副溶血弧菌EMA-PCR检测技术的建立 被引量：21

1

作者 伦镜盛 夏常艳 +3 位作者 罗鹏 梁嘉明 黄通旺 胡忠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期952-956,共5页

PCR技术被广泛应用于副溶血弧菌的检测中,但传统的PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,往往使检测结果出现较高的假阳性。因此,将叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bro-mide,EMA)与PCR技术结合,建立一种快速、准确的副溶血弧菌检测方... PCR技术被广泛应用于副溶血弧菌的检测中,但传统的PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,往往使检测结果出现较高的假阳性。因此,将叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bro-mide,EMA)与PCR技术结合,建立一种快速、准确的副溶血弧菌检测方法。以dnaJ基因为检测副溶血弧菌的靶基因,分别用副溶血弧菌的纯培养细胞及其基因组DNA作模板进行PCR检测,灵敏度分别为2.5×104 CFU/mL和6×102 fg/μL。在检测样品前处理过程中加入EMA,当EMA的浓度小于5 mg/L时,EMA对活菌靶基因的扩增没有明显的抑制;而终浓度为2 mg/L的EMA,能有效抑制1×108 CFU/mL副溶血弧菌死菌的扩增。活菌和死菌混合体系的PCR结果表明,EMA-PCR能有效降低副溶血弧菌检测过程中的假阳性。 展开更多

关键词 副溶血弧菌 ema-pcr 死菌与活菌

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食品中微生物检测新技术研究进展 被引量：10

2

作者 张冲 刘祥 陈计峦 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2011年第12期212-216,共5页

食品微生物是影响食品安全的重要因素,由食源性致病菌引起的病例越来越多。但致病菌往往共存于复杂的生物体系中,且数量极少、致病性高,因此,微生物检测方法要有高灵敏度、特异性以及较短的分析时间,现有的成熟检测技术尚难以实现对微... 食品微生物是影响食品安全的重要因素,由食源性致病菌引起的病例越来越多。但致病菌往往共存于复杂的生物体系中,且数量极少、致病性高,因此,微生物检测方法要有高灵敏度、特异性以及较短的分析时间,现有的成熟检测技术尚难以实现对微生物进行实时、准确、快速的检测,因而许多新的检测方法已成为研究的热点。从微生物检测的角度出发,对逆转录聚合酶链式反应、叠氮溴化乙锭聚合酶链式反应、可视化基因芯片、荧光标记噬菌体等近年来出现的新型检测技术进行论述,并分析各自的优缺点。 展开更多

关键词 逆转录聚合酶链式反应 叠氮溴化乙锭聚合酶链式反应 可视化 荧光标记 基因芯片 噬菌体

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EMA与PCR结合检测沙门氏菌方法的研究 被引量：6

3

作者 赵瑜 李金磊 +2 位作者 董鹏 狄元冉 高延玲 《畜牧与饲料科学》 2013年第11期113-116,共4页

为了建立一种快速区分样品中沙门氏菌的死细菌与活细菌的检测方法,将叠氮溴化乙锭(EMA)与PCR技术相结合,以沙门氏菌的invA为靶基因,以沙门氏菌的纯培养细胞做模板进行扩增,并进行灵敏度、特异性、曝光时间及EMA浓度试验。结果显示,灵敏... 为了建立一种快速区分样品中沙门氏菌的死细菌与活细菌的检测方法,将叠氮溴化乙锭(EMA)与PCR技术相结合,以沙门氏菌的invA为靶基因,以沙门氏菌的纯培养细胞做模板进行扩增,并进行灵敏度、特异性、曝光时间及EMA浓度试验。结果显示,灵敏度为14 CFU/mL,最佳曝光时间为2 min,当EMA的浓度小于18μg/mL时,EMA对活菌靶基因的扩增没有明显的抑制,而终浓度为1μg/mL的EMA,能有效抑制1×108CFU/mL沙门氏菌死菌的扩增。EMA-PCR能有效降低沙门氏菌检测过程中的假阳性。 展开更多

关键词 沙门氏菌 ema—pcr 检测 死菌与活菌

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立 被引量：5

4

作者 赵素君 谢晶 +6 位作者 曹冶 李江凌 王秋实 叶勇刚 罗丹丹 叶健强 廖党金 《中国草食动物科学》 CAS 2012年第4期50-53,共4页

肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备... 肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌 rfbE基因 ema-pcr 死细菌 活细菌

