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非洲猪瘟病毒p54抗体胶体金试纸检测方法的建立 被引量：48
1
作者 张鑫宇 左伟勇 +2 位作者 朱善元 夏晓莉 孙怀昌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期281-285,共5页
为建立非洲猪瘟病毒（ASFV）p54抗体的胶体金检测方法，本研究原核表达并纯化了带有His标签的p54重组蛋白（aa51～aa183），胶体金标记后，喷涂玻璃纤维垫，分别以SPA和抗p54多克隆抗体作为检测线和质控线，制作ASFVp54抗体检测胶体金... 为建立非洲猪瘟病毒（ASFV）p54抗体的胶体金检测方法，本研究原核表达并纯化了带有His标签的p54重组蛋白（aa51～aa183），胶体金标记后，喷涂玻璃纤维垫，分别以SPA和抗p54多克隆抗体作为检测线和质控线，制作ASFVp54抗体检测胶体金免疫层析试纸。检测结果表明，该试纸条的敏感性为200ng／mL，对ASFV抗体阳性猪血清具有高度特异性，与猪其他病毒抗体阳性血清无交叉反应。对141份猪血清样品进行比对检测表明，在ASFV感染早期，胶体金试纸优于OIE推荐间接ELISA检测方法；以western blot检测方法作为参照，该试纸条检测疫区临床阳性样品的符合率比OIEELISA高。表明本研究建立的ASFV抗体免疫层析检测方法具有特异性强、敏感性高等特点，在ASF防控中具有趣好的应用前景。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 胶体金试纸 p54 抗体检测
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非洲猪瘟传入我国危害风险分析 被引量：37
2
作者 王君玮 张玲 +2 位作者 王志亮 王华 包静月 《中国动物检疫》 CAS 2009年第3期63-66,共4页
近年来,非洲猪瘟病毒疫情不断向非洲以外的欧洲、美洲国家蔓延,亚洲国家也面临非洲猪瘟侵入的严重威胁,引起各国政府及兽医科技工作者的高度关注。剖析目前该病在全球以及我国周边国家的流行状况,分析该病毒的病原学特点和传播特性,以... 近年来,非洲猪瘟病毒疫情不断向非洲以外的欧洲、美洲国家蔓延,亚洲国家也面临非洲猪瘟侵入的严重威胁,引起各国政府及兽医科技工作者的高度关注。剖析目前该病在全球以及我国周边国家的流行状况,分析该病毒的病原学特点和传播特性,以及传入我国的可能途径,再分析我国对该病的防控现状等因素,认为目前我国存在传入非洲猪瘟的较高风险,需要按照我国既定的新发、突发重大动物疫病防控方案加强对非洲猪瘟的防范。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 风险分析 危害 外来病 asfv
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非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：33
3
作者 李洪利 曹金山 +1 位作者 王君玮 张维 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期37-40,共4页
本研究为了建立一套检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的23株编码ASFV结构蛋白p72的基因序列,设计引物和探针,优化退火温度、Mg2+浓度和引物、探针浓度,生成标准曲线,进行重... 本研究为了建立一套检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的23株编码ASFV结构蛋白p72的基因序列,设计引物和探针,优化退火温度、Mg2+浓度和引物、探针浓度,生成标准曲线,进行重复性、敏感性、特异性试验,并检测样品。结果显示,优化的退火温度为60℃,Mg2+终浓度为4mmol/L,引物、探针终浓度分别为0.8、0.3μmol/L。重复性试验变异系数均小于1.3%,敏感性试验最低能够检测到10拷贝/μL的质粒,以其他5种猪病病毒和ASFV质粒为模板进行特异性试验,只有ASFV质粒出现扩增曲线。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法是快速、灵敏、特异的检测ASFV的方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 asfv 荧光定量PCR
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非洲猪瘟病毒及诊断技术研究进展 被引量：17
4
作者 康亚男 张小波 +7 位作者 刘涛 张倩 张英 朱秀同 赵玉龙 吴雅清 郑朝朝 刘博 《中国猪业》 2019年第8期86-88,共3页
非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员,病毒基因组庞大,能编码100种以上的蛋白质分子。20世纪20年代该病毒首次在非洲的肯尼亚被发现,经过几十年,已经在世界多个国家不断蔓延,我国于2018年8月首次发生非洲猪瘟疫情... 非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员,病毒基因组庞大,能编码100种以上的蛋白质分子。20世纪20年代该病毒首次在非洲的肯尼亚被发现,经过几十年,已经在世界多个国家不断蔓延,我国于2018年8月首次发生非洲猪瘟疫情。目前,非洲猪瘟抗原检测方法有红细胞吸附试验、荧光抗体试验、PCR技术、荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术等。抗体检测技术主要是酶联免疫吸附试验、胶体金试纸条法等。根据非洲猪瘟疫情在我国的发生情况,中国动物疫病预防控制中心组织了非洲猪瘟现场快速检测评审,对各种检测方法进行了技术把关,为非洲猪瘟病毒的检测和防控提供了技术保证。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 asfv 诊断 抗体 PCR
