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水稻品种9311的螟虫抗性改良和抗螟虫杂交稻组合选育 被引量:16
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作者 田雨 徐俊英 +2 位作者 李春海 林拥军 牟同敏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期664-672,共9页
【目的】将抗螟虫的cry1C*转入优良水稻品种9311中,培育具有9311遗传背景的高产、优质、抗螟虫水稻品种,再以改良的抗虫株系作父本配制抗螟虫的杂交水稻组合。【方法】以含有cry1C*的抗螟虫转基因材料T1C-19为供体,9311为受体,通过1次... 【目的】将抗螟虫的cry1C*转入优良水稻品种9311中,培育具有9311遗传背景的高产、优质、抗螟虫水稻品种,再以改良的抗虫株系作父本配制抗螟虫的杂交水稻组合。【方法】以含有cry1C*的抗螟虫转基因材料T1C-19为供体,9311为受体,通过1次杂交、3次回交和3次以上自交,每个世代进行标记选择,改良的稳定株系和杂交组合进行田间螟虫抗性鉴定、CRY1C*蛋白表达量测定、产量、主要农艺性状、生育期和稻米品质分析。【结果】育成了8个具有9311遗传背景并含有cry1C*抗螟虫的近等基因系、配制了56个杂交组合,田间螟虫抗性与供体亲本T1C-19一样,稻纵卷叶螟抗性达到100%,而9311的稻纵卷叶螟危害率达到20%;改良株系的CRY1C*蛋白表达量与T1C-19基本一致,杂交组合分蘖期的表达量略低于父本株系,拨节期的表达量高于父本株系。育成的8个抗螟虫9311近等基因系的生育期、主要农艺性状和稻米品质与9311相似,产量有一定的提高,筛选出3个比扬两优6号明显增产的抗螟虫迟熟杂交稻组合,筛选出产量和米质明显优于Q优6号的抗螟虫中熟中稻组合,筛选出1个产量和生育期与金优207相当的抗螟虫中熟晚稻组合。【结论】通过杂交、回交和分子标记辅助选择,已经将抗螟虫的cry1C*渗入到优良水稻品种9311中,育成株系除了高抗螟虫以外,在生育期、产量、主要农艺性状、稻米品质和配合力等方面与受体亲本9311一致,测配筛选出一批抗螟虫的高产、优质中晚稻组合。 展开更多
关键词 籼稻 9311 cry1c 螟虫抗性 杂交稻组合
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转Bt基因油菜的抗虫性分析 被引量:2
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作者 万丽丽 王转茸 +3 位作者 辛强 董发明 洪登峰 杨光圣 《湖北农业科学》 2016年第9期2386-2391,2422,共7页
利用农杆菌介导的遗传转化分别将Cry1C和Cry2A的2个单价Bt基因转入油菜(Brassica napus L.),以两个纯合的转基因抗虫油菜为亲本,通过有性杂交的方法将不同Bt基因聚合,培育双价Bt抗虫油菜,并对其抗虫性和种子品质性状进行评价。结果表明,... 利用农杆菌介导的遗传转化分别将Cry1C和Cry2A的2个单价Bt基因转入油菜(Brassica napus L.),以两个纯合的转基因抗虫油菜为亲本,通过有性杂交的方法将不同Bt基因聚合,培育双价Bt抗虫油菜,并对其抗虫性和种子品质性状进行评价。结果表明,Cry1C、Cry2A在聚合后均能稳定表达,和单价Cry1C转基因植株相比,双价株系中蛋白质含量明显降低,以Cry2A为母本的聚合株系蛋白质含量降低更多,Cry1C在遗传上存在母本效应。室内接种小菜蛾二龄幼虫结果显示,转化单价和双价聚合Bt基因的抗虫性增强,其中转化单价Cry1C的抗虫性优于双价聚合Bt基因和单价Cry2A基因的转基因植株。玻璃温室栽培转基因植株,单价Bt和双价聚合Bt基因的转基因植株能生存而非转基因植株受到严重虫害而死亡。对抗性优良的单价和双价聚合的转基因植株种子品质测定发现,与未受到虫害的受体材料双低优良恢复系7-5的含油量和硫苷含量差异不显著,从而达到抗性改良的目的。 展开更多
关键词 油菜(Brassica NAPUS L.) 苏云金芽孢杆菌 cry1c cry2A 双价聚合 农杆菌介导遗传转化 品质性状
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水稻抗虫(Cry1C)和抗稻瘟病(Pi1,Pi2)材料的创制 被引量:3
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作者 柳絮 张华 +3 位作者 宣宁 李平波 张梦琦 姚方印 《山东农业科学》 北大核心 2021年第2期89-93,共5页
