三七植物GAPDH基因克隆及序列分析 被引量：27

1

作者 朱华 李珅 +1 位作者 赵瑞强 吴耀生 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1316-1319,共4页

采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序... 采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序列与拟南芥、烟草、人参的GAPDH氨基酸序列的同源性分别为91%、93%、95%;核苷酸序列的同源性分别为82%、84%、85%. 展开更多

关键词 三七 gapdh基因 克隆

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刺五加GAPDH基因的克隆及序列分析 被引量：25

2

作者 邢朝斌 吴鹏 +2 位作者 陈龙 梁能松 何闪 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期155-158,共4页

目的对刺五加Eleutherococcus senticosus GAPDH基因进行克隆及序列分析,使其成为可用的内参照基因。方法采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,运用RT-PCR法克隆GAPDH基因的部分序列,并以其为内参照基因进行半定量PCR。结果克隆了长... 目的对刺五加Eleutherococcus senticosus GAPDH基因进行克隆及序列分析,使其成为可用的内参照基因。方法采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,运用RT-PCR法克隆GAPDH基因的部分序列,并以其为内参照基因进行半定量PCR。结果克隆了长度为627 bp的刺五加GAPDH基因,推测其编码209个氨基酸,与三七、人参、拟南芥的GAPDH氨基酸序列同源性分别为97%、93%、93%,核苷酸同源性分别为94%、86%、84%。其作为内参照基因的半定量PCR具有良好的扩增效果和重现性。结论首次分离并克隆了刺五加GAPDH cDNA,证实该序列可以作为基因表达分析的内参照基因,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机制研究奠定基础。 展开更多

关键词 刺五加 gapdh基因 克隆 序列分析 内参照基因

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小麦GAPDH基因克隆及序列分析 被引量：15

3

作者 岳彩凤 康国章 +3 位作者 刘超 郭天财 朱云集 沈丙权 《中国农学通报》 CSCD 2008年第4期94-98,共5页

采用Trizol法提取高质量小麦总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了小麦GAPDH(甘油醛三磷酸脱氢酶)基因的部分序列(EU022331),长度为604bp,核苷酸序列比对结果表明,该序列与大麦(M36650)、玉米(AY109397)、番茄(BT012693)GAPDH核苷酸序列的同源... 采用Trizol法提取高质量小麦总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了小麦GAPDH(甘油醛三磷酸脱氢酶)基因的部分序列(EU022331),长度为604bp,核苷酸序列比对结果表明,该序列与大麦(M36650)、玉米(AY109397)、番茄(BT012693)GAPDH核苷酸序列的同源性分别为95%、86%和84%。GAPDH基因的克隆为在禾谷类作物研究的应用提供了一个较好的对照基因。 展开更多

关键词 小麦 gapdh基因 半定量PCR

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鸭GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：10

4

作者 杨发龙 岳华 +1 位作者 谢秀兰 贾文祥 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第1期92-95,共4页

本研究旨在建立鸭GAPDH基因的real-time PCR技术,为鸭功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中鸭GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的real-time PCR方法.结果表明,所建立的方法具有快速、... 本研究旨在建立鸭GAPDH基因的real-time PCR技术,为鸭功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中鸭GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的real-time PCR方法.结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强等特点.研究结果为鸭GAPDH作为内参基因用于鸭相关基因定量表达分析奠定了基础. 展开更多

关键词 鸭 gapdh基因 REAL-TIMEPCR 内参基因

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北京市生菜链格孢根腐病病原菌鉴定 被引量：11

5

作者 石延霞 郭润婷 +1 位作者 张涛 李宝聚 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期658-662,共5页

为明确北京市生菜链格孢根腐病的病原菌种类,采用常规组织分离法分离获得病原菌,依据柯赫氏法则对病原菌进行致病力检测,并利用分子生物学技术结合形态学鉴定确定病原菌分类地位。结果显示,从生菜病样组织中分离到2种病原菌共18株,形态... 为明确北京市生菜链格孢根腐病的病原菌种类,采用常规组织分离法分离获得病原菌,依据柯赫氏法则对病原菌进行致病力检测,并利用分子生物学技术结合形态学鉴定确定病原菌分类地位。结果显示,从生菜病样组织中分离到2种病原菌共18株,形态学鉴定结果为芸薹链格孢Alternaria brassicae和万寿菊链格孢A.tagetica,分离比例分别为55.6%和44.4%,且二者均能单独侵染生菜根部,前者致病力较后者强,亦能复合侵染。对致病菌株进行GAPDH基因的PCR扩增和测序,并建立了基于GAPDH基因序列的系统发育树,聚类分析结果与形态学鉴定结果一致,因此证实北京市生菜链格孢根腐病是由芸薹链格孢和万寿菊链格孢复合侵染所致。 展开更多

