与烟草曲叶病毒伴随的新型DNA分子鉴定 被引量：20

1

作者 谢艳 周雪平 +2 位作者 李正和 李桂新 张仲凯 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第10期768-771,共4页

根据已报道的两种粉虱传双生病毒DNAβ分子的保守序列设计引物,利用PCR技术从烟草曲叶病毒Y5和Y8分离物中扩增到一类环状DNAβ分子,其全长分别为1333和1338nt.序列分析表明,Y5DNAβ可能编码8个可读框（ORFs）,病毒链和互补链各含有4个OR... 根据已报道的两种粉虱传双生病毒DNAβ分子的保守序列设计引物,利用PCR技术从烟草曲叶病毒Y5和Y8分离物中扩增到一类环状DNAβ分子,其全长分别为1333和1338nt.序列分析表明,Y5DNAβ可能编码8个可读框（ORFs）,病毒链和互补链各含有4个ORFs;Y8 DNAβ可能编码7个ORFs,病毒链含有4个ORFs,互补链含有3个ORFs.除茎环结构TAATATTAC外,DNAβ与烟草曲叶病毒Y5和Y8基因组DNA-A序列几乎无同源性.Y5和Y8的DNAβ全长核苷酸序列同源性较高,为85％,而与已报道的胜红蓟黄脉病毒（AYVV）DNAβ及棉花曲叶病毒（CLCuV）的两个DNAβ的同源性为51％～65％.免疫捕获PCR及粉虱传毒实验表明,DNAβ分子包裹在双生病毒粒子中,并伴随病毒由烟粉虱传播. 展开更多

关键词 dna分子鉴定 dnaΒ 烟草曲叶病毒 序列分析 传播 烟粉虱 双生病毒 伴随病毒

原文传递

南柴胡与常见混伪品的鉴别方法研究 被引量：18

2

作者 严华 董亚娟 +2 位作者 程显隆 魏锋 马双成 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期109-114,共6页

目的研究建立南柴胡与混伪品锥叶柴胡的鉴别方法。方法采用植物鉴定、药材性状鉴别、薄层色谱鉴别及DNA分子鉴定方法,对南柴胡及其混伪品锥叶柴胡进行鉴别研究。结果南柴胡与锥叶柴胡在植物形态、药材性状、薄层色谱方面有较明显的区别,... 目的研究建立南柴胡与混伪品锥叶柴胡的鉴别方法。方法采用植物鉴定、药材性状鉴别、薄层色谱鉴别及DNA分子鉴定方法,对南柴胡及其混伪品锥叶柴胡进行鉴别研究。结果南柴胡与锥叶柴胡在植物形态、药材性状、薄层色谱方面有较明显的区别,DNA分子鉴定表明,南柴胡和锥叶柴胡的最小种间K-2-P距离大于种内最大K-2-P距离,NJ树中柴胡的不同基原样品各聚为一支,南柴胡与锥叶柴胡等其他混伪品分别表现出单系性,可明显区分开。结论本实验在对南柴胡及锥叶柴胡原植物形态学比较研究的基础上,找出了两者主要的鉴别特征,同时采用药材性状鉴别、薄层色谱鉴别与DNA分子鉴定手段相结合的方式模式,建立了南柴胡和锥叶柴胡的鉴别要点。DNA分子鉴定技术是传统鉴别技术的重要补充,具有很大的潜力和应用前景。 展开更多

关键词 南柴胡 锥叶柴胡 植物鉴定 薄层色谱鉴别 dna分子鉴定

原文传递

铁皮石斛的ITS2条形码分子鉴定及5种重金属及有害元素的测定 被引量：15

3

作者 严华 石任兵 +6 位作者 姚辉 张文娟 李明华 程显隆 余坤子 魏锋 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1044-1053,共10页

