基于网络药理学的连花清瘟方抗冠状病毒的物质基础及机制探讨 被引量：78

1

作者 凌晓颖 陶嘉磊 +1 位作者 孙逊 袁斌 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1723-1730,共8页

目的探寻连花清瘟方抗冠状病毒的物质基础及作用机制,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的中医药治疗提供参考。方法借助TCMSP、Batman、Swiss Target Prediction等数据库检索连花清瘟方中药味的化学成分和作用靶点。通过Gene Cards筛选出... 目的探寻连花清瘟方抗冠状病毒的物质基础及作用机制,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的中医药治疗提供参考。方法借助TCMSP、Batman、Swiss Target Prediction等数据库检索连花清瘟方中药味的化学成分和作用靶点。通过Gene Cards筛选出冠状病毒的疾病靶点。使用Cytoscape软件构建"药物-成分-靶点-疾病"网络和潜在靶点的相互作用关系,通过富集分析预测作用机制,并将连花清瘟方的主要活性成分与新型冠状病毒(SARS-Co V-2)3CL水解酶(Mpro)、血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)进行分子对接验证。结果挖掘出连花清瘟方中100种活性成分、636个药物靶点,冠状病毒347个疾病靶点,得到药物-疾病共同靶点67个,关键靶点涉及PTGS2、IL6、CASP3、MAPK1、EGFR、ACE2等。GO富集分析共得到条目1 946个,主要涉及T细胞活化、病毒受体、炎症反应等。KEGG通路富集筛选出166条信号通路,包括肾素-血管紧张素系统、Toll样受体信号通路、JAK-STAT信号通路、T细胞受体信号通路、TNF信号通路等。分子对接结果显示山柰酚、槲皮素、木犀草素与Mpro有较好的结合能力;甘草次酸、豆甾醇、靛蓝与ACE2有较好的结合能力。结论连花清瘟方可通过多成分、多靶点、多通路作用于冠状病毒,其主要成分与Mpro、ACE2有较好的结合能力,从而可能对COVID-19有治疗作用。 展开更多

关键词 连花清瘟 冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 网络药理学 分子对接 血管紧张素转化酶ⅱ 山柰酚 槲皮素 木犀草素 甘草次酸 靛蓝

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2019新型冠状病毒的研究进展 被引量：19

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作者 谢茜 伍政宇 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期493-501,共9页

自2019年12月以来,新型冠状病毒SARS-CoV-2引发的肺炎疫情在中国武汉暴发,随后疫情迅速蔓延,扩散至中国其它各省市。新型冠状病毒属于β冠状病毒属,与SARS-CoV和MERS-CoV近缘但有较大区别,尤其是刺突蛋白(Spike,S),根据序列相似性推断... 自2019年12月以来,新型冠状病毒SARS-CoV-2引发的肺炎疫情在中国武汉暴发,随后疫情迅速蔓延,扩散至中国其它各省市。新型冠状病毒属于β冠状病毒属,与SARS-CoV和MERS-CoV近缘但有较大区别,尤其是刺突蛋白(Spike,S),根据序列相似性推断可能来源于蝙蝠,使用与SARS-CoV相同的血管紧张素转化酶Ⅱ(Angiotensin-converting enzymeⅡ,ACE2)受体进入细胞,以飞沫和接触传播为主要传播途径,缺乏有效药物治疗和疫苗是疫情防控的挑战。 展开更多

关键词 新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 血管紧张素转化酶ⅱ(ace2) 病毒进化起源

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血管紧张素转化酶2(ACE2)在糖尿病大鼠肾损伤中的作用及机制分析 被引量：3

3

作者 王珊珊 马畅 +2 位作者 张伟 王艳霞 张源淑 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期287-291,共5页

