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依赖解旋酶的等温扩增技术在手足口病检测中的应用研究 被引量:2
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作者 王晓 唐美媛 《智慧健康》 2018年第5期10-11,共2页
目的探讨依赖解旋酶的等温扩增技术在手足口病检测中的应用研究。方法选取医院收治的手足口病儿童(EV71、CA16及HFMD其他EV病原体各40例)标本。对收集手足口病病人的标本使用依赖解旋酶恒温扩增技术检测,分析依赖解旋酶的恒温扩增(RT-t ... 目的探讨依赖解旋酶的等温扩增技术在手足口病检测中的应用研究。方法选取医院收治的手足口病儿童(EV71、CA16及HFMD其他EV病原体各40例)标本。对收集手足口病病人的标本使用依赖解旋酶恒温扩增技术检测,分析依赖解旋酶的恒温扩增(RT-t HDA)技术的特异性、灵敏度和符合率进行分析。结果检测均出现特异性扩增产物,具有典型的特异条带,检测标本病毒株均呈阳性,具有较强的检测特异性。阳性检测结果的符合率为91.28%~100.00%,平均为95.24%,阴性检测结果符合率为100.00%。结论依赖解旋酶恒温扩增技术具有快速、特异、简便、经济适用性高等优势,适用于基层医疗机构临床检测,值得临床借鉴与应用。 展开更多
关键词 依赖解旋酶 手足口病 普通RT-PCR
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设计特定序列的引物提高依赖解旋酶恒温扩增效率 被引量:2
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作者 张培培 吴洋 +1 位作者 王玲 齐浩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期747-753,共7页
依赖解旋酶恒温扩增(helicase-dependent amplification,HDA)是一种新型的恒温DNA体外扩增方法,具有反应原理简单,反应温度恒定等优点,被广泛地应用于核酸分子检测。但是依赖解旋酶恒温扩增仍面临着双链DNA解旋反应效率不高导致的扩增... 依赖解旋酶恒温扩增(helicase-dependent amplification,HDA)是一种新型的恒温DNA体外扩增方法,具有反应原理简单,反应温度恒定等优点,被广泛地应用于核酸分子检测。但是依赖解旋酶恒温扩增仍面临着双链DNA解旋反应效率不高导致的扩增效率不够高、灵敏度低的问题。为了进一步提高依赖解旋酶恒温扩增技术中双链DNA模板的解旋效率,在本研究中,5'端带有不同长度不同序列的寡聚核苷酸引物,被用于依赖解旋酶恒温扩增反应,以研究DNA片段的末端序列对依赖解旋酶的双链DNA解旋反应,乃至整个扩增反应效率的影响。结果表明,只有5'端带有poly(A)序列的核酸引物明显促进了扩增反应效率,其中6个A的长度的5'端组成的引物对恒温扩增的促进作用最好,扩增产物比不带任何特定序列的原引物提高了约5.3倍。相比之下,带有poly(AC)或者poly(C)序列的引物,在一定程度上阻碍依赖解旋酶恒温扩增反应效率。因此,本研究证明了特定设计的末端序列,可以提高依赖解旋酶恒温扩增反应效率。 展开更多
关键词 依赖解旋酶恒温扩增 解旋酶 引物设计
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赖解旋酶恒温基因扩增技术的研究进展 被引量:2
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作者 陈璐 沈建箴 《医学综述》 2010年第13期1932-1934,共3页
随着分子生物学研究领域的发展,赖解旋酶恒温基因扩增技术(HDA)作为一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术出现。HDA依靠解旋酶解开双链DNA、结合蛋白维持单链DNA状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增。可以用于微生物基因组DNA、病原... 随着分子生物学研究领域的发展,赖解旋酶恒温基因扩增技术(HDA)作为一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术出现。HDA依靠解旋酶解开双链DNA、结合蛋白维持单链DNA状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增。可以用于微生物基因组DNA、病原菌DNA、质粒DNA和cDNA等的扩增,该法具有广阔的实用前景。 展开更多
关键词 赖解旋酶恒温基因扩增 DNA解旋酶 单链DNA结合蛋白
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实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术和实时荧光RT-PCR在手足口病中的应用价值 被引量:3
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作者 张蕾 张秀娟 张云帆 《临床医学研究与实践》 2021年第13期117-119,共3页
目的研究实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术和实时荧光RT-PCR在手足口病中的应用价值。方法回顾性分析106例疑似手足口病患儿的临床资料。所有患儿均进行实时荧光RT-PCR检测、实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术检测,以临床表现、实验室检查... 目的研究实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术和实时荧光RT-PCR在手足口病中的应用价值。方法回顾性分析106例疑似手足口病患儿的临床资料。所有患儿均进行实时荧光RT-PCR检测、实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术检测,以临床表现、实验室检查、血清和病原学的综合诊断结果为临床诊断金标准,比较不同检测方法的诊断结果及效能。结果实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术检测EV通用型、EV71、CoxA16的窗口期及平均用时均短于实时荧光RT-PCR检测,诊断效能均优于实时荧光RT-PCR检测,阳性综合诊断率高于实时荧光RT-PCR检测(P<0.05)。结论实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术在检测手足口病中具有快速、高效、诊断效能高等优势,临床推广应用价值高。 展开更多
