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Effect of decoy-oligodeoxynucleotides on expression of inflammation mediators in pMΦ cells from rats 被引量:3
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作者 国华 梁华平 +5 位作者 吕凤林 徐祥 安兵 郝天智 王付龙 杨文军 《Chinese Journal of Traumatology》 CAS 2003年第6期363-369,共7页
Objective: To study the effect of decoy-oligodeoxynucleotides (decoy-ODNs) in dumbbell shape with the oligodeoxynucleotide sequence similar to nuclear factor kappa B (NF-κB) cis-elements on expression of inflammation... Objective: To study the effect of decoy-oligodeoxynucleotides (decoy-ODNs) in dumbbell shape with the oligodeoxynucleotide sequence similar to nuclear factor kappa B (NF-κB) cis-elements on expression of inflammation mediators in pMΦ cells from rats. Methods: With carriers of cationic liposomes, decoy-ODNs were transfected into pMΦ cells of rats. Then the inhibiting effects of the decoy-ODNs on tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin-6 (IL-6) and IL-10 were analyzed. Results: Decoy-ODNs could decrease the expression of TNFα and IL-6 in dose-dependent fashion but had weaker inhibiting effect on IL-10. Conclusions: Decoy-ODNs targeting NF-κB can decrease the expression of inflammatory mediators in pMΦ cells from rats. 展开更多
关键词 Tumor necrosis factor Inflammation mediators Nuclear factor kappa B decoy-oligodeoxynucleotides
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圈套ODNs影响IL-10表达的实验研究
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作者 国华 孙磊 胡宏伟 《泰山医学院学报》 CAS 2006年第7期610-613,共4页
目的本实验设计合成靶向核因子κB(NF-κB)的哑铃形圈套寡核苷酸(ODNs),并验证其对白介素10(IL-10)的作用。方法以阳离子脂质体为载体,将圈套ODNs转染大鼠pMф细胞6h后用LPS(10μg/m l)刺激,用ELISA法及RT-PCR法测圈套ODNs对IL-10在蛋白... 目的本实验设计合成靶向核因子κB(NF-κB)的哑铃形圈套寡核苷酸(ODNs),并验证其对白介素10(IL-10)的作用。方法以阳离子脂质体为载体,将圈套ODNs转染大鼠pMф细胞6h后用LPS(10μg/m l)刺激,用ELISA法及RT-PCR法测圈套ODNs对IL-10在蛋白及mRNA水平的影响。结果哑铃形圈套ODNs可降低在IL-10mRNA及蛋白水平的表达。结论靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs具有抗IL-10的作用。 展开更多
关键词 NF-KB 圈套odns IL-10
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阳离子脂质体介导NF-κB“decoy”ODNs转染巨噬细胞条件的优化 被引量:1
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作者 王建 李金宝 +1 位作者 任绪义 邓小明 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期856-858,F004,共4页
目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。 方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ... 目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。 方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ;荧光显微镜观察细胞内荧光分布 ;测定细胞上清乳酸脱氢酶 (L DH)观察细胞损伤情况。 结果 :lipofectin介导转染显著提高 J774 .1细胞对 NF- κB“decoy”ODNs的摄取 ;在 2 4孔培养板中 ,NF- κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时 ,转染效率最佳而细胞毒性相对较低 ;lipofectin介导转染 6 h后 ,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核和部分细胞质中 ,而直接转染时荧光物质多分布于细胞质。结论 :lipofectin可增加 NF-κB“decoy”ODNs的细胞摄入并改变其细胞内分布 ;NF-κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时可获得最佳转染效率。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 NF-κB“decoyodns 基因转染 巨噬细胞
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靶向转录因子STAT3的Decoy核苷酸对膀胱癌细胞体外增殖的抑制作用 被引量:2
