将分别编码猪细小病毒(PPV)主要免疫保护性抗原VP2蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入乳酸杆菌细胞表面表达载体pPG中,成功构建了重组表达载体pPG-VP2-LTB,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小...将分别编码猪细小病毒(PPV)主要免疫保护性抗原VP2蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入乳酸杆菌细胞表面表达载体pPG中,成功构建了重组表达载体pPG-VP2-LTB,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒VP2-LTB融合蛋白的重组乳酸菌表达系统,经2%乳糖诱导,SDS-PAGE和Western-blot检测表明,有大小约78kD的蛋白得到了表达,具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性,全细胞ELISA结果表明,LTB同时获得了表达;间接免疫荧光实验及免疫胶体金定位试验结果表明,所表达的蛋白定位于干酪乳杆菌的菌体表面。本研究成果为猪细小病毒重组乳酸菌活菌口服疫苗的研制和LTB作为粘膜免疫佐剂作用的研究奠定了重要的物质基础。展开更多
文摘将分别编码猪细小病毒(PPV)主要免疫保护性抗原VP2蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入乳酸杆菌细胞表面表达载体pPG中,成功构建了重组表达载体pPG-VP2-LTB,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒VP2-LTB融合蛋白的重组乳酸菌表达系统,经2%乳糖诱导,SDS-PAGE和Western-blot检测表明,有大小约78kD的蛋白得到了表达,具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性,全细胞ELISA结果表明,LTB同时获得了表达;间接免疫荧光实验及免疫胶体金定位试验结果表明,所表达的蛋白定位于干酪乳杆菌的菌体表面。本研究成果为猪细小病毒重组乳酸菌活菌口服疫苗的研制和LTB作为粘膜免疫佐剂作用的研究奠定了重要的物质基础。