基于IL-6/STAT3通路研究健脾和胃法干预肿瘤微环境下肌细胞自噬的分子机制 被引量：3

1

作者 彭梦薇 贺倩文 +6 位作者 蒋时红 张彩丽 郝羚伦 张艳 陈玉龙 刘燕 吴耀松 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期3314-3318,共5页

目的:基于小鼠肺癌细胞/小鼠成肌细胞(Lewis/C_(2)C_(12))体外共培养模型研究健脾和胃法六君子汤干预肿瘤微环境下细胞自噬的分子机制。方法:采用Lewis/C_(2)C_(12)共培养方法模拟肿瘤微环境,将细胞分为5组,分别为空白对照组、模型组、... 目的:基于小鼠肺癌细胞/小鼠成肌细胞(Lewis/C_(2)C_(12))体外共培养模型研究健脾和胃法六君子汤干预肿瘤微环境下细胞自噬的分子机制。方法:采用Lewis/C_(2)C_(12)共培养方法模拟肿瘤微环境,将细胞分为5组,分别为空白对照组、模型组、六君子汤组、抑制剂组、联合用药组。加药48 h后,MTT法检测六君子汤1000μg/mL、抑制剂3μmol/L对两种细胞的影响;马血清诱导C_(2)C_(12)细胞分化,建立Lewis/C_(2)C_(12)细胞共培养体系;免疫荧光法检测C_(2)C_(12)细胞中肌肉蛋白重链MyHC的表达;电子显微镜下观察C_(2)C_(12)细胞中自噬体的变化;ELISA检测共培养条件下细胞上清中IL-6的含量;Western Blot法检测STAT3及Beclin1、LC3B/LC3A、泛素结合蛋白p62、ULK1的表达。结果:MTT结果显示六君子汤和抑制剂分别为1 mg/mL和3μmol/L的浓度符合肿瘤微环境模型要求;与空白对照组比较,模型组MyHC蛋白表达量显著下降(P<0.05),上清中IL-6含量、STAT3、Beclin1、p62、LC3B/LC3A、ULK1蛋白表达量以及自噬体数量显著上升(P<0.05)。与模型组比较,各给药组MyHC蛋白表达量显著上升(P<0.05),细胞上清中IL-6含量、STAT3、p62、LC3B/LC3A、ULK1蛋白表达均显著下降(P<0.05),自噬体数量显著减少(P<0.05)。与六君子汤组比较,抑制剂组、联合用药组MyHC蛋白表达量显著上升(P<0.05),细胞上清中IL-6下降,抑制剂组细胞p62、LC3B/LC3A表达量显著下降(P<0.05),联合用药组p62表达显著下降(P<0.05)。结论:六君子汤可通过抑制自噬溶酶体途径的激活,逆转肿瘤恶病质肌肉萎缩,其机制可能与IL-6/STAT3信号通路有关。 展开更多

关键词 六君子汤 肿瘤恶病质 肌肉萎缩 IL-6/STAT3信号通路 自噬 c_(2)c_(12)细胞

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蒲黄总黄酮抑制棕榈酸培养下C2C12骨骼肌细胞白细胞介素6的表达 被引量：11

2

作者 娄少颖 刘毅 +3 位作者 陈伟华 应健 何燕铭 王文健 《中西医结合学报》 CAS 2008年第5期488-492,共5页

目的:观察蒲黄总黄酮(Pollen Typhae total flavones,PTF)对棕榈酸培养下C2C12骨骼肌细胞白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)表达的影响,探讨PTF改善骨骼肌胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的可能机制。方法:0.25mmol/L棕榈酸培养建立... 目的:观察蒲黄总黄酮(Pollen Typhae total flavones,PTF)对棕榈酸培养下C2C12骨骼肌细胞白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)表达的影响,探讨PTF改善骨骼肌胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的可能机制。方法:0.25mmol/L棕榈酸培养建立骨骼肌细胞IR模型。根据处理方法不同,设对照组、模型组、核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)抑制剂PDTC组、罗格列酮(rosiglitazone,ROS)组、ROS+PDTC组、PTF组和PTF+PDTC抑制剂组。处理16h后,3H-脱氧葡萄糖摄入法观察细胞对葡萄糖的转运率,实时定量多聚酶联反应检测IL-6mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清中IL-6蛋白水平。结果:0.25mmol/L棕榈酸培养16h,C2C12细胞葡萄糖摄取率下降30.43%,IR模型建立;PTF可使IR模型细胞葡萄糖转运率增加32.39%,IL-6mRNA表达及细胞培养上清液中IL-6蛋白水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);加入PDTC后,细胞IL-6mRNA表达及细胞培养上清液中IL-6蛋白水平上升(P<0.05)。结论:PTF通过抑制NF-κB通路而抑制C2C12骨骼肌细胞IL-6mRNA表达及蛋白分泌,可能是其减轻骨骼肌炎症状态和改善IR的机制之一。 展开更多

