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谷子DnaJ蛋白基因的克隆 被引量:11
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作者 崔润丽 智慧 +4 位作者 王永芳 李伟 李海权 黄占景 刁现民 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期9-13,共5页
DnaJ蛋白是近年研究较多的同热激等胁迫反应相关的基因。本研究用0.8%NaCl胁迫下的谷子幼苗提取RNA,用反转录酶M-MLV扩增得到第一链cDNA,再以第一链cDNA为模板进行PCR扩增,克隆获得了完整的谷子DnaJ蛋白基因,该基因cDNA全长1 260 bp,编... DnaJ蛋白是近年研究较多的同热激等胁迫反应相关的基因。本研究用0.8%NaCl胁迫下的谷子幼苗提取RNA,用反转录酶M-MLV扩增得到第一链cDNA,再以第一链cDNA为模板进行PCR扩增,克隆获得了完整的谷子DnaJ蛋白基因,该基因cDNA全长1 260 bp,编码419个氨基酸,具有DnaJ蛋白分子伴侣系统的3个保守结构域。将谷子DnaJ蛋白基因构建入表达载体pGFP,获得了谷子DnaJ基因的表达载体。该基因的克隆和表达载体构建,为谷子DnaJ蛋白基因的功能分析以及谷子耐热抗旱机理研究有重要意义。 展开更多
关键词 谷子 dnaj 基因克隆
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拟南芥DnaJ蛋白的过量表达对细菌耐盐性的影响 被引量:6
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作者 赵志常 张建军 +3 位作者 张皖蓉 刘震 李旭锋 杨毅 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2010年第1期54-57,共4页
热激蛋白是植物在各种环境胁迫下产生的一种蛋白,其表达与多种胁迫的抗性有一定关系。从野生型拟南芥cDNA中克隆获得了编码442个氨基酸序列的DnaJ基因,其与大肠杆菌DnaJ基因含有相同的J区和半胱氨酸富集区。将DnaJ基因构建到pET32a的原... 热激蛋白是植物在各种环境胁迫下产生的一种蛋白,其表达与多种胁迫的抗性有一定关系。从野生型拟南芥cDNA中克隆获得了编码442个氨基酸序列的DnaJ基因,其与大肠杆菌DnaJ基因含有相同的J区和半胱氨酸富集区。将DnaJ基因构建到pET32a的原核表达载体,过量表达DnaJ基因的细菌在含有0.5 mol/LNaCl的培养基中仍然可以生长,初步推断DnaJ的表达与耐盐性有关。 展开更多
关键词 热激蛋白 dnaj 过量表达 细菌耐盐性
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肺炎链球菌dnaJ基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究 被引量:5
3
作者 崔瑾 张群 +6 位作者 董杰 姜慧 周爱娥 董姗姗 张雪梅 尹一兵 王虹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期2000-2003,共4页
目的构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)dnaJ基因缺陷菌株,并对其毒力作初步研究。方法采用长臂同源多聚酶链式反应(long flanking homology polymerase chain reaction,LFH-PCR)技术将dnaJ基因替换为红霉素耐药基因(erm)... 目的构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)dnaJ基因缺陷菌株,并对其毒力作初步研究。方法采用长臂同源多聚酶链式反应(long flanking homology polymerase chain reaction,LFH-PCR)技术将dnaJ基因替换为红霉素耐药基因(erm)后同源重组于肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出dnaJ缺陷菌株。用PCR鉴定缺陷菌株,以细菌的吸光度值D(600 nm)观察体外缺陷菌株生长情况。将44只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为2组,分别用野生菌株和缺陷菌株处理,腹腔攻毒100μl高(2×108cfu)、低(2×106cfu)剂量的菌液,各处理组的不同剂量组均有11只小鼠。记录小鼠死亡时间,计算存活率。60只BALB/c小鼠采用随机数字表分为2组,分别鼻腔滴注含菌量为2×107 cfu的30μl D39菌液和△dnaJ菌液,感染后6、12、24、36、48 h处死每组中的5只小鼠,分别取鼻咽灌洗液、肺组织(匀浆)和心脏血培养,根据每组平均菌落计数结果绘制细菌在宿主体内的定植曲线。结果 PCR结果显示dnaJ基因完全被erm基因所替代,构建dnaJ缺陷菌成功;单个菌落培养基生长情况表明体外热休克状态抑制dnaJ缺陷菌生长;小鼠毒力实验显示腹腔感染缺陷菌株的小鼠存活率可达到100%,而感染野生菌株的小鼠全部死亡,两者比较有统计学差异(P<0.01)。小鼠鼻腔感染模型中,缺陷菌株在各时间点鼻咽灌洗液和肺部的细菌载量均显著低于野生菌株,而且入血后可在感染24 h内被宿主清除,上述差异有统计学意义(P<0.01)。结论采用LFH-PCR技术作基因突变完全替代dnaJ基因,方法简便快捷;dnaJ的缺陷影响细菌在体外应激条件下的生长,并显著降低细菌在宿主体内的毒力和定植。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 dnaj 长臂同源多聚酶链式反应 毒力
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LeCDJ1,a chloroplast DnaJ protein,facilitates heat tolerance in transgenic tomatoes 被引量:5
4
