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苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质JAK/STAT信号蛋白磷酸化的影响 被引量：5
1
作者 史永红 段惠军 +3 位作者 王丽晖 任韫卓 刘青娟 李英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1230-1232,共3页
目的:探讨血管紧张素Ⅱ转换酶抑制剂苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3信号蛋白表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和苯那普利治疗组。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型,治疗组每日灌胃给予苯那... 目的:探讨血管紧张素Ⅱ转换酶抑制剂苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3信号蛋白表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和苯那普利治疗组。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型,治疗组每日灌胃给予苯那普利10mg/kg,共2周。采用免疫沉淀和Western blotting检测JAK2磷酸化,Western blotting检测肾皮质p-STAT1、p-STAT3和TGF-β1蛋白的表达,半定量RT-PCR检测肾皮质细胞TGF-β1 mRNA的表达。结果:糖尿病组肾皮质p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3及其TGF-β1表达明显高于对照组,同时TGF-β1 mRNA表达亦明显强于对照组;苯那普利治疗组p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达低于糖尿病组,同时TGF-β1蛋白及其mRNA表达亦低于糖尿病组。结论:JAK/STAT信号途径可能参与糖尿病早期肾脏变化的过程,苯那普利的肾脏保护作用可能部分是通过影响JAK/STAT信号途径的激活而实现。 展开更多
关键词 糖尿病大鼠 肾皮质细胞 蛋白磷酸化 苯那普利 信号途径 JAK/STAT TGF-Β1表达 blotting检测
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甘蔗宿根矮化病病原菌一推测膜蛋白基因(Lxx18460)单克隆抗体的制备和检测
2
作者 邵敏 张小秋 +2 位作者 张琨琨 杨丽涛 李杨瑞 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期382-388,共7页
【目的】对甘蔗宿根矮化病病原菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)一推测为抗K因子的膜蛋白基因(Lxx18460)进行研究,为今后研究该基因在感病甘蔗体内表达打下基础。【方法】诱导表达并纯化含有推测为抗K因子的膜蛋白Lxx18460基因的p ET-... 【目的】对甘蔗宿根矮化病病原菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)一推测为抗K因子的膜蛋白基因(Lxx18460)进行研究,为今后研究该基因在感病甘蔗体内表达打下基础。【方法】诱导表达并纯化含有推测为抗K因子的膜蛋白Lxx18460基因的p ET-30a质粒菌液,委托南京金斯瑞生物科技有限公司制备单克隆抗体;用Western blotting对细菌及感病和健康甘蔗样品总蛋白进行检测。【结果】Lxx18460基因具有特异性,只存在于甘蔗Lxx中。ELISA单克隆抗体效价大于1∶512000,能够灵敏地检测细菌总蛋白和甘蔗样品蛋白。Western blotting检测结果表明,Lxx18460基因在细菌中和感病甘蔗样品中表达,在健康甘蔗样品中几乎不表达。【结论】Lxx18460基因具有特异性,是Lxx中的抗K因子的膜蛋白基因,能够在细菌和感病甘蔗样品体外进行表达。 展开更多
关键词 甘蔗宿根矮化病 Lxx18460基因 单克隆抗体 ELISA检测 WESTERN blotting检测
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桦褐孔菌酸性蛋白酶的基因克隆及其在菌核中的表达 被引量：1
3
作者 李健 王鑫 +4 位作者 胡志强 亢学平 杜忠伟 王旭 陈艳秋 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期42-48,共7页