关键词 蒲黄总黄酮 棕榈酸 胰岛素抵抗 白细胞介素6 c2c12细胞株

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大鼠趋化素样因子对成肌细胞促增殖作用的研究 被引量：6

3

作者 夏东岚 娄雅欣 +4 位作者 韩文玲 李现亭 宋泉声 张颖妹 马大龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期313-315,共3页

目的　探讨大鼠趋化素样因子 1和 2 (rCKLF1、2 )对成肌细胞的增殖促进作用。方法　构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体 ,并瞬时转染 2 93T细胞 ,收获培养上清。分别以3 H -TdR掺入和MTT比色法 ,分析rCKLF1和rCKLF2对小... 目的　探讨大鼠趋化素样因子 1和 2 (rCKLF1、2 )对成肌细胞的增殖促进作用。方法　构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体 ,并瞬时转染 2 93T细胞 ,收获培养上清。分别以3 H -TdR掺入和MTT比色法 ,分析rCKLF1和rCKLF2对小鼠肌母细胞系C2C12和原代肌卫星细胞增殖的促进作用。结果　成功地构建了rCKLF1和rCKLF2的真核表达质粒 ,并在SV4 0转化的 2 93T细胞中瞬时表达rCKLF1和rCKLF2。瞬时转染上清能够使C2C12细胞的3 H -TdR的掺入值增加 2倍或 3倍。MTT比色法分析表明 ,rCKLF1和rCKLF2的转染上清 ,对Wistar大鼠乳鼠肌卫星细胞具有增殖促进作用。结论　rCKLF1和rCKLF2能够促进骨骼肌细胞的增殖 。 展开更多

关键词 rcKLF 细胞增殖 G2c12细胞 肌卫星细胞

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强骨抗萎方抑制模拟失重肌管细胞萎缩机制的研究

4

作者 武睿鹏 王佳平 +1 位作者 李勇枝 李玉娟 《航天医学与医学工程》 CAS 2024年第1期20-25,共6页

目的探讨中药复方强骨抗萎方(QG)对模拟失重效应诱导的小鼠肌管细胞萎缩的保护效果。方法将诱导分化成功的小鼠肌管细胞(C2C12细胞)分为六组。然后通过三维回转器建立48 h小鼠肌管细胞模拟微重力效应(simulated microgravity effect,SMG... 目的探讨中药复方强骨抗萎方(QG)对模拟失重效应诱导的小鼠肌管细胞萎缩的保护效果。方法将诱导分化成功的小鼠肌管细胞(C2C12细胞)分为六组。然后通过三维回转器建立48 h小鼠肌管细胞模拟微重力效应(simulated microgravity effect,SMG)模型(48h-SMG组),其中三组给予2.50、1.25、0.625 mg/mL的QG,一组给予2.70μg/mL阿仑膦酸钠作为阳性对照。通过H2O2、MDA检测试剂盒和TNF-αELISA试剂盒检测肌管细胞中氧化因子和炎性因子的水平。采用蛋白质印迹法(Western blotting法)检测肌管细胞中NF-κB/IκB蛋白质分解通路和IGF-1/PI3K/Akt蛋白质合成通路的相关蛋白质表达水平,并采用7μmol/L IGF-1抑制剂处理后对IGF1/PI3K/Akt通路进行验证。结果与对照组相比,48h-SMG组的肌管氧化水平和炎性水平显著上升(P<0.05),IKK、NF-κB和MURF-1蛋白的表达水平显著上升19.9%±6.1%、189.3%±15.9%、445.0%±46.1%,IκB表达水平显著降低26.5%±0.1%(P<0.05)。IGF-1/PI3K/Akt通路中IGF-1、PI3K、p-Akt/Akt和mTOR的水平降低23.6%±0.5%、30.7%±2.7%、13.3%±1.1%、21.0%±1.6%(P<0.05)。三个剂量的QG均能降低细胞氧化应激和炎性水平(P<0.05),并激活IGF-1/PI3K/Akt通路,抑制NF-κB/IκB通路蛋白的表达,其中高剂量QG(2.50 mg/mL)使IKK、NF-κB和MURF-1蛋白的表达水平显著降低39.9%±2.4%、48.6%±0.1%、70.0%±2.1%(P<0.05),IGF-1、PI3K和mTOR的表达水平和Akt磷酸化水平显著提高43.1%±1.1%、100.0%±7.7%、71.8%±2.5%、95.2%±12.8%(P<0.05)。结论QG能够通过调控蛋白质合成和分解通路显著抑制模拟微重力效应引起的肌管细胞萎缩。 展开更多