关键词 生菜 gapdh基因 芸薹链格孢 万寿菊链格孢

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家兔GAPDH基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量：9

6

作者 高博 杨晓农 +2 位作者 于学辉 罗薇 黄河 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期69-73,共5页

根据GenBank登录的家兔GAPDH基因保守区域CDS序列设计1对引物,通过反应体系及反应条件优化,成功建立了检测家兔GAPDH基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。结果表明,该方法检测GAPDH的最低拷贝数为32拷贝/μL,在较广的范围内（3.2... 根据GenBank登录的家兔GAPDH基因保守区域CDS序列设计1对引物,通过反应体系及反应条件优化,成功建立了检测家兔GAPDH基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。结果表明,该方法检测GAPDH的最低拷贝数为32拷贝/μL,在较广的范围内（3.2×10^1-3.2×10^7拷贝/μL）有良好的线性关系（r=0.999）;熔解曲线分析显示扩增产物的特异性单峰,其Tm为（87±0.2）℃;5个不同浓度标准品组内试验变异系数为1.67%4.73%,组间试验变异系数为2.66%8.74%。该方法具有快速、灵敏、高通量及可重复性强等优点,为GAPDH基因作为内参基因进行家兔功能基因与病原基因表达的定量分析提供了方法学基础。 展开更多

关键词 家兔 gapdh基因 实时荧光定量RT-PCR 内参基因

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实时荧光PCR检测鸡GAPDH基因方法的建立 被引量：7

7

作者 李娅 韦平 +5 位作者 金元昌 韦信贤 杨先荣 牛搏学 梁韦芬 苏清康 《中国家禽》 北大核心 2008年第8期37-40,共4页

根据GenBank上鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehy-drogenase,GAPDH)基因的序列,在保守区域设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了荧光定量PCR法。采用梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行荧光定量... 根据GenBank上鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehy-drogenase,GAPDH)基因的序列,在保守区域设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了荧光定量PCR法。采用梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行荧光定量PCR并建立了标准曲线,经分析显示标准曲线的Ct值与标准品浓度的对数值之间存在良好的线性关系;动力学曲线分析表明,在本研究所建立的反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度都达到10拷贝/反应。实时荧光定量PCR检测GAPDH基因表达水平标准品质粒和标准曲线的建立,为GAPDH基因作为内参基因进行鸡功能基因与病原基因表达的定量分析奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡 gapdh基因 实时荧光定量PCR 内参基因

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家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析 被引量：6

8

作者 胡红元 任春丽 +4 位作者 尚小丽 陈明明 王宇 王涛 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第3期250-256,共7页

目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能... 目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。 展开更多

关键词 家蝇 gapdh基因 克隆表达 内参基因

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中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：6

9

作者 田月珍 黄锡霞 +8 位作者 狄江 田可川 吴伟伟 徐新明 哈尼克孜 付雪峰 张艳花 马依拉 艾买提 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1938-1943,共6页

【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR G... 【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析。【结果】以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=一3.679 51g/X+35.648,相关系数R=0.999 8;试验重复性好,批内和批间变异系数(CV%)分别为0.22%～3.45%和1.30%～4.89%。【结论】所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究。 展开更多

关键词 中国美利奴羊(新疆型) gapdh基因 RT—PCR 内参基因

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文心兰GAPDH基因片段的克隆及序列分析 被引量：4

10

作者 张国付 蒋素华 +3 位作者 崔波 袁秀云 田云芳 叶永忠 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期68-71,共4页

采用Trizol法提取文心兰花期花葶总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了文心兰GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)基因的2个部分序列,长度均为875 bp,编码291个氨基酸残基.序列分析结果表明,与其它已登录物种的GAPDH基因相比,其核苷酸序列的同源性均在79... 采用Trizol法提取文心兰花期花葶总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了文心兰GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)基因的2个部分序列,长度均为875 bp,编码291个氨基酸残基.序列分析结果表明,与其它已登录物种的GAPDH基因相比,其核苷酸序列的同源性均在79%以上,与蕙兰(JN177724.1)同源性高达到92%,氨基酸序列的同源性也在85%以上;且与单子叶植物的同源序列表现出较高的相似性.本研究已克隆出文心兰GAPDH基因的部分cDNA同源序列片段,分别命名为OnGA1和OnGA2,并在GenBank注册,登录号分别为JN981141和JN981142. 展开更多

关键词 文心兰 gapdh基因 克隆

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牛病毒性腹泻病毒1型和2型双重RT-PCR检测方法的建立 被引量：3