目的:通过比较肾脏组织中血管紧张素转化酶Ⅰ(angiotensin converting enzymeⅠ,ACE)-血管紧张素Ⅱ(ang iotensinⅡ,AngⅡ)-血管紧张素Ⅱ受体1亚型(AngⅡtype 1 receptor,AT1)/血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzymeⅡ,ACE2)... 目的:通过比较肾脏组织中血管紧张素转化酶Ⅰ(angiotensin converting enzymeⅠ,ACE)-血管紧张素Ⅱ(ang iotensinⅡ,AngⅡ)-血管紧张素Ⅱ受体1亚型(AngⅡtype 1 receptor,AT1)/血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzymeⅡ,ACE2)-血管紧张素1-7(angiotensin 1-7,Ang 1-7)-Mas及肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensinsystem,RAS)相关调节因子在肾损伤过程中的表达差异,探讨ACE2在糖尿病大鼠肾脏损伤发生发展中的作用及可能的分子机制。方法:研究选用STZ腹腔注射致大鼠糖尿病,分别于15d(对照1组和模型1组)和30d(对照2组和模型2组)断头处死,取肾脏组织。PCR检测肾脏组织中ACE、AT1、ACE2和Mas mRNA的表达水平;放免法测定肾脏局部组织中肾素活性和Ang I、AngⅡ含量。结果显示:与对照组相比,模型1组大鼠肾脏组织中ACE2和其Mas受体mRNA表达升高,ACE mRNA表达无显著差异,AT1 mRNA表达下降,ACE/ACE2 mRNA比值下降;模型2组大鼠肾脏组织中ACE2 mRNA表达低于对照2组,Mas受体mRNA表达无显著变化,ACE mRNA的表达高于对照2组,AT1受体有同样升高趋势,ACE/ACE2 mRNA表达比值较对照2组升高,有显著性差异。放射免疫分析结果显示:模型1组肾脏局部组织中肾素活性和Ang I含量低于对照1组,有显著性差异(P<0.05),而AngⅡ含量高于对照1组,无显著性差异(P>0.05);模型2组肾素活性和Ang I极显著高于对照2组(P<0.01),同时AngⅡ也显著高于对照2组(P<0.05)。结论:ACE与ACE2表达失调是糖尿病大鼠肾损伤发生发展的原因之一。损伤初期以ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的激活占优势;严重损伤时,ACE-AngⅡ-AT1轴的激活占优势。ACE2在早期肾脏病变的发病中通过降解AngⅡ发挥积极的保护作用。 展开更多

关键词 ace2 糖尿病 肾损伤 ace-Angⅱ-AT1轴 ace2-Ang-(1-7)-Mas轴

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新型冠状病毒感染肺炎患者肝酶异常的机制探究 被引量：68

4

作者 关贵文 高林 +6 位作者 王建文 文夏杰 毛天皓 彭思雯 张婷 陈香梅 鲁凤民 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期100-106,共7页

目的探索和分析新型冠状病毒感染肺炎(NCP)患者发生肝损伤的可能机制。方法综合分析已报道文献中NCP患者的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)等肝酶变化情况与疾病状态的相关性;基于肝组织单细胞测序数据(GSE115469)分析新冠病毒... 目的探索和分析新型冠状病毒感染肺炎(NCP)患者发生肝损伤的可能机制。方法综合分析已报道文献中NCP患者的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)等肝酶变化情况与疾病状态的相关性;基于肝组织单细胞测序数据(GSE115469)分析新冠病毒受体血管紧张素转换酶2(ACE2)在肝组织中的表达;采用RNA-seq方法分析半肝切除急性肝损伤小鼠模型肝切除后不同时间点残肝组织中Ace2的表达及与其表达相关的转录因子。统计学方法采用t检验和Spearman秩相关分析。结果部分新冠病毒感染者发生了ALT、AST异常升高,且NCP重症患者ALT、AST升高的比率及程度均高于非重症患者。肝组织单细胞测序和免疫组织化学检测结果显示,ACE2在正常肝组织中只在胆管上皮细胞表达,而在肝细胞中表达极低。在小鼠半肝切除急性肝损伤模型中,Ace2在术后第1天的急性损伤期表达下调,但在术后第3天的肝细胞增殖高峰期表达升高至正常水平的2倍以上,并在肝脏恢复、肝细胞增殖停止的第7天恢复到正常水平。这一现象是否提示ACE2表达阳性的胆管上皮细胞参与了部分肝切除后的肝再生过程,值得进一步的研究。RNA-seq数据中有77个转录因子与Ace2表达呈正相关(r>0.2,FDR<0.05),主要富集在腺体腔管表皮细胞的发育、分化、形态生成以及细胞增殖等功能。结论除了NCP患者过度激活的炎症反应可导致肝损伤外,胆管上皮细胞来源肝实质细胞的代偿性增生所致病毒受体ACE2在肝组织中的表达上调,可能是新型冠状病毒感染肝细胞造成肝组织损伤的可能机制。 展开更多

关键词 肝功能 肝再生 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 血管紧张素转换酶2 转录因子 丙氨酸转氨酶 天冬氨酸转氨酶

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ACE 2在奶牛乳腺中的表达定位及其抗炎性损伤作用的研究 被引量：11

5

作者 刘小倩 刘颖 +3 位作者 荣超 王鲲 肖航 张源淑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期552-560,共9页

