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基于foldon介导的寡聚化以提高阿魏酸酯酶催化效率 被引量:5
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作者 张雷 雷林超 +1 位作者 张光亚 李夏兰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期816-826,共11页
将foldon结构域与阿魏酸酯酶C-末端进行融合表达并用组氨酸标签对融合蛋白进行纯化。实现基于foldon的寡聚化阿魏酸酯酶及单体阿魏酸酯酶在毕赤酵母GS115中表达,并应用目标蛋白与foldon结构域融合可自发形成三聚体结构的特性对阿魏酸酯... 将foldon结构域与阿魏酸酯酶C-末端进行融合表达并用组氨酸标签对融合蛋白进行纯化。实现基于foldon的寡聚化阿魏酸酯酶及单体阿魏酸酯酶在毕赤酵母GS115中表达,并应用目标蛋白与foldon结构域融合可自发形成三聚体结构的特性对阿魏酸酯酶进行改造,以提高阿魏酸酯酶的催化性能。经纯化获得寡聚化及单体阿魏酸酯酶,寡聚化阿魏酸酯酶表观分子量约为110kDa,单体阿魏酸酯酶表观分子量为40 kDa;寡聚化阿魏酸酯酶的最适反应温度和pH分别为50℃和5.0,而单体阿魏酸酯酶则分别为50℃和6.0。寡聚化阿魏酸酯酶的底物亲和力(K_m)及催化效率(k_(cat)/K_m)较单体阿魏酸酯酶分别提高3.42倍和7.57倍。结果表明,寡聚化及单体阿魏酸酯酶均成功表达,且寡聚化阿魏酸酯酶在底物亲和力和催化效率上具有明显优势,该提高阿魏酸酯酶催化效率的方法简单、高效,有很好的应用前景。 展开更多
关键词 阿魏酸酯酶 寡聚化 foldon 催化性能 酶工程
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拥挤试剂PEG2000对不同拓扑结构类弹性蛋白相变的影响
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作者 张雷 熊紫阳 +1 位作者 张光亚 李夏兰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1111-1117,共7页
类弹性蛋白(elastin-like polypeptides,ELPs)属于弹性蛋白质中的一种,且具有温控性的生物大分子,本文研究拥挤试剂对不同拓扑结构ELPs相变温度的影响,利用温控-紫外分光光度计研究其相变特性,结果发现,随着PEG2000浓度的增加,T-E-F(thr... 类弹性蛋白(elastin-like polypeptides,ELPs)属于弹性蛋白质中的一种,且具有温控性的生物大分子,本文研究拥挤试剂对不同拓扑结构ELPs相变温度的影响,利用温控-紫外分光光度计研究其相变特性,结果发现,随着PEG2000浓度的增加,T-E-F(three-armed ELPs-Foldon的简称)的相变温度下降11.9~17.1℃;在固定Tadpole-like-E(Tadpole-like-ELPs的简称)浓度下,随着PEG2000浓度的增加,Tadpole-like-E的相变温度降低11.5~16℃,其中,25μmol/L的Tadpole-like-E其相变速度缓慢;ELPs浓度越大,其相变温度降低愈大,且PEG2000影响ELPs相变温度的趋势与ELPs的拓扑结构关系不大。另外,在PBS缓冲溶液中加入PEG2000,可以使E-C(ELPs-SpyCather的简称)在浓度<0.5 mol/L的Na_2CO_3中发生相变,且随着PEG2000浓度的增加,E-C相变温度逐渐降低。本研究为今后ELPs在复杂体系的应用提供前期的基础研究。 展开更多
关键词 类弹性蛋白多肽 聚乙二醇 SpyTag/SpyCatcher foldon
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Compacton, Peakon, and Foldon Structures in the (2+1)-DimensionalNizhnik-Novikov-Veselov Equation 被引量:2
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作者 ZHANGJie-Fang MENGJian-Ping +1 位作者 WUFeng-Min SIJian-Qing 《Communications in Theoretical Physics》 SCIE CAS CSCD 2004年第1期7-14,共8页
By the use of the extended homogenous balance method,the B(?)cklund transformation for a (2+1)- dimensional integrable model,the(2+1)-dimensional Nizhnik-Novikov-Veselov (NNV) equation,is obtained,and then the NNV equ... By the use of the extended homogenous balance method,the B(?)cklund transformation for a (2+1)- dimensional integrable model,the(2+1)-dimensional Nizhnik-Novikov-Veselov (NNV) equation,is obtained,and then the NNV equation is transformed into three equations of linear,bilinear,and tri-linear forms,respectively.From the above three equations,a rather general variable separation solution of the model is obtained.Three novel class localized structures of the model are founded by the entrance of two variable-separated arbitrary functions. 展开更多
关键词 COMPACTON PEAKON foldon Nizhnik-Novikov-Veselov equation
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(2+维修正Veselov-Novikov系统的新型折叠子及其弹性碰撞 被引量:1
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作者 沈守枫 张隽 《物理学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1548-1554,共7页
借助Mathematica软件,在Backlund变换的基础上采用多线性变量分离(MLVS)方法,得到了(2+1)维修正Veselov-Novikov系统的一个含低维任意函数的新的精确解.选取合适的多值函数,构造出新型的折叠子,对其进行了分类并且研究了各种类型的二折... 借助Mathematica软件,在Backlund变换的基础上采用多线性变量分离(MLVS)方法,得到了(2+1)维修正Veselov-Novikov系统的一个含低维任意函数的新的精确解.选取合适的多值函数,构造出新型的折叠子,对其进行了分类并且研究了各种类型的二折叠子之间的完全弹性碰撞.另外还给出了折叠子与隐形折叠子的相互作用.最后把MLVS方法推广到一个新的(1+1)维非线性系统. 展开更多
关键词 修正Veselov-Novikov系统 折叠子 弹性碰撞 变量分离
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水痘带状疱疹病毒gE-Foldon融合蛋白的表达及免疫效果的分析
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作者 李海鑫 曹蕾 +10 位作者 郭晋源 孙馨 胡宏俏 时雨晴 张丽 武婕慧 谢智博 张瑶 张燕 李海 李栋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期314-325,共12页
水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚... 水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚体蛋白可以诱导更强的免疫应答,本研究应用中国仓鼠卵巢细胞CHO-S表达连接Foldon结构域的蛋白(gE-Foldon)、连接Fc片段的蛋白(gE-Fc)和gE蛋白。三种抗原(gE-Foldon、gE-Fc和gE)分别联合AlOH+CpG佐剂,比较在BALB/c小鼠中的免疫效果,同时,将商品化的Shingrix作为对照。SDS-PAGE和WB结果显示成功表达纯化三种抗原,非还原条件下可以观察到gE-Foldon以三聚体形式存在。与gE和gE-Fc抗原相比,gE-Foldon在小鼠中诱导产生的IgG抗体(40492)和中和抗体滴度(1190.5)最高(P<0.01),与Shingrix相当。此外gE-Foldon诱导小鼠产生的分泌IL-2、IL-4的淋巴细胞数量显著高于其他免疫组(P<0.0001,P<0.05)。综上所述,gE-Foldon蛋白联合AlOH+CpG佐剂可诱导较强的体液和细胞免疫应答,因此可以作为预防HZ的潜在候选疫苗。 展开更多
关键词 水痘带状疱疹病毒 gE-foldon蛋白 免疫效果
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