过接种鸡胚、血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验、PCR鉴定,确定该病例为三种病毒混合感染。动物回归试验证明,1 000 ELD_(50)病毒量对2日龄SPF鸡致死率达到100%,剖检病变呈现典型心包积液-肝炎综合征,而H9亚型禽流感和新城疫病变特征不明显,说明混合感染中血清4型禽腺病毒病变非常典型,H9亚型禽流感和新城疫则呈现非典型病变。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 h9亚型禽流感病毒 新城疫病毒 混合感染 鉴定
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H7亚型禽流感病毒与禽类和人类的关系 被引量：7
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作者 王承氏 王婧 +7 位作者 罗静 谢立 丁华 刘社兰 刘晓冬 陈余 贾亚雄 何宏轩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第5期416-424,共9页
近年来,禽流感已给人类公共卫生健康造成严峻的挑战^[1-2],频繁引起人和各种动物的流感流行,如2005年H5N1禽流感和2009年H1N1人流感流行.在亚洲、非洲和欧洲的许多国家,从家禽和野生鸟类检测出禽流感病毒,不仅给畜禽产业造成重大损失,... 近年来,禽流感已给人类公共卫生健康造成严峻的挑战^[1-2],频繁引起人和各种动物的流感流行,如2005年H5N1禽流感和2009年H1N1人流感流行.在亚洲、非洲和欧洲的许多国家,从家禽和野生鸟类检测出禽流感病毒,不仅给畜禽产业造成重大损失,而且对人类的公共健康构成严重威胁^[3].这些病毒对家禽、野生鸟类和人类都构成了潜在威胁,其流行病学特征很复杂,传播途径、防治措施等诸多问题有待深入研究.野生鸟类, 展开更多
关键词 h7亚型禽流感病毒 人类 禽类 野生鸟类 流行病学特征 卫生健康 h1N1 h5N1
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番鸭禽流感母源抗体和免疫抗体的消长变化 被引量：7
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作者 谢为天 黄其 +2 位作者 徐春厚 陈刚舰 邵建宏 《养禽与禽病防治》 北大核心 2006年第11期36-38,共3页
关键词 h5亚型禽流感病毒 番鸭 消长变化 免疫抗体 母源抗体 世界动物卫生组织 A型流感病毒 动物疾病
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