目的观察人脂肪来源干细胞胶(SVF-GEL)中细胞因子含量及其体外对表皮、真皮细胞生物学行为的影响和临床疗效。方法(1)收集笔者单位行脂肪抽吸术获取的女性腹部脂肪抽吸液制备SVF-GEL。取1 mL SVF-GEL和1 mL DMEM高糖培养基,均用含体积分...目的观察人脂肪来源干细胞胶(SVF-GEL)中细胞因子含量及其体外对表皮、真皮细胞生物学行为的影响和临床疗效。方法(1)收集笔者单位行脂肪抽吸术获取的女性腹部脂肪抽吸液制备SVF-GEL。取1 mL SVF-GEL和1 mL DMEM高糖培养基,均用含体积分数10%胎牛血清、10 g/L青霉素、10 g/L链霉素的DMEM高糖培养基培养24 h,分别设为SVF-GEL组和阴性对照组,样本数均为6,采用酶联免疫吸附测定法检测上清液中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。(2)选取处于对数生长期的5×105个人皮肤成纤维细胞(HSF)、HaCaT细胞分别接种于Transwell小室常规培养12 h,将所有培养细胞的Transwell小室分为2组,SVF-GEL处理组在Transwell小室中加入0.5 mL SVF-GEL与细胞共培养,对照组在Transwell小室中加入0.5 mL DMEM高糖培养基与细胞共培养,2种细胞各组样本数均为9。培养24 h后行划痕试验,观察划痕后0(即刻)、24、48 h划痕剩余宽度变化,测量划痕后24、48 h的细胞迁移距离;培养24、48、72 h采用细胞计数仪计数活细胞。(3)2018年6月—2019年6月,笔者单位应用SVF-GEL填充15例患者面部凹陷性瘢痕,其中男2例、女13例,年龄19~42岁。术后6个月,记录SVF-GEL存活情况、有无并发症。术前及术后6个月,对比患者瘢痕凹陷程度、色泽、柔软性,采用温哥华瘢痕量表进行色泽、血管、柔软性评分并计算总分。术后6个月记录十分满意、满意的患者数量。对数据行析因设计方差分析、配对样本t检验及Wilcoxon秩和检验。结果(1)SVF-GEL组、阴性对照组EGF含量分别为(316.6±12.8)、(3.4±0.6)pg/mL,VEGF含量分别为(568.67±12.19)、(4.93±0.16)pg/mL,组间比较,差异均有统计学意义(t=48.777、92.485,P<0.01)。(2)HSF、HaCaT各组细胞划痕剩余宽度随时间延长逐渐缩小,其中SVF-GEL处理组划痕后24、48 h的划痕剩余宽度均小于相应对照组。SVF-GEL处理组划痕后24、48 h HSF、HaCaT展开更多
目的通过shRNA敲低下咽癌FaDu细胞(简称FaDu细胞)蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)的表达,了解其在下咽癌发生发展中的作用。方法设计特异性shRNA序列,...目的通过shRNA敲低下咽癌FaDu细胞(简称FaDu细胞)蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)的表达,了解其在下咽癌发生发展中的作用。方法设计特异性shRNA序列,包装慢病毒并转染FaDu细胞,特异性敲低CIP2A的表达,分别通过RT-PCR和Western blot检测CIP2A mRNA和CIP2A蛋白的表达情况。结果(1)shRNA敲低FaDu细胞中CIP2A后,实验组CIP2AmRNA和CIP2A蛋白的表达量均较空白组显著降低。(2)细胞克隆和CCK8实验结果显示,实验组细胞较空白组细胞增殖能力明显下降(t=50.86,P<0.01;t=12.406,P<0.001)。细胞划痕实验结果显示,实验组细胞横向迁移能力较空白组细胞明显下降。Transwell实验结果显示,实验组细胞纵向迁移能力较空白组细胞明显下降(t=40.038,P<0.01;t=12.247,P<0.001)。结论敲低FaDu细胞CIP2A后细胞增殖和迁移能力均下降,表明CIP2A参与调控下咽癌细胞的生物学行为,可作为潜在的抗癌靶点。展开更多
目的研究Plectin的表达与肝癌细胞迁移能力的关系,揭示Plectin表达影响肝癌细胞迁移行为的分子机理。方法首先,Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中Plectin的表达。其次,构建Plectin下调的肝癌细胞株,设立对照组(shNC组)和shPLEC组...目的研究Plectin的表达与肝癌细胞迁移能力的关系,揭示Plectin表达影响肝癌细胞迁移行为的分子机理。方法首先,Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中Plectin的表达。其次,构建Plectin下调的肝癌细胞株,设立对照组(shNC组)和shPLEC组,各组分别设溶剂对照组(shNC+DMSO组或shPLEC+DMSO组)和F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide组(shNC+Jasp组或shPLEC+Jasp组)。采用Western blot检测各组肝癌细胞中Plectin的表达及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子(N-cadherin、vimentin和E-cadherin)的表达;采用Transwell小室法分析肝癌细胞的迁移能力;采用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析与Plectin基因有关的信号通路;采用免疫荧光技术检测Plectin表达变化对细胞骨架F-actin聚合的影响。结果与正常肝细胞相比,Plectin在肝癌细胞中高表达。与shNC组相比,shPLEC组Plectin的表达降低(P<0.05),肝癌细胞的迁移能力减弱(P<0.05),EMT进程被抑制(N-cadherin和vimentin表达降低,E-cadherin表达升高)(P<0.05);KEGG分析发现细胞骨架F-actin调控与Plectin的联系最为密切,shPLEC组肝癌细胞骨架F-actin发生解聚。采用F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide处理后,与shPLEC+DMSO组相比,shPLEC+Jasp组肝癌细胞迁移能力增强(P<0.05),EMT进程有所恢复(N-cadherin和vimentin表达升高,E-cadherin表达降低)(P<0.05),同时肝癌细胞骨架F-actin聚合亦有所恢复。结论Plectin在肝癌细胞中高表达,肝癌细胞中Plectin通过诱导F-actin聚合促进肝癌细胞的迁移和EMT。展开更多