关键词 模拟失重效应 强骨抗萎方 c2c12细胞 肌管细胞萎缩

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保元解毒汤通过细胞因子-泛素-蛋白酶体途径干预癌因性肌管萎缩机制的研究 被引量：6

5

作者 章洪华 宗鑫 +2 位作者 邓甜甜 赵若含 季旭明 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期642-647,共6页

目的观察保元解毒汤对癌性环境下C2C12小鼠成肌细胞分化的影响,探讨其缓解肌肉萎缩的可能机制。方法先分别用1∶2、1∶4、1∶8的Lewis肺腺癌细胞上清液诱导C2C12细胞,确定癌因性肌管萎缩模型建立的最佳浓度和培养时间。造模成功后,将细... 目的观察保元解毒汤对癌性环境下C2C12小鼠成肌细胞分化的影响,探讨其缓解肌肉萎缩的可能机制。方法先分别用1∶2、1∶4、1∶8的Lewis肺腺癌细胞上清液诱导C2C12细胞,确定癌因性肌管萎缩模型建立的最佳浓度和培养时间。造模成功后,将细胞分为模型组,保元解毒汤高剂量组(125 g/L)、中剂量组(62.5 g/L)、低剂量组(31.25 g/L),光学显微镜下观察肌管形成情况;ELISA法检测C2C12细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)含量;Western blot、Real-Time PCR法检测肌肉萎缩盒F蛋白(Atrogen-1)和肌肉特异性环指蛋白1(MuRF-1)的表达。结果 1∶2的Lewis肺腺癌细胞上清液诱导C2C12细胞96 h,TNF-α和IL-6含量明显增多,为构建癌因性肌管萎缩模型的最佳条件。高、中、低剂量的保元解毒汤干预后,肌管横径增加(P<0.05);上清液中TNF-α和IL-6含量减少(P<0.05),Atrogin-1和MuRF-1蛋白及mRNA表达下调(P<0.05)。结论保元解毒汤可能通过降低细胞因子含量,抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP),减少肌蛋白分解而改善癌因性肌管萎缩。 展开更多

关键词 保元解毒汤 癌性恶病质 癌因性肌管萎缩 细胞因子 泛素-蛋白酶体途径 c2c12成肌细胞

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过表达Runx2促进C2C12细胞成骨分化 被引量：5

6

作者 李萍 余守和 +4 位作者 陈迪 高忠平 申健 时宿妹 孙奋勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期236-242,共7页

利用Tet-on(Tetracycline-on)基因表达系统,通过强力霉素(doxycycline,DOX)诱导Runx2基因在C2C12细胞中的表达,探究Runx2促成骨分化功能,为其分子机制的研究提供一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-Flag-Runx2转染... 利用Tet-on(Tetracycline-on)基因表达系统,通过强力霉素(doxycycline,DOX)诱导Runx2基因在C2C12细胞中的表达,探究Runx2促成骨分化功能,为其分子机制的研究提供一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-Flag-Runx2转染入C2C12细胞,并用G418和潮霉素分别进行2轮筛选,运用实时荧光定量PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度DOX诱导C2C12/Tet/pTRE-Flag-Runx2细胞,蛋白免疫印迹检测Runx2的表达,确定DOX的最佳诱导浓度与时间,并检测C2C12细胞的成骨分化能力.结果表明,诱导细胞最佳DOX浓度为10μg/ml;最佳诱导时间为12h;诱导后Runx2基因高表达,C2C12细胞向成骨方向分化(P<0.05).成功建立Tet调控Runx2基因表达C2C12细胞系,为进一步研究Runx2基因功能分子机制提供理想的细胞模型. 展开更多

关键词 RUNX2 c2c12细胞 Tet-on基因表达系统 成骨分化

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LncRNA AK051397在BMP-2诱导的C2C12成骨分化中的作用 被引量：4