为了提高抗虫转基因水稻的稻瘟病抗性,利用已育成的以粳稻为遗传背景的抗虫转基因(Cry1C)水稻新品系济抗10号为受体,选择带有广谱高抗稻瘟病基因(Pi1,Pi2)的空育131为供体,通过杂交与多代回交进行抗虫和抗稻瘟病基因的聚合,对每一世代... 为了提高抗虫转基因水稻的稻瘟病抗性,利用已育成的以粳稻为遗传背景的抗虫转基因(Cry1C)水稻新品系济抗10号为受体,选择带有广谱高抗稻瘟病基因(Pi1,Pi2)的空育131为供体,通过杂交与多代回交进行抗虫和抗稻瘟病基因的聚合,对每一世代的后代单株通过分子标记辅助选择、田间抗病虫鉴定、田间农艺性状选择,创制出了4个抗虫和抗稻瘟病的新材料SK01、SK02、SK03、SK04,田间均表现出很好的抗虫、抗稻瘟病特性以及优质丰产性状,为黄淮稻区抗病虫水稻育种奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 cry1c Pi1 Pi2 基因聚合 抗病虫水稻育种
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大豆胚尖转化体系优化和cry1C*基因转化大豆的研究 被引量:3
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作者 贾宝辉 李娜 +5 位作者 于希森 李涵哲 李洋 刘玉婷 孟凡立 李文滨 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期910-913,917,共5页
以抗大豆食心虫品系东农8004的胚尖为外植体,通过对芽诱导和芽伸长培养基进行优化,建立8004的胚尖转化体系,利用该体系进行cry1C*基因的转化,对获得的抗性再生植株进行分子鉴定和抗虫性鉴定。结果表明:在芽诱导培养基中附加1.67 mg·... 以抗大豆食心虫品系东农8004的胚尖为外植体,通过对芽诱导和芽伸长培养基进行优化,建立8004的胚尖转化体系,利用该体系进行cry1C*基因的转化,对获得的抗性再生植株进行分子鉴定和抗虫性鉴定。结果表明:在芽诱导培养基中附加1.67 mg·L-16-BA,丛生芽诱导率最高,达到80%,在芽伸长培养基中附加0.5 mg·L-1GA3和0.1mg·L-1IAA,芽伸长率最高为54%。共获得94株PPT(100μg·m L-1)抗性再生植株,PCR检测阳性14株,阳性率为14.89%。对4株T0代阳性植株进行大豆食心虫抗性鉴定,其中C-1植株的食心虫抗性明显高于野生型8004,说明在大豆中表达cry1C*基因能提高大豆对食心虫的抗性。 展开更多
关键词 大豆(Glycine MAX L) 胚尖 遗传转化 cry1c*
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水稻三系恢复系镇恢084的螟虫抗性改良 被引量:3
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作者 冯睿彤 徐俊英 +3 位作者 闫成业 邓学武 李春海 牟同敏 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2012年第1期60-66,共7页
以对螟虫有良好抗性的T1C-19(含抗螟虫的cry1C*基因)作为供体,优良恢复系镇恢084为受体和轮回亲本,通过杂交、回交并结合分子辅助选择的方法将cry1C*基因导入镇恢084中,选育了携带cry1C*基因的纯合株系4个。对育成的抗螟虫新株系及其杂... 以对螟虫有良好抗性的T1C-19(含抗螟虫的cry1C*基因)作为供体,优良恢复系镇恢084为受体和轮回亲本,通过杂交、回交并结合分子辅助选择的方法将cry1C*基因导入镇恢084中,选育了携带cry1C*基因的纯合株系4个。对育成的抗螟虫新株系及其杂交组合的CRY1C*蛋白表达量、螟虫抗性、产量、主要农艺性状和稻米品质进行了研究。结果表明,4个抗虫新株系的CRY1C*蛋白表达量与供体T1C-19基本一致,表明cry1C*基因在新株系中能够很好地表达;在自然条件下的田间调查结果显示,培育的4个抗螟虫株系及其所配杂交组合与供体亲本表现一致,都没有受到螟虫的危害,而受体亲本受到一定程度的螟虫危害。此外,新育成的4个抗螟虫株系在主要农艺性状、稻米品质和配合力上都与受体亲本镇恢084相近。 展开更多
关键词 水稻恢复系 镇恢084 cry1c 螟虫抗性
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水稻三系恢复系先恢207的螟虫抗性改良 被引量:3
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作者 刘艳 徐俊英 牟同敏 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2010年第S1期245-250,共6页
