免疫层析法快速检测金黄色葡萄球菌的研究 被引量：12

1

作者 刘洪贵 武瑞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期283-287,共5页

为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的新方法,本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记鼠抗金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)重组蛋白特异性抗体,从抗金黄色葡萄球菌IgG包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该方法... 为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的新方法,本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记鼠抗金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)重组蛋白特异性抗体,从抗金黄色葡萄球菌IgG包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该方法可以在10min内完成对含金黄色葡萄球菌奶样的检测;敏感度为1×104cfu/mL以上,与PCR方法进行对比检测,相差一个数量级;与大肠杆菌、链球菌、李氏杆菌、巴氏杆菌及蜡样芽孢杆菌均无交叉;稳定性和重复性较好。该试纸条检测金黄色葡萄球菌临床样品表明其具有特异性好,灵敏度较高的特点。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 凝集因子A 免疫层析 试纸条 奶样

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奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌ClfA核酸疫苗的构建及免疫原性试验 被引量：8

2

作者 尹荣兰 王浩然 +4 位作者 张艳晶 杨正涛 刘辉 李琳 张乃生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期539-542,共4页

扩增了奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌ClfA基因,并将其克隆至真核表达载体pVAX1启动子下游,构建成真核表达质粒,通过体外细胞转染试验,运用IFA方法进行抗原性初步确认,所构建的重组DNA疫苗质粒能在真核细胞中表达并被金黄色葡萄球菌抗体特异... 扩增了奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌ClfA基因,并将其克隆至真核表达载体pVAX1启动子下游,构建成真核表达质粒,通过体外细胞转染试验,运用IFA方法进行抗原性初步确认,所构建的重组DNA疫苗质粒能在真核细胞中表达并被金黄色葡萄球菌抗体特异性识别。为进一步评价侯选疫苗的免疫原性,进行了BALB/c小鼠免疫试验,分别检测免疫后的ELISA抗体水平、Th1/Th2类细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖试验。结果表明,构建的核酸疫苗pVAX1-ClfA免疫小鼠后,ELISA抗体水平提高,Th1/Th2类细胞因子含量提升,T细胞增殖能力增强。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 clfa DNA疫苗 免疫原性

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金黄色葡萄球菌黏附素ClfA,FnBPA-A,FnBPA-BCD联合免疫的免疫生物学特性 被引量：6

3

作者 姜慧娇 苏艳 申煜 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1343-1349,共7页

【目的】为比较金黄色葡萄球菌黏附素分子聚集因子(Clf A)与纤连蛋白结合蛋白A(Fn BPA)A区(Fn BPA-A)及BCD区(Fn BPA-BCD)的抗原性、抗体的黏附抑制特性及其免疫保护力。【方法】分别表达了Clf A蛋白、Fn BPA-A和Fn BPA-BCD蛋白,并将表... 【目的】为比较金黄色葡萄球菌黏附素分子聚集因子(Clf A)与纤连蛋白结合蛋白A(Fn BPA)A区(Fn BPA-A)及BCD区(Fn BPA-BCD)的抗原性、抗体的黏附抑制特性及其免疫保护力。【方法】分别表达了Clf A蛋白、Fn BPA-A和Fn BPA-BCD蛋白,并将表达纯化后得到Clf A、Fn BPA-A和Fn BPA-BCD重组蛋白单独或联合免疫小鼠,收集免疫血清对其进行抗原性及免疫保护力的比较分析。【结果】结果显示,重组蛋白Fn BPA-BCD对Fn的结合能力高于其对Fg的结合,而重组蛋白Clf A及Fn BPA-A对Fg的结合能力高于Fn BPA-BCD。血清抗体的检测结果表明,Clf A蛋白及Fn BPA-A蛋白免疫组诱导抗体的水平均优于Fn BPABCD组。3种蛋白联合免疫组的血清抗体效价及抗体抗黏附能力明显优于单一蛋白免疫组(P<0.05)。3种蛋白联合免疫组与Clf A蛋白免疫组免疫保护率为100%,Fn BPA-A组与Fn BPA-BCD组免疫保护率分别为80%与50%。【结论】重组蛋白Clf A及Fn BPA-A的免疫原性优于Fn BPA-BCD,三者联合免疫较单一蛋白免疫在抗细菌的黏附、抗体诱导和免疫保护方面具有优势,提示这3种蛋白联合免疫有利于达到更好的免疫效果。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 clfa FnBPA-A FnBPA-BCD 联合免疫 免疫生物学特性