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非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：15
5
作者 王建华 陈小金 +5 位作者 赵丹 王玉玲 张俊哲 肖妍 董志珍 赵祥平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期907-911,共5页
为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸道综合征病毒(HP-PRRSV)的方法,本研究根据ASFV CP530R基因、CSFV 5'UTR基因和HP-PRRSV NSP2基因,分别设计了3对特异性引物和Taq Man水解探针,建立了同时... 为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸道综合征病毒(HP-PRRSV)的方法,本研究根据ASFV CP530R基因、CSFV 5'UTR基因和HP-PRRSV NSP2基因,分别设计了3对特异性引物和Taq Man水解探针,建立了同时检测这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法,并对其反应条件进行优化。结果表明,该方法仅对ASFV、CSFV和HP-PRRSV呈现特异性扩增,不与伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的DNA以及猪流行腹泻病毒和猪流感病毒的c DNA发生交叉反应;该方法对ASFV、CSFV和HP-PRRSV的最低检出量分别为61拷贝/μL、11拷贝/μL和41拷贝/μL;组内和组间重复性试验的Ct值变异系数均小于2.5%,具有良好的重现性。用该方法对276份临床样品进行ASFV、CSFV和HP-PRRSV的检测,所有样品的ASFV检测结果均为阴性,CSFV检测单阳性样品6份,HP-PRRSV检测单阳性样品22份,CSFV和HP-PRRSV检测双阳性样品4份。本研究建立的方法为临床样品中ASFV、CSFV和HP-PRRSV的同时检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重荧光定量RT-PCR
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非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究 被引量：14
6
作者 张鑫宇 孙怀昌 +2 位作者 刘文俊 夏晓莉 成大荣 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期55-58,共4页
对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出... 对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进行杂交,杂交产物加入吸附链霉亲和素的酶标板,利用亲和原理,捕获杂交产物,银染增强法对纳米金标记探针进行信号放大。结果表明:制备的纳米金探针经银染放大后,在酶标板中形成肉眼可见的黑色沉淀,可有效检测扩增出的p72基因,检测核酸浓度达到10 fmol·L-1,可用于ASFV快速诊断。 展开更多
关键词 纳米金探针 非洲猪瘟病毒 p72基因 检测 银染增强
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“西班牙模式”对我国非洲猪瘟防控的启示 被引量：13
7
作者 张涵 于书琴 +2 位作者 刘益君 张萌萌 吴克亮 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期147-152,共6页
西班牙是最早受非洲猪瘟困扰的国家之一,其创建了非洲猪瘟快速检测方法,研究清楚了非洲猪瘟的虫-蜱传染途径,经过35年努力已根除非洲猪瘟。本文基于西班牙防控非洲猪瘟的成功经验,总结非洲猪瘟防控的有效措施,为我国非洲猪瘟防控及非洲... 西班牙是最早受非洲猪瘟困扰的国家之一,其创建了非洲猪瘟快速检测方法,研究清楚了非洲猪瘟的虫-蜱传染途径,经过35年努力已根除非洲猪瘟。本文基于西班牙防控非洲猪瘟的成功经验,总结非洲猪瘟防控的有效措施,为我国非洲猪瘟防控及非洲猪瘟后养猪复产提供参考模式和防控经验借鉴。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 防控措施 养猪生产 西班牙模式
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5种猪病毒性传染病病原的多重PCR检测方法的建立 被引量：12
8
作者 冷依伊 任梅渗 +4 位作者 蒙正群 张鹏飞 杨泽晓 姚学萍 王印 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期123-126,共4页