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柑橘溃疡病菌EMA-PCR快速活体检测技术的建立 被引量：5

5

作者 熊书 王中康 +1 位作者 卢小林 殷幼平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期78-84,共7页

传统PCR方法不能诊断柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri Gabriel)的死活状态,往往导致假阳性检测结果。本研究将特异性核酸染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与PCR技术结合,旨在建立柑橘溃疡病活菌的快速检... 传统PCR方法不能诊断柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri Gabriel)的死活状态,往往导致假阳性检测结果。本研究将特异性核酸染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与PCR技术结合,旨在建立柑橘溃疡病活菌的快速检测技术。根据柑橘溃疡病菌独有的保守蛋白基因设计特异性引物扩增出278bp的靶带,PCR反应的检测下限为25个细胞/25μL或2.75pg/25μL。EMA-PCR结果表明:当卤钨灯曝光时间1min,EMA终浓度为1.0mg/L时,能有效抑制1.0×108 cfu/mL死菌的扩增;当EMA的浓度小于30mg/L时,EMA对上述相同浓度活菌靶基因的扩增没有明显的抑制。EMA-PCR对死活混合菌的扩增表明,活菌数在6.875×101～6.875×105 cfu/PCR范围时,荧光强度与混合体系中活菌的对数值有线性关系。基于以上建立的EMA-PCR活体检测技术,对疑似带病柑橘材料进行检测,结果发现能降低柑橘溃疡病菌检测过程中的假阳性,有望为柑橘溃疡病的检疫检验提供更科学的技术手段。 展开更多

关键词 柑橘溃疡病菌 ema-pcr 死菌与活菌 检疫

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EMA-PCR方法快速检测铜绿假单胞菌活菌研究 被引量：3

6

作者 方梅 陆巧荣 +2 位作者 王国庆 张宏斌 李建 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1015-1018,共4页

目的探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合(EMA-PCR),建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法。方法以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,检测PCR灵敏度、EMA使用... 目的探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合(EMA-PCR),建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法。方法以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,检测PCR灵敏度、EMA使用浓度和曝光时间优化试验。结果 PCR检测灵敏度为3×103 CFU/mL;曝光处理时间为10 min;EMA浓度≤5μg/mL对活菌DNA扩增没有明显抑制,终浓度为1μg/mL EMA能有效抑制3×106 CFU/mL死菌扩增;1%活菌混合体系检测结果阳性。结论 EMA-PCR方法能有效快速检测铜绿假单胞菌活菌,能避免PCR检测可能造成的假阳性结果。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 ema-pcr 活菌检测

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应用EMA-PCR检测沙门氏菌活菌的研究 被引量：2

7

作者 赵素君 曹冶 +6 位作者 谢晶 李江凌 王秋实 叶勇刚 罗丹丹 叶健强 廖党金 《中国畜牧兽医文摘》 2012年第10期46-47,43,共3页

根据沙门氏菌保守的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)基因序列设计特异性引物,对实验菌株进行PCR检测,结果只有沙门氏菌能扩增出大小为285bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。本研究利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活... 根据沙门氏菌保守的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)基因序列设计特异性引物,对实验菌株进行PCR检测,结果只有沙门氏菌能扩增出大小为285bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。本研究利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测沙门氏菌活菌的EMA-PCR方法,从而避免了因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果。该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性和真实性,检测灵敏度可达11CFU/ml。 展开更多

关键词 沙门氏菌 invA基因 ema-pcr 死细菌 活细菌

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饲料及其原料中沙门菌快速检测方法的比较研究 被引量：1

8

作者 舒畅 高延玲 +5 位作者 方忠意 李金磊 董鹏 狄元冉 王瑞宁 吴志明 《上海畜牧兽医通讯》 2019年第6期10-13,共4页

为了探索饲料及其原料中沙门菌的检测方法,对河南省饲料企业采集239份饲料及其原料,分别采用常规培养法、PCR法、EMA-PCR法、Romer快速检测法检测沙门菌,并对检测结果进行比较.结果显示:常规培养法检出7份阳性,PCR法检出9份阳性,EMA-PC... 为了探索饲料及其原料中沙门菌的检测方法,对河南省饲料企业采集239份饲料及其原料,分别采用常规培养法、PCR法、EMA-PCR法、Romer快速检测法检测沙门菌,并对检测结果进行比较.结果显示:常规培养法检出7份阳性,PCR法检出9份阳性,EMA-PCR法检出7份阳性,Romer快速检测法检出6份阳性;同常规培养法相比,PCR法容易产生假阳性结果,Romer快速检测法容易出现假阴性结果,EMA-PCR法与常规法吻合率为100%,能够快速、准确地检测饲料及其原料中沙门菌. 展开更多