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牛源耐药性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及黏附因子基因FnBP和clfA的表达分析 被引量：5

4

作者 孙志华 刘君 +4 位作者 张辉 刘娟 许长萌 张华雷 陈创夫 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期22-28,共7页

为探究致奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生物学特性,对新疆垦区部分奶牛场乳房炎奶样进行病原学分析,并对病原菌进行耐药性、毒力因子的表达分析。从乳房炎奶样中分离得到S.aureus,采用血浆凝... 为探究致奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生物学特性,对新疆垦区部分奶牛场乳房炎奶样进行病原学分析,并对病原菌进行耐药性、毒力因子的表达分析。从乳房炎奶样中分离得到S.aureus,采用血浆凝固酶试验、KB法、琼脂筛选法、生化鉴定法(VITEK32)、聚合酶链式反应等法进行鉴定。针对毒力基因clfA(凝集因子A)和FnBP(纤维结合素结合蛋白)进行特异性PCR扩增,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,并构建原核表达载体pET-28a(+)-FnBP和pET-28a(+)-clfA。转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。常规鉴定出葡萄球菌105株,其中金黄色葡萄球菌(S.aureus)62株,从62株S.aureus中检出耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA)13株,检出率为20.10%,2株未确检。经测序证实与GenBank中FnBP基因(J04151)和clfA基因(AB245457)序列同源性分别为100%和95.69%。SDS-PAGE显示,clfA和FnBP蛋白相对分子质量分别为45ku和58ku。Western blot分析显示,clfA蛋白和FnBP蛋白均可与金黄色葡萄球菌多克隆抗血清发生特异性反应。病畜奶样中MRSA检出率较高,新疆垦区部分牛场呈蔓延趋势,成功表达了clfA、FnBP蛋白,具有一定的免疫保护效果。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 凝集因子A基因 纤维结合素结合蛋白基因

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左旋咪唑对金黄色葡萄球菌粘附素ClfA重组DNA疫苗免疫效果的影响 被引量：1

5

作者 江航 孙鹏 +2 位作者 姜慧娇 刘云涛 苏艳 《新疆农业大学学报》 CAS 2014年第5期352-355,共4页

为了探究左旋咪唑(LMS)作为免疫增强剂对金黄色葡萄球菌粘附素ClfA重组DNA疫苗免疫效果的影响。分别用含左旋咪唑的ClfA重组DNA疫苗、ClfA重组DNA疫苗及空载体免疫昆明白小鼠,通过巨噬细胞吞噬试验、MTT实验、免疫血清对金黄色葡萄球菌... 为了探究左旋咪唑(LMS)作为免疫增强剂对金黄色葡萄球菌粘附素ClfA重组DNA疫苗免疫效果的影响。分别用含左旋咪唑的ClfA重组DNA疫苗、ClfA重组DNA疫苗及空载体免疫昆明白小鼠,通过巨噬细胞吞噬试验、MTT实验、免疫血清对金黄色葡萄球菌识别能力、酶联免疫吸附试验和攻毒试验验证免疫效果。结果表明,含左旋咪唑DNA疫苗组在巨噬细胞吞噬指数、脾脏淋巴细胞增殖、免疫血清对金黄色葡萄球菌识别能力方面有增强作用,与其他两组相比差异显著(P<0.05),含左旋咪唑DNA疫苗组小鼠抗体水平及攻毒实验保护率高于单独ClfA重组DNA组和空载对照组,LMS能够对ClfA重组DNA疫苗免疫效果起到增强作用。 展开更多

关键词 左旋咪唑 免疫增强 金黄色葡萄球菌 clfa 重组 DNA 疫苗

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金黄色葡萄球菌ClfA蛋白Th表位鉴定及其免疫原性分析(英文) 被引量：1

6

作者 李扬 李志杰 +1 位作者 李亚刚 叶军锋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期966-975,共10页