目的：应用DNA条形码技术,从分子水平快速、准确地鉴定我国12个省区铁皮石斛栽培基地铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）及其同属常见植物的基原,采用微波消解ICP-MS技术测定各地铁皮石斛中铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As... 目的：应用DNA条形码技术,从分子水平快速、准确地鉴定我国12个省区铁皮石斛栽培基地铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）及其同属常见植物的基原,采用微波消解ICP-MS技术测定各地铁皮石斛中铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）、汞（Hg）、铜（Cu）5种重金属及有害元素的含量,评价栽培铁皮石斛的用药安全。方法：提取各样本总DNA,对r DNA的第二内转录间隔区（ITS2区）进行扩增,计算种内、种间Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离,通过与中药材DNA条形码鉴定系统比对和构建N-J（Neighbor-Joining）系统树进行基原鉴定。建立微波消解方法进行样品前处理,ICP-MS法对铁皮石斛中5种重金属及有害元素进行测定,比对国内外现行标准,对铁皮石斛的安全性进行评价。结果：铁皮石斛的ITS2序列长度在246-340bp范围,种内变异较小,种内最大K2P遗传距离为0.009,铁皮石斛及其混伪品的种间平均K2P遗传距离为0.206,种间最小K2P遗传距离明显大于种内的最大K2P遗传距离。经与中药材DNA条形码鉴定系统比对及构建N-J树进行基原鉴定。结果表明ITS2序列可区分铁皮石斛及其近缘种。5种重金属及有害元素的测定结果表明各地的含量差异较显著,但在安全的范围内。结论：ITS2片段DNA条形码可有效鉴定中药铁皮石斛及其常见同属植物的基原,建立的ICP-MS法测定铁皮石斛中5种重金属与有害元素的方法准确、可行,各元素的含量在现行相关标准的安全范围内。 展开更多

关键词 铁皮石斛 第二内转录间隔区(ITS2) dna分子鉴定 基原鉴定 微波消解 电感耦合等离子体质谱 重金属 有害元素

原文传递

中药秦艽基原植物的DNA分子鉴定 被引量：14

4

作者 张得钧 高庆波 +1 位作者 李福安 李永平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第24期14609-14612,14615,共5页

[目的]分析秦艽基原植物间不同DNA序列的差异,为秦艽药材DNA条形码的筛选和基原鉴定提供分子证据。[方法]采用PCR扩增纯化后直接测序的方法,测定大叶秦艽（G.macrophylla Pall.）、麻花艽（G.straminea Maxim.）、粗茎秦艽（G.crassicau... [目的]分析秦艽基原植物间不同DNA序列的差异,为秦艽药材DNA条形码的筛选和基原鉴定提供分子证据。[方法]采用PCR扩增纯化后直接测序的方法,测定大叶秦艽（G.macrophylla Pall.）、麻花艽（G.straminea Maxim.）、粗茎秦艽（G.crassicaulis Duthie exBurk.）、小秦艽（G.dahurica Fisch）、黄管秦艽（G.officinalis H.Smith）5种植物的核糖体DNA ITS、叶绿体DNApsbA-trnH核苷酸序列,并作序列同源性分析。[结果]cpDNApsbA-trnH序列长度变异范围为316~318 bp,有7种不同的单倍型,单倍型间有7个变异位点,序列的GC含量为21.2%;最大简约树的聚类结果与单倍型反映的结果一致。nrDNAITS序列长度变异范围为624~625 bp,有5种不同的单倍型,单倍型间有12个变异位点,序列的GC含量为59.3%;最大简约树的聚类结果表明,小秦艽与麻花艽聚为一支,大叶秦艽与黄管秦艽聚为一支,粗茎秦艽位于聚类图的最基部。[结论]nrDNAITS序列较适合作秦艽基原植物的DNA分子鉴定。 展开更多

关键词 中药秦艽 psbA-trnH序列 ITS序列 PCR dna分子鉴定

下载PDF 职称材料

罗布麻及其易混品的DNA分子鉴定 被引量：12

5

作者 彭雪梅 张卫明 +2 位作者 王蔓丽 陆长梅 顾龚平 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期302-307,共6页

