DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用 被引量：13

1

作者 刘超 冯冬亮 刘长晖 《中国法医学杂志》 CSCD 北大核心 2010年第2期79-81,共3页

目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后... 目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。 展开更多

关键词 法医物证学 DNA数据库 直接扩增法 磁珠法 Chelex-100法

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基于SCAR标记和DNA条形码技术的苍术基原鉴别研究

2

作者 陈研 冯露露 +1 位作者 黄荣 齐伟辰 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2024年第2期490-501,共12页

目的开发出能同时鉴别北苍术和关苍术的分子标记方法,并探究不同种质资源苍术的遗传进化关系。方法对不同地区北苍术Atractylodes chinensis(Bunge)Koidz及关苍术A.japonica Koidz.ex Kitam基因组DNA的差异片段进行测序,结合SRAP、ISSR... 目的开发出能同时鉴别北苍术和关苍术的分子标记方法,并探究不同种质资源苍术的遗传进化关系。方法对不同地区北苍术Atractylodes chinensis(Bunge)Koidz及关苍术A.japonica Koidz.ex Kitam基因组DNA的差异片段进行测序,结合SRAP、ISSR、DAMD分子标记方法,优化PCR反应体系,筛选并转换成特异性标记,同时,采用条形码方法分析种间序列差异。结果通过SRAP、ISSR、DAMD三种分子标记方法的PCR扩增,共筛选出198对能稳定扩增且重现性好的引物,转换出7对能稳定、快速鉴别北苍术和关苍术的SCAR引物。条形码方法检测出北苍术ITS2序列长度为454 bp,关苍术ITS2序列长度为453 bp,与其他苍术属植物之间遗传距离较远。NJ树结果显示,北苍术、关苍术及其他苍术属植物均各自聚为一支,表现出良好的单系性。依据ITS2二级结构,4种苍术属植物在螺旋区的茎环数目、大小、位置均有明显差异,可以直观地进行区分。结论所开发的特异性SCAR标记为苍术属植物优良品种的筛选提供了新方法,DNA条形码能稳定、准确鉴别北苍术。 展开更多

关键词 北苍术 关苍术 Internal transcribed spacer 2(ITS2) Sequence-related amplified polymorphism(SRAP) Inter-simple sequence repeat(ISSR) direct amplification of minisatellite region DNA(DAMD) Sequence characterized amplified regions(SCAR)

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直接扩增法用于重大灾难事故中软骨的个体识别 被引量：5

3

作者 王传海 徐程 +2 位作者 李湘秦 吴勇 杜舟 《法医学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期281-283,共3页

目的探讨直接扩增法对软骨STR检验的有效性,以提高灾难受害者身源鉴定工作效率。方法采用Power Plex~21试剂盒对88份软骨进行直接扩增法检验,同步进行磁珠法比较分型结果。结果 88份软骨检材中,直接扩增法与磁珠法均成功检出84份检材... 目的探讨直接扩增法对软骨STR检验的有效性,以提高灾难受害者身源鉴定工作效率。方法采用Power Plex~21试剂盒对88份软骨进行直接扩增法检验,同步进行磁珠法比较分型结果。结果 88份软骨检材中,直接扩增法与磁珠法均成功检出84份检材的STR基因型,两者分型结果完全一致。结论Power Plex~21试剂盒直接扩增法可以应用于软骨STR分型检验,且操作简便、快速,在重大灾难事故身源鉴定中具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 法医遗传学 软骨 基因分型技术 直接扩增法 个体识别

