水产品中霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌多重PCR检测方法的建立 被引量：18

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作者 蒋蔚 易力 +5 位作者 陈永军 何再平 白雪瑞 赵梦苏 刘景云 王权 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第1期44-51,共8页

霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌是引起全球范围的食源性疾病的重要病原菌,建立一种能准确鉴别这3种弧菌的方法具有重要意义。groEL基因是包括弧菌属在内的多种细菌检测的分子标记。本研究根据3种弧菌的groEL基因分别设计引物,经PCR扩... 霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌是引起全球范围的食源性疾病的重要病原菌,建立一种能准确鉴别这3种弧菌的方法具有重要意义。groEL基因是包括弧菌属在内的多种细菌检测的分子标记。本研究根据3种弧菌的groEL基因分别设计引物,经PCR扩增及反应条件的优化,建立一种能同时检测这3种弧菌的多重PCR方法。结果表明应用多重PCR技术对霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌能分别特异性地扩增出418、644、192 bp的目的片段。检测其他非目标供试菌时,不出现任何扩增条带。敏感性检测结果表明,对霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌最低检测限分别为102、102、103CFU/m L。人工染菌水产品检测结果显示,所建立的多重PCR方法能够有效检测出目的细菌,而未染菌组均为阴性。本文通过建立的多重PCR方法实现了对这3种弧菌的同时检测,具有快速、灵敏度高和特异性强等优点,对水产品中这3种弧菌的检测和流行病学调查具有重要意义。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 副溶血弧菌 创伤弧菌 groel基因 多重PCR

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钩端螺旋体groEL基因原核表达及其产物免疫保护作用 被引量：4

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作者 李小余 王银环 +1 位作者 严杰 程东庆 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期164-170,共7页

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株groEL基因原核重组表达系统,了解重组表达的GroEL蛋白(rGroEL)对金地鼠的免疫保护作用。方法:采用高保真PCR扩增问号钩体赖株groEL基因并测序,常规方法构建groEL基因原核表达系统... 目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株groEL基因原核重组表达系统,了解重组表达的GroEL蛋白(rGroEL)对金地鼠的免疫保护作用。方法:采用高保真PCR扩增问号钩体赖株groEL基因并测序,常规方法构建groEL基因原核表达系统。采用SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检查rGroEL表达情况及其可溶性,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL。观察rGroEL免疫金地鼠对问号钩体赖株感染的保护率。采用MAT法检测免疫动物血清与我国流行问号钩体血清群交叉凝集效价。结果:所克隆的groEL基因核苷酸和氨基酸序列与GenBank中相应基因完全相同。所构建的groEL基因原核表达系统能表达可溶性rGroEL。100和200μgrGroEL对金地鼠的免疫保护率分别为50.0%和75.0%。rGroEL免疫金地鼠血清可不同程度地凝集各问号钩体血清群。结论:GroEL蛋白是问号钩体属特异性保护性抗原,可用于制备通用性钩体基因工程疫苗。 展开更多

关键词 问号钩端螺旋体 groel蛋白质 遗传学 重组 遗传 基因表达 序列分析 DNA 免疫法 被动 groel基因 原核表达 免疫保护

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新疆伊宁人源植物乳植杆菌的体外益生特性研究

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作者 陈丽澜 王明芳 +1 位作者 单宇晴 倪永清 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第5期153-160,共8页

