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纳米探针芯片技术用于微量乙肝病毒DNA的检测 被引量：12
1
作者 汪毅 毛红菊 +3 位作者 臧国庆 张宏莲 金庆辉 赵建龙 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1133-1138,共6页
利用两组探针修饰的微粒:(1)表面标记有可与待测乙肝病毒(HBV)DNA另一端结合的纳米金探针1(信号探针)以及可与信号探针部分结合的纳米金探针2(检测探针);(2)表面标记有可与待测HBVDNA一端结合的磁珠探针(捕捉探针1)。检测靶HBV DNA时,... 利用两组探针修饰的微粒:(1)表面标记有可与待测乙肝病毒(HBV)DNA另一端结合的纳米金探针1(信号探针)以及可与信号探针部分结合的纳米金探针2(检测探针);(2)表面标记有可与待测HBVDNA一端结合的磁珠探针(捕捉探针1)。检测靶HBV DNA时,磁珠探针与信号探针在液相中可分别与HBV DNA靶序列一端结合最终形成三明治样结构。再以磁场将三明治样复合物从反应液中分离,以DTT溶液将信号探针从纳米金颗粒上洗脱。洗脱后的信号探针数量反映靶基因的多寡,信号探针一段与预先点样的基因芯片上的捕捉探针2结合,检测探针与信号探针另一段相结合,最后用银染液将检测探针显色从而得到靶目标DNA相对定量信息。结果表明,本检测方法的检测灵敏度达到10-15mol/L水平。检测时间少于1.5h,检测结果与HBV DNA水平呈现较好的线性关系且无假阳性结果;本方法有望用于乙肝病人血清中HBV DNA的快速筛测及其它微生物基因的检测。 展开更多
关键词 乙肝病毒DNA 纳米金探针 生物条形码扩增 纳米探针芯片
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基于纳米金复合探针的基因芯片膜转印检测法 被引量：4
2
作者 李海燕 景奉香 +4 位作者 高秋月 贾春平 陈季武 金庆辉 赵建龙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1135-1142,共8页
建立了一种基于纳米金复合探针的基因芯片膜转印核酸检测新方法。首先,用纳米金颗粒同时标记检测探针P2和两种长短不同且生物素化的信号探针(T10,T40),其中检测探针与靶DNA5′端互补,两种信号探针起信号放大作用。当靶DNA分子存在时,芯... 建立了一种基于纳米金复合探针的基因芯片膜转印核酸检测新方法。首先,用纳米金颗粒同时标记检测探针P2和两种长短不同且生物素化的信号探针(T10,T40),其中检测探针与靶DNA5′端互补,两种信号探针起信号放大作用。当靶DNA分子存在时,芯片表面捕捉探针P1(与靶DNA分子3′端互补)通过碱基互补配对原则结合靶DNA分子,将其固定于芯片上,同时检测探针通过与靶DNA5′端互补配对将纳米金复合探针结合于芯片表面,结果在芯片表面形成"三明治"结构,后通过链霉亲和素-生物素反应,使芯片表面对应有靶DNA分子的部位结合上碱性磷酸酶,最后利用BCIP/NBT显色系统使芯片表面信号结果镜面转印至尼龙膜表面。当检测探针和信号探针摩尔比为1∶10,T10和T40摩尔比为9∶1时可以检测1pmol/L合成靶DNA分子或0.23pmol/L结核分枝杆菌16S rDNA PCR扩增产物,检测结果通过普通的光学扫描仪读取或肉眼直接判读信号有无。本芯片检测系统灵敏度高,操作方法简单、快速,不需要特殊仪器设备,在生物分子的检测方面具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 纳米金复合探针 基因芯片膜转印检测法 杂交 DNA检测
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基于多肽微阵列芯片的荧光和共振光散射法筛选凝血酶抑制剂 被引量：3
3
作者 苏敏 李桃 +1 位作者 刘殿骏 王振新 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期199-206,共8页
研制了一种基于多肽微阵列芯片的荧光和共振光散射双通路检测方法,对血液样品中的凝血酶抑制剂进行检测。以生物素化的多肽微阵列芯片为反应平台,加入凝血酶水解多肽上的特异位点使其C末端的生物素解离,通过亲和素和生物素之间的特异性... 研制了一种基于多肽微阵列芯片的荧光和共振光散射双通路检测方法,对血液样品中的凝血酶抑制剂进行检测。以生物素化的多肽微阵列芯片为反应平台,加入凝血酶水解多肽上的特异位点使其C末端的生物素解离,通过亲和素和生物素之间的特异性结合,用荧光探针和30 nm金纳米粒子探针标记此反应过程。凝血酶抑制剂阻止凝血酶对底物多肽的水解反应,通过荧光和共振光散射信号强度的变化检测抑制剂的抑制能力。酶溶液和加标人血清中测定的半抑制浓度(IC50)值:阿加曲班<抗凝血酶Ⅲ<4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐,IC50差的绝对值随抑制剂特异性的减弱而增大。当抑制剂浓度为7.5μmol/L时,血浆中5种化合物的抑制能力:阿加曲班>抗凝血酶Ⅲ>胰蛋白酶抑制剂>N-(反式-环氧丁二酰基)-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺>4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐。在血浆中考察了阿加曲班和抗凝血酶Ⅲ的可逆性。对比荧光法和共振光散射法在血液样品中的检测结果,用30 展开更多
