目的:研究趋化性细胞因子受体CXCR4短干扰RNA(siRNA)对大肠癌细胞系体外侵袭及增殖能力的影响.方法:利用T7 RNA聚合酶体外合成以CXCR4为靶基因的siRNA,用脂质体转染大肠癌SW480细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.于转染后48h采用RT-...目的:研究趋化性细胞因子受体CXCR4短干扰RNA(siRNA)对大肠癌细胞系体外侵袭及增殖能力的影响.方法:利用T7 RNA聚合酶体外合成以CXCR4为靶基因的siRNA,用脂质体转染大肠癌SW480细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.于转染后48h采用RT-PCR方法检测CXCR4 mRNA水平,免疫印迹方法检测CXCR4和MT1-MMP的蛋白质水平,Boyden小室模型检测体外侵袭能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的分布情况,MTT法测定细胞增殖状况.结果:SW480细胞转染CXCR4 siRNA 48h后,与空白对照和无关对照相比,CXCR4 mRNA水平明显下调(51.53%±6.1% vs 78.4%±3.3%.P<0.01:51.53%±6.1% vs 87.4%±5.3%,P<0.01),CXCR4的蛋白质水平明显降低(47.3%±3.7% vs 107.2%±3.6%,P<0.01;47.3%±3.7% vs 114.7%±4.8%,P<0.01),MT1-MMP蛋白表达水平也明显下降(43.8%±2.5% vs 64.4%±4.4%,P<0.01;43.8%±2.5% vs 67.0%±2.9%,P<0.01),细胞的体外侵袭能力减弱(26.5%±6.1% vs 73.7%±3.4%,P<0.01;26.5%±6.1% vs 64.5%±5.7%,P<0.01),细胞周期的分布无明显差异.在无SDF-1存在的情况下,各组细胞的增殖无明显改变;经SDF-1刺激后,各组细胞增殖增加,但CXCR4 siRNA转染组细胞的增殖显著低于空白对照组和无关对照组(24h:0.55±0.03 vs 0.68±0.06,0.71±0.04,P<0.05;48h:0.67±0.04 vs 0.89±0.03,0.94±0.07,P<0.05;72 h:0.72±0.06 vs 1.36±0.08,1.53±0.07,P<0.01).以上各指标在空白对照和无关对照之间无显著性差异(P>0.05).结论:以CXCR4为靶向的siRNA能够有效下调CXCR4基因,降低SDF-1诱导的大肠癌细胞系体外侵袭能力及增殖海性.展开更多
本文研究探讨下调CXCR4的表达对人T-ALL Jurkat细胞周期和凋亡的影响。设计合成CXCR4的特异性siRNA,采用脂质体转染Jurkat细胞株。用RT-PCR检测siRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响,用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡情况。结果表...本文研究探讨下调CXCR4的表达对人T-ALL Jurkat细胞周期和凋亡的影响。设计合成CXCR4的特异性siRNA,采用脂质体转染Jurkat细胞株。用RT-PCR检测siRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响,用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡情况。结果表明:成功构建了CXCR4的特异性siRNA;与空白对照组相比,转染CXCR4 siRNA的Jurkat细胞的CXCR4 mRNA表达水平明显下降(56.9%±1.4% vs 68.3%±2.4%),G0/G1期细胞比例增加(35.8%±1.9% vs 18.1%±1.2%),G2/M期和S期细胞比例相应下降(19.8%±1.7% vs 27.2%±1.5%;44.4%±2.1% vs 54.7%±2.8%),凋亡细胞率明显增高(20.9%±2.0% vs 3.13%±0.9%)。结论:CXCR4的特异性siRNA能够有效下调CXCR4基因表达,诱导Jurkat细胞凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖。展开更多
目的探讨下调CXCR4的表达对U87胶质瘤细胞周期和凋亡的影响,为CXCR4 sh RNA治疗胶质瘤提供实验依据。方法设计合成CXCR4的特异性sh RNA,采用脂质体转染U87细胞株。实验将细胞分为空白对照组(A组),阴性对照组(转染非特异载体p GPU6/GFP/N...目的探讨下调CXCR4的表达对U87胶质瘤细胞周期和凋亡的影响,为CXCR4 sh RNA治疗胶质瘤提供实验依据。方法设计合成CXCR4的特异性sh RNA,采用脂质体转染U87细胞株。实验将细胞分为空白对照组(A组),阴性对照组(转染非特异载体p GPU6/GFP/NC组)(B组),实验组(转染CXCR4-sh RNA组)(C组)共三组,用RT-PCR检测各组细胞CXCR4基因表达情况,用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡情况。结果成功构建了CXCR4的特异性sh RNA。C组的U87细胞CXCR4 m RNA为(42.5±4.6)%,显著低于B组的(65.4±5.9)%和A组的(69.6±7.4)%(P<0.05),G0/G1期细胞比例增加(39.4±1.7)%与(25.8±1.3)%和(20.3±1.2)%,G2/M期细胞比例相应下降(20.2±1.6)%与(30.1±1.2)%和(26.4±1.3)%;S期细胞比例相应下降(46.5±2.7)%与(55.7±2.8)%和(54.9±2.6)%,凋亡细胞率为(18.68±0.44)%明显高于A组(5.14±0.23)%和B组(4.87±0.16)%(P<0.05)。结论 CXCR4 sh RNA能够有效下调U87细胞CXCR4基因表达,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖,提示CXCR4在胶质瘤发展过程中具有重要作用。展开更多