根据桦褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密码子的偏好性优化选择酶切位点和载体,成功构建pGEX-4T1-IO-AP原核表达载体;用热激法将该载体转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,构建桦褐孔... 根据桦褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密码子的偏好性优化选择酶切位点和载体,成功构建pGEX-4T1-IO-AP原核表达载体;用热激法将该载体转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,构建桦褐孔菌酸性蛋白酶(IO-AP)重组菌。以此重组菌表达的IO-AP以包涵体形式存在,重组蛋白分子质量约为60kDa。以获得的较高纯度的重组IO-AP作为免疫原,采用传统3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb/c小鼠,通过间接ELISA法测定抗血清效价,4免之后,4只小鼠抗血清效价均大于121500,成功制备了IO-AP多克隆抗体。Western Blotting检测表明,IO-AP在桦褐孔菌菌核形成过程中的表达呈现先上升后下降的趋势,以第二个时期(栽培130d,菌核长至1.33g时)AP蛋白表达量最高。 展开更多
关键词 大肠杆菌重组蛋白 桦褐孔菌 ELISA法 WESTERN blotting检测
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Gankyrin在肝癌细胞系中的表达
4
作者 杨诏旭 窦科峰 +1 位作者 路凡 赵忠良 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期3580-3582,共3页
目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Westernblotting检测。结果Gankyrin基因在... 目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Westernblotting检测。结果Gankyrin基因在3种肝癌细胞系中均有表达。结论多种肝癌细胞系中均有Gankyrin基因的表达,HepG2、SMMC-7721、HHCC均可作为阳性靶细胞,进行Gankyrin基因的RNA干涉研究。 展开更多
关键词 肝癌细胞系 Gankyrin 逆转录聚合酶链反应 WESTERN blotting检测
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金属硫蛋白2基因在红花中表达的初步研究
5
作者 官丽莉 陈昱 +7 位作者 武云云 滕孝花 杨晶 郭咏昕 胡人阁 李海燕 李校堃 姜潮 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2152-2156,共5页
目的获得转金属硫蛋白2(metallothionein 2,MT2)红花植株,为MT药用蛋白的生产奠定基础。方法采用Nco I/HindⅢ酶切pEASY-oleosin-MT获得oleosin-MT融合基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT,进行PCR和... 目的获得转金属硫蛋白2(metallothionein 2,MT2)红花植株,为MT药用蛋白的生产奠定基础。方法采用Nco I/HindⅢ酶切pEASY-oleosin-MT获得oleosin-MT融合基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT,进行PCR和双酶切鉴定。采用冻融法将重组质粒pOP-oleosin-MT转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,对转MT基因红花植株进行PCR检测及Southern blotting检测。结果成功构建了MT基因的植物油体表达载体pOP-oleosin-MT,获得了3株PCR检测呈阳性的转MT基因红花植株。结论建立了完善的红花再生体系,获得了转MT基因的红花植株。 展开更多
关键词 红花 金属硫蛋白 油体 SOUTHERN blotting检测 根瘤农杆菌 重组质粒
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南丰蜜橘胚性愈伤组织诱导及其转化研究
6
作者 段艳欣 范净 郭文武 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第8期42-45,共4页
南丰蜜橘是原产于中国的古老柑橘品种,其果实皮薄而肉甜,深受消费者喜爱,当前南丰蜜橘的品质发生劣变,影响了其商品价值。为采用基因工程育种以改善南丰蜜橘品质,通过诱导其愈伤组织并以其为试材进行了转基因研究。南丰蜜橘自种子实生... 南丰蜜橘是原产于中国的古老柑橘品种,其果实皮薄而肉甜,深受消费者喜爱,当前南丰蜜橘的品质发生劣变,影响了其商品价值。为采用基因工程育种以改善南丰蜜橘品质,通过诱导其愈伤组织并以其为试材进行了转基因研究。南丰蜜橘自种子实生苗下胚轴处长产生出愈伤组织,挑选胚性愈伤组织进行增殖后,采用根癌农杆菌介导法进行开花相关基因AP1的转化。结果获得22团抗性愈伤组织,平均产出率为7.3团/皿,表明该品种有较高的转化率。抗性愈伤组织经PCR分析、Southern blot检测证实为转化子。研究结果表明南丰蜜橘胚性愈伤组织是基因工程改良的良好受体,可用于其他基因的转化研究。 展开更多