先恢207是优良的水稻三系恢复系,以先恢207为父本配制的杂交水稻组合金优207和T优207等是长江中下游稻区的主栽晚籼组合。螟虫(包括稻纵卷叶螟、二化螟、三化螟)是中国南方水稻的主要害虫之一。以转cry1C*基因的T1C-19为抗螟虫基因供体... 先恢207是优良的水稻三系恢复系,以先恢207为父本配制的杂交水稻组合金优207和T优207等是长江中下游稻区的主栽晚籼组合。螟虫(包括稻纵卷叶螟、二化螟、三化螟)是中国南方水稻的主要害虫之一。以转cry1C*基因的T1C-19为抗螟虫基因供体,通过杂交、回交和分子标记辅助选择技术相结合的方法将螟虫抗性基因cry1C*转移到恢复系先恢207中,培育获得携有cry1C*基因的纯合株系2个,分别命名为华抗恢1431和华抗恢1432,并以金23A等6个不育系为父本配制了抗螟虫组合。经田间鉴定,改良的抗螟虫恢复系华抗恢1431和华抗恢1432以及杂交组合对稻纵卷叶螟的抗性达到100%。华抗恢1431的农艺性状、稻米品质和配合力等方面基本保持了先恢207的特性,以金23A作母本配制的杂交组合的生育期、产量和稻米品质均与金优207相当。选育出川23A/华抗恢1431、中9A/华抗恢1431 2个产量优于金优207、生育期和稻米品质与金优207相当的中熟晚籼抗螟虫组合。同时还选育出川农1A/华抗恢1431、金科1A/华抗恢1431 2个迟熟晚籼抗螟虫组合。 展开更多
关键词 水稻恢复系 cry1c* 分子标记辅助选择 抗螟虫杂交稻 选育
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Development of "Multi-Resistance Rice" by Pyramiding of Insect (Cry1C) and Blast Resistance (Pi1 and Pi2) Genes 被引量:3
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作者 Xu Liu Hua Zhang +3 位作者 Pingbo Li Mengqi Zhang Fang Liu Fangyin Yao 《Plant Diseases and Pests》 CAS 2021年第3期25-28,36,共5页
[Objective] The paper was to improve the blast resistance of insect-resistant transgenic rice. [Method] The Japonica rice variety Jikang10, a new transgenic variety with exogenous insect-resistant gene Cry1C, was used... [Objective] The paper was to improve the blast resistance of insect-resistant transgenic rice. [Method] The Japonica rice variety Jikang10, a new transgenic variety with exogenous insect-resistant gene Cry1C, was used as the receptor, and Kongyu 131, a traditional breeding variety with broad-spectrum high blast resistance genes Pi1 and Pi2, was used as the donor to breeding new rice varieties. The genes were polymerized by hybridization and multi-generation backcrossing, and the offspring of each generation was screened by molecular marker assisted selection, field identification of multi-resistance against insect pests and diseases and agronomic trait selection. [Result] Four lines SK01, SK02, SK03 and SK04 with better resistances to insect pests and blast and outstanding agronomic traits in field were selected. [Conclusion] The results will lay foundations for breeding new multi-resistance rice varieties in Huanghuai rice region. 展开更多
关键词 RIcE cry1c Pi1 Pi2 Gene polymerization Multi-resistance rice breeding
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Bt抗虫水稻转育后代两种筛选方法的比较 被引量:2
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作者 李孝琼 郭嗣斌 +3 位作者 韦宇 李杰民 刘开强 高国庆 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期141-145,共5页