【目的】ClfA蛋白是金黄色葡萄球菌粘附于宿主细胞的最主要粘附因子之一,筛选鉴定ClfA蛋白的Th表位,研制基于表位的联合疫苗将成为该菌疫苗新的发展方向。【方法】本研究采用生物信息学软件预测ClfA可能的H-2d限制性Th表位,并以CD4+T淋... 【目的】ClfA蛋白是金黄色葡萄球菌粘附于宿主细胞的最主要粘附因子之一,筛选鉴定ClfA蛋白的Th表位,研制基于表位的联合疫苗将成为该菌疫苗新的发展方向。【方法】本研究采用生物信息学软件预测ClfA可能的H-2d限制性Th表位,并以CD4+T淋巴细胞增殖实验及流式细胞分析进行筛选和鉴定。【结果】获得BALB/c小鼠H-2d限制性Th1表位(C335)和Th2表位(C214,C286和C436)。【结论】筛选出优势性Th细胞表位,并对表位的免疫学特性进行实验免疫研究,为最终研制保护作用强、安全性高的新型疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 clfa CD4+T cell 表位

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牛源金黄色葡萄球菌粘附因子Efb与ClfA的免疫生物学特性比较 被引量：1

7

作者 刘云涛 苏艳 +2 位作者 张宝江 苏玲玲 姜慧娇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1335-1343,共9页

为评价与比较金黄色葡萄球菌的粘附因子Efb(Extracellular fibrinogen-binding protein)和Clf A(Clumping factor A)的抗原性、粘附特性及其抗血清对金黄色葡萄球菌菌体的识别能力、抗粘附能力及免疫保护力等免疫生物学特性,分别构建Efb... 为评价与比较金黄色葡萄球菌的粘附因子Efb(Extracellular fibrinogen-binding protein)和Clf A(Clumping factor A)的抗原性、粘附特性及其抗血清对金黄色葡萄球菌菌体的识别能力、抗粘附能力及免疫保护力等免疫生物学特性,分别构建Efb和Clf A的重组表达载体,并用纯化的重组蛋白免疫实验动物,分别检测家兔抗血清对菌体的识别能力、抗粘附能力以及小鼠抗血清的抗体效价和免疫保护作用。结果显示,Efb和Clf A均有与纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg)结合的能力,且Efb蛋白对纤连蛋白(Fibronectin,Fn)的结合能力优于Clf A(P<0.01),Clf A免疫组抗血清对全细菌的识别能力优于Efb免疫组(P<0.01)。与对照组相比Efb和Clf A免疫组的抗血清均能显著抑制金黄色葡萄球菌对Fg和Fn的粘附(P<0.01),Efb免疫组对金黄色葡萄球菌的粘附抑制优于Clf A,两种粘附因子免疫小鼠后产生的血清抗体效价与对照组比较有显著的升高,抗体滴度可达1∶40 500,攻毒结果显示Efb与Clf A免疫组均对小鼠具有良好的保护效果。该研究结果对Efb在金黄色葡萄球菌的亚单位疫苗的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 EFB clfa 免疫生物学特性

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奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌ClfA活性基因核酸疫苗的构建及免疫试验 被引量：1

8

作者 尹荣兰 尹荣焕 +6 位作者 李琳 任清丹 许志林 李卫 许尧 杨正涛 张乃生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期18-21,190,共5页

为了研制奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌DNA候选疫苗,试验采用PCR方法扩增奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌主要抗原ClfA活性基因,将其亚克隆至真核表达载体pVAX1启动子下游,构建真核表达质粒,通过体外细胞转染试验进行抗原性初步确认;同时进行Balb/... 为了研制奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌DNA候选疫苗,试验采用PCR方法扩增奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌主要抗原ClfA活性基因,将其亚克隆至真核表达载体pVAX1启动子下游,构建真核表达质粒,通过体外细胞转染试验进行抗原性初步确认;同时进行Balb/c小鼠免疫试验,分别检测免疫后的ELISA抗体水平、Th1/Th2类细胞因子及T淋巴细胞增殖情况。结果表明:外源基因能在真核细胞中表达并被金黄色葡萄球菌抗体特异性识别。用构建的核酸疫苗pVAX1-pClfA免疫小鼠后,ELISA抗体水平提高,Th1/Th2类细胞因子含量提升,T淋巴细胞增殖能力增强。说明所构建的重组DNA候选疫苗具有抗原性、免疫原性及预防奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌的潜力和应用前景。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 clfa pclfa DNA疫苗 免疫试验