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荧光STR直接复合扩增试剂缓冲体系的研制 被引量：4

4

作者 赵兴春 姜伯玮 +1 位作者 季安全 叶健 《中国法医学杂志》 CSCD 2012年第5期359-363,共5页

目的研制适用于数据库样本荧光STR直接复合扩增体系。方法针对常规血卡、FTA和903血卡样本,配制扩增缓冲液基准母液,采用不同配方的扩增缓冲体系进行直接扩增及检测。考察不同种类增强剂、4种商业化DNA聚合酶、不同复性温度和终延伸时... 目的研制适用于数据库样本荧光STR直接复合扩增体系。方法针对常规血卡、FTA和903血卡样本,配制扩增缓冲液基准母液,采用不同配方的扩增缓冲体系进行直接扩增及检测。考察不同种类增强剂、4种商业化DNA聚合酶、不同复性温度和终延伸时间对检材的检测效果,并验证优化体系的适应性。结果采用本文所建体系对各类血卡样本进行检验,均可获得样本清晰、完整的STR分型。体系选择BSA\Tween20\DMSO\甘油等增强剂组合、Typer热启动聚合酶1.5U/10μL、57～59℃复性温度、30～50min终延伸时间,采用10μL体系即可对直径1.2mm FTA卡血样进行有效分型。结论本文所研制的缓冲体系能够满足常规血卡、FTA和903血卡样本直接扩增检验的需要。 展开更多

关键词 法医物证学 直接扩增 复合扩增 缓冲体系

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Goldeneye^(TM) 20A-M试剂盒在数据库建设中的应用 被引量：4

5

作者 李秋阳 金萍 +3 位作者 沈红缨 于蛟 郭飞 姜先华 《中国法医学杂志》 CSCD 2012年第4期272-274,共3页

目的研究GoldeneyeTM 20A-M试剂盒在DNA数据库建设中的应用。方法针对血滤纸特性,优化不同条件血痕样品的取样量、扩增循环次数,缩短PCR扩增时间,以建立适合批量样品直接快速扩增检验的方法,并将其应用于1 200份数据库样品的检验中。结... 目的研究GoldeneyeTM 20A-M试剂盒在DNA数据库建设中的应用。方法针对血滤纸特性,优化不同条件血痕样品的取样量、扩增循环次数,缩短PCR扩增时间,以建立适合批量样品直接快速扩增检验的方法,并将其应用于1 200份数据库样品的检验中。结果确定了批量样本检验的最适取样量和扩增循环次数,建立了快速扩增反应程序,1 200份样品的直接快速扩增检验成功率为98.4%,批量检验92份样品(1板)从取样到电泳完成只需6h。结论 GoldeneyeTM 20A-M试剂盒的应用,免去DNA提取过程,方法简单、快速、获得信息量大,适用于DNA数据库建设的需要。 展开更多

关键词 法医物证学 DNA数据库 直接扩增法 GoldeneyeTM 20A-M试剂盒

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直接扩增技术在法医DNA检验中的研究进展 被引量：3

6

作者 沈伟 马骏 +3 位作者 潘豪杰 邓明明 李翘 任文彦 《刑事技术》 2018年第5期390-395,共6页

直接扩增技术具有缩短检验时间、提高灵敏度、减少操作步骤和降低污染风险等优点,故可较大程度地节约人力、物力、财力及时间,因而该技术的发展对数据库建设、重大紧急案件和大规模灾难性事故等均有重要的应用价值。目前,直接扩增已在... 直接扩增技术具有缩短检验时间、提高灵敏度、减少操作步骤和降低污染风险等优点,故可较大程度地节约人力、物力、财力及时间,因而该技术的发展对数据库建设、重大紧急案件和大规模灾难性事故等均有重要的应用价值。目前,直接扩增已在数据库建设中得到了广泛应用,在案件检验中其应用也在不断深入和拓展。本文对直接扩增技术的特点、商业化扩增试剂盒在直扩中的应用、常见与接触DNA检材的直扩及其影响因素和快速直接扩增技术在法医DNA检验中的研究状况进行了综述,介绍了在采集接触DNA样品时棉签类型和处理试剂对直扩的影响,阐述了游离DNA的发现及其意义,希望能为相关研究和应用提供参考。 展开更多