7

作者 高艳 程晨 +2 位作者 李静 肖伟凡 潘秋辉 《同济大学学报（医学版）》 CAS 2014年第4期23-28,共6页

目的研究骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导后表达上调的LncRNA AK051397在C2C12成骨分化过程中的作用。方法 BMP-2诱导C2C12成骨分化过程,实时定量PCR技术与碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨相关指标。对C2C12细胞... 目的研究骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导后表达上调的LncRNA AK051397在C2C12成骨分化过程中的作用。方法 BMP-2诱导C2C12成骨分化过程,实时定量PCR技术与碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨相关指标。对C2C12细胞在BMP-2诱导下,成骨分化过程中的LncRNAs表达变化进行芯片分析(ArrayStar LncRNA Array),筛选出表达明显上调的LncRNAs,最后采用siRNA干扰的方法下调LncRNAs表达后分析其对成骨分化过程的影响。结果 BMP-2诱导C2C12成骨分化过程中,成骨指标ALP、SPT增高,成肌指标MYOG降低。芯片结果表明,LncRNA AK051397在BMP2诱导后表达明显上调,处理组与未处理组相比升高4.9倍(P<0.05)。干扰AK051397后成骨分化指标ALP、SP7表达下降,MYOG表达上升。结论 LncRNA AK051397在C2C12细胞中具有促进成骨分化的作用,同时也具有抑制细胞成肌分化的作用。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白2 成骨分化 c2c12细胞 AK051397

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C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织 被引量：4

8

作者 王齐 廖华 +4 位作者 秦建强 余磊 艾鹤英 汪海仪 邱小忠 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期606-610,共5页

目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀... 目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态,RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接。结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达。结论修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构。 展开更多

关键词 Sylgard 184 铸型 MATRIGEL 肌组织 反转录-聚合酶链式反应 免疫荧光 c2c12细胞

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PI3K/Akt在C2C12肌细胞生脂转分化中的作用 被引量：4

9

作者 齐仁立 黄晓凤 +4 位作者 吴泳江 王敬 刘虹 黄金秀 王琪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第3期224-231,共8页

本研究的主要目的在于探明PI3K/Akt通路在肌细胞生脂转分化中的调控作用.试验培养并诱导C2C12肌细胞生脂转分化,同时使用抑制剂Wortmannin处理细胞抑制PI3K的激活,或者使用特异性siR NA转染沉默细胞内源PI3K基因的表达,观察其对肌细胞... 本研究的主要目的在于探明PI3K/Akt通路在肌细胞生脂转分化中的调控作用.试验培养并诱导C2C12肌细胞生脂转分化,同时使用抑制剂Wortmannin处理细胞抑制PI3K的激活,或者使用特异性siR NA转染沉默细胞内源PI3K基因的表达,观察其对肌细胞生脂转分化的影响.结果表明,随着C2C12细胞的生脂转分化,PI3K蛋白(P55亚基和P85亚基)和其下游效应分子Akt的磷酸化水平,在转分化前期提高而在转分化后期明显降低.使用Wortmannin处理细胞能够有效抑制PI3K/Akt激活,这导致C2C12细胞的生脂转分化明显受到抑制,细胞内脂肪生成量显著降低,生脂基因PPARγ、C/EBPα、FABP4和FATP1的表达水平均显著下调.使用特异性siR NA转染细胞显著下调PI3K基因表达水平和蛋白质含量,同样明显抑制了C2C12细胞的生脂转分化.此外,在转分化过程中抑制PI3K/Akt的活性和表达还激活了Caspase-3并导致细胞凋亡.综合上述结果可以确认PI3K/Akt的正常表达和激活是肌细胞生脂转分化必不可少的. 展开更多

关键词 c2c12细胞 生脂 PI3K Akt 转分化

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siRNA沉默Myh3基因抑制C2C12细胞糖酵解 被引量：2

10

作者 温作晨 楚菡 +6 位作者 代宇星 罗云燕 张建斌 李淑英 洪亮 蒲蕾 张颖锋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1511-1519,共9页