为从分子水平更准确地鉴别罗布麻及其易混品,本研究利用PCR产物直接测序法对罗布麻、大叶白麻和Apoacynum cannabinum的核基因组(rDNA)ITS区与叶绿体基因组(cpDNA)trnL内含子及trnL-F间隔区序列进行测序与比较。结果显示,罗布麻和大叶白... 为从分子水平更准确地鉴别罗布麻及其易混品,本研究利用PCR产物直接测序法对罗布麻、大叶白麻和Apoacynum cannabinum的核基因组(rDNA)ITS区与叶绿体基因组(cpDNA)trnL内含子及trnL-F间隔区序列进行测序与比较。结果显示,罗布麻和大叶白麻ITS序列完全一致,与A.cannabinum在ITS1区有13个位点、在ITS2区有10个位点不同;在trnL内含子区及trnL-F间隔区,罗布麻和大叶白麻共有3个位点不同,罗布麻和A.cannabinum间共有23个位点、大叶白麻和A.cannabinum间共有20个位点不同。研究表明,依据rDNAITS区序列可鉴别A.cannabinum和国产“罗布麻”(罗布麻与大叶白麻);利用cpDNAtrnL内含子及trnL-F间隔区序列可鉴别罗布麻及其相似种。 展开更多

关键词 罗布麻 大叶白麻 A cannabinum ITS TRNL内含子 trnL-F非编码区 dna分子鉴定

下载PDF 职称材料

基于叶绿体psbA-trnH基因间区序列鉴定山东丹参为新种 被引量：12

6

作者 李晓娟 韩建萍 +5 位作者 李建秀 陈晓辰 张龙霏 李佳 顾正位 张永清 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1338-1344,共7页

为从分子水平鉴定山东丹参(Salvia shandongensis)及其近缘物种,本研究采用psbA-trnH序列对山东丹参、丹参(S.miltiorrhiza)和白花丹参(S.miltiorrhiza f.alba)共计33份材料进行了PCR扩增并测序,获得了该间隔区的完整序列。采用CodonCod... 为从分子水平鉴定山东丹参(Salvia shandongensis)及其近缘物种,本研究采用psbA-trnH序列对山东丹参、丹参(S.miltiorrhiza)和白花丹参(S.miltiorrhiza f.alba)共计33份材料进行了PCR扩增并测序,获得了该间隔区的完整序列。采用CodonCodeAligner进行序列拼接,应用MEGA5.0计算山东丹参及其近缘种的种内、种间的K2P距离,构建UPGMA树。结果显示,山东丹参psbA-trnH序列长度约为391 bp,丹参和白花丹参psbA-trnH序列长度约为386 bp,psbA-trnH序列在山东丹参及其近缘种种间存在丰富的变异,山东丹参种内平均K2P遗传距离为0,丹参和白花丹参种内平均K2P遗传距离分别为0.002和0.001,山东丹参与丹参种间遗传距离为0.034～0.04,与白花丹参种间遗传距离为0.005～0.008,山东丹参种内平均K2P遗传距离均远远小于丹参和白花丹参种间平均K2P遗传距离;聚类结果显示山东丹参与丹参、白花丹参(变型)可明显区分,这与形态分类特征相符。本研究首次从分子水平确立了山东丹参在植物分类学上的地位,揭示了山东丹参与近缘种之间的亲缘关系,为山东丹参药用植物新资源的开发提供DNA遗传分子鉴定的科学依据。研究结果表明psbA-trnH基因间区可作为条形码来鉴定山东丹参及其近缘种。 展开更多

关键词 psbA-trnH基因间区 山东丹参 丹参 白花丹参 dna分子鉴定

原文传递

基于ITS序列分析鉴别冬虫夏草与古尼虫草 被引量：12

7

作者 张文娟 康帅 +1 位作者 魏锋 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1551-1555,共5页