关键词 法医遗传学 直接扩增 STR分型

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一种同步回旋激射不稳定性对电磁波的直接放大 被引量：2

7

作者 石秉仁 吴京生 《核聚变与等离子体物理》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期1-6,11,共6页

本文讨论了一种同步回旋激射不稳定性对电磁波的直接放大,它基于少量在速度空间具有空心分布的中等相对论性高能电子束与本底等离子体中本征电磁模的共振相互作用。主要关心的是的参数区域(ω_e为电子等离子体频率,Ω_e为电子回旋频率)... 本文讨论了一种同步回旋激射不稳定性对电磁波的直接放大,它基于少量在速度空间具有空心分布的中等相对论性高能电子束与本底等离子体中本征电磁模的共振相互作用。主要关心的是的参数区域(ω_e为电子等离子体频率,Ω_e为电子回旋频率)。计算表明,若电子束的单能性很高,则不稳定性增长率比同样参数下由动力效应计算得出的增长率高若干个数量级,且最大增长率处在2ω_e附近。 展开更多

关键词 同步回旋激射 电磁波 直接放大

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川东地区汉族人群18个STR基因座遗传多态性 被引量：2

8

作者 汪昌丽 范英南 +4 位作者 樊哲仁 姚伊人 杨帆 张国栋 喻永敏 《检验医学与临床》 CAS 2019年第1期1-4,共4页

目的应用直接扩增法批量检验并调查川东地区汉族人群DNA标本在18个STR基因座的遗传多态性。方法采用DNATyper15TMPlus试剂盒直接扩增和3730XL型遗传分析仪检测STR分型。随机抽取326例该地区汉族无关个体STR分型结果,并统计18个STR基因... 目的应用直接扩增法批量检验并调查川东地区汉族人群DNA标本在18个STR基因座的遗传多态性。方法采用DNATyper15TMPlus试剂盒直接扩增和3730XL型遗传分析仪检测STR分型。随机抽取326例该地区汉族无关个体STR分型结果,并统计18个STR基因座的等位基因分布频率及其他群体遗传学参数。结果 18个STR基因座基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),川东地区汉族人群18个STR基因座的杂合度、匹配概率、多态信息含量、个体识别概率、非父排除概率的范围分别为0.604～0.896、0.016～0.219、0.545～0.908、0.781～0.984、0.295～0.788。结论使用直接扩增法批量检验DNA数据库标本的效率高、质量好;18个STR基因座的联合应用能获得较好的系统效能,为该地区汉族人群的遗传多态性研究及应用提供数据支持。 展开更多

关键词 直接扩增 STR基因座 遗传多态性 川东地区 汉族

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荧光聚合酶链反应检测血液标本快速方法的建立及其在ADRB1单核苷酸多态性分型中的应用 被引量：1

9

作者 龚如涵 李佳 黄凯峰 《诊断学理论与实践》 2020年第4期402-406,共5页

目的:建立一种荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测血液标本的快速方法,并将其应用到ADRB1(1165G>C)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分型检测中。方法:建立可直接利用血液样本进行荧光PC... 目的:建立一种荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测血液标本的快速方法,并将其应用到ADRB1(1165G>C)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分型检测中。方法:建立可直接利用血液样本进行荧光PCR扩增法,与传统血液样本的基因SNP检测方法不同,本所建立的方法无需进行血液基因组DNA的提取。选取1051份临床乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)抗凝全血样本,利用本研究建立的采用血液标本直接扩增的荧光PCR方法,进行ADRB1的SNP分型,并将分型结果与Sanger测序法这一"金标准"进行对比,评估两者之间的符合率和一致性。结果:本研究建立的方法与传统DNA提取加荧光PCR方法相比,具有较好的扩增性能;与Sanger测序法相比,本研究建立的方法在ADRB1(1165G>C)基因SNP分型检测中的总体符合率达到98.98%,Kappa一致性系数达到0.971,具有较高的准确率。结论:与传统方法相比,本研究建立的方法可省略基因组DNA提取步骤,其操作简便、成本较低,且准确率高,适合在基因分型相关临床检验工作中推广和使用。 展开更多