肌球蛋白重链3(myosin heavy chain 3,Myh3)基因为肌肉细胞分化的标志基因,调节肌肉细胞能量的利用,但其是否会影响肌肉细胞不同状态下的糖酵解过程尚鲜有报道。本文以成肌和成脂分化不同阶段的小鼠C2C12细胞为模型,利用qRT-PCR方法研究... 肌球蛋白重链3(myosin heavy chain 3,Myh3)基因为肌肉细胞分化的标志基因,调节肌肉细胞能量的利用,但其是否会影响肌肉细胞不同状态下的糖酵解过程尚鲜有报道。本文以成肌和成脂分化不同阶段的小鼠C2C12细胞为模型,利用qRT-PCR方法研究Myh3与糖酵解相关基因Pkm(M-type pyruvate kinse)、Prkag3(protein kinase adenosine monophosphate-activatedγ3-subunit)和Gsk3β(glycogen synthase kinase-3β)的表达模式。发现在C2C12细胞成肌分化过程中,Myh3与糖酵解基因Prkag3和Pkm的相对表达趋势基本一致,都呈现相对表达水平先上升,分化第2 d达到峰值,之后下降的趋势;糖原合酶抑制基因Gsk3β的表达趋势相对平稳。而在C2C12细胞成脂分化过程中,Myh3依然与糖酵解基因Prkag3和Pkm的相对表达趋势基本一致,相对表达量逐渐上升,在分化第8 d达到最高值;糖原合酶抑制基因Gsk3β的表达保持稳定状态。在C2C12细胞成肌分化状态下,qRT-PCR和Western印迹检测干扰Myh3对细胞糖酵解相关基因Pkm、Prkag3和Gsk3βmRNA和蛋白质表达的影响。结果显示,干扰Myh3后,糖酵解基因Pkm和Prkag3的mRNA表达量极显著降低(P<0.01),糖原合酶抑制基因Gsk3β的mRNA表达无明显变化(P>0.05);Myh3干扰组中Myh3和Pkm的蛋白质水平显著低于空白组和NC组细胞。在C2C12细胞成脂分化状态下,干扰Myh3,糖原合酶抑制基因Gsk3β和糖酵解基因Prkag3的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),糖酵解基因Pkm的mRNA表达下降;Myh3干扰组中Myh3和Pkm的蛋白质水平也低于空白组和NC组细胞。综合以上研究,C2C12细胞成肌和成脂状态下糖酵解水平存在明显差异,Myh3与酵解基因的表达模式相似,进一步研究发现,干扰Myh3可以抑制C2C12细胞成肌状态下的糖酵解,不影响糖原合成。与成肌状态不同,在C2C12细胞成脂状态下干扰Myh3,抑制了糖原合成和糖酵解。 展开更多

关键词 肌球蛋白重链3 SIRNA干扰 c2c12细胞 酵解基因

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不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性 被引量：3

11

作者 王齐 廖华 +4 位作者 秦建强 余磊 邱小忠 于巧莲 艾鹤英 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期235-239,共5页

目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处... 目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理：I型胶原包被（B组）、层黏连蛋白包被（C组）、多聚赖氨酸包被（D组）;未经包被（E组）,每组共6个样本。在不同基质材料修饰的Sylgard184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术（FCM）检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达。结果Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Sylagard184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组（P〈0.05）。结论经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达。 展开更多

关键词 细胞基质 Sylgard184 相容性 流术细胞术 c2c12细胞

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稳定表达人ASB12的C2C12细胞系的建立及鉴定 被引量：3

12

作者 文斗斗 周军媚 +3 位作者 赵明一 胡维新 吴秀山 王跃群 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期283-286,共4页

ASB12(homo sapiens ankyrin repeat and SOCS box containing 12)蛋白含有5个ANK(ankyrin repeat sequence)序列和一个保守的SOCS(suppressor of cytokine signaling)盒结构域,是ASBs(human ankyrin repeat andSOCS box containing pro... ASB12(homo sapiens ankyrin repeat and SOCS box containing 12)蛋白含有5个ANK(ankyrin repeat sequence)序列和一个保守的SOCS(suppressor of cytokine signaling)盒结构域,是ASBs(human ankyrin repeat andSOCS box containing protein family,ASB family)家族的成员.人类ASB12基因在成体心肌和骨骼肌组织中特异表达,是成肌分化的候选基因.利用阳离子聚合物转染技术将重组表达质粒pCMV-tag2B-ASB12转染小鼠骨骼肌细胞系C2C12细胞,通过G418筛选、免疫荧光检测、RT-PCR分析、Western blotting检测建立了稳定表达ASB12的细胞系C2C12-ASB12,为研究ASB12在骨骼肌发育及其相关功能提供有用的细胞研究模型. 展开更多

关键词 ASB12 ANK结构域 SOcS box结构域 c2c12稳定细胞系

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旋毛虫肌幼虫排泄分泌物激活的巨噬细胞和成肌细胞共培养对成肌细胞分化的影响 被引量：4

13

作者 王艳凤 王楠 +5 位作者 丁静 孙尧 刘晓雷 王学林 刘明远 白雪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期893-897,共5页