关键词 沙门菌 传统培养法 pcr ema-pcr 检测

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肠毒性大肠埃希菌肠毒素LTa基因特异性EMA-PCR检测方法的建立

9

作者 赵素君 曹冶 +6 位作者 谢晶 李江凌 王秋实 叶勇刚 罗丹丹 叶健强 廖党金 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第11期8-11,共4页

由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭(EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PC... 由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭(EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法。肠毒性大肠埃希菌CVCC196、CVCC197、CVCC200均能扩增出大小为438bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。经EMA处理,除了完全死菌组外,含有10mL/L～1 000mL/L活菌的混合悬液均可扩增出目的片段。因此,成功建立了一种快速、有效的检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法,该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性,灵敏度可达19cfu/mL。 展开更多

关键词 肠毒性大肠埃希菌 不耐热肠毒素基因 叠氮溴乙锭-聚合酶链反应 检测

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EMA-PCR检测金黄色葡萄球菌活菌的方法 被引量：4

10

作者 赵素君 李江凌 +6 位作者 谢晶 曹冶 王秋实 叶勇刚 罗丹丹 叶健强 廖党金 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期18-20,共3页

根据金黄色葡萄球菌(SA)耐热核酸酶编码基因(nuc基因)设计特异性引物,对试验菌株进行PCR检测,结果显示,金黄色葡萄球菌扩增出大小为480bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,从... 根据金黄色葡萄球菌(SA)耐热核酸酶编码基因(nuc基因)设计特异性引物,对试验菌株进行PCR检测,结果显示,金黄色葡萄球菌扩增出大小为480bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,从而使检测结果往往出现很高的假阳性。本试验利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测金黄色葡萄球菌活菌的EMA-PCR方法,较传统PCR大大提高了检测的准确性和可靠性,该方法检测灵敏度可达15CFU/mL。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 flue基因 ema—pcr法 死细菌 活细菌

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四种检测方法用于上海市口岸管道水军团菌存在状况调查的研究

11

作者 任红宇 田桢干 +3 位作者 周海健 关红 秦天 邵祝军 《疾病监测》 CAS 2014年第6期449-453,共5页

目的比较传统的平板培养法、普通聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）、实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR,real-time PCR）和荧光染料叠氮溴化乙锭（ethidium monoazide,EMA）结合荧光定量PCR的方法... 目的比较传统的平板培养法、普通聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）、实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR,real-time PCR）和荧光染料叠氮溴化乙锭（ethidium monoazide,EMA）结合荧光定量PCR的方法（EMA-荧光定量PCR）对管道水中军团菌的检测效果。方法于2010年对上海市2个口岸管道水进行采样,共采集132份。分别采用传统的平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR对水样中军团菌进行定性和/或定量分析。结果对132份管道水标本进行军团菌定性检测,平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR检出军团菌污染率分别为18.9%、20.5%、24.2%和24.2%。3种定量方法（平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR）对阳性标本中军团菌定量数值分别为50~1320菌落形成单位/升（cfu/L）、20~13 085基因单位/升（GU/L）和10~4480 GU/L。对于132份水样,3种方法对军团菌含量分析的定量数值大小差异有统计学意义（χ2=193.6,P〈0.01）,其中荧光定量PCR的定量数值最高,EMA-荧光定量PCR的数值次之,平板培养的数值最低。结论上海市口岸管道水中军团菌污染率和含菌量高。荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法检测管道水中军团菌的灵敏度优于传统的培养方法,EMA-荧光定量PCR方法适合用于环境水体中军团菌活菌监测。 展开更多

关键词 军团菌 管道水 实时荧光定量聚合酶链反应 ema-荧光定量pcr

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