关键词 荧光聚合酶链反应 直接扩增 ADRB1基因 Sanger测序

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直接扩增技术在接触性检材DNA检验中的应用 被引量：1

10

作者 李长征 刘海东 +3 位作者 崔文 寻超群 孙贤学 姜铭章 《济宁医学院学报》 2014年第5期347-349,共3页

目的：将DNA直接扩增技术引入案件现场不同的接触性检材的检验中，构建有效的接触性DNA的生物检材的检验方法。方法采用剪取、擦拭等方法对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶、吸管及残缺指纹等检材进行取样，采用DNA直接扩增技术获得短串联康... 目的：将DNA直接扩增技术引入案件现场不同的接触性检材的检验中，构建有效的接触性DNA的生物检材的检验方法。方法采用剪取、擦拭等方法对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶、吸管及残缺指纹等检材进行取样，采用DNA直接扩增技术获得短串联康复序列（short tandem repeat ，STR）分型。结果 DNA直接扩增技术在5种不同检材中检出的基因型均为单一个体来源，其对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶和吸管、残缺指纹检材的成功率分别为90％、100％、70％、90％和60％，平均成功率在70％以上。分别对5种检材多处取点样品进行平行扩增，手套、烟蒂检材3个点位成功率均在90％以上；饮料瓶、吸管3个点位的成功率达80％～90％；衣服3个点位的成功率在60％～70％；残缺指纹3个点位的成功率在50％～60％。结论 DNA直接扩增技术对接触性DNA检材检验具有较高的有效应，其结果可靠，重复性强。 展开更多

关键词 法医物证 接触性DNA 直接扩增

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现场生物检材Identifiler Plus直接扩增方法的应用研究 被引量：1

11

作者 哈飞 孙红兵 +2 位作者 高海鹏 杨鑫 骆继怀 《中国优生与遗传杂志》 2013年第12期33-34,29,共3页

目的探讨非直接扩增试剂Identifiler Plus Kit直接扩增现场微量生物检材的可行性。方法选取270份现场血样、68份烟蒂和194份脱落细胞擦拭物,采用Identifiler Plus和Identifiler-Direct Kit直接扩增法及Chelex-100提取法对样本进行检测... 目的探讨非直接扩增试剂Identifiler Plus Kit直接扩增现场微量生物检材的可行性。方法选取270份现场血样、68份烟蒂和194份脱落细胞擦拭物,采用Identifiler Plus和Identifiler-Direct Kit直接扩增法及Chelex-100提取法对样本进行检测。结果 PCR遗传分析数据显示Identifiler Plus Kit直接扩增法对现场血样检测成功率为96.1%,对烟蒂及脱落细胞擦拭物检测成功率为分别为86.8%和64.9%。结论 Identifiler Plus Kit能有效应用于血痕、烟蒂、脱落细胞擦拭物等现场生物检材的直接扩增。 展开更多

关键词 生物检材 直接扩增 Identifiler PLUS KIT

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黄瓜叶片直接PCR扩增方法的建立

12

作者 付冰冰 钟颜花 +3 位作者 雍建朋 陈菲帆 张朝文 李玉红 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1691-1697,共7页

为了快速对黄瓜样品进行基于PCR的分子鉴定,本研究以我国华北型黄瓜品种"长春密刺"的幼嫩叶片为材料,通过筛选DNA聚合酶的种类、改变黄瓜叶片取样量以及扩增产物长度等条件,对叶片直接PCR的体系进行了建立和验证。结果表明,普... 为了快速对黄瓜样品进行基于PCR的分子鉴定,本研究以我国华北型黄瓜品种"长春密刺"的幼嫩叶片为材料,通过筛选DNA聚合酶的种类、改变黄瓜叶片取样量以及扩增产物长度等条件,对叶片直接PCR的体系进行了建立和验证。结果表明,普通Taq酶和Hiproof高保真酶对叶片直接PCR扩增的效果较好,与对照CTAB法提取的DNA相比,20μL、200μL和1 000μL枪头的叶片取样量、不同GC含量(25%~65%)和不同扩增长度的DNA模板对PCR扩增效果无明显差异;此体系也可用于黄瓜的茎、花、果实等组织部位上。该试验方法的建立及应用,省去了DNA体外提取过程,有助于提高基于黄瓜PCR基础上的分子检测效率。 展开更多