本研究旨在通过体内外试验,明确ACE 2在奶牛乳腺中的表达定位,并对其在高精料饲喂致内源性奶牛乳房炎中的抗损伤作用进行初步探讨。体外试验分别选用牛乳腺组织样品和牛乳腺上皮细胞(Mac-T细胞),RTPCR和Western blotting法检测ACE 2在... 本研究旨在通过体内外试验,明确ACE 2在奶牛乳腺中的表达定位,并对其在高精料饲喂致内源性奶牛乳房炎中的抗损伤作用进行初步探讨。体外试验分别选用牛乳腺组织样品和牛乳腺上皮细胞(Mac-T细胞),RTPCR和Western blotting法检测ACE 2在奶牛乳腺组织中的mRNA和蛋白表达;免疫荧光法测定ACE 2蛋白在Mac-T细胞中的定位。体内试验,选用6头健康泌乳期荷斯坦奶牛,随机分为对照组和高精料饲喂组,饲喂20周后,活体采集乳腺组织及乳。测定乳中LPS含量、体细胞数及相关炎性指标;制作乳腺组织学切片;分析乳腺组织中ACE、AT1、ACE2、MasR mRNA表达水平,ELISA法检测Ang II、Ang1-7含量。体外试验结果表明,奶牛乳腺中ACE2在基因和蛋白水平上均有表达,细胞学定位在细胞的胞浆和胞膜。体内试验结果显示,高精料长期饲喂,奶牛乳中体细胞数和LPS含量均明显升高(P<0.01);乳中NAGase和AKP酶活力均显著高于正常对照组(P<0.05),MPO活力两组之间无明显差异;乳腺组织学表现出一定炎性损伤变化;其中Ang1-7含量显著增高(P<0.05),Ang II的含量显著降低(P<0.05);ACE、AT 1、ACE 2、MasR mRNA表达量均显著上升((P<0.05)),ACE2/ACE mRNA比值高于对照组。本研究首次证实奶牛乳腺组织中有ACE 2的存在。在高精料长期饲喂造成奶牛乳房炎性损伤时,乳腺组织中RAS处于激活状态,ACE/ACE2比例失衡,以ACE 2-Ang1-7-MasR轴的活力处于优势状态,即ACE 2的抗损伤作用占优势。ACE 2可能通过降解AngII,产生Ang1-7发挥抗损伤作用,对乳腺组织炎性损伤具有一定的保护作用。 展开更多

关键词 肾素-血管紧张素系统(RAS) 血管紧张素转化酶2(ace 2) 奶牛乳腺组织 表达 抗损伤

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血管紧张素转化酶2和中性氨基酸转运载体BoAT1在不同日龄猪肠道中的表达差异 被引量：8

6

作者 权素玉 王睿杰 +2 位作者 孙俊杰 吴昭淳 张源淑 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第4期36-39,共4页

研究了肠道血管紧张素转化酶2(ACE2)和中性氨基酸转运载体B0AT1在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达,探讨其相互关系。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪十二指肠、空肠和回肠组织,采用体外扩增和荧光定量技术对各肠段... 研究了肠道血管紧张素转化酶2(ACE2)和中性氨基酸转运载体B0AT1在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达,探讨其相互关系。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪十二指肠、空肠和回肠组织,采用体外扩增和荧光定量技术对各肠段组织中ACE2和B0AT1基因进行了定性和定量分析。结果显示ACE2基因在不同日龄猪小肠各段均有表达,相对表达量随日龄增长显著升高,120日龄猪表达量极显著上调。而肠道中B0AT1相对表达量逐渐下降,120日龄时显著下调。结果提示:ACE2在成年猪肠道组织中有较高表达,B0AT1在仔猪肠道组织中表达较高。 展开更多

关键词 ace2 B0AT1 猪 小肠 表达

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山羊血管紧张素转换酶2基因的克隆表达与生物信息学分析 被引量：7

7

作者 杨维维 许媛媛 +2 位作者 荣超 权素玉 张源淑 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期120-126,共7页

[目的]血管紧张素转换酶2（ACE2）是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能。[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的... [目的]血管紧张素转换酶2（ACE2）是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能。[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到p MD19-T载体并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行验证后测序分析。根据测序分析结果设计引物,经PCR扩增和酶切连接,构建原核表达载体p ET-28a-ACE2,经过验证后转化大肠杆菌BL21（DE3）并用IPTG诱导表达ACE2蛋白。[结果]山羊ACE2基因c DNA编码区共包括2 415个核苷酸,编码804个氨基酸残基。同源性比对发现,山羊ACE2基因核苷酸序列同源性与绵羊ACE2最高,为99%,与斑马鱼最低,仅为60%。遗传进化分析也表明该ACE2基因与绵羊的遗传距离最近,与斑马鱼处在两个不同的分支上。蛋白结构及理化性质分析预测该山羊ACE2蛋白属于稳定型蛋白,蛋白信号肽序列位于第1氨基酸（aa）~18氨基酸（aa）之间,蛋白跨膜螺旋预测为Ⅰ型跨膜蛋白。成功构建山羊ACE2蛋白胞外部分（19~738 aa）表达载体,表达出的蛋白相对分子质量约为90×10^3,主要以包涵体的形式在BL21（DE3）中表达。[结论]本试验首次成功克隆了山羊ACE2基因编码区（基因序列号：KF921008.1）,并对其蛋白结构及理化性质进行了初步预测,同时在大肠杆菌中高效表达了其胞外区蛋白。 展开更多