植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)在自然界中分布广泛,是目前开发利用最广泛的乳酸菌物种之一,大多数开发利用的植物乳植杆菌来源于发酵食品或植物基材料。本研究选用分离自新疆伊宁维吾尔族和哈萨克族健康儿童粪便样品中... 植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)在自然界中分布广泛,是目前开发利用最广泛的乳酸菌物种之一,大多数开发利用的植物乳植杆菌来源于发酵食品或植物基材料。本研究选用分离自新疆伊宁维吾尔族和哈萨克族健康儿童粪便样品中的植物乳植杆菌,经指纹图谱去除相同条带,挑选出20株代表菌株;指纹图谱聚类结果将菌株分为3个大类,相同民族和年龄段来源的菌株更倾向于聚集在同一小分支上;从基于groEL基因构建的系统发育树上发现相同民族来源的菌株更倾向于聚集在一起;同时对20株菌株的酸、胆盐耐受性、自聚集、疏水性(二甲苯)、抑菌能力、抗生素敏感性、碳糖利用能力进行了体外检测。结果显示,菌株YLW2L-108-29、YLW2L-61-7、YLW1L-44-7耐酸(pH2.5)能力较好,YLW1L-44-6耐胆盐(0.3%浓度)能力最优,菌株YLW2L-61-7、YLW2L-57-4、YLW2L-66-30自聚集和疏水性结果最优,所有菌株在低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、麦芽糊精、棉子糖、D-海藻糖、果胶、水苏糖和大豆低聚糖上生长良好,大部分菌株在菊粉和抗性淀粉上生长较差,在低聚木糖上生长最差。结合抑菌和抗生素耐药结果,筛选出菌株YLW2L-61-7作为潜在的益生菌菌株开展后续研究,为开发适应区域人群的优良益生菌菌株及产品奠定基础。 展开更多

关键词 植物乳植杆菌 益生特性 groel基因 REP-PCR

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基于groEL基因检测云南家鼠鼠疫疫源地鼠类动物感染米库尔新埃立克体情况

4

作者 韦蓉 李紫薇 +5 位作者 罗云燕 汪娜 刘淑清 李进春 卢江丽 尹家祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期689-695,共7页

目的调查云南家鼠鼠疫疫源地鼠类动物感染米库尔新埃立克体情况。方法以云南省梁河县、芒市和弥勒市鼠疫疫源地为采样点,使用夹夜法捕捉鼠类动物,并收集脾脏样本。采用巢式PCR技术检测脾脏样本中米库尔新埃立克体特异性groEL基因,并对... 目的调查云南家鼠鼠疫疫源地鼠类动物感染米库尔新埃立克体情况。方法以云南省梁河县、芒市和弥勒市鼠疫疫源地为采样点,使用夹夜法捕捉鼠类动物,并收集脾脏样本。采用巢式PCR技术检测脾脏样本中米库尔新埃立克体特异性groEL基因,并对阳性产物进行Sanger双向序列测定。应用χ2检验或Fisher确切概率法分析不同疫源地、生境、鼠种、性别间鼠类动物感染米库尔新埃立克体的情况。结果检测656份鼠类动物样本,在黄胸鼠、斯氏家鼠、北社鼠和青毛巨鼠上检出米库尔新埃立克体阳性12份,阳性率为1.83%。不同疫源地、生境、鼠种、性别间鼠类动物感染米库尔新埃立克体的阳性率均无统计学差异(P>0.05)。基于groEL基因的遗传进化分析,12份阳性样本核酸序列内部的同源性在99.5%~100%,米库尔新埃立克体核酸序列处于同一分支,为ClusterⅣ型。结论云南家鼠鼠疫疫源地4种鼠类动物存在米库尔新埃立克体低度感染。 展开更多

关键词 米库尔新埃立克体 groel基因 阳性率 鼠类 家鼠鼠疫疫源地

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2009-2012年河北鼠型斑疹伤寒流行概况及实验室调查分析 被引量：7

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作者 孙印旗 董妥 +4 位作者 姜霞 王勇 钱振宇 刘晓丽 张丽娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期552-555,共4页