关键词 黄瓜 叶片 PCR 直接扩增

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林下参与栽培参扩增片段长度多态性指纹图谱鉴定 被引量：23

13

作者 王帅 王慧 +2 位作者 张丽华 王淼 李明成 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期677-680,共4页

目的探讨林下参与栽培参DNA直接扩增片段长度多态性(direct amplification of length polymorphisms,DALP)特征,建立林下参与栽培参直接扩增片段长度多态性指纹鉴定图谱。方法采用改进十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)法提取林下参和栽培参... 目的探讨林下参与栽培参DNA直接扩增片段长度多态性(direct amplification of length polymorphisms,DALP)特征,建立林下参与栽培参直接扩增片段长度多态性指纹鉴定图谱。方法采用改进十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)法提取林下参和栽培参基因组DNA,设计6条随机引物,优化直接扩增片段长度多态性体系,进行PCR扩增。结果采用改进的十六烷基三甲基溴化胺法从人参样品中提取到约为19 kb左右的基因组DNA,其纯度在(1.80±0.23)之间,并获得林下参与栽培参的直接扩增片段长度多态性指纹图谱。结论获得的林下参直接扩增片段长度多态性图谱具有指纹特征,可以作为林下参与栽培参的特异鉴定方法。 展开更多

关键词 林下参 栽培参 DNA直接扩增片段长度多态性 指纹图谱

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DNA Typer^(TM)15 plus直扩试剂盒在DNA数据库建设中的应用 被引量：20

14

作者 白雪 姜成涛 +7 位作者 赵兴春 孙敬 张建 欧元 王乐 赵蕾 亢斌 叶健 《中国法医学杂志》 CSCD 2012年第5期372-375,共4页

目的测试DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的技术性能指标,评价其在DNA数据库建设中的应用价值。方法采用DNA TyperTM15 plus试剂盒,并使用IdentifilerTM和DNA TyperTM15试剂盒进行比较,设定不同体系和引物量、不同退火温度和循环次数以进... 目的测试DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的技术性能指标,评价其在DNA数据库建设中的应用价值。方法采用DNA TyperTM15 plus试剂盒,并使用IdentifilerTM和DNA TyperTM15试剂盒进行比较,设定不同体系和引物量、不同退火温度和循环次数以进行方法验证;设定不同模板量标准品、不同比例混合样本,取猪、狗、兔等动物的血液样品,血痕、骨骼、唾液斑等常见检材样本以及不同建库样本,以验证试剂盒灵敏度、特异性、稳定性以及混合样本、常见检材及建库样本的检测能力。结果直扩试剂盒分型结果准确,重复性好,灵敏度可达0.125ng,不同批次间试剂检测结果稳定,对不同检材有很好的适应性。10μL扩增体系时FTA卡和加强型血液采集卡取样直径应为0.5mm,而血滤纸、血液采集卡样本和经典型血液采集卡取样直径应为1.0mm。结论 DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的性能可以满足DNA数据库建设及检案的需要,可在相关实验中选择使用。 展开更多

