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泡球蚴感染小鼠所致肝损伤基因表达谱的变化 被引量：8
1
作者 谢文娟 吕国栋 +3 位作者 李瑶 张传山 温浩 林仁勇 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期189-191,共3页
目的 观察泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的变化.方法 采用开腹直视下肝左叶注射泡球蚴混悬液构建小鼠肝泡型包虫病动物模型.运用包含25000个小鼠基因的36 K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,检测感染8周后小鼠肝脏的基因表达.荧光定量逆转录.... 目的 观察泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的变化.方法 采用开腹直视下肝左叶注射泡球蚴混悬液构建小鼠肝泡型包虫病动物模型.运用包含25000个小鼠基因的36 K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,检测感染8周后小鼠肝脏的基因表达.荧光定量逆转录.聚合酶链反应（RT-PCR）法验证芯片结果 .结果 小鼠肝脏受泡球蚴侵染8周后,共有108条基因表达发生改变,功能聚类分为新陈代谢、信号转导、细胞生长、转录调节、细胞骨架、凋亡、免疫应答及运输等11类.荧光定量RT-PCR验证正确.结论 泡球蚴感染可以导致小鼠肝脏基因表达谱发生的改变,涉及多个基因表达调控途径. 展开更多
关键词 肝脏 泡球蚴 基因芯片
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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察 被引量：4
2
作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第7期676-678,共3页
目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD... 目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD_4^+和CD_8^+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照。结果:疫苗接种组的脾CD_4^+和CD_8^+T细胞亚群分别在免疫后2～12周和2～18周升高,分别在免疫后6和10周达最高水平。结论:CD_4^+T细胞亚群数目在多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫早期(2～6周)显著增加, 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 重组BCG-EM14-3-3疫苗 脾细胞亚群
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转化生长因子-β1及凋亡相关因子在泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中的表达及其意义 被引量：3
3
作者 王俊华 卢晓梅 +3 位作者 张传山 魏绪法 温浩 林仁勇 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期929-931,F0003,共4页
目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1（TGF-p1）、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义。方法8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化，免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细... 目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1（TGF-p1）、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义。方法8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化，免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细胞TGF-β1以及凋亡相关因子Caspase-3的表达与分布，原位末端标记技术（TUNEL）检测病灶旁免疫细胞凋亡。结果泡型包虫患者及泡球蚴感染小鼠病灶旁及汇管区均有大量炎性细胞灶性浸润，TGF—β1（P〈0．01）和凋亡相关因子Caspase-3（P〈0．01）高表达，TUNEL结果表明病灶旁免疫细胞发生凋亡，与对照比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论泡球蚴在感染宿主过程中可能通过引起宿主TGF—β1高表达，造成免疫细胞发生凋亡而达到逃避宿主免疫反应长期寄生的目的。 展开更多
关键词 肝 泡球蚴 免疫细胞 转化生长因子-Β1
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肝癌细胞及其上清液体外培养多房棘球蚴的实验研究 被引量：3
4
作者 马海龙 李兆勇 +1 位作者 孙世安 郭倩 《武警后勤学院学报（医学版）》 CAS 2012年第11期864-867,F0003,共5页
【目的】利用肝癌细胞(Bel-7404)及其培养细胞的上清液,在体外对多房棘球蚴进行培养,观察其在体外的生长、发育过程。【方法】培养肝癌细胞(Bel7404),留取细胞上清液,分别取培养细胞及其上清液与多房棘球蚴囊液进行共培养38 d。实验期... 【目的】利用肝癌细胞(Bel-7404)及其培养细胞的上清液,在体外对多房棘球蚴进行培养,观察其在体外的生长、发育过程。【方法】培养肝癌细胞(Bel7404),留取细胞上清液,分别取培养细胞及其上清液与多房棘球蚴囊液进行共培养38 d。实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡最大、最小直径,绘制生长曲线,培养结束后,取所培养囊泡壁及其囊液分别进行DNA鉴定和蛋白定量。【结果】多房棘球蚴在肝癌细胞(Bel-7404)及其上清液中均能生长,呈出芽生殖方式,囊泡直径1.0～5.0 mm;囊液蛋白含量分别为:肝癌细胞,3.8 mg/ml;肝癌细胞上清液,1.1 mg/ml;多房棘球蚴在体外培养初期呈较快速性生长(1～15 d);生长中期可见一平台期(15～26 d);后期保持一个较稳定囊泡数量。并对所培养的多房棘球蚴囊壁DNA经PCR扩增出Em特异性200 bp条带。SDS-PAGE观察体内外培养囊液中蛋白在14、47-66kd处有相似条带。【结论】多房棘球蚴体外生长因素不依赖培养细胞本身,利用肝癌细胞上清液建立多房棘球蚴体外培养模型具有一定的可行性,由于肝癌细胞(Bel-7404)与其培养细胞的上清液所含成分可能不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白定量有所差异。 展开更多