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双重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌粘附素clfa A和Fnbp A基因 被引量：2

9

作者 杨宏军 高运东 +3 位作者 王长法 杨少华 仲跻峰 赵宏坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期906-908,934,共4页

利用设计合成的特异性引物对金黄色葡萄球菌进行PCR扩增,将目的基因回收并连接到T载体,鉴定后进行测序验证,然后对本实验室所分离鉴定的临床分离株进行双重PCR检测。结果显示,PCR产物经过电泳成像显示,仅有金黄色葡萄球菌分别在293bp和6... 利用设计合成的特异性引物对金黄色葡萄球菌进行PCR扩增,将目的基因回收并连接到T载体,鉴定后进行测序验证,然后对本实验室所分离鉴定的临床分离株进行双重PCR检测。结果显示,PCR产物经过电泳成像显示,仅有金黄色葡萄球菌分别在293bp和642bp处出现特异性条带。通过对金黄色葡萄球菌临床分离株双重PCR检测发现,其中95%以上存在粘附素基因clfa A和Fnbp A。证明本试验建立的双重PCR检测金黄色葡萄球菌粘附素基因的方法具有良好的特异性和可靠性。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 粘附素 聚集因子 纤连蛋白

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金黄色葡萄球菌黏附因子ClfA作为金黄色葡萄球菌疫苗组分的研究

10

作者 张晓艳 易绍琼 +4 位作者 付玲 刘树玲 于婷 刘颖 陈薇 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2010年第3期258-260,共3页

目的研究黏附因子丛生因子A(clumping factor A,ClfA)在金黄色葡萄球菌(SAU)不同菌株中的分布情况,为开发具有广泛保护效果的SAU疫苗奠定基础。方法采用PCR法扩增目的基因,构建重组质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,对目的蛋白进行... 目的研究黏附因子丛生因子A(clumping factor A,ClfA)在金黄色葡萄球菌(SAU)不同菌株中的分布情况,为开发具有广泛保护效果的SAU疫苗奠定基础。方法采用PCR法扩增目的基因,构建重组质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,对目的蛋白进行表达、纯化。PCR及点杂交法检测ClfA在不同菌株中的分布情况。结果得到纯度较高的目的蛋白,PCR及点杂交结果显示ClfA存在于菌株USA300,而在菌株546、1884、1885中并无分布。结论 ClfA在SAU各菌株中分布不广泛,可能难以作为具有广泛保护效果的SAU疫苗组分。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 丛生因子A 疫苗 聚合酶链反应

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奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌ClfA A区和FnBPA基因的克隆与串联表达

11

作者 宋战辉 马卧龙 陈创夫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期152-154,共3页

金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的重要病原[1],近50%乳腺炎由该菌引起[2],主要感染乳房、乳头导管或损伤的乳头。致病性金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性较低,防治较难[3]。近年研究证实,在金黄色葡萄球菌感染早期,黏附素是最重要的致病因子... 金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的重要病原[1],近50%乳腺炎由该菌引起[2],主要感染乳房、乳头导管或损伤的乳头。致病性金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性较低,防治较难[3]。近年研究证实,在金黄色葡萄球菌感染早期,黏附素是最重要的致病因子,只有当金黄色葡萄球菌黏附到宿主细胞上,毒素和荚膜才能表达。与金黄色葡萄球菌在奶牛乳房中定植有关的黏附素主要是Clf A和Fn BPA。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 FnBPA基因 clfa A 奶牛乳腺炎 乳头导管 致病性 感染早期 重组表达质粒 黏附素 宿主细胞

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金黄色葡萄球菌凝聚因子A区基因的克隆表达及表达产物的免疫学特性 被引量：11

12

作者 姜晓娟 郝永清 +2 位作者 张爱荣 范鑫 陈晓杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期626-631,共6页