作者 Fanying Kong Yongsheng Deng +3 位作者 Guodong Wang Jieru Wang Xiaoqing Liang Qingwei Meng 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2014年第1期63-74,共12页
The roles of a tomato (Lycopersicon esculentum) chloroplast-targeted DnaJ protein (LeCDJ1) were investigat-ed using wild-type (WT) and sense transgenic tomatoes. The LeCDJ1 expression was upregulated by 38℃, 42... The roles of a tomato (Lycopersicon esculentum) chloroplast-targeted DnaJ protein (LeCDJ1) were investigat-ed using wild-type (WT) and sense transgenic tomatoes. The LeCDJ1 expression was upregulated by 38℃, 42 ℃, 45 ℃, NaCl, PEG, methyl viologen (MV) and hydrogen peroxide (H2O2), but not by 30 ℃ and 35 ℃. Meanwhile, LeCDJ1 was involved in the response of plants to abscisic acid (ABA). Under heat stress, the sense plants showed better growth, higher chlorophyll content, lower malondialdehyde (MDA) accumulation and relative electrical conductivity (REC), and also less PSII photoinhibition than WT. Interestingly, the sense plants treated with streptomycin (SM), an inhibitor of organellar translation, still showed higher maximum photo-chemistry efficiency of PSII (Fv/Fm) and D1 protein levels than the SM-untreated WT, suggesting that the protective effect of LeCDJ1 on PSII was, at least partially, independent of D1&amp;nbsp;protein synthesis. Furthermore, the relatively lower super-oxide radical (O2^*-) and H2O2 levels in the sense plants were considered to be due to the higher ascorbate peroxidase (APX) and superoxide dismutase (SOD) activity, which seemed unlikely dependent on their transcription level. These results indicated that LeCDJ1 overexpression facilitated heat tolerance in transgenic tomatoes. 展开更多
关键词 DI protein dnaj protein heat stress photosystem II reactive oxygen species TOMATO
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肺炎链球菌dnaJ基因缺陷对小鼠肺炎感染模型天然免疫应答的影响 被引量:3
5
作者 崔瑾 董杰 +5 位作者 姜慧 周爱娥 董姗姗 张雪梅 尹一兵 王虹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期160-165,共6页
目的探讨肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)dnaJ基因缺陷对肺炎感染模型小鼠天然免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、D39感染组和△dnaJ感染组,分别经鼻腔滴注30μl无菌PBS、30μl含2×107cfu的S.pn D39... 目的探讨肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)dnaJ基因缺陷对肺炎感染模型小鼠天然免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、D39感染组和△dnaJ感染组,分别经鼻腔滴注30μl无菌PBS、30μl含2×107cfu的S.pn D39和△dnaJ(dnaJ基因缺陷株)菌液,复制小鼠肺炎感染模型。于感染后6、12、24、36和48 h处死小鼠,取肺组织,匀浆后分离上清,ELISA检测促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IFNγ的表达水平,HE染色观察感染12 h的小鼠肺组织炎症反应变化;将小鼠巨噬细胞株RAW264.7体外感染S.pn D39和△dnaJ,细菌与细胞的比例为100∶1,感染1、2、3 h后分离细胞培养上清液,ELISA检测TNF-α和IL-6的表达水平。实时定量PCR和Western blot分别检测感染12 h的小鼠肺组织中模式识别受体TLRs基因mRNA的转录水平和炎症相关信号p38MAPK的磷酸化水平。结果与D39感染组相比,△dnaJ感染组小鼠肺组织炎症反应强度下降,TNF-α、IL-6和IL-1β等促炎因子水平达峰时间延迟,且峰值降低,RAW264.7细胞感染3 h分泌TNF-α和IL-6显著减少(P<0.01或P<0.05);小鼠肺组织Tlr2和Tlr13基因mRNA转录水平显著降低(P<0.05),p38MAPK的磷酸化水平也明显下降。结论肺炎链球菌dnaJ基因缺陷可下调肺炎感染模型小鼠的炎症反应、促炎因子分泌及胞内信号分子的激活,也可影响小鼠感染后肺组织中Trl2和Tlr13基因mRNA的表达,为进一步研究机体对肺炎链球菌DnaJ蛋白的天然免疫应答分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 dnaj 促炎因子 TLRS p38MAPK