关键词 泡球坳 体外培养 肝癌细胞 上清液
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藏药久美2号对抗小鼠继发性多房棘球蚴病的疗效研究 被引量：2
5
作者 洛桑达哇 刘文磊 +4 位作者 杨宝良 汤锋 王海久 久美彭措 樊海宁 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2018年第3期197-202,共6页
目的在体内及体外水平综合考察藏药久美2号对小鼠继发性多房棘球蚴病的药效学活性,以明确其对小鼠继发性多房棘球蚴病的对抗作用。方法 1.将久美2号水提物用RPMI1640培养液溶解后配成不同浓度(16.0mg/m L,8.0mg/m L,1.6mg/m L);在体外... 目的在体内及体外水平综合考察藏药久美2号对小鼠继发性多房棘球蚴病的药效学活性,以明确其对小鼠继发性多房棘球蚴病的对抗作用。方法 1.将久美2号水提物用RPMI1640培养液溶解后配成不同浓度(16.0mg/m L,8.0mg/m L,1.6mg/m L);在体外培养多房棘球蚴原头蚴,通过台盼蓝染色后在光镜下观察第1、3、6、12、18 d原头蚴活性及其死亡率。2.将给予不同浓度药物治疗后的模型小鼠以多房棘球蚴病灶组织湿重和病灶囊重抑制率为指标评价其疗效。结果1.实验组原头蚴死亡率具有时间和浓度的依赖性,并且在培养第18 d时,三组差异有统计学意义(P<0.05),进一步做两两比较可知,对照组明显低于其他三组,差异有统计学意义(P<0.05),高浓度组(16.0mg/m L)和中浓度组(8.0mg/m L)明显高于低浓度组(1.6mg/m L),差异有统计学意义(P<0.05),高浓度组和中浓度组差异无统计学意义(P>0.05)。2.模型对照组小鼠体内多房棘球蚴病灶组织湿重为8.18±3.29,藏药久美2号组为3.39±1.35(P=0.0039),阿苯达唑组为4.39±1.44(P=0.0164)。结论藏药久美2号对继发性多房棘球蚴病小鼠模型连续治疗90 d,在体内对多房棘球蚴的生长有良好的抑制作用,在体外对原头蚴有明显的杀灭作用。 展开更多
关键词 藏药 多房棘球蚴病 原头蚴 杀灭作用
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多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响 被引量：2
6
作者 杨梅 李文桂 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第8期796-798,共3页
目的:检测多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法:用重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗分别通过皮下注射和鼻腔粘膜接种免疫BALB/C小鼠8周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,分... 目的:检测多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法:用重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗分别通过皮下注射和鼻腔粘膜接种免疫BALB/C小鼠8周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,分离脾细胞,用ConA刺激培养16～18h,然后用Annexin V-FITC染色法检测脾细胞凋亡。结果:小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于PBS对照组(P<0.05或P<0.01);每个ConA刺激组脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液组(P<0.05或P<0.01);鼻腔粘膜接种组脾细胞凋亡率显著低于皮下注射组(P<0.01)。结论:多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可抑制感染小鼠脾细胞发生凋亡,增加CD4+T细胞亚群的数量,加强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 脾细胞 凋亡
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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞因子变化的研究
7
作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期9-12,共4页
目的:探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或C... 目的:探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2I、FN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;鼻腔内接种组的TNF-α水平高于皮下注射组。结论:多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠产生一个TH1型反应,从而对抗Em原头节攻击感染。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG-Emi4-3-3疫苗 细胞因子
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多房棘球蚴表面抗原EMY162的原核表达及抗体制备 被引量：5