目的:冬虫夏草与古尼虫草在外观上相似度高,最易混淆,本研究将从基因水平对两者进行准确鉴别。方法:通过聚合酶链式反应扩增,得到样品的内转录间隔区(ITS)序列,同时从Gen Bank下载2种虫草的ITS序列;利用Codon Code Aligner和MEGA软件对... 目的:冬虫夏草与古尼虫草在外观上相似度高,最易混淆,本研究将从基因水平对两者进行准确鉴别。方法:通过聚合酶链式反应扩增,得到样品的内转录间隔区(ITS)序列,同时从Gen Bank下载2种虫草的ITS序列;利用Codon Code Aligner和MEGA软件对ITS序列进行分析,找到2种虫草差异的酶切位点;通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)实验进行验证。结果:在ITS序列上,冬虫夏草存在1个SacⅡ酶切位点,而古尼虫草不具有该位点。PCR-RFLP的实验结果表明,冬虫夏草ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶SacⅡ切割为2个片段,大小分别约为488 bp和128 bp,古尼虫草不能被SacⅡ切割,所以酶切前后其PCR产物在琼脂糖凝胶图上的位置没有变化。从子实体取样和从虫体取样得到一致的结果。结论:PCR-RFLP法可以将冬虫夏草与古尼虫草明确区分,取样部位不同对本方法的结果没有影响。 展开更多

关键词 冬虫夏草 古尼虫草 dna分子鉴定 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) 内转录间隔区(ITS)

原文传递

HPLC含量测定和DNA分子标记技术对不同产地金银花的鉴定 被引量：11

8

作者 宋雯舒 张晨 +2 位作者 甘亮 黎新银 严群超 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第17期59-62,共4页

目的：通过指标成分含量测定及DNA分子标记技术对不同产地金银花样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景。方法：以绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量。提取金银花、山银花... 目的：通过指标成分含量测定及DNA分子标记技术对不同产地金银花样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景。方法：以绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量。提取金银花、山银花对照药材及河北和山东产地金银花样品DNA,检测DNA浓度和纯度,采用基于聚合酶链式反应（PCR）方法的DNA分子标记技术鉴别样品。结果：河北和山东产地金银花中绿原酸质量分数3.1%-3.3%,河北、山东产地金银花中木犀草苷质量分数分别为0.049%-0.050%,0.069%-0.078%,2个产地样品中均未检出灰毡毛忍冬皂苷乙成分。采用基于PCR方法鉴定出河北和山东产地各3批样品均为金银花。结论：DNA分子鉴定技术作为含量测定常规方法的补充,具有准确可靠、重复性高等优点,可用于金银花药材的鉴定。 展开更多

关键词 金银花 山银花 绿原酸 灰毡毛忍冬皂苷乙 dna分子鉴定

原文传递

中药柴胡与常见混伪品的鉴别方法分析 被引量：10

9

作者 孙旖 《光明中医》 2018年第17期2502-2504,共3页

目的探讨中药柴胡与常见混伪品的鉴别方法。方法运用薄层色谱鉴别、植物鉴定、DNA分子鉴定以及药材性状鉴别方法,鉴别中药柴胡与常见混伪品。结果中药柴胡与锥叶柴胡在薄层色谱、药材性状以及植物状态方面的区别明显;经DNA分子鉴定,结... 目的探讨中药柴胡与常见混伪品的鉴别方法。方法运用薄层色谱鉴别、植物鉴定、DNA分子鉴定以及药材性状鉴别方法,鉴别中药柴胡与常见混伪品。结果中药柴胡与锥叶柴胡在薄层色谱、药材性状以及植物状态方面的区别明显;经DNA分子鉴定,结果显示,与种内最大K-2-P距离相比,锥叶柴胡和中药柴胡的最小种间K-2-P距离较大;同时,与常见混伪品相比,中药柴胡呈现出单系性,容易区分。结论运用DNA分子鉴定+薄层色谱鉴别+药材性状鉴别的方式有助于准确区分中药柴胡与常见混伪品。 展开更多

关键词 dna分子鉴定 薄层色谱鉴别 植物鉴定 锥叶柴胡 中药柴胡

下载PDF 职称材料

远志HPLC指纹图谱及rbcL序列分子鉴定研究 被引量：2

10

作者 郑玉霄 杨晨 +4 位作者 张彬 李鹏辉 龚年春 李超 李跃辉 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期588-595,共8页