【目的】通过比较分子标记辅助选择和除草剂抗性筛选两种检测方法的优缺点,为快速、准确、经济有效地选择抗螟虫水稻转育后代提供依据。【方法】用分子标记检测和除草剂抗性筛选两种方法,对不同组合的抗螟虫转育后代进行筛选,同时采用EL... 【目的】通过比较分子标记辅助选择和除草剂抗性筛选两种检测方法的优缺点,为快速、准确、经济有效地选择抗螟虫水稻转育后代提供依据。【方法】用分子标记检测和除草剂抗性筛选两种方法,对不同组合的抗螟虫转育后代进行筛选,同时采用ELISA检测方法对筛选的抗性株系测定杀虫蛋白含量,比较两种筛选方法的准确性。【结果】在以T1C-19为供体亲本的4个组合169个单株中,两种筛选方法的符合率达到98.2%;而以T2A-1为供体亲本的3个组合141个单株中,两种筛选方法的符合率达到98.6%。在随机选择的经两种筛选方法鉴定均为阳性的144个单株中,均含有对应Bt抗虫基因的杀虫蛋白表达量,与亲本T1C-19、T2A-21相比,Bt抗虫水稻转育后代中个别单株的Bt蛋白含量出现大幅度下降或上升的现象。【结论】分子标记检测和除草剂抗性筛选对抗螟虫水稻转育后代的选择均有很高的准确性:分子标记检测准确可靠,且不受环境影响,但费用相对高;除草剂抗性筛选法耗费低、简便易行,但易受雨天影响。在筛选的过程中可根据现有的条件做出适宜选择。 展开更多
关键词 Bt抗虫水稻 分子标记辅助选择 除草剂抗性筛选 cry1c* cry2A*
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B.t.c. cry1C全长基因的克隆及其在增产菌中的表达 被引量:2
9
作者 陈月华 李红秀 +2 位作者 王津红 蔡峻 任改新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期65-68,共4页
设计的一对引物 ,对苏云金芽孢杆菌科默尔亚种 (Bacillusthuringiensissubsp .colmeri)1 5A3菌株中的cry1C基因进行PCR扩增 ,得到包括结构基因 ,调节基因在内的全长为4 0kb的PCR产物。经两步克隆 ,将此基因连接至穿梭表达载体pHT31 5上 ... 设计的一对引物 ,对苏云金芽孢杆菌科默尔亚种 (Bacillusthuringiensissubsp .colmeri)1 5A3菌株中的cry1C基因进行PCR扩增 ,得到包括结构基因 ,调节基因在内的全长为4 0kb的PCR产物。经两步克隆 ,将此基因连接至穿梭表达载体pHT31 5上 ,得到重组质粒pHT 1C。通过电转化将其导入一株增产菌蜡状芽孢杆菌 (Bacilluscereus) 95 0 9菌株 ,SDS PAGE检测到 1条 60kD左右的蛋白带 ,镜检观察到菱形晶体 ,生测结果表明 ,cry1C基因的导入使Bc95 0 9菌株获得了对甜菜夜蛾的杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌默尔亚种 cry1c 增产菌 杀虫活性
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抗鳞翅目害虫基因cry1C的抗原表位分析及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 金永梅 陈莫军 +1 位作者 刘笑笑 林秀峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期224-229,共6页
利用生物信息学方法预测cry1C蛋白的抗原表位区,并命名为Δcry1C。优化Δcry1C的核苷酸序列并进行人工合成,构建重组表达载体pET28b(+)-Δcry1C。在E.coli中诱导表达His6-Δcry1C蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,分离、纯化获得cry1C多抗... 利用生物信息学方法预测cry1C蛋白的抗原表位区,并命名为Δcry1C。优化Δcry1C的核苷酸序列并进行人工合成,构建重组表达载体pET28b(+)-Δcry1C。在E.coli中诱导表达His6-Δcry1C蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,分离、纯化获得cry1C多抗血清。ELISA测定结果表明,抗体效价最高可达1∶512 000。Western Blot分析结果表明,cry1C多克隆抗体能够与cry1C转基因抗虫水稻蛋白特异性结合。利用生物信息学筛选抗原表位区并优化序列、原核表达重组蛋白、免疫制备cry1C多克隆抗体,为深入研究抗鳞翅目害虫植物提供了前提条件。 展开更多
关键词 鳞翅目害虫 cry1c 抗原表位 序列优化 多克隆抗体
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Transgenic japonica rice expressing the cry1C gene is resistant to striped stem borers in Northeast China 被引量:2