关键词 多肽微阵列 金纳米粒子探针 共振光散射 半抑制浓度 凝血酶抑制剂
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纳米金标记p53抗体探针在p53蛋白检测中的应用 被引量：1
4
作者 黄云艳 刘美英 +3 位作者 贾春平 赵林川 金庆辉 赵建龙 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第6期839-843,共5页
目的利用纳米金粒子静电吸附抗体和与巯基修饰的寡核苷酸以Au-S键共价结合的特点制备多功能纳米金探针,结合免疫磁珠探针技术建立一种新的、高灵敏的免疫检测体系。方法纳米金探针表面标有两种蛋白分子和一种寡核苷酸链:检测抗体(免疫... 目的利用纳米金粒子静电吸附抗体和与巯基修饰的寡核苷酸以Au-S键共价结合的特点制备多功能纳米金探针,结合免疫磁珠探针技术建立一种新的、高灵敏的免疫检测体系。方法纳米金探针表面标有两种蛋白分子和一种寡核苷酸链:检测抗体(免疫检测中结合待测抗原);辣根过氧化物酶(HRP,信号扩增作用);巯基化DNA链(作为"桥梁"连接纳米金颗粒和HRP分子)。捕获抗体(捕获待测抗原蛋白)修饰的微型磁珠探针作为p53蛋白检测固相支撑物。目标蛋白p53存在时,通过抗原抗体反应形成三明治结构(磁珠探针—目标蛋白—纳米金探针)。结果最佳条件下,该蛋白检测体系可检测到最低浓度为30 pg/ml的p53蛋白,与酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法相比,检测效果较好。结论该法操作过程简单,灵敏度高、重复性较佳,费用低廉,在临床微量蛋白检测中具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 多功能纳米金探针 免疫磁珠探针 P53蛋白 HRP ELISA
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检测肿瘤标志物CA125纳米金探针的制备及应用 被引量：2
5
作者 邹瑟音 夏勇 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第15期1976-1978,共3页
目的该研究应用自行设计合成的纳米金探针通过比色法定量检测CA125,并初步探讨其临床应用的可行性。方法将待检测的CA125捕获抗体连接到纳米金粒子表面制备纳米金探针,经过抗原抗体免疫反应形成纳米金聚集体,通过比色法定量检测CA125。... 目的该研究应用自行设计合成的纳米金探针通过比色法定量检测CA125,并初步探讨其临床应用的可行性。方法将待检测的CA125捕获抗体连接到纳米金粒子表面制备纳米金探针,经过抗原抗体免疫反应形成纳米金聚集体,通过比色法定量检测CA125。结果成功制备纳米金探针,可快速、简便检测患者血清中CA125的浓度,结果与病理确诊相一致,最低检测限为0.5U/mL,远低于传统的酶联免疫吸附试验。结论该纳米金探针制备简单、快速、容易操作、成本低廉,在临床尤其是基层医院早期检测卵巢癌标志物CA125具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 纳米金探针 卵巢肿瘤 肿瘤标记 生物学
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核酸条码标识法PSA检测试剂盒的研制及验证
6
作者 齐晖 孔小丽 +2 位作者 李富荣 任莉莉 周汉新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1142-1144,1148,共4页
目的:建立核酸条码标识法检测前列腺特异性抗原(PSA)的方法,临床血清标本验证灵敏度、特异性等指标,并与试剂盒ELISA及RIA检测结果比较。方法:采用自制免疫磁球和双标记纳米金探针,利用双抗体夹心法原理,将PSA的检测转化为对核酸条码片... 目的:建立核酸条码标识法检测前列腺特异性抗原(PSA)的方法,临床血清标本验证灵敏度、特异性等指标,并与试剂盒ELISA及RIA检测结果比较。方法:采用自制免疫磁球和双标记纳米金探针,利用双抗体夹心法原理,将PSA的检测转化为对核酸条码片段的检测,制备核酸条码法PSA检测试剂盒,对45例前列腺癌患者,45例前列腺良性增生患者,15例其它肿瘤患者,30例正常人群血清标本进行验证。结果:临床血清标本灵敏度约92,特异性约为68,假阳性率32,检测平均回收率大于95,批内变异系数(CV)为6.24,重复性平行性良好。与ELISA及RIA进口试剂盒检测结果比较,三法的差异无显著性(P>0.05),相关性良好,吻合度强。结论:建立的核酸条码标识PSA检测方法,为超微量蛋白质检测提供一种新的方法。 展开更多