目的建立14批不同产地远志药材HPLC指纹图谱并利用化学计量学方法对其进行质量评价。采用DNA分子鉴定技术对远志药材进行物种鉴定,为远志药材质量控制提供依据。方法选用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,0.5μm),流动... 目的建立14批不同产地远志药材HPLC指纹图谱并利用化学计量学方法对其进行质量评价。采用DNA分子鉴定技术对远志药材进行物种鉴定,为远志药材质量控制提供依据。方法选用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,0.5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长316 nm,进样量10μL,运用软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)对14批远志药材进行相似度评价,确认共有峰,对测定结果进行聚类分析和主成分分析,并结合正交偏最小二乘-判别分析对样品进行模式识别。提取14批远志以及白薇、瓜子金样品的DNA进行序列分析和物种鉴定,并从NCBI数据库下载混淆品的序列,借助MEGA-X计算遗传距离并构建系统发育树。结果建立了14批远志药材的HPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,相似度均大于0.918,化学计量学分析将14批远志药材分为3类。经DNA分子鉴定,14批远志药材均为远志科植物远志Polygala tenuifolia,遗传距离和NJ树分析可将远志与混淆品区分开。结论所建立的HPLC指纹图谱稳定可靠,可为远志的质量评价提供参考。rbcL序列能区分远志及其混淆品,可用于远志药材的鉴定。 展开更多

关键词 远志 HPLC指纹图谱 dna分子鉴定 RBCL序列 西伯利亚远志糖A5 远志(口山)酮Ⅲ 3 6′-二芥子酰基蔗糖

原文传递

DNA分子鉴定技术在中成药真伪性鉴别中的应用与研究进展 被引量：8

11

作者 陈蓉 吴成丽 +1 位作者 邓赟 卞金辉 《中药与临床》 2016年第2期83-86,共4页

中成药真伪性的准确鉴定是临床用药安全有效的前提所在,DNA分子鉴定技术是分子生物学上的一种常规技术,应用于中成药真伪性的鉴别是对目前中药质量控制体系的有效补充。本文主要从中成药DNA分子鉴定常规操作流程及DNA分子鉴定在中成药... 中成药真伪性的准确鉴定是临床用药安全有效的前提所在,DNA分子鉴定技术是分子生物学上的一种常规技术,应用于中成药真伪性的鉴别是对目前中药质量控制体系的有效补充。本文主要从中成药DNA分子鉴定常规操作流程及DNA分子鉴定在中成药的真伪性鉴别中的应用研究方面进行了综述,并对其应用过程中存在的问题和发展前景进行了总结和展望。 展开更多

关键词 dna分子鉴定 中成药 综述

下载PDF 职称材料

ITS2和psbA-trnH序列对人参属常见药用植物的DNA分子鉴定研究 被引量：6

12

作者 张亚光 陈丹青 朱国琴 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期523-529,共7页

目的评价两种DNA条形码候选区对常见人参属药用植物品种的鉴别能力。方法选择ITS2和psbA-trnH序列扩增并测序,运用最大简约法(maximum parsimony,MP)、非加权分组平均法(unweighted group average method,UPGMA)和最大似然法(maximum li... 目的评价两种DNA条形码候选区对常见人参属药用植物品种的鉴别能力。方法选择ITS2和psbA-trnH序列扩增并测序,运用最大简约法(maximum parsimony,MP)、非加权分组平均法(unweighted group average method,UPGMA)和最大似然法(maximum likelihood,ML)对条带构建系统发育树。通过基因扩增效果,种间差异区分度,序列一致性等指标探讨DNA条形码区分人参属常见植物的能力。结果ITS2序列和psbA-trnH作为DNA条形码,可以将人参属植物与其他五加科植物准确区分。其中,ITS2序列一致性为97.06%,优于psbA-trnH序列测得的40.13%。结论以ITS2序列为主,psbA-trnH序列为辅的条形码组合可以对常见人参属植物进行DNA分子鉴定。 展开更多