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作者 JIN Yong-mei MA Rui +1 位作者 YU Zhi-jing LIN Xiu-feng 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2021年第11期2837-2848,共12页
Rice production and quality are seriously affected by the lepidopteran pest,striped stem borer(SSB),in Northeast China.In this study,a synthetic cry1 C gene encoding Bacillus thuringiensis(Bt)δ-endotoxin,which is tox... Rice production and quality are seriously affected by the lepidopteran pest,striped stem borer(SSB),in Northeast China.In this study,a synthetic cry1 C gene encoding Bacillus thuringiensis(Bt)δ-endotoxin,which is toxic to lepidopteran pest,was transformed into a japonica rice variety(Jigeng 88)in Northeast China by Agrobacterium-mediated transformation.Through molecular detection and the Basta resistance germination assay,a total of 16 single-copy homozygous transgenic lines were obtained from 126 independent transformants expressing cry1 C.Finally,four cry1 C-transgenic lines(JL16,JL23,JL41,and JL42)were selected by evaluation of the Cry1 C protein level,insect-resistance and agronomic traits.The cry1 C-transgenic lines had higher resistance to SSB and higher yield compared with non-transgenic(NT)control plants.T-DNA flanking sequence analysis of the transgenic line JL42 showed that the cry1 C gene was inserted into the intergenic region of chromosome 11,indicating that its insertion may not interfere with the genes near insertion site.In summary,this study developed four cry1 C-transgenic japonica rice lines with high insect resistance and high yield.They can be used as insect-resistant germplasm materials to overcome the problem of rice yield reduction caused by SSB and reduce the use of pesticides in Northeast China. 展开更多
关键词 striped stem borer insect resistance cry1c gene transgenic japonica rice T-DNA flanking sequence
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抗Cry1c蛋白兔单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:2
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作者 倪庚 沈金儿 +3 位作者 热米拉 刘娜 冯劲松 郑晓冬 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期131-136,共6页