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生精相关HSP40家族蛋白的研究进展 被引量:1
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作者 朱复希 刘刚 卢光琇 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第10期1960-1963,共4页
HSP40家族蛋白存在于从衣藻到哺乳动物的多种生物细胞内。早期研究表明HSP40/DnaJ蛋白作为HSP70蛋白的一种共伴侣分子,调节HSP70的ATP酶活性促进HSP70蛋白完成许多细胞过程,包括新生蛋白质的折叠、错误折叠蛋白质的解折叠、蛋白质的转... HSP40家族蛋白存在于从衣藻到哺乳动物的多种生物细胞内。早期研究表明HSP40/DnaJ蛋白作为HSP70蛋白的一种共伴侣分子,调节HSP70的ATP酶活性促进HSP70蛋白完成许多细胞过程,包括新生蛋白质的折叠、错误折叠蛋白质的解折叠、蛋白质的转运、组装和解离过程。近年来的研究表明HSP40与生精过程相关,本文就与生精相关的HSP40家族蛋白成员作一综述。 展开更多
关键词 HSP40 dnaj HSP70 生精过程
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分子伴侣HSP40/DNAJ蛋白家族及其在神经退行性疾病中的作用 被引量:1
7
作者 何颖慧 王志萍 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期640-646,共7页
分子伴侣和辅助伴侣分子能够促进新合成多肽的组装以及帮助未折叠或错误折叠的蛋白质重新折叠形成正确折叠的蛋白质,从而维持细胞内蛋白系统的稳态。作为热休克蛋白(HSP)70的辅助伴侣分子,HSP40(DNAJ)蛋白家族是目前已知的最大分子伴侣... 分子伴侣和辅助伴侣分子能够促进新合成多肽的组装以及帮助未折叠或错误折叠的蛋白质重新折叠形成正确折叠的蛋白质,从而维持细胞内蛋白系统的稳态。作为热休克蛋白(HSP)70的辅助伴侣分子,HSP40(DNAJ)蛋白家族是目前已知的最大分子伴侣家族,能够通过J结构域与HSP70结合,从而帮助蛋白质折叠。近年研究发现,DNAJ家族蛋白与阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、脊髓小脑性共济失调、进行性神经性腓骨肌萎缩症、脊髓性肌萎缩、远端型遗传性运动神经病变、肢带型肌营养不良、神经元蜡样质脂褐质沉积症和特发性震颤等神经退行性疾病的发生和发展有密切关系,如DNAJA1可有效降解亨廷顿蛋白聚集体;DNAJB1可降解蛋白聚集体ataxin-3;DNAJB2能够抑制亨廷顿蛋白聚集体的形成;DNAJB6能够抑制Aβ_(42)和α-突触核蛋白的聚集;DNAJC5可以促进TDP-43、τ蛋白和α-突触核蛋白释放到细胞外空间;与特发性震颤相关的DNAJC13的突变可能阻碍核内体蛋白运输。本文就DNAJ蛋白家族在神经退行性疾病中的作用机制进行综述。 展开更多
关键词 分子伴侣 热休克蛋白40 dnaj 神经退行性疾病 蛋白稳态 综述
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Molecular characterization of DnaJ 5 homologs in silkworm Bombyx mori and its expression during egg diapause 被引量:2
8
作者 Sasibhushan Sirigineedi Esvaran Vijayagowri Geetha N. Murthy Guruprasada Rao Kangayam M. Ponnuvel 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2014年第6期677-686,共10页
A comparison of the cDNA sequences (1 056 bp) of Bombyx mori DnaJ 5 homolog with B. mori genome revealed that unlike in other Hsps, it has an intron of 234 bp. The DnaJ 5 homolog contains 351 amino acids, of which 7... A comparison of the cDNA sequences (1 056 bp) of Bombyx mori DnaJ 5 homolog with B. mori genome revealed that unlike in other Hsps, it has an intron of 234 bp. The DnaJ 5 homolog contains 351 amino acids, of which 70 contain the conserved DnaJ domain at the N-terminal end. This homolog orB. mori has all desirable functional domains similar to other insects, and the 13 different DnaJ homologs identified in B. mori genome were distributed on different chromosomes. The expressed sequence