8
作者 冯琳 李润乐 +3 位作者 刘川川 廖瑜 杨全余 汤锋 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2017年第4期235-241,共7页
目的建立多房棘球蚴表面抗原EMY162原核表达系统及制备兔多克隆抗体。方法构建表达载体pCzn1-EMY162并转入Arctic Express菌株,用IPTG诱导、Ni柱纯化获得目的蛋白后免疫新西兰兔,以ELISA、SDS-PAGE考察纯化后抗体的效价、浓度及纯度。... 目的建立多房棘球蚴表面抗原EMY162原核表达系统及制备兔多克隆抗体。方法构建表达载体pCzn1-EMY162并转入Arctic Express菌株,用IPTG诱导、Ni柱纯化获得目的蛋白后免疫新西兰兔,以ELISA、SDS-PAGE考察纯化后抗体的效价、浓度及纯度。结果酶切鉴定和测序结果表明重组质粒pCzn1-EMY162构建成功,且EMY162在包涵体部位中表达、可溶部位微量表达。通过Ni-NTA柱亲和层析纯化获得高纯度的EMY162蛋白。免疫兔后收集血清,其ELISA结果表明,抗血清可以特异性结合目标蛋白,抗体效价大于512 K,SDS-PAGE结果表明,纯化后获得了较高纯度的多克隆抗体,可用于后续实验研究。结论成功建立EMY162原核表达系统并制备了高纯度、高效价的多克隆抗体。 展开更多
关键词 EMY162 多房棘球蚴 多克隆抗体 原核表达
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多房棘球绦虫重组Bb—EmⅡ／3-Em14—3—3疫苗诱导BALB／c小鼠T淋巴细胞亚群变化的研究 被引量：5
9
作者 杨梅 李文桂 刘兴超 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期629-632,共4页
目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组Bb-EmⅡ／3-Eml4．3．3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群的变化。方法用重组Bb-EmⅡ／3-Em14．3．3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种以及口服接种免疫BALB／c小鼠... 目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组Bb-EmⅡ／3-Eml4．3．3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群的变化。方法用重组Bb-EmⅡ／3-Em14．3．3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种以及口服接种免疫BALB／c小鼠，双歧杆菌（Bb）液和磷酸盐缓冲液（PBS）为对照，12周后，用50个Em原头蚴腹腔注射进行攻击，攻击感染18周剖杀小鼠，检获泡球蚴组织，称取重量，计算减蚴率；分离脾细胞，流式细胞仪检测脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群的百分比。结果疫苗免疫组（皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种、口服接种）小鼠检获泡球蚴重量[（0．77±0．52）、（0．87±0．60）、（2．17±0．50）、（3．06±0．15）g]均明显低于PBS对照组[（3．54±0．32）g．P〈0．05或〈0．01]。疫苗免疫组（皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种、口服接种）小鼠脾CD4＋T细胞亚群[（28．2±2．5）％、（25．0±2．7）％、（24．0±1.3）％、（23．0±1．8）％]显著高于PBS对照组[（16．1±2．2）％，P均〈0．01]；各疫苗免疫组小鼠CD8＋T细胞亚群水平均轻微升高，但组间比较差异无统计学意义（F=1．36，P〉0．05）。皮下注射组小鼠CD4＋T细胞亚群高于肌肉注射组、鼻腔黏膜接种组和口服接种组（P均〈0．05）。结论CD4＋T细胞亚群在Em重组Bb-EmⅡ／3-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用，疫苗皮下注射是一种较好的免疫途径。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗 T淋巴细胞亚群
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灰仓鼠多房棘球蚴腹腔动物模型的建立 被引量：3
10
作者 刘斌 徐艺玫 +3 位作者 燕顺生 史深 麦丽开 廖力夫 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2012年第5期25-28,共4页
目的观察多房棘球蚴(Echinococcus muhilocularis E.m)在灰仓鼠腹腔内的生长发育规律,制作E.m灰仓鼠动物模型。方法 2000个E.m原头节/只剂量腹腔接种灰仓鼠,接种后10、15、18、22、39、60、80和100 d,测量包囊重量和抗体,计算包囊重与... 目的观察多房棘球蚴(Echinococcus muhilocularis E.m)在灰仓鼠腹腔内的生长发育规律,制作E.m灰仓鼠动物模型。方法 2000个E.m原头节/只剂量腹腔接种灰仓鼠,接种后10、15、18、22、39、60、80和100 d,测量包囊重量和抗体,计算包囊重与灰仓鼠体重的包囊系数,观察多房棘球蚴在灰仓鼠体内的发育规律。分别按100个/只、500个/只和2000个/只剂量腹腔接种灰仓鼠各10只,100 d后剖检比较不同感染剂量的包囊发育情况和感染率。结果 62只灰仓鼠中有59只感染了多房棘球蚴。18 d可观察到成熟原头节,感染率达到100%,15 d出现抗体阳性,60 d时包囊系数达到15%以上;100、500和2000三种剂量的感染率100%;结论建立的灰仓鼠腹腔多房棘球蚴动物模型具有感染率高,感染周期短,包囊生长发育和抗体滴度变化易观察,感染60 d可作为E.m动物模型成模观察期。包囊系数,抗体滴度和包囊发育变化可作为造模的主要参考指标。雌性灰仓鼠造模优于雄性。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 灰仓鼠 包囊系数 动物模型 抗体 感染
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