通过原核质粒表达重组Cry1c晶体蛋白,将其纯化后作为特定抗原免疫兔子。经多抗血清效价的测定,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选,构建重组载体等步骤获得抗Cry1c单克隆抗体。通过ELISA方法测定单克隆抗体相关特性,结果表明,Cry1c兔单克隆抗体... 通过原核质粒表达重组Cry1c晶体蛋白,将其纯化后作为特定抗原免疫兔子。经多抗血清效价的测定,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选,构建重组载体等步骤获得抗Cry1c单克隆抗体。通过ELISA方法测定单克隆抗体相关特性,结果表明,Cry1c兔单克隆抗体效价超过3.2×104,其亲和常数为2.4×109L/mol,该单克隆抗体与Cry1Ac蛋白有微量交叉反应,与Cry1Ab蛋白无明显交叉反应。间接ELISA检测抗原Cry1c蛋白时,当包被量为400ng/mL时,判定为阳性。 展开更多
关键词 单克隆抗体 cry1c 间接ELISA 蛋白 检测限
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抗虫基因Cry1C*重组表达载体的构建与鉴定 被引量:1
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作者 张丽萍 查仁明 李尚伟 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第6期6-9,共4页
为水稻害虫生物防治提供菌株,从GenBank中选定Cry1C类抗虫基因,将其优化改造后命名为Cry1C*,Cry1C*经BamH I和Spe I双酶切后与植物表达载体pTCK303连接,构建pTCK303-Cry1C*重组表达载体,将其转化到农杆菌LBA4404中,同时进行PCR、双酶切... 为水稻害虫生物防治提供菌株,从GenBank中选定Cry1C类抗虫基因,将其优化改造后命名为Cry1C*,Cry1C*经BamH I和Spe I双酶切后与植物表达载体pTCK303连接,构建pTCK303-Cry1C*重组表达载体,将其转化到农杆菌LBA4404中,同时进行PCR、双酶切及测序鉴定。结果表明:PCR、双酶切及测序产物与预期扩增片段(2 342bp)相符,重组表达载体pTCK303-Cry1C*构建成功;农杆菌LBA4404中含有重组质粒,成功构建了Cry1C*农杆菌基因工程菌株。 展开更多
关键词 水稻 抗虫基因 cry1c 表达载体构建
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转Cry1C*基因抗虫水稻的培育 被引量:15
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作者 于志晶 刘丽 +3 位作者 李淑芳 蔡勤安 林秀峰 马瑞 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第6期702-708,共7页
水稻害虫是影响吉林省水稻产量的主要限制因素,为培育抗虫转基因水稻新品种,本研究采用农杆菌介导的遗传转化法,将人工合成的Cry1C*基因导入吉林省主栽粳稻品种吉粳88和吉利518中,共获得410个独立转化株。通过对转基因植株PCR检测,阳性... 水稻害虫是影响吉林省水稻产量的主要限制因素,为培育抗虫转基因水稻新品种,本研究采用农杆菌介导的遗传转化法,将人工合成的Cry1C*基因导入吉林省主栽粳稻品种吉粳88和吉利518中,共获得410个独立转化株。通过对转基因植株PCR检测,阳性率为67.2%;ELISA检测结果表明:不同株系Bt毒蛋白含量变化较大,变幅为0.40~4.86μg/g鲜叶重;田间抗性鉴定结果表明:2个株系表现高度抗性,且农艺性状与原品种没有显著差异。这两个高抗转基因水稻株系的获得,为进一步培育适宜于吉林省抗虫转基因新品种奠定了基础。 展开更多
关键词 cry1c*基因 抗虫性 水稻 农杆菌介导的遗传转化
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苏云金杆菌Cry1C毒素对甜菜夜蛾幼虫生长发育、存活及取食行为的影响 被引量:8
15
作者 曾晓慧 喻子牛 胡萃 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第1期62-66,共5页
研究了苏云金杆菌Cry1C毒素对甜菜夜蛾幼虫生长发育、存活及取食行为的影响.结果表明,当饲料中所含毒素浓度增高时,幼虫历期延长,存活率降低,对饲料的拒食作用和选择作用增强,取食量和生长量减少.在毒素浓度相同的情况下,... 研究了苏云金杆菌Cry1C毒素对甜菜夜蛾幼虫生长发育、存活及取食行为的影响.结果表明,当饲料中所含毒素浓度增高时,幼虫历期延长,存活率降低,对饲料的拒食作用和选择作用增强,取食量和生长量减少.在毒素浓度相同的情况下,与敏感品系相比,抗性品系对含有毒素的饲料明显具有较强的适应能力. 展开更多
关键词 苏云金杆菌 cry1c毒素 甜菜夜蛾 生长发育