关键词 根癌农杆菌介导转化 胚性愈伤组织 南丰蜜橘 PCR分析 SOUTHERN blotting检测
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灵芝孢子粉对帕金森病模型鼠黑质酪氨酸羟化酶的影响 被引量：15
7
作者 谢安木 刘焯霖 +2 位作者 朱蔚文 叶钦勇 徐浩文 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期355-358,共4页
目的研究灵芝孢子对帕金森病(PD)模型鼠脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)的影响,以探讨灵芝孢子对PD的脑保护作用。方法120只SD大鼠随机分为三组,PD组:立体定向注入6-羟多巴(6-OHDA),术后1周腹腔注入阿朴吗啡观察30min大鼠旋转的次数,连续至第四... 目的研究灵芝孢子对帕金森病(PD)模型鼠脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)的影响,以探讨灵芝孢子对PD的脑保护作用。方法120只SD大鼠随机分为三组,PD组:立体定向注入6-羟多巴(6-OHDA),术后1周腹腔注入阿朴吗啡观察30min大鼠旋转的次数,连续至第四周每分钟大于6次者为成功的PD模型;灵芝孢子组:先用灵芝孢子粉灌胃3d,立体定向注入6-OHDA,继续灌胃4周,直至处死;正常对照组:立体定向注入脑黑质抗坏血酸生理盐水。处死后制作快速冰冻切片用免疫组化检测TH阳性细胞数,用原位杂交法检测THmRNA的阳性细胞数,用Westernblot检测TH的半定量变化,用高效液相色谱检测多巴胺水平的变化。结果免疫组化显示灵芝孢子组术侧鼠脑黑质TH阳性神经元数量为99·7±13·6,PD组为51·0±13·5,灵芝孢子组较PD组显著升高(P<0·05);原位杂交显示灵芝孢子组术侧鼠脑黑质THmRNA阳性神经元数量为180·3±24·3,PD组为72·7±15·0,灵芝孢子组较PD组显著升高(P<0·01);Westernblot检测显示TH蛋白灵芝孢子组较PD组显著增加;高效液相色谱检测术侧鼠脑黑质多巴胺(DA)水平灵芝孢子组为(0·7±0·3)ng/mg蛋白,PD组为(0·4±0·1)ng/mg蛋白,灵芝孢子组较PD组显著升高(P<0·05)。结论灵芝孢子能够提高TH的表达,并提高鼠脑黑质DA的水平,推测对6-OHDA诱导的PD可能有脑保护作用。 展开更多
关键词 酪氨酸羟化酶 灵芝孢子粉 帕金森病 模型鼠 Western 6-OHDA blot检测 多巴胺(DA) 脑保护作用 神经元数量 立体定向 免疫组化检测 快速冰冻切片 mRNA 色谱检测 高效液相 脑黑质 6-羟多巴 正常对照组 原位杂交法 SD大鼠 阿朴吗啡
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大鼠重症急性胰腺炎发病机制中p38丝裂原活化蛋白激酶的作用 被引量：12
8
作者 施新岗 李兆申 +5 位作者 贾一韬 许永春 满晓华 龚燕芳 屠振兴 许国铭 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第5期653-656,共4页
目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺组织中的变化规律,探讨p38 MAPK特异性抑制剂CNI1493对SAP 的保护作用. 方法:50 g/L牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立雄性SD 大鼠SAP模型,随机分为SO组... 目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺组织中的变化规律,探讨p38 MAPK特异性抑制剂CNI1493对SAP 的保护作用. 方法:50 g/L牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立雄性SD 大鼠SAP模型,随机分为SO组(假手术组,n=30)、SAP—NS组(n=25)及SAP—CNI1493组(n=25),各组大鼠质量相似.Western blot法检测大鼠胰腺组织磷酸化p38 MAPK的表达;ELISA方法检测血清IL-1β,TNF-α水平:光镜下评估胰腺组织病理学积分. 结果:SO组胰腺组织存在磷酸化p38 MAPK弱表达, SAP—NS组造模后15 min时磷酸化p38 MAPK的表达即显著增高至峰值,3 h后开始下降,6 h时磷酸化p38 MAPK活性与SO组相似.SAP—NS组和SAP-CNI1493 组Western blot检测15,30 min条带光密度值5 200±360, 3 500±250和4 910±320,2 500±340,SAP—CNI1493组15,30 min时胰腺组织磷酸化p38 MAPK的表达显著低于SAP—NS组(P<0.01).SAP-CNI1493组3,6 h时间点血清IL-1β,TNF-α水平及3 h时间点胰腺组织病理学积分均显著低于SAP—NS组(P<0.01). 结论:p38 MAPK信号转导通路与牛磺胆酸钠大鼠SAP 发病机制有关,CNI1493预处理可能通过抑制p38 MAPK的激活、减少炎症细胞因子的产生而改善腓炎病理改变的严重程度. 展开更多