关键词 手足口病 实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术 实时荧光RT-PCR
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卵巢癌HELQ蛋白结构和功能的生物信息学工具分析预测 被引量:2
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作者 李亚萍 邹余粮 +2 位作者 张琳 黄新 秦勇 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第35期29-32,共4页
目的预测卵巢癌抑癌基因HELQ编码蛋白(HELQ蛋白)的结构和功能。方法采用Ex PASy服务器中的工具分析HELQ蛋白的理化特征。分别采用PSORTⅡ和TMHMM预测HELQ蛋白的亚细胞定位和跨膜拓扑结构。采用Signal P 4.0预测HELQ蛋白的信号肽。采用Sc... 目的预测卵巢癌抑癌基因HELQ编码蛋白(HELQ蛋白)的结构和功能。方法采用Ex PASy服务器中的工具分析HELQ蛋白的理化特征。分别采用PSORTⅡ和TMHMM预测HELQ蛋白的亚细胞定位和跨膜拓扑结构。采用Signal P 4.0预测HELQ蛋白的信号肽。采用Scan Prosite和SMART分析HELQ蛋白的功能结构域以及结构域分区。采用PSIPRED和I-TASSER预测HELQ蛋白的二级和三级结构以及配体结合位点。采用STRING10.0预测HELQ蛋白与其他蛋白的交互作用。结果 HELQ蛋白主要定位在细胞核(47.8%)和细胞质(39.1%)中,有4个保守结构域DEXDc、HELICc、HHH_5和PRK02362,并包含解旋酶ATP结合区和解旋酶C端结合区两个功能结构域;成功建立了HELQ蛋白的二级和三级结构模型,其中二级结构中α螺旋、无规则卷曲及折叠结构比例分别为54%、31%和6%。三维配体结构分析发现HELQ蛋白包含一个酶活性中心位点His341,催化Ile333、Lys335、Tyr337、Gln340、Pro360、Thr361、Ser362、Gly363、Gly364、Lys365、Thr366、Leu367、Glu464和Ala711等结合位点与配体ATP结合。交联蛋白质分析发现HELQ蛋白可能与RAD51、POLA1、PLON、FANCD2、DHX8等蛋白存在交互作用。结论 HELQ蛋白可能具有ATP依赖性解旋酶的结构和功能,参与DNA损伤的修复过程。 展开更多
关键词 卵巢癌 HELQ基因 HELQ蛋白 三级结构 ATP依赖性解旋酶
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ATP依赖性染色质域解旋酶DNA结合蛋白家族在肿瘤发病中作用的研究进展
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作者 罗嘉欣 陈晓铭 郭润民 《中国医药科学》 2021年第11期32-35,共4页
编码调节染色质结构和功能的基因突变,在实体肿瘤和血液系统肿瘤发生中起着重要作用。ATP依赖性染色质域解旋酶DNA结合蛋白(CHD)是一种极为重要的染色质调节蛋白,共有9个成员,根据结构域的不同分为三大家族亚类,CHD蛋白影响染色质的紧... 编码调节染色质结构和功能的基因突变,在实体肿瘤和血液系统肿瘤发生中起着重要作用。ATP依赖性染色质域解旋酶DNA结合蛋白(CHD)是一种极为重要的染色质调节蛋白,共有9个成员,根据结构域的不同分为三大家族亚类,CHD蛋白影响染色质的紧密程度,控制转录、细胞增殖和DNA损伤修复等生物过程,CHD蛋白的缺失或失活对器官发育和癌症的发生起着重要作用。本文主要综述CHD蛋白各种家族亚类在肿瘤发病中的具体作用机制,为设计靶向CHD精准高效的抗癌疗法提供新思路。 展开更多
关键词 CHD蛋白家族 肿瘤 ATP依赖性解旋酶
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溶藻弧菌HY9901 ahr基因克隆与序列分析(英文)
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作者 蔡双虎 吴灶和 +1 位作者 简纪常 鲁义善 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期522-528,共7页
Touchdown PCR扩增溶藻弧菌依赖ATP的DNA解旋酶rep基因部分序列,得一1.2kb片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由2016 bp组成,共编码671 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与副溶血弧... Touchdown PCR扩增溶藻弧菌依赖ATP的DNA解旋酶rep基因部分序列,得一1.2kb片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由2016 bp组成,共编码671 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与副溶血弧菌RIMD 2210633、溶藻弧菌12G01、Vibriosp.Ex25、创伤弧菌YJ016、霍乱弧菌RC385、灿烂弧菌12B01、费氏弧菌ES114及V.angustumS14分别为96%、95%、95%、94%、92%、91%、89%、86%。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 依赖ATP的DNA解旋rep基因 基因克隆
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