为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、水疱性口炎病毒(VSV)、猪口蹄疫病毒(FMDV),猪瘟病毒(CSFV)以及猪伪狂犬病病毒(PRV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的参考病毒株序列,选择各病毒的保守序列设计5对特异性引物,通过... 为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、水疱性口炎病毒(VSV)、猪口蹄疫病毒(FMDV),猪瘟病毒(CSFV)以及猪伪狂犬病病毒(PRV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的参考病毒株序列,选择各病毒的保守序列设计5对特异性引物,通过优化反应条件,建立了一种可以同时快速检测以上5种病毒的多重RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对不同的细菌或病毒模板扩增结果均为阴性,特异性强;敏感性试验表明该方法对PRV、CSFV、ASFV、VSV和FMDV的核酸最少检出量分别为8.82×10~3拷贝/μL、6.87×10~4拷贝/μL、5.71拷贝/μL、4.93×10~4拷贝/μL和4.32×10~2拷贝/μL。以上结果表明该方法快速、灵敏、特异性强,对以上5种猪病病毒能够进行快速鉴别检测,为其临床诊断与流行病学调查提供了有效的检测方法。 展开更多
关键词 多重PCR 非洲猪瘟病毒 猪口蹄疫病毒 猪水疱性口炎病毒 猪瘟病毒 猪伪狂犬病病毒
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非洲猪瘟血清学诊断和疫苗研究进展 被引量：10
9
作者 栾宇轩 张毫 王承宝 《动物医学进展》 北大核心 2021年第3期78-82,共5页
非洲猪瘟是一种高度接触性猪传染病,自2018年8月传入我国后呈暴发性流行,目前防控形势依然严峻。因此,开发准确、快速的检测方法和安全、高效的疫苗具有重要意义。由于非洲猪瘟病毒复杂的生物学特性阻碍了疫苗的研发,目前尚无批准上市... 非洲猪瘟是一种高度接触性猪传染病,自2018年8月传入我国后呈暴发性流行,目前防控形势依然严峻。因此,开发准确、快速的检测方法和安全、高效的疫苗具有重要意义。由于非洲猪瘟病毒复杂的生物学特性阻碍了疫苗的研发,目前尚无批准上市的商品化疫苗。理论上健康猪只体内不存在非洲猪瘟病毒抗体,血清学检测具有高度的敏感性和特异性,如果检测到抗体反应阳性,即提示猪场出现了感染。论文综述了非洲猪瘟的各种血清学检测方法,以及灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗和病毒活载体疫苗的研究进展,以期为非洲猪瘟的诊断和疫苗的研发提供借鉴。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 血清学诊断 疫苗
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非洲猪瘟病毒E183L、B602L、K205R和A104R基因表达及诊断抗原筛选 被引量：10
10
作者 张鑫宇 陈宇 +2 位作者 刘文俊 夏晓莉 孙怀昌 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期3-5,9,共4页
为了获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)重组蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L,将Ba71V株的K205R、E183L、A104R和B602L基因分别亚克隆进行原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET-E183L、pET-B602L、pET-K205R和pET-... 为了获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)重组蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L,将Ba71V株的K205R、E183L、A104R和B602L基因分别亚克隆进行原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET-E183L、pET-B602L、pET-K205R和pET-A104R,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,纯化表达的蛋白,并进行Western blotting鉴定,结果4种重组蛋白与预期大小一致,且与ASFV抗体发生特异性反应。为了从表达的4种重组蛋白中筛选最佳诊断抗原,将其分别包被酶标板,间接ELISA检测ASFV阳性血清,发现重组蛋白pK205R、p54和pB602L血清学反应良好;在检测ASFV感染后第13天分离血清时,重组蛋白p54和pK205R效果更佳,这表明p54和pK205R重组蛋白是较好的诊断抗原,可用于ASFV感染后早期或中后期血清学诊断。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 重组蛋白 诊断抗原
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非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：10
11
作者 张路捷 高雁怩 +2 位作者 夏婷婷 白娟 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第6期111-115,共5页