采用PCR技术对引起乳牛乳腺炎的金黄色葡萄球菌凝聚因子(ClfA)A区基因进行了扩增和克隆测序,并对测序结果用DNAStar软件进行了抗原表位分析,成功构建了原核表达质粒pET-32a-ClfA A。将其转入宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,证实目的蛋... 采用PCR技术对引起乳牛乳腺炎的金黄色葡萄球菌凝聚因子(ClfA)A区基因进行了扩增和克隆测序,并对测序结果用DNAStar软件进行了抗原表位分析,成功构建了原核表达质粒pET-32a-ClfA A。将其转入宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,证实目的蛋白以可溶形式存在。用His.Bind柱对其纯化后获得了纯度较高的蛋白。纯化后的蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫家兔得到了较高效价的抗血清,通过ELISA、试管凝集试验、吞噬调理试验、抗体抗金黄色葡萄球菌黏附能力检测等对表达产物及制备的超免疫血清进行了检测。试验证明目的蛋白具有黏附活性,自制的超免疫血清具有抗金黄色葡萄球菌黏附至牛纤维蛋白原的作用以及吞噬调理作用,所表达的蛋白为ClfA A蛋白。 展开更多

关键词 乳牛 乳腺炎 金黄色葡萄球菌 凝聚因子(clfa)A区基因

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金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB-ClFA共表达质粒的构建与原核表达 被引量：8

13

作者 范鑫 郝永清 +2 位作者 张爱荣 史冬艳 陈晓杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期173-177,共5页

采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌纤黏蛋白B的D区和纤黏蛋白原凝集素A的A区基因片段进行了特异性扩增,并通过重叠延伸PCR扩增了FnBPB-ClFA串联基因,构建了克隆质粒pMD19-FnB-PB-ClFA。将该基因片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,... 采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌纤黏蛋白B的D区和纤黏蛋白原凝集素A的A区基因片段进行了特异性扩增,并通过重叠延伸PCR扩增了FnBPB-ClFA串联基因,构建了克隆质粒pMD19-FnB-PB-ClFA。将该基因片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了表达质粒pET-FnBPB-ClFA,并将其转入宿主菌BL21(DE3)。SDS-PAGE分析表明,在1mmol/L IPTG诱导下,在51ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带。Western-blot分析表明,所表达的蛋白与目的蛋白一致。上述结果表明,该融合基因在原核细胞中成功表达。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 纤维素结合蛋白B 凝集因子A 重叠延伸PCR 原核表达

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光触媒薄膜储粮应用技术初步试验 被引量：7

14

作者 熊鹤鸣 张忠柏 田智军 《粮食储藏》 2001年第4期21-24,共4页

将当年产水分为 14%的早籼谷用光触媒袋包装储存和用光触媒薄膜六面密闭麻袋包装储存 ,以普通塑料编织袋包装储存作为对照。经过一年多的试验观察 ,两个光触媒试验堆的防虫效果明显 ,并且具有一定的延缓早籼谷品质陈化作用。特别是光触... 将当年产水分为 14%的早籼谷用光触媒袋包装储存和用光触媒薄膜六面密闭麻袋包装储存 ,以普通塑料编织袋包装储存作为对照。经过一年多的试验观察 ,两个光触媒试验堆的防虫效果明显 ,并且具有一定的延缓早籼谷品质陈化作用。特别是光触媒薄膜六面密闭麻袋包装储存 ,操作简便 ,容易在粮库大规模应用推广。为探索安全。 展开更多

关键词 光触媒薄膜 光化学反应 氧化钛 粮食储藏 害虫防治

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金黄色葡萄球菌CP8-FnBPB-ClfA偶联蛋白对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的免疫效果研究 被引量：8

15

作者 杨岚 郝永清 +3 位作者 何焱 潘海婷 许金朋 于自民 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期229-232,共4页