关键词 P38丝裂原活化蛋白激酶 重症急性胰腺炎 发病机制 MAPK信号转导通路 Western p38MAPK ELISA方法 牛磺胆酸钠 IL-1β TNF-α 组织病理学 胰腺组织 特异性抑制剂 MAPK活性 blot检测 炎症细胞因子 SAP 磷酸化 blot法 变化规律
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转化生长因子β对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响 被引量：13
9
作者 陶树清 潘宣超 +1 位作者 荣杰生 王效东 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2005年第3期302-305,共4页
目的探讨转化生长因子β对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法实验中取雌性SD大鼠4肢松质骨,应用胶原酶消化法得到大量纯净成骨细胞;进行形态学观察,检测不同培养时间的细胞培养液的上清液中成骨细胞特征性分泌物:碱性磷酸酶(AKP)... 目的探讨转化生长因子β对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法实验中取雌性SD大鼠4肢松质骨,应用胶原酶消化法得到大量纯净成骨细胞;进行形态学观察,检测不同培养时间的细胞培养液的上清液中成骨细胞特征性分泌物:碱性磷酸酶(AKP)和骨钙素(OCN)的含量;碱性磷酸酶(ALP)染色(改良Gomori氏钙钴法);通过免疫组化法(SP法)进行雌激素受体染色;用不同浓度的TGFβ作用于体外培养的成骨细胞,进行SDSPAGE电泳和Westernblot检测雌激素受体。结果成骨细胞上清液AKP和OCN的分泌量明显高于成纤维细胞(P<0.01),形态学观察符合成骨细胞的特征。经免疫组化染色大鼠的成骨细胞存在雌激素受体,且位于胞核内。Westernblot结果显示,雌激素受体在TGFβ浓度为0.1～0.5ngml时,有较强的荧光发光信号条带。结论TGFβ在浓度为0.1～0.5ngml时,能提高成骨细胞雌激素受体基因表达水平,这可为研究TGFβ对于成骨细胞雌激素受体的作用机制及骨代谢疾病药物筛选提供新的支持。 展开更多
关键词 雌激素受体 成骨细胞 转化生长因子 转化生长因子Β 激素受体表达 成骨细胞 大鼠 SDS-PAGE电泳 免疫组化染色 雌激素受体 TGF-β blot检测
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Ki-67基因siRNA表达质粒的构建、鉴定及功能研究 被引量：11
10
作者 郑骏年 马腾骧 +6 位作者 孙晓青 陈家存 温儒民 曹敬毅 杨文发 李望 刘俊杰 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期611-613,共3页
目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用,探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pSliencer3.1质粒,构建重组质粒pSl... 目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用,探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pSliencer3.1质粒,构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786-0细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westernblot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67mRNA、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。 展开更多
关键词 siRNA 表达质粒 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 功能研究 Ki-67基因表达 786-0细胞 Western Ki-67表达 鉴定 blot检测 癌基因治疗 DNA序列 增殖基因 阻抑作用 肾癌细胞 方法设计 重组质粒 mRNA 蛋白表达 抑制
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糖尿病大鼠皮肤组织表皮细胞增殖相关事件的研究 被引量：9
11
作者 谢挺 陆树良 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第6期541-544,共4页