tag database analysis of Hsp40 gene expression revealed higher expression in wing disc followed by diapause-induced eggs. Microarray analysis revealed higher expression of DnaJ 5 homolog at 18th h after oviposition in diapause-induced eggs. Further validation of DnaJ 5 expression through qPCR in diapause-induced and nondiapause eggs at different time intervals revealed higher expression in diapause eggs at 18 and 24 h after oviposition, which coincided with the expression of Hsp70 as the Hsp 40 is its co-chaperone. This study thus provides an outline of the genome organization of lisp40 gene, and its role in egg diapause induction in B. mori. 展开更多
关键词 Bombyx mori DIAPAUSE dnaj EXON Hsp40 INTRON
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拟南芥Hsp40蛋白AtDjA5在大肠杆菌中的功能分析 被引量:2
9
作者 陈鹏 徐西兵 +1 位作者 胡屹玲 杨毅 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1117-1122,共6页
通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型,发现AtDjA5及其J-Domain能够功能性地替换DnaJ及其J-Domain.免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用.由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调... 通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型,发现AtDjA5及其J-Domain能够功能性地替换DnaJ及其J-Domain.免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用.由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调热激蛋白DnaK表达量.这些发现说明AtDjA5在大肠杆菌中具有与DnaJ相似的功能. 展开更多
关键词 热激蛋白 Hsp40 dnaj AtDjA5 免疫共沉淀
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Genome-wide analysis of soybean DnaJA-family genes and functional characterization of GmDnaJA6 responses to saline and alkaline stress
10
作者 Binshuo Zhang Zhen Liu +10 位作者 Runnan Zhou Peng Cheng Haibo Li Zhiyang Wang Ying Liu Mingyang Li Zhenqing Zhao Zhenbang Hu Qingshan Chen Xiaoxia Wu Ying Zhao 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2023年第4期1230-1241,共12页
Plant Dna JA proteins act as molecular chaperones in response to environmental stressors.The purpose of this study was to characterize the function and regulatory mechanisms of Dna JA genes in soybean.Gene expression ... Plant Dna JA proteins act as molecular chaperones in response to environmental stressors.The purpose of this study was to characterize the function and regulatory mechanisms of Dna JA genes in soybean.Gene expression profiles in various soybean tissues at various stages of development indicated that Gm Dna JAs function in the coordination of stress and plant hormone responses.Gm Dna JA6 was identified as a candidate regulator of saline and alkaline stress resistance and Gm Dna JA6 overexpression lines showed increased soybean saline and alkaline tolerance.Dna J interacted with Hsp70,and Gm Hsp70 increased the saline and alkaline tolerance of plants with chimeric soybean hairy roots. 展开更多