关键词 ITS2 PSBA-TRNH 系统发育树 dna分子鉴定

下载PDF 职称材料

基于DNA分子鉴定与化学模式识别方法的藏药索罗嘎布品种鉴别

13

作者 李瑞兰 樊锦雅 +4 位作者 赵倩 李廷菊 王成辉 古锐 钟世红 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3626-3631,共6页

目的:基于DNA分子鉴定和高效液相色谱(HPLC)指纹图谱结合化学模式识别方法对藏药索罗嘎布进行鉴别。方法:提取20批索罗嘎布药材的DNA,通过PCR扩增与测序筛选合适的引物序列,分析药材序列特征,并构建系统发育树;建立HPLC指纹图谱,进行相... 目的:基于DNA分子鉴定和高效液相色谱(HPLC)指纹图谱结合化学模式识别方法对藏药索罗嘎布进行鉴别。方法:提取20批索罗嘎布药材的DNA,通过PCR扩增与测序筛选合适的引物序列,分析药材序列特征,并构建系统发育树;建立HPLC指纹图谱,进行相似度评价,并运用系统聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)进行化学模式识别研究。结果:基于ITS-18F/ITS-25R序列和HPLC指纹图谱均可有效地将20批索罗嘎布分为单花荠和丛菔属植物两类。结论:本研究所建立的方法可为藏药索罗嘎布的品种鉴别、质量提升与应用提供参考。 展开更多

关键词 藏药 索罗嘎布 dna分子鉴定 高效液相色谱指纹图谱 化学模式识别 品种鉴别 系统发育树

原文传递

中药乌头及其近缘种的rDNA-ITS序列分析 被引量：6

14

作者 张武 韩艳丽 朱建华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期50-52,共3页

运用PCR扩增产物直接测序的方法对云南、安徽的乌头及其近缘种植物的ITS区碱基序列测定。表明核糖体DNA中ITS区的完整序列(包括ITS1,ITS2和5.8S),4种乌头属植物的ITS1序列长度为249bp,云南乌头和安徽乌头及黄山乌头ITS2序列长度为189bp... 运用PCR扩增产物直接测序的方法对云南、安徽的乌头及其近缘种植物的ITS区碱基序列测定。表明核糖体DNA中ITS区的完整序列(包括ITS1,ITS2和5.8S),4种乌头属植物的ITS1序列长度为249bp,云南乌头和安徽乌头及黄山乌头ITS2序列长度为189bp,赣皖乌头ITS2序列长度为217bp。运用Mega2软件进行系统分析得到系统进化树。ITS序列特征是乌头鉴别的有效分子标记。 展开更多

关键词 乌头 rdna—ITS区 dna分子鉴定

下载PDF 职称材料

线粒体基因在药用植物DNA分子鉴定中的应用 被引量：5

15

作者 陆佳妮 赵志礼 +1 位作者 倪梁红 嘎务 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1791-1796,共6页

线粒体是植物细胞中重要细胞器之一,蕴含丰富的DNA信息,与叶绿体基因组、核基因组相结合,能客观地反映物种、居群甚至个体间的遗传特性。针对植物线粒体基因组的基本特征及其在中药DNA分子鉴定中的应用价值、研究现状与进展进行综述。

关键词 线粒体 基因组 dna条形码 药用植物 dna分子鉴定

原文传递

脑心通胶囊中水蛭的特异性DNA鉴别 被引量：5

16

作者 朱晓枭 胡恺恩 +2 位作者 邵鹏柱 彭维 苏薇薇 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期114-124,共11页