11

作者 王克栋 熊浩 +4 位作者 季新成 冉多良 彭武丽 于学辉 史茜 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期21-25,共5页

根据GenBank已发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因1型和2型毒株的5′端非编码区(5′-UTR)保守序列的差异,设计2对特异性引物,并以牛GAPDH基因为内标,设计1对特异性引物,建立牛病毒性腹泻病毒分型与内标三重RT-PCR检测方法。3对引物可分... 根据GenBank已发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因1型和2型毒株的5′端非编码区(5′-UTR)保守序列的差异,设计2对特异性引物,并以牛GAPDH基因为内标,设计1对特异性引物,建立牛病毒性腹泻病毒分型与内标三重RT-PCR检测方法。3对引物可分别扩增出的片段大小为127、94、152bp,与预期大小相符。经反应条件优化,该方法的灵敏度为10°TCID50,与不加内标检测灵敏度相当。经临床样品检测验证,该方法具有较好的特异性和重复性,可用来对牛病毒性腹泻病毒分型进行快速准确的检测。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 gapdh基因 基因分型 内标 双重RT-PCR

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猪GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：3

12

作者 韩建强 许文花 高斌 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期1282-1285,共4页

根据GenBank上猪GAPDH基因的序列设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了Real-time PCR方法。以阳性重组质粒为标准品,建立了标准曲线,并进行了融解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强... 根据GenBank上猪GAPDH基因的序列设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了Real-time PCR方法。以阳性重组质粒为标准品,建立了标准曲线,并进行了融解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强等特点。研究结果为GAPDH作为内参基因用于猪相关基因定量表达分析奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 gapdh基因 REAL-TIME PCR 内参基因

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双色荧光定量PCR快速诊断唐氏综合征 被引量：3

13

作者 罗红权 陈新敏 +2 位作者 梁家智 薛峰 丁显平 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第3期186-189,共4页

目的建立快速诊断唐氏综合征的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法及其应用于产前诊断唐氏综合征的可能性。方法合成21号染色体单拷贝基因DSCR1特异的引物和TaqMan探针以及1对非21号常染色体单拷贝基因GAPDH特异的引物和TaqMan探针,其中... 目的建立快速诊断唐氏综合征的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法及其应用于产前诊断唐氏综合征的可能性。方法合成21号染色体单拷贝基因DSCR1特异的引物和TaqMan探针以及1对非21号常染色体单拷贝基因GAPDH特异的引物和TaqMan探针,其中检测DSCR1基因的探针标记6-羧基荧光素(FAM),检测GAPDH基因的探针标记六氯(HEX)荧光素;提取患者和正常人外周血及胎儿羊水脱落细胞标本的DNA为模板,在同一PCR扩增管中同时进行2种基因的双色荧光定量聚合酶链反应(the double chromatogra-phy fluorescence quantitative polymerase chain reaction,DC-FQ-PCR),分别定量测定DSCR1基因和GAPDH基因的含量,并计算每个标本2种基因剂量的比值;采用该基因检测技术检测23例唐氏综合征患者、20名正常人和100例羊水,与染色体检查诊断结果对比,判断该技术在唐氏综合征基因诊断和产前诊断中的应用价值。结果在30μL FQ-PCR反应体系中,加入最少约0.05 ng基因组DNA能够稳定地获得扩增曲线;实验表明23例染色体检测为唐氏综合征患者的GAPDH与DSCR1的差值为0.65±0.17,以2-△CT方法计算DSCR1与GAPDH拷贝数的比值范围为1.77～1.39。而20例染色体检测为正常人的GAPDH与DSCR1的差值为0.06±0.18,计算DSCR1与GAPDH拷贝数的比值范围为1.18～0.92;2组间的差异有统计学意义。在100例羊水细胞的检测中,以DSCR1与GAPDH拷贝数的比值大于1.35为唐氏综合征的判定标准,发现2例为患儿,其余98例为正常,与染色体检查结果一致。结论双色荧光定量PCR检测唐氏综合征是一个可行的、快速的、准确的、高通量的、费用较为低廉的检测方法,该法在唐氏综合症的基因诊断和产前基因诊断具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 唐氏综合症 DSCR1基因 gapdh基因 双色荧光定量PCR

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箭筈豌豆甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因片段的克隆及序列分析 被引量：3

14

作者 张磊 刘志鹏 +2 位作者 张吉宇 张妙青 王彦荣 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期753-757,共5页