关键词 前列腺特异性抗原 免疫磁球 纳米金探针 核酸条码 检测
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浊点萃取-纳米金探针联用可视化检测鱼肉中的Hg^(2+) 被引量：1
7
作者 王正 王晓伟 +4 位作者 郭蒙京 李倩 薛颖 沙博郁 赵婕 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第8期3197-3201,共5页
目的建立一种浊点萃取与纳米金探针联用快速可视化检测鱼肉中Hg^(2+)的方法。方法修饰的纳米金粒子与Hg^(2+)的特异性络合,经浊点萃取进入有机相,并出现可肉眼观察的红色沉淀。根据有机相中沉淀量的多少或颜色深浅可判定Hg2+的浓度。结... 目的建立一种浊点萃取与纳米金探针联用快速可视化检测鱼肉中Hg^(2+)的方法。方法修饰的纳米金粒子与Hg^(2+)的特异性络合,经浊点萃取进入有机相,并出现可肉眼观察的红色沉淀。根据有机相中沉淀量的多少或颜色深浅可判定Hg2+的浓度。结果 Hg^(2+)的浓度在1~15μg/L范围内,沉淀量和沉淀颜色与溶液中的Hg^(2+)的浓度呈正相关。本方法肉眼可识别的Hg^(2+)的浓度最低为2μg/L。结论本方法对Hg^(2+)的选择性好、灵敏度较高、检测时间短、操作简便,可用于鱼肉中Hg^(2+)的的快速定性分析。 展开更多
关键词 浊点萃取 纳米金探针 可视化检测 汞 鱼
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新型比色法快速测定天然矿泉水中的痕量汞离子
8
作者 王正 王晓伟 +3 位作者 薛颖 赵榕 罗仁才 陈东 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期640-644,共5页
目的运用浊点萃取与纳米金探针联用技术,建立快速可视化检测天然矿泉水中汞离子的方法。方法合成可与汞离子特异性结合的小粒径纳米金探针,在pH 7.5条件下,于10 mL样品中加入200μL纳米金探针溶液和400μL 5%的Triton X-114进行浊点萃取... 目的运用浊点萃取与纳米金探针联用技术,建立快速可视化检测天然矿泉水中汞离子的方法。方法合成可与汞离子特异性结合的小粒径纳米金探针,在pH 7.5条件下,于10 mL样品中加入200μL纳米金探针溶液和400μL 5%的Triton X-114进行浊点萃取,样品中的汞离子可进入Triton X-114相生色,通过观察Triton X-114相颜色的变化以及分光光度计检测,实现天然矿泉水中痕量汞离子的定性与定量检测。结果本方法肉眼可识别的汞离子浓度最低为5μg/L,分光光度法的检出限为1.8μg/L,线性范围为0~50μg/L,相关系数0.9945,分光光度法浓度测定结果与电感耦合等离子质谱法测定结果一致。结论该方法灵敏度高,检测时间短,操作简便,可用于天然矿泉水中汞离子的快速定性以及定量检测。 展开更多
关键词 浊点萃取 纳米金探针 比色法 汞离子
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纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫病毒核酸的研究 被引量：9
9
作者 陶春爱 邱文英 +1 位作者 李刚 田康乐 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期89-94,共6页
试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到... 试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳米金颗粒上。靶核酸两端分别与两条探针结合,形成"生物素化探针-靶核酸-纳米金探针"复合物,该复合物通过生物素-亲和素系统,固定在固相载体上,最后银染放大信号。通过肉眼观察法、光镜观察法、分光光度法分析银染灰度,从而间接测定靶核酸的量。初步检测PPRV核酸最低浓度达10fmol/L,所需时间约为1.5h。该方法灵敏度高、操作简单,为临床检测小反刍兽疫病毒核酸提供实验数据和技术支持。 展开更多
关键词 纳米金 PPRV 核酸探针 银染
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