关键词 山羊 血管紧张素转换酶2 基因克隆 生物信息学 表达

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ACE2-Ang(1-7)-Mas轴在炎症反应中的作用 被引量：6

8

作者 余莹 余晨 《医学研究杂志》 2011年第2期112-115,共4页

实验和临床研究证实,肾素-血管紧张素系统通过炎症反应参与多种心血管和肾脏疾病的发生发展过程。血管紧张素1-7[Ang(1-7)]是肾素-血管紧张素系统家族的新成员,近年的研究发现其具有重要的生理功能。Ang(1-7)及其合成酶血管紧张素转移酶... 实验和临床研究证实,肾素-血管紧张素系统通过炎症反应参与多种心血管和肾脏疾病的发生发展过程。血管紧张素1-7[Ang(1-7)]是肾素-血管紧张素系统家族的新成员,近年的研究发现其具有重要的生理功能。Ang(1-7)及其合成酶血管紧张素转移酶2(ACE2)和受体Mas组成的ACE2-Ang(1-7)-Mas轴对心血管和肾脏疾病,特别是炎症性心血管和肾脏疾病的影响受到广泛的关注。本文主要就ACE2-Ang(1-7)-Mas轴在炎症反应中的作用及其机制做一简要的综述。 展开更多

关键词 血管紧张素转移酶2(ace2) 血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)] 炎症

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血管紧张素转化酶2:乳酸的一个潜在靶点

9

作者 苏晶 张源媛 +3 位作者 黄犇犇 钟朕 刘先发 钟佳宁 《赣南医学院学报》 2024年第5期470-477,共8页

目的:探讨血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在L-乳酸和D-乳酸条件下的蛋白功能影响及其效应机制。方法:通过AlphaFold2对ACE2进行了蛋白结构预测,将ACE2分别与L-乳酸、D-乳酸、丙酮酸和MLN-4760进行分子对接模... 目的:探讨血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在L-乳酸和D-乳酸条件下的蛋白功能影响及其效应机制。方法:通过AlphaFold2对ACE2进行了蛋白结构预测,将ACE2分别与L-乳酸、D-乳酸、丙酮酸和MLN-4760进行分子对接模拟分析,其中MLN-4760为ACE2的特异性抑制剂,作为本研究的阳性对照。基于分子对接模拟分析结果,使用ACE2活性荧光检测试剂盒检测L-乳酸和D-乳酸对ACE2酶活性的影响。对HEK-293细胞进行常规培养,同时转染RBD-Flag和ACE2-HA质粒后分别用L-乳酸和MLN-4760处理,co-IP检测RBD与ACE2的结合水平。结果:对接结果显示L-乳酸和D-乳酸结合在ACE2的氯离子结合位点,体外酶活性测定发现L-乳酸和D-乳酸均能够以浓度依赖性抑制ACE2酶活性,L-乳酸对ACE2的抑制作用较D-乳酸强,丙酮酸对ACE2活性无显著影响。ACE2是介导SARS-CoV-2入侵细胞的关键受体,co-IP实验结果发现,L-乳酸能够增强SARS-CoV-2病毒S蛋白RBD和ACE2结合,而ACE2抑制剂MLN-4760对RBD与ACE2的结合无显著影响。结论:L-乳酸能够抑制ACE2酶活性,并促进RBD与ACE2结合。 展开更多

关键词 乳酸 血管紧张素转换酶2 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 糖尿病 高血压

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血管紧张素转换酶2在非小细胞肺癌与SARSCoV-2中共表达的研究进展

10

作者 白向豆 曾伟强 +6 位作者 崔百强 王兵 杨宁 贺晓阳 张斯渊 金大成 苟云久 《中国胸心血管外科临床杂志》 CSCD 北大核心 2023年第5期773-778,共6页

自2019年底首例由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)出现以来,该病毒在全球范围内迅速传播,已成为全球公共卫生... 自2019年底首例由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)出现以来,该病毒在全球范围内迅速传播,已成为全球公共卫生问题。在此次病毒流行过程中,相比于普通人群,癌症患者被认为是高度易感人群,尤其是肺癌患者。有部分研究表明血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme,ACE2)可能是SARSCoV-2感染宿主的途径。同时,ACE2常在非小细胞肺癌中呈现出异常表达。因此了解ACE2在COVID-19与非小细胞肺癌中各自的作用机制,对于研究疫苗以及治疗性药物具有极其重要的参考价值,同时也为疫情期间肺癌患者的防护提出有意义的指导意见。本文综述了ACE2在SARS-CoV-2中可能的侵袭机制,以及其在非小细胞肺癌中异常表达的研究进展。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 血管紧张素转换酶2(ace2) 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) SPIKE蛋白 新型冠状病毒感染(COVID-19) 综述