目的对2009-2012年河北省斑疹伤寒高发地区临床报告病例进行实验室调查分析。方法按我国卫生部《流行性和地方性斑疹伤寒诊断标准》(WS 215-2008)在临床可疑病例高发地区设立哨点监测医院并收集病例。临床病例进行个案登记并进行发病急... 目的对2009-2012年河北省斑疹伤寒高发地区临床报告病例进行实验室调查分析。方法按我国卫生部《流行性和地方性斑疹伤寒诊断标准》(WS 215-2008)在临床可疑病例高发地区设立哨点监测医院并收集病例。临床病例进行个案登记并进行发病急性期及恢复期血液标本的收集。实验室检测按WHO推荐的立克次体血清学诊断方法-间接免疫荧光法检测病人血清IgM和IgG特异抗体。以急性期血液DNA为模板,采用巢氏PCR扩增斑疹伤寒群立克次体热休克蛋白基因groEL基因并测序。通过NCBI Blast平台同源比较序列并使用DNASTAR软件进行遗传进化分析。结果本次调查在辛集市、定州市和迁安市共收集877例临床报告病例,2009年报告病例数最多(441例),迁安市病例数最多(510例)。急性期血清莫氏立克次体IgM抗体阳性率为72.8%(73/101),IgG阳性率为78.2%(79/101)。12人通过血清IgG抗体4倍升高或降低明确诊断。PCR扩增阳性率为21.7%(22/101),成功测序的17人groEL(209bp)基因100%同源,与其他地区序列存在较大变异,与标准株R.typhi Wilmington(AY191590)核苷酸97.0%,氨基酸只有93.9%同源,进化分析与其他菌株遗传关系较远。结论河北省辛集、定州和迁安地区存在鼠型斑疹伤寒流行。进一步调查传播媒介及宿主对该病的预防控制具有重要公共卫生意义。加强该病临床诊断及鉴别诊断十分必要。 展开更多

关键词 鼠型斑疹伤寒 莫氏立克次体 groel基因 分子流行病学特征

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GroEL基因抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的研究 被引量：5

6

作者 彭宏 余文贵 +5 位作者 赵统敏 张保龙 倪万潮 吴丹 杨玛丽 赵丽萍 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期371-377,共7页

利用烟粉虱体内GroEL基因,构建了具有抗生素标记的SUC2-GroEL和无抗生素标记的CaMV35S-PDRB10 2个植物表达载体。通过农杆菌介导法转化番茄,获得抗性再生苗。对抗性植株进行PCR、RT-PCR以及病毒检测。PCR检测结果表明:SUC2-GroEL载体和C... 利用烟粉虱体内GroEL基因,构建了具有抗生素标记的SUC2-GroEL和无抗生素标记的CaMV35S-PDRB10 2个植物表达载体。通过农杆菌介导法转化番茄,获得抗性再生苗。对抗性植株进行PCR、RT-PCR以及病毒检测。PCR检测结果表明:SUC2-GroEL载体和CaMV35S-PDRB10载体转化的阳性植株分别有11株和9株。RT-PCR检测结果显示:SUC2-GroEL载体和CaMV35S-PDRB10载体转化植株分别有6株和2株检测到GroEL基因特异条带,说明GroEL基因在转录水平得到表达。农杆菌病毒接种和带毒烟粉虱传毒检测结果显示,SUC2-GroEL载体转基因植株3、4和5号和CaMV35S-PDRB10载体转基因植株5号均未表现发病症状,证明利用GroEL基因抗番茄黄化曲叶病毒具有可行性,而且SUC2启动子诱导的GroEL抗性更加理想。 展开更多

关键词 番茄黄化曲叶病毒 groel基因 转化

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烟草转GroEL基因抗双生病毒的研究 被引量：5

7

作者 吴丹 张保龙 +2 位作者 倪万潮 王荣富 张云华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期260-264,共5页

双生病毒是全球性的重要植物病毒,为提高植物对此病毒的抗性,分离了烟粉虱体内GroEL基因,将其连接到棉花韧皮部特异启动子PGHNBS下游,构建到植物表达载体PBI121上,采用农杆菌介导法转化烟草,获得抗性苗。对抗性植株进行PCR、RT-PCR和病... 双生病毒是全球性的重要植物病毒,为提高植物对此病毒的抗性,分离了烟粉虱体内GroEL基因,将其连接到棉花韧皮部特异启动子PGHNBS下游,构建到植物表达载体PBI121上,采用农杆菌介导法转化烟草,获得抗性苗。对抗性植株进行PCR、RT-PCR和病毒侵染检测,结果表明:GroEL基因已经整合到烟草基因组中,并且在转录水平上表达。病毒侵染检测结果显示转基因烟草植株中没有检测到病毒,证明韧皮部特异表达GroEL基因抗双生病毒是可行的。 展开更多