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作者 王淑芬 包建玲 +1 位作者 张须龙 张建 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第2期88-92,共5页
目的:研究核转录因子STAT3的诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)对人膀胱癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:采用阳离子聚合物Sofast为转染试剂将STAT3 decoy ODNs转染入膀胱癌T24及5637细胞;用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞... 目的:研究核转录因子STAT3的诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)对人膀胱癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:采用阳离子聚合物Sofast为转染试剂将STAT3 decoy ODNs转染入膀胱癌T24及5637细胞;用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测ODNs的转染效率;荧光显微镜检测ODNs入核情况;RT-PCR及Western blot检测转染ODNs前后bcl-xl、cyclinD1和c-myc表达水平的变化。结果:ODNs可有效地转染至细胞内,部分可进入核内,转染效率呈剂量依赖关系;STAT3 decoy ODNs可抑制膀胱癌细胞的增殖,100 nmol/L组抑制率最明显,达40%~48%;100 nmol/L decoy ODNs明显抑制bcl-xl、cyclinD1和c-myc mRNA及蛋白的表达水平。结论:STAT3 decoy ODNs可显著抑制膀胱癌细胞的增殖。其作用机制可能是通过下调癌基因c-myc、细胞周期基因cyclinD1及凋亡相关基因bcl-xl的基因转录及蛋白表达而实现的。 展开更多
关键词 STAT3 诱骗寡核苷酸 BCL-XL CYCLINDL c-myc 膀胱癌
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靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMφTNFα表达的实验研究
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作者 国华 梁华平 +4 位作者 吕凤林 徐祥 郝天智 王付龙 杨文军 《创伤外科杂志》 2003年第5期373-376,共4页
目的 本实验设计合成靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs,并验证其抗TNFα生成效应。方法 以阳离子脂质体为载体 ,将圈套ODNs转染大鼠pM细胞 6小时后用LPS(脂多糖 ) 10 μg ml刺激 ,用ELISA法及RT PCR法测圈套ODNs对TNFα蛋白及mRNA水平的... 目的 本实验设计合成靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs,并验证其抗TNFα生成效应。方法 以阳离子脂质体为载体 ,将圈套ODNs转染大鼠pM细胞 6小时后用LPS(脂多糖 ) 10 μg ml刺激 ,用ELISA法及RT PCR法测圈套ODNs对TNFα蛋白及mRNA水平的影响。结果 哑铃形圈套ODNs可明显降低TNFα在mRNA及蛋白水平的表达。结论 靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs具有下调炎性介质TNFα的表达。 展开更多
关键词 NF-ΚB 圈套odns pMФTNFα 大鼠 抗炎治疗 抗TNFα生成效应 基因治疗 基因表达
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STAT3诱骗寡核苷酸对肝癌细胞Hep G2的影响
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作者 史梅 史伟峰 魏江 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期272-275,共4页
目的观察应用诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)靶向阻断信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of tran-scription 3,STAT3)对肝癌细胞Hep G2的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外合成的STAT3 decoy ODNs在脂质体的介... 目的观察应用诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)靶向阻断信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of tran-scription 3,STAT3)对肝癌细胞Hep G2的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外合成的STAT3 decoy ODNs在脂质体的介导下转染Hep G2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率;通过细胞生长曲线观察对细胞增殖的影响;annexin-V/PI染色检测细胞凋亡;实时定量PCR检测STAT3下游基因bcl-xL、cyclin D1和c-myc的表达。结果荧光显微镜和流式细胞仪检测表明decoy ODNs能有效转染Hep G2细胞,转染效率达90.2%;生长曲线显示decoy ODNs有效抑制Hep G2细胞增殖;decoy ODNs处理细胞48 h后,流式细胞仪annexin-V/PI染色检测到早期细胞凋亡率为(22.86±2.63)%,晚期细胞凋亡率为(23.00±2.76)%;实时定量PCR证实decoy ODNs下调bcl-xL、cyclin D1和c-myc mRNA表达。结论STAT3 decoy ODNs能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调STAT3下游bcl-xL、cyclin D1和c-myc基因的表达相关。 展开更多
关键词 STAT3 肝癌细胞Hep G2 信号转导 诱骗寡核苷酸
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诱骗寡核苷酸下调MKN-45细胞OP18基因表达及对细胞增殖的影响
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作者 林芳 王锐 +3 位作者 高萍 刘丽 王希 张惠中 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第12期1115-1118,共4页