目的体外研究与旋毛虫肌幼虫排泄分泌物(ML ES)作用后的巨噬细胞共培养对成肌细胞分化的影响,为深入了解旋毛虫包囊形成机理提供新的思路。方法通过共培养技术对旋毛虫ML ES激活的巨噬细胞与成肌细胞进行共培养,建立J774A.1-C2C12细胞... 目的体外研究与旋毛虫肌幼虫排泄分泌物(ML ES)作用后的巨噬细胞共培养对成肌细胞分化的影响,为深入了解旋毛虫包囊形成机理提供新的思路。方法通过共培养技术对旋毛虫ML ES激活的巨噬细胞与成肌细胞进行共培养,建立J774A.1-C2C12细胞共培养模型。细胞免疫荧光法以及Western blot分析与旋毛虫ML ES处理的巨噬细胞共培养对成肌细胞分化以及成肌调节因子表达的影响。结果细胞免疫荧光以及Western blot表明,与对照组比较,成肌细胞与ML ES作用后的巨噬细胞共培养明显降低成肌细胞分化调节因子(MyoD、Myogenin)阳性细胞的数量及终末分化标记物MHC的表达。结论旋毛虫ML ES可以直接通过调节巨噬细胞活性来影响成肌细胞的分化,为研究旋毛虫与宿主细胞及旋毛虫感染后,宿主细胞间相互作用复杂机制提供了新的思路。 展开更多

关键词 旋毛虫 排泄分泌物 巨噬细胞 成肌细胞 共培养

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电刺激对C2C12骨骼肌细胞糖代谢及其机制研究 被引量：2

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作者 潘红英 徐晓阳 +1 位作者 郝选明 闫旭杰 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2012年第8期34-39,共6页

目的:利用培养的骨骼肌细胞作为模型,研究收缩运动对肌糖原、AMPK-α2及GLUT4表达的影响。方法:分化5天的C2C12骨骼肌肌管,电刺激(15V,3Hz)60min,120min后随即收样检测,酶联免疫法测肌管中GLUT4蛋白含量,Western blot检测肌管中AMPK-α... 目的:利用培养的骨骼肌细胞作为模型,研究收缩运动对肌糖原、AMPK-α2及GLUT4表达的影响。方法:分化5天的C2C12骨骼肌肌管,电刺激(15V,3Hz)60min,120min后随即收样检测,酶联免疫法测肌管中GLUT4蛋白含量,Western blot检测肌管中AMPK-α2蛋白表达,实时荧光定量PCR测定肌管中GLUT4mRNA及AMPK-α2mRNA的表达。结果:1)糖原含量在刺激120min时与对照组相比显著降低(P<0.05),LDH活性与对照组相比无显著性差异(P>0.05);2)电刺激60min时,GLUT4基因表达和蛋白含量增加(P<0.05),刺激120 min时,GLUT4蛋白含量增加显著(P<0.01);3)电刺激引起AMPK-α2mRNA表达增加(P<0.05),AMPK-α2蛋白表达虽有所增加,却无统计意义(P>0.05)。结论:1)15V,3Hz的电刺激强度,可引起培养的C2C12骨骼肌细胞产生收缩运动,建立研究骨骼肌收缩功能变化的细胞模型;2)长时间电刺激可降低C2C12骨骼肌细胞的肌糖原含量,激活AMPK-α2mRNA和GLUT4的表达。 展开更多

关键词 运动应激 GLUT4 AMPK-α2 电刺激 c2c12细胞

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hhlim基因转录调控区域鉴定及表达调控的初步研究 被引量：3

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作者 郑斌 温进坤 +1 位作者 韩梅 周爱儒 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期910-914,共5页

为了研究hhlim基因表达调控机制 ,对该基因 5′上游 - 2 5 37bp序列从 5′端依次进行缺失后 ,利用荧光素酶报告基因检测各种不同长度片段在C2C12细胞中驱动荧光素酶表达的活性 .结果表明 ,在hhlim基因 5′上游- 2 5 37～ - 15 37bp之间... 为了研究hhlim基因表达调控机制 ,对该基因 5′上游 - 2 5 37bp序列从 5′端依次进行缺失后 ,利用荧光素酶报告基因检测各种不同长度片段在C2C12细胞中驱动荧光素酶表达的活性 .结果表明 ,在hhlim基因 5′上游- 2 5 37～ - 15 37bp之间存在负调控元件 ,在 - 2 5 3～ - 15 7bp之间含有增强子样序列 .用含有增强子样序列的DNA片段做探针 ,对未分化型和分化型C2C12细胞的核蛋白进行电泳迁移率改变分析 (electrophoreticmopilityshiftassay ,EMSA) .分析的结果显示 ,两种表型细胞中的核蛋白与探针结合所形成滞后带的谱型明显不同 .结果还发现内皮素 1(ET 1)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)既能显著诱导C2C12细胞对hhlim的表达 ,也能刺激含增强子样序列的调控区域所驱动的报告基因表达 .提示hhlim基因转录起始点至 - 2 5 37bp的区域内含有负调控元件及增强子样序列 ,该基因的表达受ET 展开更多