关键词 烟粉虱 双生病毒 groel基因 烟草 转化

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恙虫病东方体环介导等温扩增可视化快速检测方法的建立 被引量：1

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作者 曾志伟 韩腾伟 +4 位作者 刘维俊 刘菁 徐国英 王加熊 周淑姮 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期326-331,共6页

目的利用环介导等温扩增(LAMP)可视化检测技术,建立一种灵敏、特异和简便的恙虫病检测方法。方法利用LAMP在线引物设计软件Primer Explorer V4,以恙虫病东方体热休克蛋白groEL基因作为靶序列,设计扩增引物,优化反应条件。利用恙虫病东... 目的利用环介导等温扩增(LAMP)可视化检测技术,建立一种灵敏、特异和简便的恙虫病检测方法。方法利用LAMP在线引物设计软件Primer Explorer V4,以恙虫病东方体热休克蛋白groEL基因作为靶序列,设计扩增引物,优化反应条件。利用恙虫病东方体标准株评估灵敏度和特异度;收集42份恙虫病血样,分别采用LAMP、普通PCR和实时荧光定量PCR方法进行验证。结果建立的LAMP方法可在61~65℃80 min内完成恙虫病东方体的快速检测,最低检测限为10拷贝/μL,高于普通PCR方法2个数量级,高于荧光定量PCR方法1个数量级;对8种常见的自然疫源性疾病病原体检测均为阴性,特异度为100%;对42份恙虫病血样采用3种方法检测,阳性率一致,均为21.4%(9/42)。结论本研究建立的恙虫病东方体LAMP可视化检测反应快速,操作简便,灵敏特异,可在基层医疗卫生机构运用推广。 展开更多

关键词 恙虫病东方体 环介导等温扩增 groel基因 可视化检测

原文传递

类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析 被引量：4

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作者 黄海峰 张振兴 +9 位作者 杨小健 曹瑞勇 李宝宝 聂鑫 朱姝 李国华 彭冬梅 李亚颖 王凤阳 杜丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期302-309,共8页

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段... 试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段,将其连接至pMD19-T载体,构建pMD19-T-groEL重组质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定正确后,构建重组质粒pET-28a(+)-groEL。将鉴定正确的pET-28a(+)-groEL质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定,利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现,试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达,表达的融合蛋白大小约为64 ku,GroEL蛋白的分子式为C4510H7381N1641O1840S521,原子总个数为15 893,消光系数为32 500,不稳定指数为40.31,亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、无规则卷曲(Cc)分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 groel基因 克隆 原核表达 蛋白质鉴定 生物信息学分析

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不同启动子在转基因烟草中抗番茄黄化曲叶病毒的研究 被引量：3

10

作者 吴丹 张保龙 +4 位作者 杨郁文 倪万潮 赵统敏 张云华 王荣富 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期55-60,共6页