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的单克隆抗体,以原核表达的重组p30蛋白为免疫原免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛选,获得2株能稳定分泌抗ASFV p30蛋白单克隆抗体的... 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的单克隆抗体,以原核表达的重组p30蛋白为免疫原免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛选,获得2株能稳定分泌抗ASFV p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。2株杂交瘤细胞从第10代开始均能稳定分泌抗体,细胞上清抗体效价均为1∶6400。亚型鉴定结果显示,2株单克隆抗体的重链均属于IgG1,轻链均为κ型。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,2株单克隆抗体均能与ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞发生特异性反应。试验结果为p30蛋白生物学和诊断方法研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 单克隆抗体
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非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体的制备与应用 被引量：9
12
作者 郝丽影 王彦伟 +6 位作者 孙玉洁 曹红梅 黄甜 逄文强 李向东 邓均华 田克恭 《河南农业科学》 北大核心 2020年第10期124-129,共6页
为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫学诊断试剂,利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白,制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体,建立检测ASFV的胶体金免疫层析法(GICA)。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET28a-P30,实现了重组P30蛋白的可溶性表... 为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫学诊断试剂,利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白,制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体,建立检测ASFV的胶体金免疫层析法(GICA)。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET28a-P30,实现了重组P30蛋白的可溶性表达,且该重组蛋白与ASFV阳性血清可发生特异性反应;制备了10株稳定分泌P30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价均高于1∶40000,与ASFV具有良好的反应性,且不与其他常见猪源病毒反应;利用2株单克隆抗体建立胶体金免疫层析法,可用于ASFV的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 P30蛋白 大肠杆菌表达系统 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
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非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立 被引量：5
13
作者 徐玲玉 曹琛福 +4 位作者 李中圣 陈俊宏 柳腾飞 王新凯 贾伟新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期813-821,共9页
旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原,并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体,采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件,并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性... 旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原,并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体,采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件,并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性和符合性评价。结果显示,抗原最佳包被浓度为2.0μg·mL^(-1),抗原包被温度及时间为4℃过夜,被检血清稀释度为1∶40,酶标单抗稀释度为1∶1000,被检血清作用时间为1 h,酶标单抗作用时间为30 min,底物作用时间为10 min。经阴、阳性样品检测和特异性、敏感性试验,当临界值阻断率≥55.2%时,判定为阳性,当阻断率<43.4%时,判定为阴性,介于两者之间判定为可疑。该方法与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、猪流感病毒、猪伪狂犬病病毒阳性血清不发生交叉反应,特异性好。批内重复试验及批间重复试验的变异系数(CV)均在10%以内。将该方法进行初步应用,并与商品化ELISA试剂盒进行符合性试验,两者的检测符合率为98%。综上表明,建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于ASFV临床样品的抗体检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 asfv 阻断ELISA p54蛋白 单克隆抗体