建立正品水蛭(宽体金线蛭、日本医蛭)的DNA分子鉴别方法。基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列,分别设计了针对宽体金线蛭和日本医蛭的特异性引物,将其应用于水蛭药材正品、常见伪品菲牛蛭以及含水蛭的中成药脑心通胶囊的PC... 建立正品水蛭(宽体金线蛭、日本医蛭)的DNA分子鉴别方法。基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列,分别设计了针对宽体金线蛭和日本医蛭的特异性引物,将其应用于水蛭药材正品、常见伪品菲牛蛭以及含水蛭的中成药脑心通胶囊的PCR技术检测。结果显示单独使用引物WF1R2或WF2R2均可以特异性扩增宽体金线蛭的DNA,产生大小为200 bp左右的条带;而引物HF1R2则可以特异性扩增日本医蛭,产生大小为142 bp的条带;这3对引物在伪品菲牛蛭中均无扩增条带。且用引物WF1R2和WF2R2均在脑心通胶囊中检测到宽体金线蛭,与胶囊所用投料药材一致。结果表明这3对引物可以分别对宽体金线蛭和日本医蛭进行特异性鉴别,且无需测序;而引物WF1R2和WF2R2可直接用于脑心通胶囊中所用水蛭正品的检控。该DNA分子鉴定方法简便、准确,特异性强且灵敏度高,可作为对传统基原鉴定方法的补充,进一步提高水蛭药材及含水蛭的中成药脑心通胶囊的质量控制水平。 展开更多

关键词 水蛭 脑心通胶囊 基原鉴定 dna分子鉴定 COⅠ基因

下载PDF 职称材料

HPLC含量测定和DNA分子标记技术对重楼属药用植物的鉴定 被引量：5

17

作者 刘立敏 韩多 +1 位作者 李海峰 赵志莲 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2017年第2期355-359,共5页

目的:通过指标成分含量测定与DNA分子标记技术对重楼属药用植物样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景。方法:以重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量,并用单因素方差分析对其根茎中甾体... 目的:通过指标成分含量测定与DNA分子标记技术对重楼属药用植物样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景。方法:以重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量,并用单因素方差分析对其根茎中甾体皂苷活性成分的差异进行评价;采用基于聚合酶链式反应(PCR)方法的DNA分子标记技术鉴别样品。结果:重楼属10种药用植物根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及总皂苷的含量具有极显著差异(P<0.01),且其主要化学成分种类也存在较大差异;同时ITS2序列与NJ树结果能有效区分重楼属10种药用植物。结论:DNA分子鉴定技术作为含量测定常规方法的补充,具有准确可靠、重复性高等优点,可用于重楼属药用植物的鉴定。 展开更多

关键词 重楼属植物 含量测定 dna分子鉴定 ITS2

下载PDF 职称材料

拟黑多刺蚁药材DNA分子鉴定研究 被引量：1

18

作者 何丽丹 赵开军 +2 位作者 彭雲 黄芳 王海丽 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3140-3146,共7页

本研究以拟黑多刺蚁的COⅠ基因序列为基础设计特异性引物,优化基因组DNA提取方式和扩增条件,建立了一种高效、专属性强、准确性高的拟黑多刺蚁药材DNA分子鉴定方法。在该方法下拟黑多刺蚁药材扩增出长度为294~308 bp的目的片段,其他伪... 本研究以拟黑多刺蚁的COⅠ基因序列为基础设计特异性引物,优化基因组DNA提取方式和扩增条件,建立了一种高效、专属性强、准确性高的拟黑多刺蚁药材DNA分子鉴定方法。在该方法下拟黑多刺蚁药材扩增出长度为294~308 bp的目的片段,其他伪品均无目的条带。本文建立的拟黑多刺蚁药材基原专属性鉴定方法可准确鉴定拟黑多刺蚁药材。 展开更多

关键词 拟黑多刺蚁 双齿多刺蚁 dna分子鉴定 特异性引物 COⅠ基因

原文传递

基于ITS2条形码的玛咖药材鉴别及9种元素的测定 被引量：4

19

作者 王江瑞 陈文仿 +4 位作者 许莉 方成鑫 刘红梅 郭力 王岚 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期677-687,共11页