为了提高植物对番茄黄化曲叶病毒的抗性,利用CaMV35S启动子、棉花韧皮部特异启动子PGHNBS、拟南芥韧皮部特异启动子SUC2分别构建了含有不同启动子控制下的烟粉虱内GroEL基因的植物表达载体P-Gro-EL、P-PGHNBS-GroEL、P-SUC2-GroEL。通... 为了提高植物对番茄黄化曲叶病毒的抗性,利用CaMV35S启动子、棉花韧皮部特异启动子PGHNBS、拟南芥韧皮部特异启动子SUC2分别构建了含有不同启动子控制下的烟粉虱内GroEL基因的植物表达载体P-Gro-EL、P-PGHNBS-GroEL、P-SUC2-GroEL。通过农杆菌介导转化法,获得了一批抗卡那霉素的转化再生烟草植株。RT-PCR结果表明,3个启动子皆驱动GroEL基因在转基因烟草中表达。对转化再生烟草的一次病毒注射侵染结果显示,共有19株抗性烟草植株,其中,转P-GroEL载体的有7株,转P-PGHNBS-GroEL和P-SUC2-GroEL载体的各有6株;2次病毒注射侵染的结果显示,获得7株抗性烟草植株,它们是转P-GroEL载体的1株、转P-PGHNBS-GroEL和P-SUC2-GroEL载体的各3株。2次接种的试验结果表明,PGHNBS和SUC2转基因烟草植株的抗病效果均比CaMV35S转基因植株明显。证明利用韧皮部特异表达GroEL基因可以获得抗番茄黄化曲叶病毒的转基因植物。 展开更多

关键词 烟粉虱 番茄黄化曲叶病毒(TYLCV) 双生病毒 groel基因 启动子 烟草转化

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新疆绵羊种布鲁氏菌GroEL基因的克隆及序列分析 被引量：3

11

作者 刘辉 陈创夫 +2 位作者 许程剑 王远志 韩亚杰 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第6期683-686,共4页

参考牛种布鲁氏菌的GroEL(热休克蛋白)基因设计引物,扩增出新疆绵羊种布鲁氏菌GroEL基因片段,将其片段克隆到T载体上测序。结果表明:新疆源布鲁氏菌GroEL基因片段长1641bp,编码546个氨基酸,与羊种(B.melitensis)、猪种(B.suis)以及牛种(... 参考牛种布鲁氏菌的GroEL(热休克蛋白)基因设计引物,扩增出新疆绵羊种布鲁氏菌GroEL基因片段,将其片段克隆到T载体上测序。结果表明:新疆源布鲁氏菌GroEL基因片段长1641bp,编码546个氨基酸,与羊种(B.melitensis)、猪种(B.suis)以及牛种(B.abortus)GroEL基因的核苷酸序列同源性分别为99.88%、99.82%、99.88%,推导的氨基酸序列同源性在99%以上,显示了很强的保守性。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 groel基因 克隆 序列分析

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烟粉虱内共生菌传毒相关groEL基因的克隆及其原核表达 被引量：2

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作者 谭周进 谢丙炎 +2 位作者 肖启明 杨宇红 冯兰香 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期314-318,共5页

烟粉虱内共生菌 groEL基因编码一种 6 3kD的GroEL蛋白 ,利用一对特异性引物 ,通过PCR对长期培养在黄瓜上的烟粉虱体内 groEL基因进行了扩增 ,序列测定表明其长度为 16 6 8bp ,编码 5 5 5个氨基酸 ,与GenBank中烟粉虱内共生菌 groEL(AF13... 烟粉虱内共生菌 groEL基因编码一种 6 3kD的GroEL蛋白 ,利用一对特异性引物 ,通过PCR对长期培养在黄瓜上的烟粉虱体内 groEL基因进行了扩增 ,序列测定表明其长度为 16 6 8bp ,编码 5 5 5个氨基酸 ,与GenBank中烟粉虱内共生菌 groEL(AF130 4 2 1)的核苷酸同源性为 99.5 8%,仅 7个核苷酸发生了变异 ,二者氨基酸序列同源性为 99.2 8%,仅 4个氨基酸有别。构建了一个原核表达载体 ,表达得到了 展开更多

关键词 烟粉虱 内共生细菌 传毒相关基因 groel基因 基因克隆 原核表达 蚜虫

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猪丹毒杆菌的分离鉴定及药敏试验研究 被引量：2

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作者 张瑞华 任丹宁 +4 位作者 高善颂 窦心怡 张丹萍 李焕发 韩先杰 《山东农业科学》 北大核心 2021年第10期123-127,共5页