关键词 SOYBEAN Heat shock proteins dnaj Salt stress Alkali stress
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Gene cloning and sequence analysis of the cold-adapted chaperones DnaK and DnaJ from deep-sea psychrotrophic bacterium Pseudoalteromonas sp. SM9913 被引量:1
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作者 ZHAO Dianli CHEN Xiulan HE Hailun SHI Mei ZHANG Yuzhong 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2007年第6期91-100,共10页
Pseudoalteromonas sp. SM9913 is a phychrotmphic bacterium isolated from the deep-sea sediment. The genes encoding chaperones DnaJ and DnaK of P. sp. SM9913 were cloned by normal PCR and TAIL - PCR (GenBank accession ... Pseudoalteromonas sp. SM9913 is a phychrotmphic bacterium isolated from the deep-sea sediment. The genes encoding chaperones DnaJ and DnaK of P. sp. SM9913 were cloned by normal PCR and TAIL - PCR (GenBank accession Nos DQ640312, DQ504163 ). The chaperones DnaJ and DnaK from the strain SM9913 contain such conserved domains as those of many other bacteria, and show some cold-adapted characteristics in their structures when compared with those from psychro-, meso-and themophilic bacteria. It is indicated that chaperones DnaJ and DnaK of P. sp. SM9913 may be adapted to low temperature in deep-sea and function well in assisting folding, assembling and translocation of proteins at low temperature. This research lays a foundation for the further study on the cold-adapted mechanism of chaperones DnaJ and DnaK of cold-adapted microorganisms. 展开更多
关键词 COLD-ADAPTED chaperone dnaj DNAK DEEP-SEA Pseudoalteromonas sp. SM9913 gene cloning sequence analysis
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猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补的研究 被引量:1
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作者 胡盼 米荣升 +8 位作者 黄燕 陆珂 贾海燕 程龙 詹婷婷 宋悦 王香平 韩先干 陈兆国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期635-643,共9页
为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1与DnaJ是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测HspA1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388-609位区域为HspA1表位区。分别对HspA... 为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1与DnaJ是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测HspA1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388-609位区域为HspA1表位区。分别对HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到pBiFC-VC155载体中,同时将DnaJ编码基因dnaj克隆到pBiFC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果显示,成功地构建了含HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi、DnaJ编码基因dnaj的真核重组表达质粒pBiFC-VC155-a1、pBiFC-VC155-a1-epi和pBiFC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光,表明HspA1和HspA1表位区均与DnaJ存在相互作用。本研究为进一步探讨HspA1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。 展开更多