目的研究糖尿病大鼠皮肤组织中表皮细胞的增殖改变及其可能机制。方法12只SPF级SD大鼠随机分为糖尿病组(6只)和正常对照组(6只),糖尿病大鼠以STZ诱导。成模后8周,二组同时采集背部皮肤,观察表皮的组织学特征;流式细胞术检测表皮细胞的... 目的研究糖尿病大鼠皮肤组织中表皮细胞的增殖改变及其可能机制。方法12只SPF级SD大鼠随机分为糖尿病组(6只)和正常对照组(6只),糖尿病大鼠以STZ诱导。成模后8周,二组同时采集背部皮肤,观察表皮的组织学特征;流式细胞术检测表皮细胞的细胞周期;Westernblot检测细胞增殖调节因子cyclinD1、cyclinB1和cdk4的表达水平,并测定表皮细胞丝裂期促进因子(MPF)的组蛋白激酶活性。结果与正常组相比,糖尿病大鼠表皮结构欠清晰,部分表皮缺乏复层排列,表皮细胞数量明显减少,表皮层厚度明显变薄;S期和G2/M期表皮细胞百分比均显著降低(P<0.01,P<0.05);糖尿病组cdk4的表达水平显著低于正常组(P<0.05),两组间cyclinD1、cyclinB1表达无显著差异(P>0.05);糖尿病组表皮细胞MPF活性显著降低(P<0.01)。结论糖尿病大鼠皮肤表皮细胞处于明显增殖抑制状态,这种增殖抑制可能与cdk4的低表达和MPF活性下降有关。 展开更多
关键词 糖尿病大鼠 皮肤组织 表皮细胞增殖 相关事件 cyclin 流式细胞术检测 Western blot检测 cdk4 蛋白激酶活性 皮肤表皮细胞 正常对照组 STZ诱导 组织学特征 可能机制 SD大鼠 SPF级 细胞周期 调节因子 促进因子 表皮结构 细胞数量
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CD44对骨肉瘤细胞增殖、黏附和侵袭性的影响 被引量：8
12
作者 彭挺生 丘钜世 +2 位作者 李智 张萌 梁惠珍 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期362-366,共5页
目的研究细胞表面黏附分子CD44对骨肉瘤细胞增殖、黏附和侵袭特性的影响,探讨骨肉瘤细胞生长侵袭的机制。方法流式细胞术和Westernblot检测3株骨肉瘤细胞系MG63、HOS和U2-OS中CD44的阳性表达率和相对蛋白含量;逆转录聚合酶链反应(RTPCR... 目的研究细胞表面黏附分子CD44对骨肉瘤细胞增殖、黏附和侵袭特性的影响,探讨骨肉瘤细胞生长侵袭的机制。方法流式细胞术和Westernblot检测3株骨肉瘤细胞系MG63、HOS和U2-OS中CD44的阳性表达率和相对蛋白含量;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法研究3株细胞系之间CD44mRNA的表达差异;同时应用MTT法、美蓝硼酸盐法和微孔迁移技术研究阻断CD44的作用前后3株细胞的增殖、黏附和侵袭能力的变化。结果HOS和U2-OS中CD44的阳性百分率均高于99%,但HOS中CD44的平均荧光强度显著高于U2-OS(P<0.01);而MG63中CD44阳性百分率仅为(2.10±0.46)%;Westernblot亦证明HOS中CD44的蛋白含量显著高于U2-OS(P<0.05),而MG-63中CD44表达为阴性;CD44mRNA在HOS和U2OS中的表达也显著高于MG-63(P值均<0.05)。HOS的侵袭性显著高于MG63和U2-OS(P值均<0.01);HOS与MG63的增殖速率和黏附性差异无统计学意义,但均显著高于U2OS(P值均<0.01)。应用中和抗体阻断CD44的作用之后,HOS和MG-63的黏附性均显著降低(P值均为0.03),U2-OS的黏附性无明显变化(P=0.93);HOS和U2-OS的侵袭力显著降低(P值均<0.01),而MG-63的侵袭力无明显改变(P=0.18);3株细胞的增殖速率均无显著变化(P值均>0.05)。结论CD44能促进骨肉瘤细胞系HOS的黏附和侵袭,并参与U2-OS的侵袭和MG-63的黏附过程,但是不影响骨肉瘤细胞的增殖速率。 展开更多
关键词 细胞增殖 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 侵袭性 Western 黏附分子CD44 骨肉瘤细胞系 blot检测 平均荧光强度 CD44表达 HOS 蛋白含量 mRNA 瘤细胞生长 流式细胞术 阳性表达率 细胞表面 侵袭特性 表达差异 MTT法 侵袭能力
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干扰素-γ对单核—巨噬细胞源性泡沫细胞ACAT-1表达的影响 被引量：8
13
作者 柯丽 成蓓 +2 位作者 余其振 何平 白智峰 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第10期14-15,共2页
目的观察干扰素-γ对THP-1、THP-1源性巨噬细胞泡沫细胞酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达的影响。方法将THP-1细胞与PMA孵育48小时使之分化为巨噬细胞,继以100mg/mlOx-LDL处理24小时使之形成泡沫细胞。将THP-1细胞、巨噬细胞、... 目的观察干扰素-γ对THP-1、THP-1源性巨噬细胞泡沫细胞酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达的影响。方法将THP-1细胞与PMA孵育48小时使之分化为巨噬细胞,继以100mg/mlOx-LDL处理24小时使之形成泡沫细胞。将THP-1细胞、巨噬细胞、泡沫细胞分别用300U/mlIFN-γ干预24小时。RT-PCR检测ACAT-1mRNA水平,WesternBlot检测其蛋白表达。结果THP-1细胞分化成巨噬细胞以及形成泡沫细胞时ACAT-1mRNA及蛋白含量增加(P<0.05),而后两种细胞之间无显著性差异。与各自的对照组相比,经IFN-γ作用后三种细胞ACAT-1mRNA及蛋白表达均增强(P<0.05)。结论IFN-γ诱导单核、巨噬细胞、泡沫细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达,这可能是其促进动脉粥样硬化的机制之一。 展开更多