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检测非洲猪瘟病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立 被引量：1
14
作者 林彦星 翁巧玉 +11 位作者 吴江 黄超华 史卫军 金业 陈鹏 张彩虹 杨俊兴 阮周曦 曹琛福 陈兵 曾少灵 花群义 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期7-11,共5页
利用非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白不同抗原表位的2株单克隆抗体,1株作为捕获抗体,另1株用辣根过氧化物酶(HRP)标记后作为检测抗体,采用方阵法对ELISA反应条件进行优化,建立了检测ASFV抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果显示,该方法中捕获抗... 利用非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白不同抗原表位的2株单克隆抗体,1株作为捕获抗体,另1株用辣根过氧化物酶(HRP)标记后作为检测抗体,采用方阵法对ELISA反应条件进行优化,建立了检测ASFV抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果显示,该方法中捕获抗体包被质量浓度为1.25 mg/L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1∶4000。通过试验确定该方法的临界值为0.299,当样品D_(450)值≥0.3,且P/N大于2时,判定为阳性。该双单抗夹心ELISA方法可特异性检测ASFV抗原,其他抗原检测结果均为阴性,特异性强;重复性好,批内和批间变异系数(CV)均小于8%。应用本研究建立的方法与荧光PCR方法同时对225份临床样品进行检测,总符合率为96.89%。结果表明,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于ASFV抗原的大量样品检测,为ASF防控提供了技术支持。 展开更多
关键词 asfv 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
原文传递
探析非洲猪瘟的传播途径 被引量：4
15
作者 冯会利 王海棚 +3 位作者 赵文斌 刘守铉 银岭 朱金凤 《中国猪业》 2020年第6期53-58,64,共7页
非洲猪瘟(ASF)自2018年在我国暴发以来,给许多养猪户和猪肉生产商造成严重的经济损失,现已成为我国养猪业的主要威胁。目前,研究表明非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要传播途径是:通过直接或间接接触带毒猪或其液体,摄入受污染的饲料、猪肉、猪... 非洲猪瘟(ASF)自2018年在我国暴发以来,给许多养猪户和猪肉生产商造成严重的经济损失,现已成为我国养猪业的主要威胁。目前,研究表明非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要传播途径是:通过直接或间接接触带毒猪或其液体,摄入受污染的饲料、猪肉、猪产品,接触受污染的载体表面或媒介(衣物、鞋类、车辆、农具等)而感染。但是ASF传播途径还存在重要的知识缺口,研究通过环境间接传播ASFV的方式、受污染饲料摄入的最小感染剂量、受感染野猪和家猪之间有效接触的可能性、康复的猪传播ASFV的可能性以及野猪种群中潜在的病毒持久性及人类行为对ASFV传播的影响,显得尤为迫切。这些将为优化目前ASF的干预措施和制定新的防控策略提供更好的科学依据,从而降低ASFV传播的风险。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 asfv 传播途径 干预措施
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非洲猪瘟病毒复制相关基因E165R启动子预测及其甲基化分析 被引量：4
16
作者 张彦兵 张石磊 +2 位作者 刘良波 谢全亮 孙延鸣 《中国猪业》 2021年第4期51-56,共6页
ASF(非洲猪瘟)是由ASFV(非洲猪瘟病毒)引起猪的一种烈性、急性、出血性传染病。ASFV基因组为双股线性DNA(170~190 kb),可编码150~200种病毒,已报道ASFV的E165R基因与其复制相关,E165R编码的dUTPase蛋白结构已被解析。本文旨在利用软件... ASF(非洲猪瘟)是由ASFV(非洲猪瘟病毒)引起猪的一种烈性、急性、出血性传染病。ASFV基因组为双股线性DNA(170~190 kb),可编码150~200种病毒,已报道ASFV的E165R基因与其复制相关,E165R编码的dUTPase蛋白结构已被解析。本文旨在利用软件和数据库对基因E165R的启动子进行生物信息学分析,进而分析其甲基化。首先,针对不同毒株的E165R启动子序列进行同源进化树分析,结果显示E165R启动子序列高度保守;然后,利用软件和数据库分析E165R启动子活性区域和转录因子,发现E165R启动子含有3个活性区域,启动子含有Sp1、c-Jun和C/EBPalp等6种转录因子,在Sp1、Oct-1和C/EBPalp结合序列上含有cg甲基化位点;最后,成功预测E165R启动子甲基化区域并设计了甲基化检测引物。本研究,首次从DNA甲基化角度出发,对ASFV的E165R基因启动子进行生物信息学分析,为下一步研究DNA甲基化影响ASFV的复制打下基础。 展开更多
关键词 asfv E165R 生物信息 启动子 DNA甲基化
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ASFV解旋酶D1133L蛋白表达和抗体检测方法的建立及初步应用 被引量：4
17