关键词 法医物证学 直接扩增试剂盒 DNA数据库 DNA TyperTM15 plus试剂盒

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5种免提取试剂盒检验滤纸血痕结果的比较 被引量：12

15

作者 巴华杰 林子清 +3 位作者 刘亚楠 刘冰泉 马骏 朱爱华 《中国法医学杂志》 CSCD 2013年第1期49-51,共3页

目的探讨5种免提取试剂盒对滤纸血痕样本检验的效果。方法陈旧滤纸血痕(存放时间12～14个月)及新鲜滤纸血痕(存放时间小于1个月)各920份,分别随机分为5组。应用AGCU 17+1、Goldeneye 20A、Powerplex16HS、Identifiler Plus、Identifiler... 目的探讨5种免提取试剂盒对滤纸血痕样本检验的效果。方法陈旧滤纸血痕(存放时间12～14个月)及新鲜滤纸血痕(存放时间小于1个月)各920份,分别随机分为5组。应用AGCU 17+1、Goldeneye 20A、Powerplex16HS、Identifiler Plus、Identifiler Direct 5种免提取试剂盒进行检验,对比各组检验结果。结果陈旧滤纸血痕5种试剂盒的检验成功率为98.91%～100%,各组间无差异(P>0.05);新鲜滤纸血痕,Identifiler Plus和Identifiler Direct试剂盒检验成功率高于AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒(P<0.01);将样本做陈旧化处理后再用成功率较低的3种试剂盒进行检验,成功率分别升至100%、99.46%、99.46%;Identifiler Plus试剂盒扩增循环27次效果优于28次。结论本文5种试剂盒均可用于滤纸血痕的直接扩增检验,但使用AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒需将新鲜血痕做陈旧化处理;Identifiler Plus试剂盒需将循环次数降为27次。 展开更多

关键词 法医物证学 滤纸血痕 免提取试剂盒 直接扩增检验

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红景天属植物DALP反应体系的建立 被引量：8

16

作者 李永谊 虞泓 +2 位作者 朱荣勋 和锐 倪念春 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期419-423,共5页

目的 利用直接扩增片段长度多态(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法 以红景天基因组DNA为模板,对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果 建立了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用... 目的 利用直接扩增片段长度多态(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法 以红景天基因组DNA为模板,对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果 建立了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用反应体系;经过大量重复性实验,反应体系为20μL,Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTPs浓度为1.25 mmol/L,模板DNA的量为60 ng,5 pmol/L选择性引物1μL,5 pmol/L反向引物3 μL,引物浓度比为1:3,Taq酶2 U。反应过程为:95℃预变性5 min、94℃变性30 s、50℃退火30 s、72℃延伸1 min;30个循环,再72℃延伸10 min,完成整个PCR反应。结论 该体系可有效地应用于红景天属药材的分类鉴定和地道性鉴定。 展开更多

关键词 红景天属 Taq酶 反应体系 引物 MG^2+ 变性 DNA 反应程序 dNTPs浓度 地道性

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黄瓜DAMD反应体系的建立及种质遗传资源研究 被引量：8

17

作者 胡建斌 张帆 +4 位作者 李贞煌 李雅鸽 刘丹花 王建丽 李建吾 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期652-658,共7页

通过L16（45）正交试验,研究Mg^2＋、dNTPs、Taq酶、引物和模板DNA对黄瓜DAMD（direct amplificationof minisatellite region DNA）反应的影响.结果表明,适宜的DAMD反应体系包括1×Taq酶缓冲液、1.5 mmol/LMg^2＋、0.25 mmol/L dN... 通过L16（45）正交试验,研究Mg^2＋、dNTPs、Taq酶、引物和模板DNA对黄瓜DAMD（direct amplificationof minisatellite region DNA）反应的影响.结果表明,适宜的DAMD反应体系包括1×Taq酶缓冲液、1.5 mmol/LMg^2＋、0.25 mmol/L dNTPs、1.2 UTaq酶、2.0μmol/L引物和10-80 ng模板DNA,总体积20μL.采用该体系并结合温度梯度PCR,确定了15种小卫星核心DNA引物的适宜退火温度.利用这些引物对20份不同类型的黄瓜材料进行扩增,引物平均检测到10.2个位点,平均多态性位点7.3个,平均多态性百分率71.4%.PCA分析表明,20份材料明显可分为3个区域,第I区包含绝大部分华南型黄瓜,第II区包含绝大部分华北型黄瓜,第III区为野生型黄瓜.此结果与SSR标记的研究结果基本一致,证明本实验构建的DAMD反应体系的稳定性及DAMD标记的可行性. 展开更多