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鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用

11

作者 陈雨涛 纪晓霞 +2 位作者 李帅 伍钢 张源淑 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2023年第1期75-85,共11页

为建立鸭血管紧张素转换酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)定量检测方法,首先利用纯化的鸭ACE2重组蛋白,成功制备了兔抗鸭ACE2多克隆抗体,间接ELISA... 为建立鸭血管紧张素转换酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)定量检测方法,首先利用纯化的鸭ACE2重组蛋白,成功制备了兔抗鸭ACE2多克隆抗体,间接ELISA法确定抗体效价为1∶800;然后利用制备的鼠抗鸭ACE2多克隆抗体作为捕获抗体,通过戊二醛二步法对兔抗鸭ACE2多克隆抗体进行HRP标记,并将HRP标记的兔抗鸭ACE2多克隆抗体作为检测抗体,纯化获得的鸭ACE2重组蛋白作为标准品,建立鸭ACE2双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对抗体浓度、捕获抗体最适包被条件、孵育条件、封闭条件及显色条件等进行优化;通过Western blot法检测正常白鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织间ACE2表达的变化;利用RT-qPCR方法检测正常鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织中ACE2基因的相对表达量。结果表明:所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测浓度为5 ng·mL^(-1),最佳线性范围为25~1 600 ng·mL^(-1),批内变异系数为1.65%~5.62%,批间变异系数为3.66%~6.81%,可检测出麻鸭各组织中ACE2含量。传染性浆膜炎组白鸭以及健康鸭心脏、肝脏等组织样品ACE2含量或表达存在差异,心脏组织中显著升高或上调;鸭传染性浆膜炎组心脏中ACE2 mRNA水平显著上调,肝脏组织中ACE2 mRNA水平升高不明显。采用该ELISA方法对不同畜(大鼠、猪、羊)、禽(鸭、鸡、鹅)的不同组织中ACE2进行了定量测定,证实该方法在不同畜禽上存在较大种属差异,仅适用于家禽ACE2的定量检测。综上,该研究成功建立了鸭ACE2检测的双抗体夹心ELISA方法,可用于禽类样品中ACE2的快速定量检测。 展开更多

关键词 鸭 血管紧张素转换酶2(ace2) 抗体制备 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 定量检测

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真核表达质粒pcDNA.3.1(+)-ACE2的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量：4

12

作者 肖航 王凯 +2 位作者 王换换 王鲲 张源淑 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第1期54-58,共5页

为了构建pcDNA.3.1（＋）-血管紧张素转化酶2（ACE2）真核表达质粒并检测在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达,从羊肾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增出ACE2基因,后将其与pcDNA3.1载体进行连接重组,构建pcDNA3.1（＋）-ACE2真核表达质粒,经H... 为了构建pcDNA.3.1（＋）-血管紧张素转化酶2（ACE2）真核表达质粒并检测在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达,从羊肾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增出ACE2基因,后将其与pcDNA3.1载体进行连接重组,构建pcDNA3.1（＋）-ACE2真核表达质粒,经HindⅢ、XhoⅠ限制性内切酶双酶切及DNA序列测序分析等方法验证后,通过Lipofectamine 3000脂质体介导转染至CHO细胞,Western blot法检验ACE2基因在蛋白质水平上的表达。结果显示：RT-PCR扩增出大小约为2 200 bp特异ACE2基因片段,连接获得的pcDNA3.1（＋）-ACE2重组体经HindⅢ、XhoⅠ酶切后分别出现约2 200 bp和5 000 bp片段,测序分析与Gen Bank上公布的结果完全一致,表明成功克隆了重组pcDNA3.1（＋）-ACE2真核表达质粒,Western blot检测显示该pcDNA3.1（＋）-ACE2能在CHO细胞中表达。本研究成功构建了pcDNA3.1（＋）-ACE2真核表达质粒,并证实其能在CHO中表达,为后续探究ACE2蛋白活性及其作用的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 血管紧张素转化酶2(ace 2) 真核表达质粒 转染 CHO细胞

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血管紧张素转换酶2(ACE2)基因在家猫不同组织中的表达差异分析

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作者 昂艳芬 汪娅媛 +3 位作者 严涵 田仰清 张学峰 严玉霖 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期228-233,共6页