目的:利用DNA分子鉴别技术,从分子水平快速、准确鉴别玛咖药材及其同科混伪品植物;采用石墨炉原子吸收分光光度法(GFASS)和火焰原子吸收分光光度法(FASS)测定不同产地玛咖中镉(^(112)Cd)、铜(^(63)Cu)、铅(^(207)Pb)、铬(^(52)Cr)4种有... 目的:利用DNA分子鉴别技术,从分子水平快速、准确鉴别玛咖药材及其同科混伪品植物;采用石墨炉原子吸收分光光度法(GFASS)和火焰原子吸收分光光度法(FASS)测定不同产地玛咖中镉(^(112)Cd)、铜(^(63)Cu)、铅(^(207)Pb)、铬(^(52)Cr)4种有害重金属元素以及钙(^(40)Ca)、镁(^(24)Mg)、钠(^(23)Na)、钾(^(39)K)、铁(^(56)Fe)5种元素的含量,并进行安全性评价。方法:利用DNA试剂盒提取玛咖及其混伪品(萝卜、芫根)样本共9个,PCR扩增其提出的DNA并进行双向测序,应用Codon Code Aligner V 6.0.2软件对峰图进行校对拼接,比较其内转录间隔区2(ITS2)的GC含量,结合在Gen Bank上下载的7条序列,采用MEGA 6.0软件计算种内、种间Kimura 2-parameter(K2P)遗传距离,最后构建邻接树(NJ tree)进行系统聚类分析。采用微波消解进行前处理,使用石墨原则吸收法和火焰原子吸收法分别对不同产地玛咖中的9种元素进行测定,对比《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,对玛咖的安全性进行评价。结果:玛咖的ITS2序列长度为190 bp,其中GC含量为54.7%,同时其二级结构明显与其混伪品存在差异,可以根据NJ tree将其与其他混伪品区分开来。微量元素标准曲线线性相关度均大于0.999 0,Cd、Cu、Pb、Cr、Ca、Mg、Na、K、Fe元素的回收率分别为93.2%、96.7%、95.4%、102.7%、94.3%、95.7%、105.9%、96.4%、98.1%。参照《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中的重金属元素限量标准,部分产地玛咖中的Cd元素含量超标,并且不同产地玛咖中各个元素的含量有一定的差异。结论:ITS2可以作为DAN条形码对玛咖与其混伪品进行准确、快速的鉴别,为玛咖的鉴定提供准确的分子依据。GFASS法快速、准确,灵敏度高,无背景影响,成本低廉,可较好地用于中药材中重金属残留量的测定,并且通过对玛咖中元素的研究,对确保其质量和安全性有着重要的意义。 展开更多

关键词 玛咖 药食两用植物 南美人参 混伪品 萝卜 芫根 dna条形码 dna分子鉴定 微波消解 石墨炉原子吸收 火焰原子吸收 元素

原文传递

植物叶绿体ycf15基因应用于药用植物鉴定的前景展望 被引量：4

20

作者 高娜娜 赵志礼 倪梁红 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第15期3210-3217,共8页

叶绿体普遍存在于绿色植物中,ycf15基因位于叶绿体基因组IR区,长度一般为250~550 bp,高度保守,目前对该基因研究较少。就有限的研究成果来看,其独特的序列结构及其显现的丰富多样的遗传信息不仅具有一定的物种鉴定意义,而且在植物系统... 叶绿体普遍存在于绿色植物中,ycf15基因位于叶绿体基因组IR区,长度一般为250~550 bp,高度保守,目前对该基因研究较少。就有限的研究成果来看,其独特的序列结构及其显现的丰富多样的遗传信息不仅具有一定的物种鉴定意义,而且在植物系统进化分析研究中有较大的潜力。同时,ycf15基因具有保守性高、片段长度较小、无需克隆测序等特点,在进一步构建中药材鉴定DNA条形码中具有独特优势。从ycf15基因的结构特点、物种鉴定与系统学意义几方面进行梳理并展望其在药用植物鉴定中的应用前景。 展开更多

关键词 ycf15基因 叶绿体基因组 dna分子鉴定 系统学意义 dna条形码

原文传递