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转cry1C~*及cry2A~*基因早粳稻Bt蛋白的时空表达和抗螟虫性 被引量:8
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作者 李荣田 王新宇 +2 位作者 田崇兵 周青 刘长华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1829-1836,共8页
早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系... 早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系种植于田间,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测转基因水稻不同生长发育阶段不同器官的、以及成熟期糙米的Bt蛋白量,采用室内离体茎秆法接虫鉴定转基因水稻的抗螟虫性。结果显示,转基因早粳稻不同抗虫基因Bt蛋白量不同, cry1C*基因总是低于cry2A*基因的蛋白质表达量;不同生长发育时期Bt蛋白量不同,叶片和茎鞘等器官的Bt蛋白量为分蘖期<抽穗期<灌浆期,幼穗或糙米等器官的Bt蛋白量为抽穗期幼穗>灌浆期幼穗>成熟期糙米;不同器官Bt蛋白量不同,高低次序在分蘖期为叶片、茎鞘,抽穗期为叶片、幼穗和茎鞘,灌浆及成熟期为叶片、茎鞘、幼穗和糙米;同一抗虫基因不同转基因品系间抽穗期叶片、茎鞘和幼穗等器官Bt蛋白量及抗螟虫性、糙米Bt蛋白量等性状存在差异,抽穗期各器官Bt蛋白量与抗螟虫性及成熟期糙米Bt蛋白量之间相关不显著,不论Bt蛋白量高或低的品系均表现为高抗螟虫。转基因早粳稻营养器官生长发育前期Bt蛋白量较低、后期较高,繁殖器官生长发育早期Bt蛋白量较高、晚期较低,营养器官通常比繁殖器官的Bt蛋白量高。在本研究范围内,不同基因及不同转化事件培育的转基因水稻Bt蛋白表达量高低不同,但所有的转基因早粳稻品系均表现高抗螟虫。 展开更多
关键词 cry1c^*基因 cry2A^*基因 转基因早粳稻 BT蛋白 时空表达 抗螟虫性
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间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素 被引量:5
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作者 徐重新 杨晶祎 +6 位作者 陆梦晓 仲建峰 张存政 张霄 何鑫 刘媛 刘贤金 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期44-48,共5页
利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制... 利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明:获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL^-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074 ng·mL^-1,中抑制浓度(IC50)为60.16 ng·mL^-1,线性检测范围(IC20~IC80)为0.96~1 633.60 ng·mL^-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53%~107.12%,变异系数为6.05%~11.24%。结论:该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求。 展开更多
关键词 cry1c毒素 多克隆抗体 稻米 时间分辨荧光免疫分析
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转化cry1C基因对苏云金芽胞杆菌杀虫活性的影响 被引量:3
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作者 乐超银 鲁松清 +1 位作者 刘子铎 喻子牛 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期17-20,共4页
将含基因cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1Ab、Cry1Ac和cry2的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽胞杆菌野生菌株YBT 80 3 1中 ,得到转化子BMBY 0 0 3。PCR和SDS PAGE分析显示 ,Cry1C可在其中... 将含基因cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1Ab、Cry1Ac和cry2的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽胞杆菌野生菌株YBT 80 3 1中 ,得到转化子BMBY 0 0 3。PCR和SDS PAGE分析显示 ,Cry1C可在其中正常复制、表达 ,但使受体菌部分内源质粒发生丢失。生物测定结果表明 ,转化子BMBY 0 0 3既对甜菜夜蛾有毒力 ,LC50 值为 1 1 78μL/mL ,高于出发菌株YBT 80 3 1 (LC50 1 879μL/mL) ,也对小菜蛾有毒力 ,LC50 值为 1 96 8μL/mL ,低于YBT 80 3 1 ((LC50 1 1 43 μL/mL)。表明cry1C转入后 ,提高了野生菌株YBT 80 3 1对甜菜夜蛾的毒力 ,却降低了对小菜蛾的毒力。 展开更多