【目的】分析血管紧张素转换酶2(ACE2)基因在家猫不同组织中的相对表达量及特定组织中的蛋白定位,为后续以ACE2基因为受体的疫病防控提供理论基础。【方法】采用qRT-PCR技术检测ACE2基因在家猫8个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、... 【目的】分析血管紧张素转换酶2(ACE2)基因在家猫不同组织中的相对表达量及特定组织中的蛋白定位,为后续以ACE2基因为受体的疫病防控提供理论基础。【方法】采用qRT-PCR技术检测ACE2基因在家猫8个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、小肠和肠系膜淋巴结)中的mRNA相对表达水平,并利用免疫组织化学法检测家猫肾脏、胰腺和小肠中ACE2蛋白的组织定位。【结果】ACE2基因在家猫肾脏、胰腺和小肠组织的表达量极显著高于肺脏组织(P<0.01),在心脏、脾脏和肠系膜淋巴结组织的表达量极显著低于肺脏组织(P<0.01);不同性别家猫的ACE2表达量存在一定差异,但不显著;ACE2蛋白在小肠组织中的表达量最高,其次是肾脏,在胰腺的表达量最低。【结论】家猫ACE2基因在各组织中广泛分布且存在一定的表达差异。 展开更多

关键词 血管紧张素转换酶2 家猫 组织 表达

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二脒那秦内源性激活血管紧张素转化酶2对细胞脂质沉积的抑制效应及其机制 被引量：2

14

作者 曹西月 付亚丽 +2 位作者 谢娜娜 张亚峰 张源淑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2729-2738,共10页

旨在通过诱导3T3-L1前脂肪细胞转分化为3T3-L1脂肪细胞,探讨二脒那秦(DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(ACE 2)对细胞脂质沉积的抑制效应及机制。对3T3-L1前脂肪细胞转分化,将分化成功的3T3-L1脂肪细胞分为对照组、DIZE组(12.5、25μmo... 旨在通过诱导3T3-L1前脂肪细胞转分化为3T3-L1脂肪细胞,探讨二脒那秦(DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(ACE 2)对细胞脂质沉积的抑制效应及机制。对3T3-L1前脂肪细胞转分化,将分化成功的3T3-L1脂肪细胞分为对照组、DIZE组(12.5、25μmol·L^(-1)处理),siACE2组和siACE2+DIZE组(siACE2干扰后+25μmol·L^(-1)DIZE),作用48h,取上清和细胞进行试验:1)测定细胞上清中三酰甘油和葡萄糖含量;2)油红O染色细胞,并进行定量分析;3)Western blot检测细胞内ACE2和脂肪酸合成关键酶或因子FAS、ACC和SREBP-1c及葡萄糖转运蛋白GLUT4与氧化分解关键酶CS的蛋白表达水平。结果显示:1)成功诱导得到了3T3-L1脂肪细胞,前脂肪细胞诱导至第14天,有95%以上细胞内出现脂滴;2)确定了DIZE作用浓度为12.5和25μmol·L^(-1),处理时间为48h,并用该药物浓度及时间处理3T3-L1脂肪细胞,细胞上清中三酰甘油含量显著降低(P<0.05),葡萄糖含量显著升高(P<0.05);25μmol·L^(-1)DIZE处理组细胞脂滴减少,siACE2组无显著变化,siACE2+DIZE组脂滴蓄积介于对照组和DIZE组之间;25μmol·L^(-1)DIZE组ACE2蛋白水平显著高于对照组(P<0.05);siACE2组显著下调(P<0.05),siACE2+DIZE组较siACE2组无明显变化;3)与对照组相比25μmol·L^(-1)DIZE组细胞中FAS、ACC和SREBP-1c蛋白表达下调,siACE2组和siACE2+DIZE组则表达均上调;4)与对照组相比,25μmol·L^(-1)DIZE组GLUT4和CS蛋白表达水平显著上调(P<0.05),siACE2组和siACE2+DIZE组则均显著下调(P<0.05)。综上所述,DIZE处理通过介导脂肪细胞ACE2的内源性激活改善了脂肪细胞的脂肪沉积。其机理:一方面抑制脂质合成;另一方面促进葡萄糖摄取和氧化代谢,两方面协同减少了脂肪沉积。结果提示,ACE2或DIZE可作为防控脂肪沉积发生和发展的潜在靶点或药物。 展开更多

关键词 二脒那秦(DIZE) 血管紧张素转化酶2(ace2) 脂质沉积

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白羽肉鸡血管紧张素转换酶2(ACE2)全基因克隆及序列信息分析 被引量：3

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作者 纪晓霞 李帅 +2 位作者 许濛 杨博 张源淑 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第3期38-44,共7页

血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的重要一员,对鸡ACE2的研究尚没有开展。本研究以白羽肉鸡为研究对象,从白羽肉鸡空肠组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片... 血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的重要一员,对鸡ACE2的研究尚没有开展。本研究以白羽肉鸡为研究对象,从白羽肉鸡空肠组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到pMD-19T载体并转到大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行蓝白斑筛选、菌液PCR、酶切验证后测序,对所得序列进行了生物信息学分析。结果:本研究明确了ACE2在白羽肉鸡体内有存在,分布表达有组织特异性,在消化系统及肾脏有较高表达。并且首次成功克隆了白羽肉鸡ACE2全基因序列,共包括2,444个核苷酸,编码808个氨基酸残基,同源性及遗传进化结果一致。该基因编码ACE2蛋白属不稳定、亲水性蛋白,蛋白信号肽序列位于第1-17aa之间,蛋白跨膜螺旋预测为I型跨膜蛋白。研究所得序列已上传GenBank(基因序列号为MK560199),为ACE2在肉鸡及禽类方面的研究提供了基础资料。 展开更多