关键词 猪附红细胞体 HspA1 HspA1表位区 dnaj 蛋白相互作用
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中华鳖抗嗜水气单胞菌亚单位疫苗的制备与应用 被引量:1
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作者 党伟 陆洪良 +3 位作者 高原 董玲玉 郑鹤 刘雅红 《杭州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第2期191-195,共5页
水体条件致病菌嗜水气单胞菌对中华鳖养殖业的危害巨大.为预防嗜水气单胞菌的感染,提高中华鳖免疫抵抗力,研究开发嗜水气单胞菌疫苗是一种有效的方法.利用PCR手段克隆获得嗜水气单胞菌DnaK和DnaJ两个基因,并将两基因重组到大肠杆菌表达... 水体条件致病菌嗜水气单胞菌对中华鳖养殖业的危害巨大.为预防嗜水气单胞菌的感染,提高中华鳖免疫抵抗力,研究开发嗜水气单胞菌疫苗是一种有效的方法.利用PCR手段克隆获得嗜水气单胞菌DnaK和DnaJ两个基因,并将两基因重组到大肠杆菌表达载体上,转化至大肠杆菌表达菌株,纯化获得了重组蛋白rDnaKAh和rDnaJAh.将两个重组蛋白分别与弗氏佐剂充分混合制备成疫苗,腹腔注射中华鳖幼鳖,加强免疫一次后,用已分离获得的致病菌株感染中华鳖幼鳖,实验结果表明rDnaK具有81.8%的免疫保护效应,而rDnaJ仅具有31.8%的免疫保护效应. 展开更多
关键词 中华鳖 嗜水气单胞菌 DNAK dnaj 免疫保护效应
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条斑紫菜DnaJ基因家族鉴定及其在环境胁迫下的表达分析
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作者 孙斌 孔凡娜 殷吉强 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期51-61,共11页
针对条斑紫菜(Pyropia yezoensis)DnaJ(PyDnaJ)家族研究相对较少的现状,本研究利用生物信息学方法对PyDnaJ基因家族及其在胁迫条件下的表达模式进行探究,以便为进一步解析条斑紫菜抗逆机制奠定前期工作基础。本研究鉴定出27个DnaJ蛋白(P... 针对条斑紫菜(Pyropia yezoensis)DnaJ(PyDnaJ)家族研究相对较少的现状,本研究利用生物信息学方法对PyDnaJ基因家族及其在胁迫条件下的表达模式进行探究,以便为进一步解析条斑紫菜抗逆机制奠定前期工作基础。本研究鉴定出27个DnaJ蛋白(PyDnaJ01~27),并发现:其编码氨基酸数量范围为191~980;大部分DnaJ定位于高尔基体和细胞核;成员的基因结构简单,内含子较少;根据所含结构域不同可分为A、B、C三类;27个成员散布于3条染色体上。其中:PY_1染色体含DnaJ基因最多(11个);PyDnaJ01和PyDnaJ10为片段重复基因;PY_2和PY_3染色体上各有8个DnaJ基因;DnaJ基因启动子区域含有不同数目的胁迫响应元件和植物激素响应元件。系统发生分析表明PyDnaJ蛋白家族可以分成10个亚群。qRT-PCR结果显示,PyDnaJ家族成员在孢子体世代下的表达水平显著高于配子体世代,PyDnaJ家族成员在失水及温度胁迫下具有不同表达模式。 展开更多
关键词 条斑紫菜 dnaj 基因家族 失水胁迫 温度胁迫
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半滑舌鳎弧菌病病原的分离鉴定 被引量:3
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作者 徐晓丽 叶红梅 +3 位作者 侯纯强 蔡琰 钟文慧 李贺密 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第8期86-90,共5页
从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,生... 从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,生化特性与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)较为接近,以hsp60基因为遗传标记构建的系统发育树将菌株150803与溶藻弧菌聚为一支,置信度为99%,采用特异性引物扩增溶藻弧菌dnaJ基因得到预期144 bp的基因片段。综合以上结果判定引起此次半滑舌鳎发病的病原为溶藻弧菌。对22种抗菌药物的敏感性试验表明,菌株150803对恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素、菌必治敏感,对氟苯尼考、呋喃唑酮、苯唑青霉素等具有抗性。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 溶藻弧菌 HSP60 dnaj
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肺炎链球菌烯醇化酶与热休克蛋白DnaJ的结合及结合位点鉴定
16
作者 王建敏 马峰 +5 位作者 徐红梅 王丽滨 邢燕 粟玉凤 张雪梅 王虹 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1186-1192,共7页