文摘目的观察人脂肪来源干细胞胶(SVF-GEL)中细胞因子含量及其体外对表皮、真皮细胞生物学行为的影响和临床疗效。方法(1)收集笔者单位行脂肪抽吸术获取的女性腹部脂肪抽吸液制备SVF-GEL。取1 mL SVF-GEL和1 mL DMEM高糖培养基,均用含体积分数10%胎牛血清、10 g/L青霉素、10 g/L链霉素的DMEM高糖培养基培养24 h,分别设为SVF-GEL组和阴性对照组,样本数均为6,采用酶联免疫吸附测定法检测上清液中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。(2)选取处于对数生长期的5×105个人皮肤成纤维细胞(HSF)、HaCaT细胞分别接种于Transwell小室常规培养12 h,将所有培养细胞的Transwell小室分为2组,SVF-GEL处理组在Transwell小室中加入0.5 mL SVF-GEL与细胞共培养,对照组在Transwell小室中加入0.5 mL DMEM高糖培养基与细胞共培养,2种细胞各组样本数均为9。培养24 h后行划痕试验,观察划痕后0(即刻)、24、48 h划痕剩余宽度变化,测量划痕后24、48 h的细胞迁移距离;培养24、48、72 h采用细胞计数仪计数活细胞。(3)2018年6月—2019年6月,笔者单位应用SVF-GEL填充15例患者面部凹陷性瘢痕,其中男2例、女13例,年龄19~42岁。术后6个月,记录SVF-GEL存活情况、有无并发症。术前及术后6个月,对比患者瘢痕凹陷程度、色泽、柔软性,采用温哥华瘢痕量表进行色泽、血管、柔软性评分并计算总分。术后6个月记录十分满意、满意的患者数量。对数据行析因设计方差分析、配对样本t检验及Wilcoxon秩和检验。结果(1)SVF-GEL组、阴性对照组EGF含量分别为(316.6±12.8)、(3.4±0.6)pg/mL,VEGF含量分别为(568.67±12.19)、(4.93±0.16)pg/mL,组间比较,差异均有统计学意义(t=48.777、92.485,P<0.01)。(2)HSF、HaCaT各组细胞划痕剩余宽度随时间延长逐渐缩小,其中SVF-GEL处理组划痕后24、48 h的划痕剩余宽度均小于相应对照组。SVF-GEL处理组划痕后24、48 h HSF、HaCaT
文摘目的通过shRNA敲低下咽癌FaDu细胞(简称FaDu细胞)蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)的表达,了解其在下咽癌发生发展中的作用。方法设计特异性shRNA序列,包装慢病毒并转染FaDu细胞,特异性敲低CIP2A的表达,分别通过RT-PCR和Western blot检测CIP2A mRNA和CIP2A蛋白的表达情况。结果(1)shRNA敲低FaDu细胞中CIP2A后,实验组CIP2AmRNA和CIP2A蛋白的表达量均较空白组显著降低。(2)细胞克隆和CCK8实验结果显示,实验组细胞较空白组细胞增殖能力明显下降(t=50.86,P<0.01;t=12.406,P<0.001)。细胞划痕实验结果显示,实验组细胞横向迁移能力较空白组细胞明显下降。Transwell实验结果显示,实验组细胞纵向迁移能力较空白组细胞明显下降(t=40.038,P<0.01;t=12.247,P<0.001)。结论敲低FaDu细胞CIP2A后细胞增殖和迁移能力均下降,表明CIP2A参与调控下咽癌细胞的生物学行为,可作为潜在的抗癌靶点。
文摘目的研究Plectin的表达与肝癌细胞迁移能力的关系,揭示Plectin表达影响肝癌细胞迁移行为的分子机理。方法首先,Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中Plectin的表达。其次,构建Plectin下调的肝癌细胞株,设立对照组(shNC组)和shPLEC组,各组分别设溶剂对照组(shNC+DMSO组或shPLEC+DMSO组)和F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide组(shNC+Jasp组或shPLEC+Jasp组)。采用Western blot检测各组肝癌细胞中Plectin的表达及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子(N-cadherin、vimentin和E-cadherin)的表达;采用Transwell小室法分析肝癌细胞的迁移能力;采用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析与Plectin基因有关的信号通路;采用免疫荧光技术检测Plectin表达变化对细胞骨架F-actin聚合的影响。结果与正常肝细胞相比,Plectin在肝癌细胞中高表达。与shNC组相比,shPLEC组Plectin的表达降低(P<0.05),肝癌细胞的迁移能力减弱(P<0.05),EMT进程被抑制(N-cadherin和vimentin表达降低,E-cadherin表达升高)(P<0.05);KEGG分析发现细胞骨架F-actin调控与Plectin的联系最为密切,shPLEC组肝癌细胞骨架F-actin发生解聚。采用F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide处理后,与shPLEC+DMSO组相比,shPLEC+Jasp组肝癌细胞迁移能力增强(P<0.05),EMT进程有所恢复(N-cadherin和vimentin表达升高,E-cadherin表达降低)(P<0.05),同时肝癌细胞骨架F-actin聚合亦有所恢复。结论Plectin在肝癌细胞中高表达,肝癌细胞中Plectin通过诱导F-actin聚合促进肝癌细胞的迁移和EMT。
