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Changes of chlorogenic acid content and its synthesis-associated genes expression in Xuehua pear fruit during development 被引量:14
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作者 HE Jin-gang CHENG Yu-dou +2 位作者 GUAN Jun-feng GE Wen-ya ZHAO Zhe 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2017年第2期471-477,共7页
According to synthetic pathway of plant chlorogenic acid (CGA), the expression patterns of genes encoding enzymes that are associated with CGA synthesis were studied in normally developed Xuehua pear fruit. The stud... According to synthetic pathway of plant chlorogenic acid (CGA), the expression patterns of genes encoding enzymes that are associated with CGA synthesis were studied in normally developed Xuehua pear fruit. The study demonstrated that CGA content in peel and flesh of Xuehua pear decreased as fruit development progressed, with a higher level in peel. The expression levels of PbPAL 1, PbPAL2, PbC3H, PbC4H, Pb4CL 1, Pb4CL2, Pb4CL6, PbHC T1 and PbHC T3 genes decreased in fruit, which was consistent with the pattern of variation in CGA content. That indicated that these genes might be key genes for influencing fruit CGA synthesis in Xuehua pear. However, Pb4CL7 gene expression profile is not consistent with variation of CGA content, hence, it may not be a key gene involved in CGA synthesis. 展开更多
关键词 cinnamate 4-hydroxylase gene hydroxy cinnamoyl CoA shikimate/quinic acid hydroxycinnamoyl transferasegene p-coumarate 3'-hydroxylase gene 4-hydroxycinnamoyl-CoA ligase gene phenylalanine ammonia lyasegene Xuehua pear
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植物类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因的研究进展 被引量:29
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作者 侯杰 佟玲 +2 位作者 崔国新 许志茹 李玉花 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期641-647,共7页
本文介绍了植物F3’H基因的克隆、序列分析、表达分析、系统进化及转录调控的研究进展。
关键词 花青素 类黄酮3’.羟化酶基因 表达特性 转录调控
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山葡萄中类黄酮3’-羟化酶基因(F3’H)cDNA的克隆和分析 被引量:18
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作者 刘海峰 杨成君 +2 位作者 赵权 李波 王军 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1186-1190,共5页
用RT-PCR和SMART RACE技术克隆了山葡萄F3’H基因的全长cDNA序列。其GenBank登陆号为FJ645766,F3’HcDNA全长1844bp,包括开放阅读框1530bp,编码509个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为56.14kDa,等电点为8.24,是不稳定蛋白。该基因属... 用RT-PCR和SMART RACE技术克隆了山葡萄F3’H基因的全长cDNA序列。其GenBank登陆号为FJ645766,F3’HcDNA全长1844bp,包括开放阅读框1530bp,编码509个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为56.14kDa,等电点为8.24,是不稳定蛋白。该基因属于P450超基因家族,不包含信号肽。氨基酸序列与欧亚种葡萄(AJ8803537)、矢车菊(FJ753550)、金鱼草(DQ272592)、大豆(AB061212)和玉米(EU966228)等植物的F3’H氨基酸序列的同源性系数分别为98%、77%、72%、74%和57%。 展开更多
关键词 山葡萄 CDNA克隆 类黄酮3’-羟化酶
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银杏类黄酮3’羟化酶基因的克隆与表达分析 被引量:15
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作者 李琳玲 程华 +1 位作者 陈小玲 程水源 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期643-654,共12页