本研究预期通过同源克隆获得了箭筈豌豆(Vicia sativa)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的部分片段,为研究箭筈豌豆适应高海拔环境的分子机制奠定基础。根据近缘物种GAPDH基因序列设计1对引物,通过RT-PCR技术克隆获得了一段长度1 141 bp... 本研究预期通过同源克隆获得了箭筈豌豆(Vicia sativa)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的部分片段,为研究箭筈豌豆适应高海拔环境的分子机制奠定基础。根据近缘物种GAPDH基因序列设计1对引物,通过RT-PCR技术克隆获得了一段长度1 141 bp的序列。生物信息学分析表明,该序列编码的381个氨基酸,与其他植物同源GAPDH基因序列的相似度达83%,氨基酸序列相似度在95%以上。可以确定,克隆获得的片段即为箭筈豌豆甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因片段。将此片段命名为VsGAPDH,在GenBank注册,登录号HM117006。 展开更多

关键词 箭筈豌豆 gapdh基因 RT-PCR 同源克隆 甘油醛-3-磷酸脱氢酶

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当归甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆及组织稳定性分析 被引量：2

15

作者 杨雪 雒军 +3 位作者 杨彩霞 王振恒 夏琦 王引权 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期943-950,共8页

通过同源比对查找GAPDH基因的保守区,运用逆转录PCR、同源克隆及cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)等技术从当归中克隆GAPDH基因的全长cDNA序列,利用生物信息学分析工具对该基因编码蛋白的基本性质、结构特点及... 通过同源比对查找GAPDH基因的保守区,运用逆转录PCR、同源克隆及cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)等技术从当归中克隆GAPDH基因的全长cDNA序列,利用生物信息学分析工具对该基因编码蛋白的基本性质、结构特点及生物学功能进行初步预测,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析当归GAPDH基因的表达稳定性。结果表明,克隆得到当归GAPDH基因cDNA全长序列为1 345个核苷酸,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1 005 bp,3’UTR和5’UTR长度分别为268 bp和72 bp,共编码334个氨基酸,该基因命名为AsGAPDH。AsGAPDH基因编码蛋白的预测相对分子质量为36.3 kD,理论等电点为7.06,为亲水性非分泌型蛋白,与伞形科植物白芹的亲缘关系最近。AsGAPDH基因在当归根、叶柄及叶中的表达量相近且稳定性好,扩增特异性强。 展开更多

关键词 当归 gapdh基因 克隆 序列分析 实时荧光定量PCR

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太子参GAPDH基因的克隆及序列分析 被引量：2

16

作者 龙登凯 丁铃 +3 位作者 李军 周涛 江维克 肖承鸿 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第7期87-92,共6页

为了获取可靠内参基因,采用同源克隆技术和c DNA末端快速延伸技术,首次从太子参中克隆3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)的部分c DNA序列,命名为Ph GAPDH,序列长度为981 bp,包含699 bp的部分阅读框,推测其编码232个氨基酸,还含有282 bp的3&... 为了获取可靠内参基因,采用同源克隆技术和c DNA末端快速延伸技术,首次从太子参中克隆3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)的部分c DNA序列,命名为Ph GAPDH,序列长度为981 bp,包含699 bp的部分阅读框,推测其编码232个氨基酸,还含有282 bp的3'UTR。序列分析结果表明,太子参Ph GAPDH基因编码的氨基酸序列与同科植物香石竹(Dianthus caryophyllus)氨基酸序列同源性高达99%。PCR分析结果表明,Ph GAPDH基因在太子参不同种源块根、同一种源不同组织及不同生长时期的表达水平较稳定,可以作为太子参功能基因研究的内部参考基因。 展开更多

关键词 太子参 gapdh基因 同源克隆法 CDNA末端快速扩增 表达模式

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巴夫杜氏藻GAPDH基因部分序列的克隆 被引量：2

17

作者 尚常花 朱顺妮 +1 位作者 袁振宏 王忠铭 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期126-127,134,共3页

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的一个关键酶,由于其基因表达量相对恒定,因此在定量和半定量PCR试验中常被用作内源参照基因来确定目标基因的相对表达量。从巴夫杜氏藻(Dunaliella parva)中克隆GAPDH基因,并对基因序列进行了... 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的一个关键酶,由于其基因表达量相对恒定,因此在定量和半定量PCR试验中常被用作内源参照基因来确定目标基因的相对表达量。从巴夫杜氏藻(Dunaliella parva)中克隆GAPDH基因,并对基因序列进行了分析。以巴夫杜氏藻cDNA为模板,根据GAPDH的保守序列设计引物,PCR扩增获得了673 bp的cDNA序列。在此基础上,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了913 bp的3′-cDNA序列,进而获得了cDNA部分序列1 393 bp。序列分析结果表明:巴夫杜氏藻GAPDH cDNA部分序列包括1 055 bp的编码区和338 bp的3′非翻译区。该基因的克隆为半定量和定量PCR等技术在巴夫杜氏藻分子生物学研究中的应用提供了内源参照基因。 展开更多