目的:探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)对MKN-45细胞中op18基因转录调控的影响及对细胞增殖的抑制作用.方法:设计合成针对op18启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形Decoy ODNs,然后将合成的序列进行退火、连接,使其形成哑... 目的:探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)对MKN-45细胞中op18基因转录调控的影响及对细胞增殖的抑制作用.方法:设计合成针对op18启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形Decoy ODNs,然后将合成的序列进行退火、连接,使其形成哑铃形的结构,再应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将哑铃形Decoy ODNs转染MKN-45细胞中.TRIzol法提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测细胞中op18 mRNA表达水平的变化.通过MTT实验监测细胞的生长增殖状况并绘制生长曲线,最后用TUNEL法观察细胞的凋亡的情况.结果:哑铃形Decoy ODNs被成功转染MKN-45细胞,并成功提取了细胞总RNA.RT-PCR检测发现哑铃形Decoy ODNs转染后的MKN-45细胞中op18 mRNA表达水平明显低于空白对照组,MTT实验所作的生长曲线显示转染细胞增殖速度与空白对照组相比较明显减慢,TUNEL凋亡染色可见凋亡细胞.结论:哑铃形Decoy ODNs能特异性抑制E2F转录因子对op18基因的转录调控,进而抑制op18基因表达及MKN-45细胞增殖. 展开更多
关键词 圈套寡核苷酸 转录因子 细胞增殖 基因疗法
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NF-κB靶向性哑铃形“圈套”ODNs抑制大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后TNF-α的表达 被引量:3
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作者 何兰英 罗勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期318-321,共4页
目的设计合成靶向哑铃形寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)圈套,检测其对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后TNF-α表达的抑制效应。方法原代大脑皮质神经元体外培养,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD4h/R6h组、NF-κB d... 目的设计合成靶向哑铃形寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)圈套,检测其对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后TNF-α表达的抑制效应。方法原代大脑皮质神经元体外培养,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD4h/R6h组、NF-κB decoy ODNs组、无关decoy ODNs组、脂质体组为实验组,采用Western blot检测NF-κB p65蛋白表达,分别采用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测TNF-α蛋白和mRNA表达。结果Westernblot检测显示NF-κB decoy ODNs组NF-κB P65蛋白表达明显低于OGD4h/R6h组、脂质体组、无关decoy ODNs组(P<0.05),与OGD4h/R6h组、脂质体组、无关decoy组相比NF-κB decoy ODNs组TNF-α蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05);而脂质体组、无关decoy ODNs组对NF-κB P65蛋白、TNF-α蛋白和mRNA表达未见抑制(P>0.05)。结论靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs可有效抑制大脑皮质神经元OGD/R后炎症因子TNF-αmRNA及蛋白的表达。 展开更多
关键词 NF-ΚB decoy odns 大脑皮质神经元 氧糖剥夺/复氧 肿瘤坏死因子-Α
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E2F陷阱DNA对人肺癌细胞中stathm in mRNA表达的影响及促进肿瘤细胞凋亡的作用
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作者 林芳 高萍 +2 位作者 刘丽 王锐 张惠中 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第4期485-487,共3页
目的:观察转录因子E2F陷阱DNA对stathmin的表达影响及抑制肿瘤细胞增生情况。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将E2F Decoy ODNs转染入人肺癌A549细胞中,用RT-PCR检测转染细胞中stathmin基因mRNA表达水平变化,通过细胞生长曲线观察... 目的:观察转录因子E2F陷阱DNA对stathmin的表达影响及抑制肿瘤细胞增生情况。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将E2F Decoy ODNs转染入人肺癌A549细胞中,用RT-PCR检测转染细胞中stathmin基因mRNA表达水平变化,通过细胞生长曲线观察转染细胞的增殖能力,Tunel法观察转染细胞凋亡情况。结果:E2F Decoy ODNs被成功转染入肿瘤细胞中,RT-PCR检测结果显示实验组stathmin mRNA表达水平明显低于对照组,而且显著抑制了A549细胞的增殖,空白对照组无明显变化,Tunel凋亡染色可见凋亡细胞。结论:E2F Decoy ODNs能特异性下调stathmin mRNA表达,明显抑制A549细胞的增殖,为肿瘤的基因治疗提供了新的手段。 展开更多
关键词 E2F陷阱DNA 转录因子 增殖 A549细胞 基因治疗
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