目的:明确肺炎链球菌糖酵解关键酶烯醇化酶(enolase,Eno)和热休克蛋白DnaJ是否有直接结合及结合位点。方法:原核表达并纯化Eno全长蛋白,鉴定其酶活性,利用重组Eno蛋白皮下免疫昆明小鼠制备特异性抗血清,分析其胞外分泌情况;采用生... 目的:明确肺炎链球菌糖酵解关键酶烯醇化酶(enolase,Eno)和热休克蛋白DnaJ是否有直接结合及结合位点。方法:原核表达并纯化Eno全长蛋白,鉴定其酶活性,利用重组Eno蛋白皮下免疫昆明小鼠制备特异性抗血清,分析其胞外分泌情况;采用生物膜层干涉(biolayer interferometrvy,BLI)技术和直接结合实验鉴定Eno和DnaJ两者之间是否存在直接相互作用;在前者结果阳性的基础上,截短表达Eno蛋白,通过直接结合实验鉴定Eno蛋白结合DnaJ的位点。结果:成功表达重组Eno蛋白,纯度达90%,该蛋白具有酶活性;重组Eno蛋白皮下免疫昆明小鼠后,获得效价达1∶7.68×106的特异性抗血清;Western blot分析显示,7种不同血清型肺炎链球菌培养上清中均在分子量约47 k D处出现特异性反应带;直接结合试验显示,随着Eno蛋白浓度增加,Eno与DnaJ的结合量也相应增加(r=0.920,P=0.000),其吸光度值从0.222±0.042(12.5μg/ml)增加到0.569±0.099(200.0μg/ml);BLI技术测定两者结合的亲和常数为926 nmol/L;截短的Eno(aa1-aa100)与DnaJ的结合量2.25±0.38高于其他截短序列的结合量0.94±0.25、1.08±0.09、0.75±0.12,差异具有统计学意义(P=0.000,P=0.001,P=0.000)。结论:肺炎链球菌Eno蛋白与DnaJ蛋白存在直接结合作用,结合位点主要位于其N端的1~100个氨基酸序列。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 烯醇化酶 dnaj 蛋白相互作用
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拟南芥BAH1与大肠杆菌热胁迫耐受的关系分析
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作者 梁可 徐西兵 +1 位作者 牛毓龙 杨毅 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期623-628,共6页
拟南芥BAH1含有保守的C3H4型RING结构域,与DnaJ锌指结构类似.利用原核表达纯化的BAH1进行体外泛素化实验证明了BAH1具有E3连接酶活性.然后通过表型回复实验发现BAH1融合J-domain结构域后(JdBAH1)和DnaJ一样能明显弥补danJ突变株MF634的... 拟南芥BAH1含有保守的C3H4型RING结构域,与DnaJ锌指结构类似.利用原核表达纯化的BAH1进行体外泛素化实验证明了BAH1具有E3连接酶活性.然后通过表型回复实验发现BAH1融合J-domain结构域后(JdBAH1)和DnaJ一样能明显弥补danJ突变株MF634的热敏表型,在43℃存活;而转入突变锌指结构的JdBAH1C231S,C234S,C276S,C279S(JdBAH1△Zn1/2)菌株在43℃高温条件下不能存活,说明BAH1在大肠杆菌内具有类似DnaJ锌指结构的功能.因此,BAH1在E.coli中的功能有可能与DnaJ相似,通过锌指结构参与了DnaK/DnaJ伴侣系统发挥功能. 展开更多
关键词 锌指 BAH1 dnaj E3泛素连接酶
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Identification and characterization of a Dna J gene from red alga Pyropia yezoensis(Bangiales, Rhodophyta) 被引量:1
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作者 刘娇 李先超 +1 位作者 唐学玺 周斌 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期405-411,共7页
Members of the Dna J family are proteins that play a pivotal role in various cellular processes, such as protein folding, protein transport and cellular responses to stress. In the present study, we identified and cha... Members of the Dna J family are proteins that play a pivotal role in various cellular processes, such as protein folding, protein transport and cellular responses to stress. In the present study, we identified and characterized the full-length Dna J c DNA sequence from expressed sequence tags of Pyropia yezoensis( Py Dna J) via rapid identification of c DNA ends. This c DNA encoded a protein of 429 amino acids, which shared high sequence similarity with other identified Dna J proteins, such as a heat shock protein 40/Dna J from Pyropia haitanensis. The relative m RNA expression level of Py Dna J was investigated using real-time PCR to determine its specific expression during the algal life cycle and during desiccation. The relative m RNA expression level in sporophytes was higher than that in gametophytes and significantly increased during the whole desiccation process. These results indicate that Py Dna J is an authentic member of the Dna J family in plants and red algae and might play a pivotal role in mitigating damage to P. yezoensis during desiccation. 展开更多