关键词 泡沫细胞 干扰素-Γ 细胞源性 单核 THP-1细胞 胆固醇酰基转移酶 RT-PCR检测 IFN-γ Western 巨噬细胞 mRNA水平 蛋白表达 blot检测 动脉粥样硬化 酰基辅酶A OxLDL 显著性差异 细胞分化 蛋白含量 种细胞 PMA 对照组
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ISGF3:IFN-α抗乙型肝炎病毒信号转导机制的重要因子 被引量：6
14
作者 张权 魏来 王燕 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期110-113,共4页
目的　研究干扰素 α(IFN α)抗乙型肝炎病毒(HBV)的信号转导机制。方法　用定量聚合酶链反应(PCR)检测IFNα2b处理前、后的HepG2 2 15细胞上清的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测IFNα2... 目的　研究干扰素 α(IFN α)抗乙型肝炎病毒(HBV)的信号转导机制。方法　用定量聚合酶链反应(PCR)检测IFNα2b处理前、后的HepG2 2 15细胞上清的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测IFNα2b处理后不同时点的HepG2 2 15细胞和其母源细胞HepG2 细胞内信号转导和转录活化因子1(STAT1)、STAT2、干扰素刺激基因因子3γ(ISGF3γ)、2′5′寡腺苷酸合成酶(2′5′OAS)、RAN依赖蛋白激酶(PKR)的mRNA表达水平。WesternBlot检测ISGF3γ的蛋白质表达水平。并用染料木黄酮阻断IFNα2b信号转导后再次检测上述指标。结果　IFNα2b处理8h后,HepG2 2 15细胞上清HBVDNA平均减少0 72log 10copies ml,而加染料木黄酮后则无减少。IFNα2b处理后,HepG2 和HepG2 2 15细胞中STAT1、STAT2、ISGF3γ、2′5′OAS和PKRmRNA水平明显升高;加染料木黄酮后前3个因子mRNA水平仍然能检测到,而2′5′OAS和PKRmRNA则受到抑制。WesternBlot检测也提示IFNα2b处理后ISGF3γ蛋白质水平升高,加染料木黄酮后其表达受到抑制。结论　Janus酪氨酸激酶(JAK) STAT途径在IFN α抗HBV中发挥主要作用,而ISGF3是该途径的一个重要因子。 展开更多
关键词 信号转导机制 重要因子 抗乙型肝炎病毒 HepG2.2.15细胞 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 半定量逆转录聚合酶链反应 IFNΑ-2B 乙型肝炎病毒(HBV) 聚合酶链反应(PCR) Western 染料木黄酮 blot检测 mRNA水平 细胞内信号转导
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中华芦荟多糖对辐射后非瘤细胞周期改变及周期相关蛋白表达的影响 被引量：6
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作者 王宗伟 黄兆胜 +4 位作者 吴庆光 周军民 朱孝峰 黎俏梅 刘宗潮 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期482-485,共4页
目的研究中华芦荟多糖(AP)对X射线照射后人非瘤细胞株C.Liver和293细胞周期进程及细胞周期相关蛋白表达的影响。方法流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果辐射后293和C.Liver细胞均出现明显的G2/M期阻滞... 目的研究中华芦荟多糖(AP)对X射线照射后人非瘤细胞株C.Liver和293细胞周期进程及细胞周期相关蛋白表达的影响。方法流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果辐射后293和C.Liver细胞均出现明显的G2/M期阻滞,G0/G1期细胞比例显著下降,50μg/mlAP能显著改变上述趋势。AP预处理能显著下调辐射所致C.Liver细胞P53蛋白水平,显著升高P21、CyclinB1、pRb蛋白的表达,对P27、CDK4和CyclinD1蛋白表达水平无显著影响。结论AP对X射线辐射后非瘤细胞周期紊乱的改善作用与对周期相关蛋白表达的调节有关。 展开更多