为明确引起山东某猪场猪群暴发临床急性死亡的主要致病菌,本研究采用生化鉴定试验、动物试验,并利用PCR方法扩增分离菌的GroEl基因片段进行菌株鉴定;同时通过药敏试验分析该菌的耐药性。结果表明,该菌为猪丹毒杆菌(命名为SD-196403),能... 为明确引起山东某猪场猪群暴发临床急性死亡的主要致病菌,本研究采用生化鉴定试验、动物试验,并利用PCR方法扩增分离菌的GroEl基因片段进行菌株鉴定;同时通过药敏试验分析该菌的耐药性。结果表明,该菌为猪丹毒杆菌(命名为SD-196403),能够发酵葡萄糖、果糖和乳糖,不能发酵蔗糖、鼠李糖等。小鼠攻毒试验表明该菌有很强的致病力。药敏试验结果表明该菌对头孢克肟、恩诺沙星、氨苄西林和卡那霉素等敏感,对林可霉素耐药。 展开更多

关键词 猪丹毒杆菌 groel基因 生化鉴定 药敏试验

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运用限制性长度多态性和单链构象多态性技术鉴别大肠杆菌血清型 被引量：1

14

作者 洪帮兴 冯志博 钟跃星 《新乡医学院学报》 CAS 2004年第2期86-89,共4页

目的　扩增大肠杆菌GroEL基因并通过限制性长度多态性 (RFLP)和单链构象多态性 (SSCP)分析 ,探讨进行大肠杆菌血清型鉴定的可行性。方法　选择大肠杆菌GroEL基因作为鉴别的靶基因 ,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增 ,并对 5种不同血... 目的　扩增大肠杆菌GroEL基因并通过限制性长度多态性 (RFLP)和单链构象多态性 (SSCP)分析 ,探讨进行大肠杆菌血清型鉴定的可行性。方法　选择大肠杆菌GroEL基因作为鉴别的靶基因 ,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增 ,并对 5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析。结果　运用通用引物可以扩增出 5种不同血清型大肠杆菌的GroEL基因 ,PstI酶切产物的RFLP分析表明 ,不同血清型大肠杆菌表现出不同的RFLP图谱 ,SSCP分析表明 ,图谱变异性更大 ,有利于进行血清型鉴别甚至株间的鉴别。结论　运用PCR RFLP和PCR 展开更多

关键词 groel基因 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 单链构象多态性 大肠杆菌

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16S rRNA和recA、groEL基因分类鉴定乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的比较 被引量：1

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作者 徐海燕 吕嫱 +4 位作者 孙志宏 于洁 张家超 孟和毕力格 张和平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2237-2245,共9页

【目的】比较16S rRNA和recA、groEL基因部分序列用于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种分类鉴定的效果。【方法】对已鉴定的8株分离自传统发酵乳的乳酸乳球菌,选取recA和groEL基因片段,通过PCR扩增、测序,将测序得到的序列比对后构建系统... 【目的】比较16S rRNA和recA、groEL基因部分序列用于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种分类鉴定的效果。【方法】对已鉴定的8株分离自传统发酵乳的乳酸乳球菌,选取recA和groEL基因片段,通过PCR扩增、测序,将测序得到的序列比对后构建系统发育树,并与16S rRNA基因序列分析技术进行比较。【结果】比较分析不同菌株16S rRNA和recA、groEL基因的亲缘关系,recA、groEL基因可以准确地完成乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的区分和鉴定。【结论】recA和groEL基因序列分析可以实现乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的区分,因其具有快速、准确、稳定的特点,可适合于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种间的快速分类鉴定。 展开更多

关键词 乳酸乳球菌乳酸亚种 乳酸乳球菌乳脂亚种 RECA基因 groel基因 分类鉴定

原文传递

基于groEL基因序列鉴定丹毒丝菌属菌种 被引量：1

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作者 杨振龙 吾鲁木汗.那孜尔别克 恩特马克.布拉提白 《吉首大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第4期54-58,共5页