关键词 hhlim基因转录 调控区域 鉴定 表达调控 调控序列 成肌细胞

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地拉罗司对小鼠成肌细胞C2C12生物活性的影响 被引量：2

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作者 王波 赵国阳 狄东华 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期158-164,共7页

目的模拟体内肌少症病理环境,观察铁螯合剂地拉罗司(deferasirox,DFS)对小鼠成肌细胞C2C12生物学活性的影响。方法构建模拟体内骨骼肌营养缺乏的细胞培养模型:体外培养小鼠成肌细胞C2C12,细胞分为3组:对照组、无血清培养基组和无血清培... 目的模拟体内肌少症病理环境,观察铁螯合剂地拉罗司(deferasirox,DFS)对小鼠成肌细胞C2C12生物学活性的影响。方法构建模拟体内骨骼肌营养缺乏的细胞培养模型:体外培养小鼠成肌细胞C2C12,细胞分为3组:对照组、无血清培养基组和无血清培养基加DFS (10μmol/L)共孵育组,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡; C2C12细胞在马血清作用下诱导分化,镜下观察细胞形态并计数骨骼肌肌管数目;构建模拟体内骨骼肌炎性损伤的细胞培养模型:C2C12细胞在马血清诱导下分化后分为3组:对照组、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor,TNF-α,10 ng/m L)干预组和TNF-α(10 ng/m L)加DFS (10μmol/L)共孵育组,丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒分别检测细胞MDA和GSH-Px水平,实时定量PCR法检测细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC) mRNA和肌细胞生成素(myogenin,MyOG) mRNA的表达水平,镜下观察细胞形态并计数骨骼肌肌管数目。结果对照组、无血清培养基组和无血清培养基加DFS共孵育组细胞增殖最终OD值分比为2. 74±0. 01、0. 43±0. 01和0. 83±0. 01,细胞凋亡率分别为(7. 45±1. 73)%、(37. 82±2. 30)%和(25. 73±1. 42)%,肌管计数分别为9. 10±1. 45、1. 00±0. 33和3. 80±1. 14。C2C12细胞在无血清培养条件下增殖下降、凋亡率增加、细胞肌管形成减少,DFS干预后细胞增殖升高、凋亡率下降、肌管形成增加,均P<0. 05。对照组、TNF-α干预组和TNF-α加DFS共孵育组细胞内MDA含量分别为(1. 57±0. 01)、(3. 33±0. 14)和(2. 01±0. 19) nmol/L,GSH-Px含量分别为85. 44±7. 92、36. 26±7. 48和118. 50±17. 89,MyHC mRNA的表达量分别为1、0. 60±0. 14和1. 36±0. 13,MyOG mRNA的表达量分别为1、0. 88±0. 06和1. 57±0. 16,肌管计数分别为4. 30±1. 50、3. 30±0. 67和5. 30±2. 26。C2C12细胞诱导分化后,在TNF-α干预下,细胞MDA含量增加(P<0. 05)� 展开更多

关键词 地拉罗司 c2c12细胞 铁蓄积 肌少症

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关岭牛MyoD I基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠C2C12细胞中的表达 被引量：2

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作者 桓聪聪 许厚强 +5 位作者 陈伟 陈祥 赵佳福 张雯 周迪 夏丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期719-727,共9页

本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性,初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD I基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液DNA为模板,设计5'端加磷的引物,PCR扩增获得4... 本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性,初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD I基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液DNA为模板,设计5'端加磷的引物,PCR扩增获得4个不同长度的关岭牛MyoD I启动子,定向精确替换pEGFP-N3载体的CMV启动子区,构建重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I。利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠C2C12细胞,依据小鼠C2C12细胞发光的强弱判断MyoD I启动子的启动活性。结果显示,MyoD I基因在关岭牛肌肉组织中表达量较高;目的片段成功替换pEGFP-N3载体的CMV区;重组质粒能在小鼠C2C12细胞中成功表达,细胞在激发光下发绿色荧光。本研究成功构建了重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I,4个启动子均具有启动活性,其中P3启动子在小鼠C2C12细胞中表达量最高,初步推断P3启动子为该基因的核心启动子。 展开更多

关键词 MYOD I 真核表达载体 c2c12细胞 启动子 基因表达量

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乳源β-酪啡肽-5对C2C12细胞的抗氧化损伤作用 被引量：2