关键词 白羽肉鸡 ace2 表达定位 基因克隆 生物信息学

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新型冠状病毒受体血管紧张素转换酶2的研究进展 被引量：2

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作者 郭建淑 张燕 +1 位作者 孙学春 钟萍 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1165-1170,共6页

自新型冠状病毒肺炎暴发以来,中国已累计超过8万例患者。随着对其病毒结构和感染机制的深入研究,研究者们发现血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)2是新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的受体。根据既往的研究,ACE2是肾素血管... 自新型冠状病毒肺炎暴发以来,中国已累计超过8万例患者。随着对其病毒结构和感染机制的深入研究,研究者们发现血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)2是新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的受体。根据既往的研究,ACE2是肾素血管紧张素系统(Renin angiotensin system,RAS)的关键酶之一,与其同源物ACE在该系统中起协同调节作用,同时,其生理调节功能也广泛作用于心血管、肾脏、肝脏、肠道等。疫情暴发后,人们急于了解SARS-CoV-2的溯源、中间宿主、流行病学分析和治疗的靶点,ACE2身份的转变使其成为研究的热点之一。本文就目前ACE2在SARS-CoV-2和心血管等领域的研究进展进行简要综述,以期为SARS-CoV-2的溯源、跨物种传播、流行病学分析以及抗病毒药物靶点研究提供参考依据。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎 COVID-19 新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 受体 血管紧张素转换酶2(ace2)

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糖基化修饰对新型冠状病毒刺突蛋白受体结合区(Spike RBD)与受体ACE2结合影响的非变性质谱研究 被引量：1

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作者 罗宇翔 黄静 李惠琳 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期687-696,I0003,共11页

新型冠状病毒肺炎(新冠)疫情给人类生命安全和社会发展带来巨大威胁。新冠病毒表面的刺突(spike)蛋白受体结合区域(RBD)和宿主细胞膜表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合是病毒入侵的关键步骤。表征RBD和ACE2结合时的结构基础和动态变化... 新型冠状病毒肺炎(新冠)疫情给人类生命安全和社会发展带来巨大威胁。新冠病毒表面的刺突(spike)蛋白受体结合区域(RBD)和宿主细胞膜表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合是病毒入侵的关键步骤。表征RBD和ACE2结合时的结构基础和动态变化有利于理解病毒入侵的机制,为药物研发提供思路。结构质谱是蛋白质结构表征中广泛应用的方法,本工作通过非变性质谱(native MS)研究糖蛋白RBD和ACE2样品及其复合物。首先,优化了使用PNGase F切除RBD N-糖时的条件,对切糖后RBD蛋白的异质性进行分析,并进一步考察了切糖前后RBD与ACE2形成蛋白复合物的稳定性。结果表明,RBD N-糖的切除会导致其与ACE2形成的复合物稳定性降低。本工作可为RBD的N-糖基化作用分析提供参考,并为后续实验RBD是否需要切N-糖处理提供指导建议。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎(COVID-19) 刺突蛋白 受体结合区域(RBD) 血管紧张素转化酶2(ace2) 糖蛋白 N-糖酰胺酶F 非变性质谱

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基于高通量分子对接技术筛选干预COVID-19的潜在活性分子及中药 被引量：1

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作者 祁建宏 董芳旭 +2 位作者 王轲 刘子铭 朱锦璐 《北京联合大学学报》 CAS 2022年第1期44-53,71,共11页

2019年12月以来,由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(novel coronavirus disease 2019,COVID-19)在全球范围内流行和传播,具有较高的传染性、发... 2019年12月以来,由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(novel coronavirus disease 2019,COVID-19)在全球范围内流行和传播,具有较高的传染性、发病率和死亡率。目前,国内外仍缺乏特效且无明显副作用的治疗药物。基于COVID-19的特异性靶点(AXL、3CL pro、ACE2),利用高通量分子对接技术在TCMSP数据库中虚拟筛选潜在活性小分子,并从TCMSP、TCMIP和TCMID数据库中预测相应的潜在中药。结果显示,作用于AXL、3CL pro和ACE2的共靶点小分子有47个,包括萜类、生物碱类、黄酮类、醌类和苷类等,其中萜类所占比例最高。其中Chelidimerine与AXL和3CL pro的结合能力最强,可能是一种治疗COVID-19的潜在化合物。基于ADME和Lipinski规则,得到10个具有良好药代动力学特征的化合物。此外,预测获得了13味治疗COVID-19的高频中药。本实验获得的针对COVID-19的潜在活性分子(PAM)和潜在中药,可为后续的抗病毒活性研究、新药开发和临床应用提供有意义的参考。 展开更多