对4株红斑丹毒丝菌的16SrRNA基因和groEL基因进行测序及系统发育分析,探讨groEL基因序列分析法在丹毒丝菌属菌种分类鉴定中的应用.测序结果表明,4株红斑丹毒丝菌groEL基因长度为1 614bp,编码由537个氨基酸残基组成热休克蛋白HPS60,与红... 对4株红斑丹毒丝菌的16SrRNA基因和groEL基因进行测序及系统发育分析,探讨groEL基因序列分析法在丹毒丝菌属菌种分类鉴定中的应用.测序结果表明,4株红斑丹毒丝菌groEL基因长度为1 614bp,编码由537个氨基酸残基组成热休克蛋白HPS60,与红斑丹毒丝菌ATCC19414株和扁桃体丹毒丝菌ATCC43339株groEL基因的同源性分别为99%和86%,而16SrRNA基因长度为1 351bp,与红斑丹毒丝菌ATCC19414株和扁桃体丹毒丝菌ATCC43339株的同源性均为99%.系统发育分析结果表明,groEL基因比经典的16SrRNA基因序列分析分辨率高,可适用于红斑丹毒丝菌和扁桃体丹毒丝菌的分类鉴定. 展开更多

关键词 红斑丹毒丝菌 扁桃体丹毒丝菌 16S RRNA基因 groel基因 分类鉴定

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滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物斑点热群立克次体和莫氏立克次体感染调查

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作者 贺琪楠 罗云燕 +4 位作者 刘思彤 洪汝丹 艾志琼 朱俊洁 尹家祥 《中华地方病学杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期966-971,共6页

目的了解滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物斑点热群立克次体(spotted fever group Rickettsiae,SFGR)和莫氏立克次体(Rickettsia mooseri,R.mooseri)感染情况。方法应用磁珠法提取2015-2016年自滇西梁河县、剑川县和玉龙县鼠疫疫源地捕获的2... 目的了解滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物斑点热群立克次体(spotted fever group Rickettsiae,SFGR)和莫氏立克次体(Rickettsia mooseri,R.mooseri)感染情况。方法应用磁珠法提取2015-2016年自滇西梁河县、剑川县和玉龙县鼠疫疫源地捕获的2512只野外鼠形动物肝脏样本DNA,选用热休克蛋白groEL基因引物进行巢式PCR扩增。分别采用DNAStar 7.1软件和美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GenBank进行基因序列剪切、拼接和Blast同源性比对分析,同时采用DNAStar 7.1软件和MEGA 6.0软件构建系统发育树。结果感染SFGR的野外鼠形动物有锡金小鼠、斯氏家鼠、灰麝鼩和臭鼩鼱(各1只),总感染率为0.16%(4/2512);未检出R.mooseri感染。梁河县和剑川县鼠疫疫源地野外鼠形动物SFGR感染率分别为0.49%(3/611)和0.10%(1/1029),玉龙县鼠疫疫源地野外鼠形动物未检出SFGR感染。同源性分析显示,SFGR阳性样本的基因序列与参考序列同源性为95.45%~100.00%;4份阳性样本间groEL基因部分序列高度相似,同源性达89.60%~97.40%。序列进化分析显示,梁河县鼠疫疫源地的3个SFGR阳性样本序列聚在同一分支,同源性达94.40%~97.40%;剑川县鼠疫疫源地的1个阳性样本序列单独为1个分支。结论滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物SFGR感染率较低,未发现R.mooseri感染。 展开更多

关键词 斑点热群立克次体 莫氏立克次体 鼠形动物 groel基因 鼠疫疫源地

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海南省发热患者血标本中恙虫病东方体groEL基因检测 被引量：1

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作者 吴捷 王少玲 +7 位作者 金玉明 马焱 曾祥洁 贾鹏本 吴维学 苏新元 李沅 聂绍发 《中国热带医学》 CAS 2014年第6期670-672,共3页