作者 侯景 申超超 +9 位作者 张大俊 杨博 史喜绢 张婷 杨泽晓 张克山 郑海学 李丹 党文 刘湘涛 《江西农业学报》 CAS 2021年第6期1-6,共6页
为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133... 为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133L的抗体应答情况。结果显示:成功表达纯化了D1133L蛋白,以此为抗原建立了ELISA抗体检测方法,该方法特异性高,灵敏性强,其检测结果与市售试剂盒检测结果的符合率达100%。家猪在感染ASFV后,针对D1133L的抗体在第5天可被检测到,在第7天抗体水平达到顶峰。 展开更多
关键词 asfv 解旋酶 D1133L 抗体检测 应用
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基于模式病毒评价商品化消毒剂对非洲猪瘟病毒的消杀效果
18
作者 倪征 朱寅初 +6 位作者 孙冰冰 云涛 陈柳 徐辉 叶伟成 华炯钢 张存 《浙江农业科学》 2024年第8期1944-1949,共6页
为了解常用商品化消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的消杀效果,为其消毒剂的筛选提供参考。该研究利用伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)与ASFV病毒理化特征的相似性,以PRV作为替代标识毒株,建立了消毒剂细胞评价模型,于体外检测了3种市售... 为了解常用商品化消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的消杀效果,为其消毒剂的筛选提供参考。该研究利用伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)与ASFV病毒理化特征的相似性,以PRV作为替代标识毒株,建立了消毒剂细胞评价模型,于体外检测了3种市售消毒剂对生长在BHK-21细胞中PRV的灭活效果。分别从3类消毒剂的不同方面对消毒剂抗病毒作用的影响进行消杀效果的评估。研究显示,有效含量为0.125 g·L^(-1)的戊二醛癸甲溴铵溶液,以及有效含量为0.5 g·L^(-1)的过氧乙酸溶液和二氯异氰脲酸钠,在室温作用30 min,均可有效灭活PRV。其中,过氧乙酸综合评价最优;戊二醛癸甲溴铵性价比最高,但所需消杀时间较长,受低温影响比较严重。该研究可为养殖场防控ASFV的感染提供消毒剂筛选的理论依据,并对ASFV的消毒标准提供参考。 展开更多
关键词 消毒剂细胞评价模型 asfv PRV 杀灭病毒效果
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非洲猪瘟病毒pS273R蛋白酶的可溶性表达与胞外活性鉴定 被引量：4
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作者 王彦伟 王孟月 +6 位作者 张素玲 吴芃 白露露 王同燕 李向东 逄文强 田克恭 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期879-884,共6页
pS273R是ASFV编码的涉及多聚蛋白切割的蛋白酶,也是ASFV核心壳层的组成成分。利用分子伴侣在大肠杆菌表达非洲猪瘟pS273R蛋白酶,IPTG诱导可表达可溶性pS273R重组蛋白,分子量约31 kD。经Western Blot鉴定,表达的蛋白可与ASF阳性血清发生... pS273R是ASFV编码的涉及多聚蛋白切割的蛋白酶,也是ASFV核心壳层的组成成分。利用分子伴侣在大肠杆菌表达非洲猪瘟pS273R蛋白酶,IPTG诱导可表达可溶性pS273R重组蛋白,分子量约31 kD。经Western Blot鉴定,表达的蛋白可与ASF阳性血清发生特异性反应,能够酶切杆状病毒表达的pp62,具有胞外活性。这些结果为研究ASFV组装机制和病毒复制抑制药物的开发提供了重要的生物材料。 展开更多
关键词 asfv 重组pS273R蛋白 分子伴侣 胞外活性
原文传递
非洲猪瘟病毒研究进展
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作者 张诚程 刘威哲 +3 位作者 卿馨文 全家霖 胡广安 陈金军 《家畜生态学报》 北大核心 2024年第11期83-91,共9页
非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)是双股线性DNA病毒,属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)、非洲猪瘟病毒属(Asfivirus),是引起非洲猪瘟(African Swine fever,ASF)的元凶。近5年来,ASF席卷全球,导致大量的生猪被捕杀,给全球... 非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)是双股线性DNA病毒,属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)、非洲猪瘟病毒属(Asfivirus),是引起非洲猪瘟(African Swine fever,ASF)的元凶。近5年来,ASF席卷全球,导致大量的生猪被捕杀,给全球养殖业造成了重大损失。由于ASFV的宿主和生存特点不断改变,其有效治疗方法仍未研发成功,致病机制也未完全明了,ASF对养殖业仍有潜在的威胁。该文对ASFV的分子病理机制、分子检测技术和治疗防控等方面进行了综述,旨在为进一步研究与应对ASFV提供理论依据。 展开更多
关键词 猪 asfv 病原学 感染机制 临床症状 检测与治疗 防护措施
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