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作者 范英兰 任欢欢 +1 位作者 韩东宁 张源淑 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第9期257-260,共4页

通过建立过氧化氢(H2O2)对C2C12细胞的氧化损伤模型,从细胞水平探讨β-酪啡肽-5(β-casomorphin5,β-CM5)对H2O2致氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法:1)MTT法测定72h内β-CM5对C2C12细胞活力的影响,筛选安全剂量;2)测定不同浓度... 通过建立过氧化氢(H2O2)对C2C12细胞的氧化损伤模型,从细胞水平探讨β-酪啡肽-5(β-casomorphin5,β-CM5)对H2O2致氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法:1)MTT法测定72h内β-CM5对C2C12细胞活力的影响,筛选安全剂量;2)测定不同浓度H2O2对C2C12细胞活力的影响,筛选H2O2的最佳剂量和作用时间;3)测定β-CM5对H2O2损伤后细胞活力的影响;4)检测培养液中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性。结果:1)β-CM5各浓度组MTT值与对照组无差异;2)0.25mmol/L的H2O2作用于C2C12细胞1h,MTT值显著低于对照组(P<0.01);3)与损伤组相比,β-CM5预保护组的MTT值显著升高(P<0.05),治疗组MTT值无明显变化;4)与损伤组相比,β-CM5预保护组的SOD活性显著提高(P<0.05),LDH活性显著下降(P<0.05)。结论:β-CM5具有较强的抗氧化作用,对H2O2损伤的C2C12细胞有明显的保护作用,其机制可能与增强抗氧化酶活力和维持细胞完整性有关。 展开更多

关键词 β-酪啡肽-5 c2c12 过氧化氢 超氧化物歧化酶(SOD) 乳酸脱氢酶(LDH)

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miRNA簇基因在山羊组织和不同时期的C2C12细胞的表达分析 被引量：2

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作者 李杰 任航行 +3 位作者 王高富 蒋婧 孙晓燕 周鹏 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期175-179,共5页

【目的】为阐明同一个miRNA簇基因(miR-665,miR-127-5p,miR-136-3p,miR-136-5p,miR432-5p,miR432-3p和miR433)在不同组织山羊表达特征和成肌细胞中表达水平。【方法】本研究采用qRT-PCR方法检测miRNA簇基因在山羊组织以及C2C12细胞不同... 【目的】为阐明同一个miRNA簇基因(miR-665,miR-127-5p,miR-136-3p,miR-136-5p,miR432-5p,miR432-3p和miR433)在不同组织山羊表达特征和成肌细胞中表达水平。【方法】本研究采用qRT-PCR方法检测miRNA簇基因在山羊组织以及C2C12细胞不同生肌时间点的动态表达模式。【结果】miRNA簇基因(miR-665,miR-127-5p,miR-136-3p,miR-136-5p,miR432-5p,miR-432-3p和miR433)在不同波尔山羊组织中均广泛表达。miR-127-5p,miR-136-3p,miR432-5p,miR432-3p和miR433在山羊肌肉中高表达,miR-136-5p和miR«65在肌肉表达量低。miR-136-3p表达量随肌细胞增殖和分化逐浙升高;miR-127-5p,miR432-3p,miR432-5p,miR433和miR-136-5p表达量呈现先升高后降低的趋势;miR-665在随C2C12细胞增殖和分化表达逐浙降低。【结论】本研究结果为进一步阐明miRNA簇基因调控骨骼肌的生长发育的调控功能奠定了理论基础。 展开更多

关键词 miRNA簇 体组织 c2c12细胞 表达分析

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KLHL31促进C2C12细胞的肌原分化 被引量：2

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作者 梁洁 刘仕杰 +8 位作者 宋怀婷 邓云 莫小阳 万永奇 李永青 袁婺州 江志钢 吴秀山 王跃群 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第4期466-468,442,共4页

人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因,其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域,已有报道表明其在人类成体骨骼肌和心肌组织中特异表达。RT-PCR分析表明在C2C12细胞肌原分化过程中过表达KLHL31能够提高肌原分化标志基因MyoD与My... 人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因,其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域,已有报道表明其在人类成体骨骼肌和心肌组织中特异表达。RT-PCR分析表明在C2C12细胞肌原分化过程中过表达KLHL31能够提高肌原分化标志基因MyoD与Myogenin的转录水平;荧光报告系统分析发现过表达KLHL31能够增强肌原分化相关基因MCK启动子的活性,表明KLHL31能够促进C2C12细胞的肌原分化。 展开更多

关键词 KLHL31 c2c12细胞 MYOD MYOGENIN 肌原分化

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