目的了解海南省发热病人中感染恙虫病东方体的状况，并确定其基因分型。方法利用巢氏PCR方法，检测海南省各家医院2009～2010年送检的117份不明原因发热病人血标本的groEL基因的特异性片段，对所检测到的部分目的片段进行基因测序，从... 目的了解海南省发热病人中感染恙虫病东方体的状况，并确定其基因分型。方法利用巢氏PCR方法，检测海南省各家医院2009～2010年送检的117份不明原因发热病人血标本的groEL基因的特异性片段，对所检测到的部分目的片段进行基因测序，从基因水平进一步证实阳性结果，并对序列同源性及进化分析。结果从117份发热病人血标本中发现有恙虫病东方体阳性15份，检出率为12．8％。取10份PCR阳性产物进行测序，核酸序列基本一致，彼此间仅存在3个核苷酸的差异，构建进化树进行聚类分析，结果示海南省恙虫病东方体序列与R．tsutsugamushi（M31887）恙虫病东方体在同一分支上，同源性高。结论海南省发热病人中存在恙虫病东方体感染的状况，应加强相关监测和防控措施，为给海南省制定恙虫病防治策略提供科学依据。 展开更多

关键词 恙虫病东方体 热休克蛋白 groel基因 巢式PCR

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基于绵羊无浆体Groel基因的PCR方法的建立 被引量：1

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作者 赵姗姗 彭永帅 +3 位作者 王坤轮 闫亚群 菅复春 宁长申 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期891-895,共5页

利用绵羊无浆体(Anaplasma ovis)高度保守的Groel基因,建立了快速、特异、敏感的绵羊无浆体检测方法。根据GenBank上登录的绵羊无浆体Groel基因序列(FJ460438),设计1对特异性引物,建立了绵羊无浆体PCR检测方法,并对其进行特异性、敏感... 利用绵羊无浆体(Anaplasma ovis)高度保守的Groel基因,建立了快速、特异、敏感的绵羊无浆体检测方法。根据GenBank上登录的绵羊无浆体Groel基因序列(FJ460438),设计1对特异性引物,建立了绵羊无浆体PCR检测方法,并对其进行特异性、敏感性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,该方法能特异性地检测绵羊无浆体,与山羊无浆体、嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、边缘无浆体、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、羊附红细胞体、弓形虫基因组均无交叉反应;该方法检测下限可达到7.7×10-15 g·μL-1,比文献报道的PCR敏感10倍(77×10-15 g·μL-1);具有良好的重复性;对81份羊临床血液样品检测结果表明,绵羊无浆体感染率为32.1%(26/81),高于文献报道的PCR(MSP4基因)检测结果(18.5%,15/81)。 展开更多

关键词 绵羊无浆体 无浆体病 groel基因 聚合酶链式反应

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烟粉虱内共生菌传毒相关groEL基因dsRNA载体的构建及其在烟草中的表达

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作者 唐前君 张德咏 +3 位作者 刘勇 李基光 谢丙炎 肖启明 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期620-625,共6页

烟粉虱内共生菌groEL基因编码一种与植物病毒传毒相关的GroEL蛋白.以B型烟粉虱为研究对象,利用1对特异引物,对B型烟粉虱体内的groEL基因进行PCR扩增,选取502 bp groEL基因片段构建dsRNA,并将其连接植物表达载体pBIN19,将重组质粒电激转... 烟粉虱内共生菌groEL基因编码一种与植物病毒传毒相关的GroEL蛋白.以B型烟粉虱为研究对象,利用1对特异引物,对B型烟粉虱体内的groEL基因进行PCR扩增,选取502 bp groEL基因片段构建dsRNA,并将其连接植物表达载体pBIN19,将重组质粒电激转化农杆菌菌株LBA4404.采用农杆菌浸染转化本氏烟草,PCR筛选表明,目的片段已整合至转基因植株的基因组DNA;RT-PCR结果表明,502 bp的groEL基因片段在转基因植株中被转录. 展开更多

关键词 烟粉虱 groel基因 内共生菌 病毒结合蛋白 双生病毒 植物表达载体

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