为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)CP8-Fn BPB-Clf A偶联物对S.aureus性奶牛乳房炎的免疫保护效果,本研究将脂质体、氢氧化铝(ALUM)或大肠杆菌不耐热肠毒素B(LTB)作为佐剂与纯化的CP8-Fn BPB-Clf A混合分别免疫泌乳期奶牛,通过检测乳汁中... 为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)CP8-Fn BPB-Clf A偶联物对S.aureus性奶牛乳房炎的免疫保护效果,本研究将脂质体、氢氧化铝(ALUM)或大肠杆菌不耐热肠毒素B(LTB)作为佐剂与纯化的CP8-Fn BPB-Clf A混合分别免疫泌乳期奶牛,通过检测乳汁中体细胞数(SCC)、监测血清中Ig G、Ig A及乳汁中Ig G水平,对免疫效果进行评价。结果显示,通过ALUM佐剂乳化后的CP8-Fn BPB-Clf A免疫泌乳期奶牛,其血清及乳汁中抗体水平最高,持续时间最长,并且乳汁中SCC下降幅度最大。本研究结果表明,CP8-Fn BPB-Clf A经ALUM乳化后免疫奶牛,能够有效降低奶牛乳汁中的SCC,激发奶牛免疫反应。 展开更多

关键词 CP8-Fn BPB-Clf A 金黄色葡萄球菌 奶牛 体细胞数

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金黄色葡萄球菌ClfA基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

16

作者 尹荣兰 杨正涛 +4 位作者 张艳晶 刘辉 杨琦 刘珊 张乃生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期150-152,共3页

根据GenBank中ClfA基因序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得了约2 300 bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,构建了克隆质粒pMD18-ClfA。用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD18-ClfA和pET28a(+),将纯化... 根据GenBank中ClfA基因序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得了约2 300 bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,构建了克隆质粒pMD18-ClfA。用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD18-ClfA和pET28a(+),将纯化的基因ClfA亚克隆至pET28a(+),构建重组质粒pET28a-ClfA,并将其转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,在87 000处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western-blotting分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 clfa基因 克隆 原核表达

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新疆地区牛乳源金黄色葡萄球菌粘附因子ClfA基因的克隆与序列分析 被引量：3

17

作者 邵俊高 苏艳 《新疆农业大学学报》 CAS 2013年第2期103-107,共5页

采集新疆奶牛隐性乳腺炎乳样,对分离鉴定的致病性金黄色葡萄球菌,提取分离菌株的基因组DNA,参考GenBank中发表的ClfA(Clumping Factor A of Staphylococcus aureus)基因序列,设计特异性引物经PCR扩增得到1 560bp的ClfA基因。对新疆3个... 采集新疆奶牛隐性乳腺炎乳样,对分离鉴定的致病性金黄色葡萄球菌,提取分离菌株的基因组DNA,参考GenBank中发表的ClfA(Clumping Factor A of Staphylococcus aureus)基因序列,设计特异性引物经PCR扩增得到1 560bp的ClfA基因。对新疆3个地区分离的9株金黄色葡萄球菌分别进行ClfA基因的克隆和序列分析,对ClfA蛋白的氨基酸序列分析结果表明,新疆3个地区ClfA蛋白氨基酸的同源性为91.5%～100%,与国外其他分离菌株的同源性为91.9%～100%,差异性较小,该结果表明ClfA基因在该菌进化和流行过程中是保守的。 展开更多

关键词 新疆 金黄色葡萄球菌 clfa基因 克隆 序列分析

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大鼠IgG Fc片段与金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB-ClfA的融合表达及其免疫学特性 被引量：3

18

作者 潘海婷 郝永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期299-303,共5页

为提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)串联表达的黏附素重组蛋白(r Fn BPB-Clf A)的免疫效力,本研究将RT-PCR扩增的大鼠Ig G Fc段基因与本实验室已构建的S.aureus Fn BPB-Clf A基因串联,采用SOE-PCR进行扩增,制备Fc-Fn BPB-Clf A融合基因,并... 为提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)串联表达的黏附素重组蛋白(r Fn BPB-Clf A)的免疫效力,本研究将RT-PCR扩增的大鼠Ig G Fc段基因与本实验室已构建的S.aureus Fn BPB-Clf A基因串联,采用SOE-PCR进行扩增,制备Fc-Fn BPB-Clf A融合基因,并将其克隆于p ET-32a(+)载体中进行原核表达。将表达的重组蛋白(r Fc-Fn BPBClf A)经乳头管注射(200μg/只)免疫哺乳期Wistar大鼠,并于加强免疫2周后,以1×109 cfu S.aureus经乳头管攻毒。结果表明,在加强免疫7 d后,与r Fn BPB-Clf A免疫组相比,r Fc-Fn BPB-Clf A免疫组血清和乳清中的抗体水平明显增高,而且Ig G水平动态检测结果表明,其特异性抗体上升趋势明显高于r Fn BPB-Clf A免疫组。攻毒保护试验证明,r Fc-Fn BPB-Clf A和r Fn BPB-Clf A免疫组对S.aureus清除率均显著高于对照组(p<0.01)。本研究结果表明,r Fc-Fn BPB-Clf A对S.aureus乳房炎的免疫效果更佳,为进一步研制有效防治S.aureus乳房炎疫苗提供了实验依据。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 大鼠IgG Fc基因 FnBPB-clfa串联基因