关键词 中华芦荟多糖 细胞周期相关蛋白 Cyclin Liver 流式细胞仪检测 Western G2/M期阻滞 细胞周期进程 blot检测 蛋白表达水平 细胞周期紊乱 X射线照射 PRB蛋白 X射线辐射 瘤细胞株 蛋白水平 CDK4 改善作用 G1期 P53 预处理
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^(125)I籽源连续照射诱导人乳腺癌细胞凋亡的研究 被引量：5
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作者 岳麓 沈赞 +2 位作者 陈红红 罗伟华 程文英 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期130-132,共3页
目的探讨^(125)I籽源低剂量率γ射线持续照射诱导MCF7人乳腺癌细胞凋亡过程中Bcl2Bax的变化情况。方法用9粒表面放射活度为2775MBq的6711型^(125)I籽源连续照射MCF7细胞72h后,采用RTPCR和Westernblot法检测Bcl2和BaxmRNA和蛋白表达。常... 目的探讨^(125)I籽源低剂量率γ射线持续照射诱导MCF7人乳腺癌细胞凋亡过程中Bcl2Bax的变化情况。方法用9粒表面放射活度为2775MBq的6711型^(125)I籽源连续照射MCF7细胞72h后,采用RTPCR和Westernblot法检测Bcl2和BaxmRNA和蛋白表达。常规细胞流式法和AnnexinV标记法直接检测MCF7细胞凋亡率。结果MCF7细胞经125I籽源照射后较对照组Bcl2mRNA的表达降低,BaxmRNA的表达升高;Westernblot检测Bcl2Bax比值,结果对照组为189±009,125I籽源照射组为062±008,两者差异有统计学意义(P<005)。常规细胞流式法检测照射组(n=10)和对照组(n=12)细胞凋亡率分别为(2361±727)%和(281±168)%,P<005。AnnexinV标记法检测两组细胞早期凋亡率分别为(2146±829)%和(194±138)%,P<005。结论125I籽源连续照射能够诱导Bcl2Bax比值的降低,促进MCF7细胞的凋亡。 展开更多
关键词 ^125I籽源 癌细胞凋亡 连续照射 Bcl-2/Bax 乳腺 MCF-7细胞 Western Annexin 细胞凋亡率 RT-PCR mRNA blot检测 0.05 blot法 对照组 变化情况 低剂量率 72h后 放射活度 蛋白表达 直接检测 表达降低 标记法 γ射线 统计学
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氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究 被引量：4
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作者 梁蓉 王哲 +5 位作者 黄高 乔岩 王爱勤 董宝侠 郭英 王娟红 《实用癌症杂志》 2005年第1期20-23,27,共5页
目的　探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法　采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后... 目的　探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法　采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果　0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论　GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。 展开更多
关键词 K562细胞凋亡 氨基葡萄糖硫酸盐 实验研究 CASPASE-3 CASPASE-3 BCL-2蛋白表达 AO/EB染色法 慢性髓系白血病 Western bcl-2基因 Annexin 流式细胞仪 凋亡诱导作用 生长抑制作用 细胞生长曲线 台盼蓝拒染法 blot检测 对数生长期
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ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列转录活性的鉴定 被引量：6
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作者 高书颖 许丽艳 +3 位作者 孟令英 崔磊 周飞 李恩民 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-4,共4页