关键词 dnaj DESICCATION life cycle mRNA expression Pyropia yezoensis
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Fibrolamellar hepatocellular carcinoma:Exploring molecular mechanisms and differentiation pathways to better understand disease outcomes and prognosis
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作者 Cassandra A.Kersten Elise N.Sloey +3 位作者 Eric Zhou Ying Peng Michael S.Torbenson Yi Guo 《Liver Research》 2017年第4期187-192,共6页
Fibrolamellar hepatocellular carcinoma(FLC)is a rare but aggressive liver cancer of children that occurs predominantly in teenagers without a history of liver disease.Surgical resection remains the only therapeutic op... Fibrolamellar hepatocellular carcinoma(FLC)is a rare but aggressive liver cancer of children that occurs predominantly in teenagers without a history of liver disease.Surgical resection remains the only therapeutic option,and the recurrence rate is extremely high(>50%within 3 years).A newly discovered chromosomal deletion that occurs in the majority of FLCs generates a novel kinase fusion between DnaJ heat shock protein family member B1(DNAJB1)and protein kinase cAMP-activated catalytic subunit alpha(PRKACA)(DNAJB1-PRKACA).Despite its high penetrance and apparent specificity for FLC,the oncogenic role of this fusion event remains unclear.In this review article,we discuss the histology,presentation and diagnosis,current treatment,and roles of the DNAJB1-PRKACA as well as research models contributing to our understanding of this disease. 展开更多
关键词 Fibrolamellar hepatocellular carcinoma(FLC) dnaj heat shock protein family member B1 (dnajB1) Protein kinase cAMP-activated catalytic subunit alpha(PRKACA)Pediatric cancer Liver cancer
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葡萄糖调节蛋白78研究进展 被引量:23
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作者 吴逸园 杨业鹏 李载权 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期135-141,共7页
葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78kD,GRP78)又称免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy chain binding protein,Bip),是位于内质网上重要的分子伴侣,属热休克蛋白70家族的一员,GRP78分子及其DNA分子序列结构在许... 葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78kD,GRP78)又称免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy chain binding protein,Bip),是位于内质网上重要的分子伴侣,属热休克蛋白70家族的一员,GRP78分子及其DNA分子序列结构在许多生物物种中高度保守。GRP78在内质网中参与阻止内质网新生肽聚集、调节内质网钙稳态、抗内质网相关性细胞凋亡,以及启动未折叠蛋白反应等细胞生命过程。GRP78基因启动子上存在内质网应激反应元件(ERSE)和cAMP反应元件(CRE)等特殊的顺式作用元件,特异性转录因子ATF6等与GRP78启动子上顺式作用元件发生动态结合,从而调节GRP78基础性或诱导性转录表达。近年来发现,GRP78与脂肪肝、肿瘤和神经系统等疾病的发生发展密切相关,GRP78生物学功能的研究已经引起生物学家们的广泛重视。 展开更多
关键词 葡萄糖调节蛋白78 GRP78-ERdj3循环 甲基化酶依赖单启动子分析
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