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金黄色葡萄球菌ClfA基因表达产物在小鼠的免疫原性分析 被引量：2

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作者 杨明锋 陈创夫 +4 位作者 曹旭东 刘君 王正荣 李贞 乔军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1584-1591,共8页

为分析原核表达的金黄色葡萄球菌ClfA部分基因表达产物的免疫原性,作者采用PCR方法从奶牛乳房炎病例中分离的金黄色葡萄球菌中克隆出ClfA基因的部分片段,测序后用DNAman软件进行抗原位点分析。构建原核表达质粒ClfA-pET-28a+,转化BL21(D... 为分析原核表达的金黄色葡萄球菌ClfA部分基因表达产物的免疫原性,作者采用PCR方法从奶牛乳房炎病例中分离的金黄色葡萄球菌中克隆出ClfA基因的部分片段,测序后用DNAman软件进行抗原位点分析。构建原核表达质粒ClfA-pET-28a+,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达。用His-bind柱纯化表达蛋白,加弗氏佐剂混匀后免疫小鼠。小鼠分娩后乳腺内攻菌,检查乳腺组织病理变化,乳腺组织中金葡菌数量和TNF-α水平来评价原核表达蛋白的免疫保护效果。结果显示转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导可以表达ClfA蛋白。原核表达蛋白抗原免疫小鼠可以显著降低乳腺组织内金葡菌数量,TNF-α水平也显著低于对照组和全菌蛋白抗原组,提示原核表达的ClfA蛋白免疫小鼠可以减少乳腺内金葡菌定植的数量,减轻乳腺内感染造成炎症的严重程度。本研究表明原核表达金黄色葡萄球菌ClfA蛋白有一定的免疫保护效果,为奶牛乳房炎疫苗的研究提供科学依据。 展开更多

关键词 乳房炎 金黄色葡萄球菌 凝聚因子A(clfa) 小鼠 免疫原性

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牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及ClfA基因的克隆和真核表达载体的构建 被引量：1

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作者 王华 阚威 +6 位作者 侯书宝 武小虎 董翔宸 马友记 胡俊杰 张勇 赵兴绪 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1933-1938,共6页

以研制安全有效的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌基因工程疫苗为目的,采集380份隐性和临床型乳房炎奶样,经高盐肉汤、过氧化氢酶、甘露醇发酵、三糖铁发酵试验以及Baird-Parker平板对金黄色葡萄球菌进行分离和生化鉴定,PCR扩增分离株凝集因... 以研制安全有效的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌基因工程疫苗为目的,采集380份隐性和临床型乳房炎奶样,经高盐肉汤、过氧化氢酶、甘露醇发酵、三糖铁发酵试验以及Baird-Parker平板对金黄色葡萄球菌进行分离和生化鉴定,PCR扩增分离株凝集因子基因(Clf A)并连接TA克隆载体。经测序确定无误后,连接pc DNA3.1His B以构建真核表达载体pc DNA 3.1His B-Clf A,转化Trans T1TM感受态细胞,HindⅢ和XhoⅠ双酶切分析,同时进行测序和序列分析。结果显示,通过高盐肉汤、过氧化氢酶、甘露醇、三糖铁试验和Baird-Parker平板从380份隐性及临床型奶牛乳房炎奶样中共分离到35株金黄色葡萄球菌,成功构建了真核表达载体(pc DNA3.1His B-Clf A),为研制金黄色葡萄球菌基因工程疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 奶牛隐性乳房炎 金黄色葡萄球菌 clfa基因

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