目的检测ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列的转录活力,探讨ezrin基因在癌细胞的表达调控机制。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测ezrin基因在食管癌细胞EC109、EC171、EC8712、SHEEC,胃癌细胞N87... 目的检测ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列的转录活力,探讨ezrin基因在癌细胞的表达调控机制。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测ezrin基因在食管癌细胞EC109、EC171、EC8712、SHEEC,胃癌细胞N87、BGC823,肺癌细胞A549、95D,肝癌细胞HepG2,白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa中的mRNA和蛋白表达水平;采用PCR法构建以ezrin基因翻译起始位点上游-1444/+134序列为启动子的真核细胞表达质粒pGLB-hE(-1444/+134);采用双荧光素酶报告基因分析系统检测-1444/+134序列在EC109、Hela、A549和BGC823细胞中的转录活力。结果ezrin基因在食管癌等几种癌细胞中均有高表达,其5′侧翼区-1444/+134序列具有较强的转录活力。结论ezrin基因5′侧翼区序列的转录活性可能对ezrin基因的几种癌细胞中的高表达起重要作用。 展开更多
关键词 EZRIN基因 逆转录聚合酶链反应 WESTERN blot检测 双荧光素酶报告基因分析
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Aβ_(1-15)多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果 被引量：5
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作者 张革 汪华侨 +5 位作者 邹俊涛 李国营 袁群芳 林贤 姚志彬 张革 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期371-376,共6页
【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.... 【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合。【结果】测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8ku的分泌型4×Aβ15蛋白。pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1︰6400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和。【结论】所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件。 展开更多
关键词 多价DNA疫苗 体液免疫 COS-7细胞 pcDNA3.1 ELISA法检测 Western BALB/C鼠 LINKER 真核表达质粒 blot检测 免疫组织化学 抗体平均滴度 基因片段 加强免疫 转基因鼠 Aβ42 PCR技术 信号肽序列 转基因动物 老年性痴呆 基因合成
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甲异靛联合imatinib对CML K562细胞的促凋亡作用 被引量：4
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作者 吴英理 印彤 +2 位作者 孙云 邬维礼 孙关林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期433-436,共4页
目的研究甲异靛联合imatinib促进K562细胞凋亡的作用。方法K562细胞经imatinib或/和甲异靛处理48h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡相关指标(线粒体跨膜电位和AnnexinV/PI)的改变,ELISA方法检测caspase3活性改变,Westernblot检测凋亡相关... 目的研究甲异靛联合imatinib促进K562细胞凋亡的作用。方法K562细胞经imatinib或/和甲异靛处理48h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡相关指标(线粒体跨膜电位和AnnexinV/PI)的改变,ELISA方法检测caspase3活性改变,Westernblot检测凋亡相关蛋白(cytC,cIAP1,procaspase3和PARP)的改变。结果与单用组相比,20μmol/L甲异靛与0.3μmol/Limatinib联合应用后,线粒体跨膜电位下降细胞比例明显升高,cytC释放入胞浆,caspase3酶原形式procaspase3减少,caspase3活性升高,其底物PARP被降解,AnnexinV水平升高。结论甲异靛与imatinib合用可协同促进K562细胞凋亡。 展开更多
关键词 IMATINIB 甲异靛 促凋亡作用 K562细胞凋亡 caspase Annexin CML 线粒体跨膜电位 流式细胞术检测 ELISA方法 Western mol/L 凋亡相关蛋白 blot检测 C-IAP1 跨膜电位下降 活性改变 PARP 关指标 应用后 升高 cyt
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