关键词 巴夫杜氏藻 gapdh基因 克隆

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玉米ZmGAPDH2基因的克隆及表达特性分析

18

作者 张丽萌 赵振华 +2 位作者 梅福建 王同朝 李玉华 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期42-50,共9页

研究通过同源比对查找GAPDH基因的保守区,运用逆转录PCR和同源克隆技术从玉米叶片中克隆出GAPDH2基因的全长cDNA序列。采用qRT-PCR分析两个玉米品种登海605和蠡玉35幼苗叶片中GAPDH2基因在非生物胁迫和ABA处理下的表达特性,利用二维凝... 研究通过同源比对查找GAPDH基因的保守区,运用逆转录PCR和同源克隆技术从玉米叶片中克隆出GAPDH2基因的全长cDNA序列。采用qRT-PCR分析两个玉米品种登海605和蠡玉35幼苗叶片中GAPDH2基因在非生物胁迫和ABA处理下的表达特性,利用二维凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱法(MAL⁃DI-TOF),对登海605和蠡玉35幼苗在干旱胁迫下叶片中的GAPDH蛋白表达水平进行分析。结果表明,ZmGAP⁃DH2基因开放阅读框(ORF)全长1014 bp,编码337个氨基酸。ZmGAPDH2蛋白分子量为36.53 kDa,属于亲水性蛋白。生物信息分析发现,玉米ZmGAPDH2蛋白和单子叶植物小米GAPDH2蛋白的亲缘关系最近,同源性高达94.66%。qRT-PCR分析表明,ZmGAPDH2在登海605和蠡玉35叶片中均能被ABA和PEG处理诱导表达,登海605在NaCl和蠡玉35幼苗在低温处理下其表达量均有所下降。干旱对登海605和蠡玉35幼苗叶片中ZmGAPDH2蛋白表达量也有影响。 展开更多

关键词 玉米 gapdh基因 基因表达 非生物胁迫

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实时荧光定量PCR检测犬GAPDH基因 被引量：1

19

作者 李佳 姜代勋 +4 位作者 陈益山 任超 陈丽 张岩 陈武 《北京农学院学报》 2010年第1期33-36,共4页

建立犬3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的qPCR检测体系,为犬功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础。对反应体系进行优化,建立了基于SYBR GreenI染料技术的real-time PCR方法。结果表明,其标准曲线相关系数达到0.999,扩增效率为105.8%... 建立犬3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的qPCR检测体系,为犬功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础。对反应体系进行优化,建立了基于SYBR GreenI染料技术的real-time PCR方法。结果表明,其标准曲线相关系数达到0.999,扩增效率为105.8%,熔解曲线为特异性单峰,组内变异系数（CV%）为0.25-2.8,组间变异系数（CV%）为1.31-2.85。该研究所建立的荧光定量RT-PCR法灵敏、稳定、高效,为犬GAPDH基因作为内参基因用于犬相关基因定量表达分析奠定了基础。 展开更多

关键词 犬 gapdh基因 qPCR

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羊蹄GAPDH基因的克隆及序列分析 被引量：1

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作者 任聪 黄五星 +2 位作者 张翔 邵惠芳 许自成 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第2期115-118,共4页

为利用实时荧光定量PCR技术研究中草药羊蹄有效化学成分合成相关基因表达情况,采用针对多糖、多酚植物样品的总RNA提取试剂提取高质量的羊蹄总RNA,随后运用反转录PCR方法克隆了羊蹄甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的部分c DNA序列,并以... 为利用实时荧光定量PCR技术研究中草药羊蹄有效化学成分合成相关基因表达情况,采用针对多糖、多酚植物样品的总RNA提取试剂提取高质量的羊蹄总RNA,随后运用反转录PCR方法克隆了羊蹄甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的部分c DNA序列,并以该序列为模板设计引物,采用实时荧光定量PCR验证其作为内源参照基因的可靠性。结果表明:获得的核酸序列长564 bp,编码188个氨基酸;推导的氨基酸序列与西伯利亚蓼、拟南芥、小麦GAPDH基因编码的氨基酸序列同源性分别为92%、90%和89%;扩增曲线和熔解曲线显示设计的引物可应用于实时荧光定量PCR扩增。羊蹄GAPDH基因的克隆为利用实时荧光定量PCR技术研究目的基因表达情况奠定了基础。 展开更多

关键词 羊蹄 gapdh基因 克隆

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