关键词 受体酪氨酸激酶(AXL) 血管紧张素转换酶2(ace2) 3C样蛋白酶(3CL pro) COVID-19 潜在活性分子 中药

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新型冠状病毒结合穿山甲ACE2受体的分子机制 被引量：2

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作者 仵丽丽 苏佳岐 +7 位作者 牛胜 陈茜 张艳芳 严景华 施一 齐建勋 高福 王奇慧 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第1期73-84,共12页

新型冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)的病原体为新型冠状病毒(COVID-19 virus),以下简称为新冠病毒,也称为severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2).研究认为,SARS-CoV-2可能起源于蝙蝠,但是其中... 新型冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)的病原体为新型冠状病毒(COVID-19 virus),以下简称为新冠病毒,也称为severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2).研究认为,SARS-CoV-2可能起源于蝙蝠,但是其中间宿主仍不清楚.目前,除蝙蝠外,穿山甲被证明是唯一携带SARS-CoV-2相关冠状病毒的哺乳动物,因而被认为是可能的中间宿主.本研究利用表面等离子共振实验(surface plasmon resonance,SPR)展现和分析了SARS-CoV-2和两种穿山甲冠状病毒(pangolin-CoVs,GX/P2V/2017和GD/1/2019)分别与穿山甲ACE2(pangolin ACE2,pACE2)和人ACE2(human ACE2,hACE2)受体的结合能力,解析了SARS-CoV-2刺突蛋白(spike,S)受体结合域(receptor binding domain,RBD)与pACE2复合物的晶体结构,分辨率为2.3Å,发现SARS-CoV-2 RBD结合pACE2的模式与结合hACE2或猫ACE2(cat ACE2,cACE2)相似,但与hACE2更相近.通过同源建模的方式,进一步模拟了GX/P2V/2017 RBD和GD/1/2019 RBD分别与pACE2和hACE2受体的结合,发现二者结合pACE2和hACE2的方式与SARS-CoV-2 RBD相似,但晶体结构或同源建模的数据暗示,上述3种RBDs结合pACE2的能力均稍弱于hACE2,这与SPR的结论一致.这些研究结果不仅有助于我们更好地理解SARS-CoV-2的进化,而且警示我们穿山甲冠状病毒具有感染人的潜力,强调了持续监测穿山甲携带病毒的重要性,以防止病毒外溢,引起人类疾病. 展开更多

关键词 新型冠状病毒 穿山甲冠状病毒 刺突蛋白受体结合域 血管紧张素转换酶(ace2) 晶体结构

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基于数据库挖掘以血管紧张素转化酶2为靶点治疗新型冠状病毒肺炎的潜在中药成分 被引量：1

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作者 李亚玲 张仃仃 姚国栋 《药物评价研究》 CAS 2020年第9期1693-1700,共8页

目的利用中药数据库寻找抑制血管紧张素转化酶2(ACE2)治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在中药成分。方法借助SYMMAP、TCMID、ETCM数据库,以ACE2为搜索词,筛选中药成分及中药材,利用GCBI平台来筛选与靶点相关的炎症因子,得到相关疾病... 目的利用中药数据库寻找抑制血管紧张素转化酶2(ACE2)治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在中药成分。方法借助SYMMAP、TCMID、ETCM数据库,以ACE2为搜索词,筛选中药成分及中药材,利用GCBI平台来筛选与靶点相关的炎症因子,得到相关疾病及核心网络图。将ACE2输入到STITCH数据库中,查询阳性对照药物。运用Sybyl(2.0)软件处理受体,中药成分与阳性对照药均和ACE2(1R42)及新型冠状病毒(SARS-CoV-2)3CL pro(6LU7)进行对接分析。应用Swiss ADME平台为对接结果较好的中药成分和阳性对照药构建雷达图。结果从数据库中找到7种具有抑制SARS-CoV-2潜在活性的中药成分和相关中药材。网络分析图中连接基因数最多的是CXCR4基因,它涉及到细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路可能是发挥治疗COVID-19的潜在机制。分子对接的结果表明,2’,4’,3,4-四羟基查尔酮、葛根素与SARS-CoV-2相关蛋白结合最好。结论2’,4’,3,4-四羟基查尔酮等中药成分可能是治疗COVID-19的潜在成分。 展开更多

关键词 血管紧张素转化酶2(ace2) 新型冠状病毒肺炎 数据库 2’ 4’ 3 4-四羟基查尔酮 葛根素

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