关键词 黄瓜 正交设计 DAMD 反应体系 种质资源

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FTA卡直接扩增缓冲增强剂的研制 被引量：6

18

作者 赵兴春 姜伯玮 叶健 《刑事技术》 2012年第3期13-15,共3页

目的研制一种能够配合非直接扩增试剂应用的PCR缓冲增强剂,实现对FTA卡保存样本的直接扩增。方法基于常规STR复合扩增试剂盒的扩增体系及引物组,加入增强剂对FTA卡类样本进行直接扩增。结果获得样本STR分型结果清晰、完整、平衡性好,无... 目的研制一种能够配合非直接扩增试剂应用的PCR缓冲增强剂,实现对FTA卡保存样本的直接扩增。方法基于常规STR复合扩增试剂盒的扩增体系及引物组,加入增强剂对FTA卡类样本进行直接扩增。结果获得样本STR分型结果清晰、完整、平衡性好,无明显抑制现象存在。结论所研制的FTA卡直扩增强剂能达到FTA卡保存样本的直接扩增检验要求,可应用于法医STR检验。 展开更多

关键词 法医遗传学 直接扩增 复合扩增 FTA卡 缓冲体系 增强剂

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汤洪敏云南野生大白口蘑遗传多样性研究 被引量：7

19

作者 汤洪敏 吴刚 虞泓 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期128-134,共7页

应用DALP技术对云南野生大白口蘑遗传多样性进行分析.筛选的5组引物在大白口蘑6个菌塘的56朵子实体中检测到202个位点,其中多态位点151个,多态位点百分比PPB为74.75%.6个菌塘总的观察等位基因数Na为1.7475;总的有效等位基因数Ne为1.4659... 应用DALP技术对云南野生大白口蘑遗传多样性进行分析.筛选的5组引物在大白口蘑6个菌塘的56朵子实体中检测到202个位点,其中多态位点151个,多态位点百分比PPB为74.75%.6个菌塘总的观察等位基因数Na为1.7475;总的有效等位基因数Ne为1.4659;Nei＇s基因多样性指数H为0.2722;总的Shannon多样性指数I为0.4053;菌塘总的基因多样度Ht为0.2705,菌塘内基因多样性度Hs 为0.012,菌塘间基因分化系数 Gst 为0.9556,菌塘的遗传一致度在0.60～0.80之间.结果表明大白口蘑遗传变异有95.56%存在菌塘间,4.44%存在菌塘内,即大白口蘑遗传变异绝大多数存在于菌塘之间. 展开更多

关键词 菌塘 直接扩增片断长度多态性

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基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法的建立

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作者 李浪 古莉冰 +6 位作者 朱丽 何建安 叶颖 张然 李华文 李福缘 顾大勇 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第3期358-364,共7页

目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果... 目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果5种样本检测限分别为血清103 PFU/mL,尿、咽拭子和唾液102 PFU/mL,全血104 PFU/mL,标准曲线的拟合优度的可决系数均在0.98以上,扩增效率均在90%~110%;寨卡病毒核酸成功扩增,非寨卡病毒核酸均未能扩增;尿、全血和唾液样本的重复性实验中106 PFU/mL和102 PFU/mL两个浓度的6个重复Ct值的变异系数均<5%。该研究建立的直扩RT-PCR技术的寨卡病毒检测方法与常规RT-PCR技术的检测结果一致,8个寨卡病毒样本,均只检测出2个血清样本,其余62个非寨卡病毒样本及12个阴性样本均未得到扩增。结论成功建立基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法,该方法简便快捷且灵敏度高、特异度强。 展开更多

关键词 寨卡病毒 直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术 DNA聚合酶

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