关键词 cry1c基因 苏云金芽胞杆菌 杀虫活性 甜菜夜蛾 小菜蛾 基因转化
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转基因抗虫水稻HD1不同生长发育阶段cry1C*基因表达量 被引量:1
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作者 孔梦莹 张佳琦 +2 位作者 于晓晨 刘长华 李荣田 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第11期3603-3611,共9页
以水稻‘空育131’为受体,利用根瘤农杆菌介导法,创制了转cry1C*基因的抗虫水稻HD1-1等独立系。为了研究水稻HD1-1等在田间生长发育过程中cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量,将水稻HD1-1等独立系种植在田间,利用RT-qPCR方法检测分蘖期... 以水稻‘空育131’为受体,利用根瘤农杆菌介导法,创制了转cry1C*基因的抗虫水稻HD1-1等独立系。为了研究水稻HD1-1等在田间生长发育过程中cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量,将水稻HD1-1等独立系种植在田间,利用RT-qPCR方法检测分蘖期、抽穗期和灌浆期叶片、茎鞘及幼穗的cry1C*基因mRNA表达量,同时利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各器官及糙米Bt蛋白含量。分析cry1C*基因表达量不同生长发育阶段间的关系,分析糙米Bt蛋白含量与生长发育时cry1C*基因表达量的关系。结果显示,不同水稻独立系cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量明显不同,叶片、茎鞘及幼穗中cry1C*基因表达量不同生长发育阶段间往往呈正相关,cry1C*基因mRNA表达量和对应的Bt蛋白含量呈极显著的正相关,糙米Bt蛋白含量和各生长发育阶段各器官cry1C*基因表达量存在正相关趋势。水稻HD1 cry1C*基因表达量在不同生长发育阶段间及其和糙米Bt蛋白含量间呈正相关或正相关趋势。cry1C*基因转录水平越高,Bt蛋白含量越高。 展开更多
关键词 转基因抗虫水稻 空育131 生长发育阶段 cry1c*基因表达量 Bt蛋白含量
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转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因整合分析与品系特异性检测 被引量:4
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作者 金永梅 马瑞 +1 位作者 于志晶 林秀峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期6-12,共7页
利用染色体步移方法分离获得转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因旁侧序列及其水稻基因组中的插入位点,并建立了吉生粳3号品系特异性PCR检测方法。通过对吉生粳3号外源基因左、右边界旁侧序列分别与水稻基因组序列和T-DNA序列的比对... 利用染色体步移方法分离获得转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因旁侧序列及其水稻基因组中的插入位点,并建立了吉生粳3号品系特异性PCR检测方法。通过对吉生粳3号外源基因左、右边界旁侧序列分别与水稻基因组序列和T-DNA序列的比对分析确定其插入位点,发现T-DNA在水稻基因组(日本晴)2号染色体上的基因间区2790685-2790589位点(GenBank登记号:NC_029257.1)。根据T-DNA插入位点,在插入位点两侧基因组区域和T-DNA左边界设计特异性引物,建立了吉生粳3号事件特异性PCR检测方法,为吉生粳3号的身份识别提供了准确、快速的检测技术手段。 展开更多
关键词 cry1c基因抗虫水稻 旁侧序列 插入位点 事件特异性检测
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