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电转染效率影响因素的探讨 被引量：7
1
作者 董菊子 赵勇 +2 位作者 高福兴 齐心亮 杨迎桂 《生物技术通讯》 CAS 2006年第5期737-739,共3页
目的:探讨影响电转染效率的因素。方法:将CHO细胞和DNA(携带标志基因的质粒)混和后进行电转染,观察电转染前孵育温度、渗透压、电转染参数、细胞周期等对细胞存活率和电转染效率影响。结果:孵育温度不影响细胞的存活率,而影响基因的转... 目的:探讨影响电转染效率的因素。方法:将CHO细胞和DNA(携带标志基因的质粒)混和后进行电转染,观察电转染前孵育温度、渗透压、电转染参数、细胞周期等对细胞存活率和电转染效率影响。结果:孵育温度不影响细胞的存活率,而影响基因的转染效率;电转染前后低渗条件有利于电转染;延长电转染持续时间和频率而不加大电压有利于电转染;最好选用处于G2/M期的细胞进行电转染。结论:初步认为温度、渗透压、电转染参数、细胞周期等对细胞存活率和电转染效率有一定的影响。 展开更多
关键词 电转染 效率 影响因素
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HD-BioP3细胞电转染条件的优化
2
作者 王亚萍 宋路萍 +2 位作者 邢体坤 李静波 张静静 《医疗装备》 2023年第4期8-11,共4页
目的 优化HD-BioP3细胞的电转染条件,提高HD-BioP3细胞的电转染效率。方法 使用电转染的方法将GFP质粒转入HD-BioP3细胞内,对电转染缓冲液、电转染温度和电转染质粒量3个因素进行优化,24 h后通过全自动荧光细胞分析仪检测细胞活率及电... 目的 优化HD-BioP3细胞的电转染条件,提高HD-BioP3细胞的电转染效率。方法 使用电转染的方法将GFP质粒转入HD-BioP3细胞内,对电转染缓冲液、电转染温度和电转染质粒量3个因素进行优化,24 h后通过全自动荧光细胞分析仪检测细胞活率及电转染效率。结果 3个因素中,电转染缓冲液对电转染效率影响最大,其次为电转染质粒量,电转染温度影响最小。在EX-CELL?CD CHO Fusion作为电转染缓冲液、电转染温度为4℃、电转染质粒量为30μg的条件下,电转染效果最好。结论 优化HD-BioP3细胞的电转染条件,可为研究外源基因电转染HD-BioP3细胞提供基础数据。 展开更多
关键词 HD-BioP3细胞 电转染 电转染效率 电转染缓冲液
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小鼠骨样细胞MLO-Y4转染方法的研究 被引量：3
3
作者 安龙 续惠云 +1 位作者 瓮媛媛 商澎 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期87-90,94,共5页
为了建立质粒转染小鼠骨样细胞MLO-Y4的方法,分别采用阳离子脂质体法和电转染法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒pEGFP-C1转染小鼠骨样细胞MLO-Y4,正常培养48h后检测并统计转染率和死亡率。结果显示,脂质体法转染,当质粒与脂质体比例为1... 为了建立质粒转染小鼠骨样细胞MLO-Y4的方法,分别采用阳离子脂质体法和电转染法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒pEGFP-C1转染小鼠骨样细胞MLO-Y4,正常培养48h后检测并统计转染率和死亡率。结果显示,脂质体法转染,当质粒与脂质体比例为1∶4时,转染效率可达到(36.8±3.7)%,细胞死亡率为(18.4±1.9)%;电转染法转染,脉冲电压240 V,脉冲时间300μs,脉冲次数3次时,转染率最高,可达到(23.8±2.3)%,细胞死亡率为(14.1±1.1)%。而后MTT实验显示脂质体转染法相对于电转染法对MLO-Y4细胞的增殖有一定的抑制作用,但对后续实验研究影响不大。脂质体转染法转染小鼠骨样细胞MLO-Y4优于电转染法。 展开更多
关键词 MLO-Y4细胞 脂质体转染 电转染 转染率
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融合蛋白基因与抗体基因电转染CHO-S细胞的条件摸索优化 被引量：2
4
作者 邓晓芬 杨晓佳 +3 位作者 易天红 冯英 柯潇 赖维莉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期223-228,共6页
旨在对编码融合蛋白和抗体的重组质粒转染CHO-S细胞的转染条件进行摸索优化,提高外源基因的转染效率,从而增加外源蛋白的表达。应用Amaxa Nucleofector-II电转仪,从电转染程序、质粒用量及细胞用量三方面着手,最终发现编码融合蛋白的重... 旨在对编码融合蛋白和抗体的重组质粒转染CHO-S细胞的转染条件进行摸索优化,提高外源基因的转染效率,从而增加外源蛋白的表达。应用Amaxa Nucleofector-II电转仪,从电转染程序、质粒用量及细胞用量三方面着手,最终发现编码融合蛋白的重组质粒的最佳电转条件为:电转程序U-030,质粒用量20μg/孔,细胞用量1×10~7个/孔;编码抗体的重组质粒的最佳电转条件为:电转程序U-024,质粒用量15μg/孔,细胞用量1×10~7个/孔;实验结果进一步显示抗体重组质粒电转染CHO-S细胞的效果要优于融合蛋白重组质粒,利用高通量细胞筛选仪Clone Pix对转染后重组细胞的阳性克隆数进行统计,证实了该抗体重组质粒的转染效率更高。这为以后的抗体及融合蛋白重组质粒电转染CHO-S细胞提供了一定的数据支持,同时提示不同类型的细胞及外源基因,都需要设计相应的电转染实验进行条件优化,进而为获得高产稳定的生产用细胞株奠定基础。 展开更多
关键词 融合蛋白 抗体 电转染 转染效率
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水牛精原干细胞电转染条件的优化 被引量：1
5
作者 杨欢 李婷婷 +6 位作者 彭腊如 谢龙 杨小淦 陆阳清 梁兴伟 卢晟盛 卢克焕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期2455-2460,共6页
本研究采用电转染法将pmaxGFP-gcc质粒通过Lonza电转仪转染入体外培养的水牛精原干细胞。通过将7组电脉冲程序的转染结果进行对比,得出水牛精原干细胞存活率与转染率最高的组别,并确定对应的最佳的电转染程序为EH100,48 h后,流式细胞仪... 本研究采用电转染法将pmaxGFP-gcc质粒通过Lonza电转仪转染入体外培养的水牛精原干细胞。通过将7组电脉冲程序的转染结果进行对比,得出水牛精原干细胞存活率与转染率最高的组别,并确定对应的最佳的电转染程序为EH100,48 h后,流式细胞仪筛选获得此电转染程序下有19.1%的GFP;细胞且转染细胞存活率达到74.2%。本电转染实验操作简便,转染效率高,可重复性好。本实验中的电转染的方法可以用于普通方法难以转染的干细胞,为其他物种的精原干细胞转基因研究提供研究基础和参考。 展开更多
关键词 电转染 水牛精原干细胞 转染效率
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