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新疆南疆地区某规模牛场牛病毒性腹泻病毒检测及基因分型 被引量：1
1
作者 鱼海玮 黄跃杰 +3 位作者 朱广艺 马纾薏 王旭 胡建军 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第7期59-64,共6页
为掌握新疆南疆某规模牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染的基因型,将该规模牛场所采集的血清样本经BVDV抗原ELISA检测阳性后作为PCR检测样本,针对BVDV基因组中5′-UTR、N^(pro)基因设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,然后将目的基因进行测序... 为掌握新疆南疆某规模牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染的基因型,将该规模牛场所采集的血清样本经BVDV抗原ELISA检测阳性后作为PCR检测样本,针对BVDV基因组中5′-UTR、N^(pro)基因设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,然后将目的基因进行测序、BLAST比对和序列分析,并构建系统发育树。结果显示,该规模牛场4份样本皆为BVDV-1c型。本研究结果为南疆规模牛场制定科学合理的牛病毒性腹泻防控措施以及选择相应疫苗提供了理论参考。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病 5′-utr基因 N 基因 系统进化树
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牛病毒性腹泻病病毒荧光定量PCR检测体系的建立与评价 被引量：8
2
作者 史利军 孙宇 +3 位作者 尹惠琼 孙卫华 吕茂民 章金刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1544-1546,共3页
基于实时荧光定量PCR技术建立了一种有效地检测牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)核酸的方法。对BVDV基因组进行同源比对,选取5′UTR区作为扩增目的区,经软件分析后设计特异扩增引物,扩增片段长度为203 bp。选用SYB... 基于实时荧光定量PCR技术建立了一种有效地检测牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)核酸的方法。对BVDV基因组进行同源比对,选取5′UTR区作为扩增目的区,经软件分析后设计特异扩增引物,扩增片段长度为203 bp。选用SYBR染料作为扩增时信号指示剂,经扩增曲线分析表明,建立的方法可有效地检测BVDV。检测体系可检测到102copies/μL的样品拷贝数。故本研究建立的BVDV实时定量检测体系可用于易感动物、牛源血液生物制品及其他可能感染或污染BVDV样品的检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 实时荧光定量PCR 5′-utr区基因
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河南省牛肠道病毒的分离、鉴定及流行病学调查 被引量：7
3
作者 钱明珠 胡俊英 +6 位作者 王旭 林倩 李欣 张泽财 蔡梦露 郑博伟 王新平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第8期67-70,72,169,共6页
为了解河南省不同地区的牛群是否存在牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)感染及其感染情况,以便为BEV感染的防控提供流行病学资料,试验应用吉林大学动物检验检疫教研室建立的检测BEV抗原的双抗体夹心ELISA方法对采自河南省不同地区牛场... 为了解河南省不同地区的牛群是否存在牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)感染及其感染情况,以便为BEV感染的防控提供流行病学资料,试验应用吉林大学动物检验检疫教研室建立的检测BEV抗原的双抗体夹心ELISA方法对采自河南省不同地区牛场的363份粪便样品进行检测,并对部分检测为阳性的病料进行病毒的分离培养、电镜观察及免疫学鉴定。将分离得到的阳性病毒毒株接种MDBK细胞后进行BEV 5′UTR基因的RT-PCR扩增及序列测定。结果表明:牛群的BEV感染率高达21.49%,不同地区牛群均存在程度不同的BEV感染率(2.50%～46.67%)。对ELISA检测为阳性的部分粪便样品进行病毒的分离培养、电镜观察及免疫学鉴定,获得了两株BEV毒株(BEV-HeN-YR2、BEV-HeN-YR91)。分离毒株的5′UTR基因序列的RT-PCR扩增产物测序后比对分析,两株BEV毒株均为F种肠道病毒。说明河南省不同地区牛群存在不同程度的BEV感染,且感染的BEV主要为F种。 展开更多
关键词 河南省 牛肠道病毒 流行病学调查 5′utr基因 免疫过氧化物酶单层细胞试验
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致细胞病变型新疆BVDV基因2型毒株的分离鉴定及其致病性 被引量：5
4
作者 李祯 郭妍婷 +10 位作者 陈俊贞 胡新艳 赵新艳 董文丽 贺渊秀 王万顺 李泽宇 姚刚 冉多良 付强 史慧君 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期646-654,共9页
为了解新疆博乐地区某牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及致病性,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测粪便样品,将阳性病料接种至胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney,MDBK),盲传1... 为了解新疆博乐地区某牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及致病性,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测粪便样品,将阳性病料接种至胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney,MDBK),盲传15代后通过5轮蚀斑纯化试验得到1株致细胞病变型(cytopathic type,CP)BVDV毒株;通过理化性质检测、间接免疫荧光试验、电镜观察、基因序列分析及小鼠致病性试验对该毒株进行鉴定。结果显示:成功分离纯化得到1株CP BVDV毒株,将其命名为BVDV-BL314株;盲传15代BVDV毒株接种至MDBK细胞培养引起明显的细胞皱缩、变圆、碎裂、脱落、产生合胞体等致细胞病变效应(cytopathogenic effect,CPE);测定该毒株的滴度为2×10^(8) TCID50/0.1mL;理化性质检测发现该病毒对乙醚、氯仿等有机溶剂敏感,对酸碱敏感;56℃处理30min可显著性降低病毒活性;间接免疫荧光试验检测胞浆中可见特异性荧光;电镜观察该病毒呈球形,直径为40~60nm;遗传进化分析显示该分离株与BVDV-125c株有较近的亲缘关系,属于BVDV-2a基因亚型;免疫BALB/c小鼠后,剖检表现为多器官肿大、出血、质地变脆,边缘钝圆,无光泽等症状;镜检可见炎性细胞浸润、出血等变化。结果表明,分离纯化得到1株致细胞病变型新疆地方性BVDV基因2型毒株,且具有较强的致病性,将为新疆BVDV流行病学调查及致病机制研究提供依据。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 致细胞病变型 5′utr基因 基因2型
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牛病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立 被引量：3
5
作者 张康 王丹阳 +4 位作者 王旭荣 张凯 张景艳 王磊 李建喜 《中国奶牛》 2018年第10期32-35,共4页
根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了BVDV的RT-PCR检测方法。该方法从BVDV标准毒株NADL中扩增出了279bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、牛传染性鼻气管炎病... 根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了BVDV的RT-PCR检测方法。该方法从BVDV标准毒株NADL中扩增出了279bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒、MDBK细胞等的扩增结果均为阴性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10-1×TCID50。提取9份细胞毒总RNA后,进行一步法RT-PCR扩增可获得一致的检测结果,说明该方法重复性很好。应用该方法对45份临床疑似患牛的样品进行检测,结果检出4份阳性,表明该方法具有较好的临床应用性,且检测结果与参考实验室检测结果完全相符,可用于BVDV的快速诊断。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 5′utr基因 一步法RT-PCR 诊断
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