文摘目的:研究趋化性细胞因子受体CXCR4短干扰RNA(siRNA)对大肠癌细胞系体外侵袭及增殖能力的影响.方法:利用T7 RNA聚合酶体外合成以CXCR4为靶基因的siRNA,用脂质体转染大肠癌SW480细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.于转染后48h采用RT-PCR方法检测CXCR4 mRNA水平,免疫印迹方法检测CXCR4和MT1-MMP的蛋白质水平,Boyden小室模型检测体外侵袭能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的分布情况,MTT法测定细胞增殖状况.结果:SW480细胞转染CXCR4 siRNA 48h后,与空白对照和无关对照相比,CXCR4 mRNA水平明显下调(51.53%±6.1% vs 78.4%±3.3%.P<0.01:51.53%±6.1% vs 87.4%±5.3%,P<0.01),CXCR4的蛋白质水平明显降低(47.3%±3.7% vs 107.2%±3.6%,P<0.01;47.3%±3.7% vs 114.7%±4.8%,P<0.01),MT1-MMP蛋白表达水平也明显下降(43.8%±2.5% vs 64.4%±4.4%,P<0.01;43.8%±2.5% vs 67.0%±2.9%,P<0.01),细胞的体外侵袭能力减弱(26.5%±6.1% vs 73.7%±3.4%,P<0.01;26.5%±6.1% vs 64.5%±5.7%,P<0.01),细胞周期的分布无明显差异.在无SDF-1存在的情况下,各组细胞的增殖无明显改变;经SDF-1刺激后,各组细胞增殖增加,但CXCR4 siRNA转染组细胞的增殖显著低于空白对照组和无关对照组(24h:0.55±0.03 vs 0.68±0.06,0.71±0.04,P<0.05;48h:0.67±0.04 vs 0.89±0.03,0.94±0.07,P<0.05;72 h:0.72±0.06 vs 1.36±0.08,1.53±0.07,P<0.01).以上各指标在空白对照和无关对照之间无显著性差异(P>0.05).结论:以CXCR4为靶向的siRNA能够有效下调CXCR4基因,降低SDF-1诱导的大肠癌细胞系体外侵袭能力及增殖海性.
文摘本文研究探讨下调CXCR4的表达对人T-ALL Jurkat细胞周期和凋亡的影响。设计合成CXCR4的特异性siRNA,采用脂质体转染Jurkat细胞株。用RT-PCR检测siRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响,用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡情况。结果表明:成功构建了CXCR4的特异性siRNA;与空白对照组相比,转染CXCR4 siRNA的Jurkat细胞的CXCR4 mRNA表达水平明显下降(56.9%±1.4% vs 68.3%±2.4%),G0/G1期细胞比例增加(35.8%±1.9% vs 18.1%±1.2%),G2/M期和S期细胞比例相应下降(19.8%±1.7% vs 27.2%±1.5%;44.4%±2.1% vs 54.7%±2.8%),凋亡细胞率明显增高(20.9%±2.0% vs 3.13%±0.9%)。结论:CXCR4的特异性siRNA能够有效下调CXCR4基因表达,诱导Jurkat细胞凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖。
文摘目的探讨下调CXCR4的表达对U87胶质瘤细胞周期和凋亡的影响,为CXCR4 sh RNA治疗胶质瘤提供实验依据。方法设计合成CXCR4的特异性sh RNA,采用脂质体转染U87细胞株。实验将细胞分为空白对照组(A组),阴性对照组(转染非特异载体p GPU6/GFP/NC组)(B组),实验组(转染CXCR4-sh RNA组)(C组)共三组,用RT-PCR检测各组细胞CXCR4基因表达情况,用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡情况。结果成功构建了CXCR4的特异性sh RNA。C组的U87细胞CXCR4 m RNA为(42.5±4.6)%,显著低于B组的(65.4±5.9)%和A组的(69.6±7.4)%(P<0.05),G0/G1期细胞比例增加(39.4±1.7)%与(25.8±1.3)%和(20.3±1.2)%,G2/M期细胞比例相应下降(20.2±1.6)%与(30.1±1.2)%和(26.4±1.3)%;S期细胞比例相应下降(46.5±2.7)%与(55.7±2.8)%和(54.9±2.6)%,凋亡细胞率为(18.68±0.44)%明显高于A组(5.14±0.23)%和B组(4.87±0.16)%(P<0.05)。结论 CXCR4 sh RNA能够有效下调U87细胞CXCR4基因表达,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖,提示CXCR4在胶质瘤发展过程中具有重要作用。