利用简并PCR和RACE技术从银杏叶片中分离到黄酮3’羟化酶基因Gb F3’H的c DNA全长序列(Gen Bank No.:KP056747)。其全长为2 144 bp,含有一个1 671 bp的开放式阅读框(ORF),编码556个氨基酸序列,预测氨基酸大小为63.47 k D,等电点为7.71... 利用简并PCR和RACE技术从银杏叶片中分离到黄酮3’羟化酶基因Gb F3’H的c DNA全长序列(Gen Bank No.:KP056747)。其全长为2 144 bp,含有一个1 671 bp的开放式阅读框(ORF),编码556个氨基酸序列,预测氨基酸大小为63.47 k D,等电点为7.71。蛋白质同源序列分析表明,Gb F3’H与其他物种F3’H同源性较低,而与菊苣(Cichorium intybus)同源性最高,为56.3%。同源建模分析显示Gb F3’H与P450家族蛋白的三维结构及活性位点高度相似,最终定位于微粒体膜上。进化树分析结果显示Gb F3’H与其他植物分化较早,序列差异较大。组织表达分析显示,Gb F3’H在银杏不同组织中都有表达,其中雄蕊表达水平最高,其次为成熟叶。诱导表达分析显示,Gb F3’H转录水平受UV-B、6-BA、SA、ABA和IAA影响诱导上调,而伤害处理对其表达量无明显影响。Gb F3’H诱导表达模式与调控银杏黄酮含量变化呈正相关,其上游调控序列存在与黄酮调控相关的顺式元件,意味着Gb F3’H可能参与了银杏黄酮类物质的合成代谢,并与黄酮类物质向花青素合成分流有关。 展开更多
关键词 银杏 类黄酮3’羟化酶 黄酮 表达调控
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灰毡毛忍冬LmC3H1基因的克隆及表达模式与绿原酸含量相关性分析 被引量:11
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作者 陈娅 王安琪 +6 位作者 刘聪 龙雨青 刘霞 曾娟 李灿 刘湘丹 周日宝 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期167-175,共9页
目的:以灰毡毛忍冬为材料,克隆对-香豆酸3-羟化酶(LmC3H1)基因,进行生物信息学和表达模式分析,结合绿原酸含量,研究推测灰毡毛忍冬LmC3H1基因的功能。方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术克隆LmC3H1基因的全长cDNA序列,对... 目的:以灰毡毛忍冬为材料,克隆对-香豆酸3-羟化酶(LmC3H1)基因,进行生物信息学和表达模式分析,结合绿原酸含量,研究推测灰毡毛忍冬LmC3H1基因的功能。方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术克隆LmC3H1基因的全长cDNA序列,对该序列进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和HPLC分别测定灰毡毛忍冬茎、叶及不同花期花中LmC3H1的相对表达量及绿原酸含量。结果:克隆得LmC3H1(GenBank:MN177695)基因,开放阅读框(ORF)长度为1533 bp,编码510个氨基酸,推测其分子式为C2618H4134N718O727 S22,相对分子质量为58005.32,等电点8.92,为亲水性蛋白,定位于叶绿体中,具有跨膜区域LLLIPAVLFLISLVYPLI,含有细胞色素P450的保守结构域CYTOCHROME_P450(422-433 aa);Real-time PCR结果显示,LmC3H1在灰毡毛忍冬茎、叶及不同花期花有不同程度的表达,其中在花发育阶段,白色花蕾期相对表达量最高,花蕾初期及白色开花期次之;白色花蕾期花与茎、叶比,花的相对表达量最高,叶的最低;HPLC结果显示,从绿白色花蕾期到金黄色开花期绿原酸含量呈上升趋势,金黄色开花期含量最高,不同器官中,花中绿原酸最高,茎最低。结论:克隆得到灰毡毛忍冬LmC3H1基因,推测LmC3H1可能参与灰毡毛忍冬花绿原酸的生物合成。该研究为进一步研究该基因的功能及探究灰毡毛忍冬绿原酸生物合成和调节机制提供了依据,同时为遗传改良灰毡毛忍冬品质奠定了基础。 展开更多
关键词 灰毡毛忍冬 对-香豆酸3-羟化酶(C3H) 基因克隆 生物信息学 表达分析 含量测定
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芜菁的类黄酮3'羟化酶基因克隆和UV-A诱导表达特性 被引量:10
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作者 许志茹 崔国新 +2 位作者 李春雷 孙燕 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期931-935,共5页
用UV-A处理‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁块根24h后提取总RNA,以RT-PCR方法分别克隆到BrF3'H1和BrF3'H2基因。BrF3'H1和BrF3'H2的开放读码框为1536bp,均编码511个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3'H1和BrF3'H2与... 用UV-A处理‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁块根24h后提取总RNA,以RT-PCR方法分别克隆到BrF3'H1和BrF3'H2基因。BrF3'H1和BrF3'H2的开放读码框为1536bp,均编码511个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3'H1和BrF3'H2与甘蓝型油菜F3'H的同源性达99%,在第45~476的肽段含有细胞色素P450家族基因的结构域。BrF3'H1和BrF3'H2基因有高度同源性,核苷酸序列的17个位点处有差异,推导的氨基酸序列在5个位点处有差异。Northern杂交结果显示,UV-A可以诱导BrF3'H1表达,基因的表达量与UV-A处理时间呈相关,UV-A不能诱导BrF3'H2基因表达。 展开更多
关键词 芜菁 类黄酮3’羟化酶基因 基因克隆 序列分析 基因表达
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过量表达紫茎泽兰类黄酮3’-羟化酶基因对转基因烟草POD、PAL活性的影响 被引量:6
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作者 张松焕 李春奇 +2 位作者 郭惠明 裴熙祥 程红梅 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第3期98-101,共4页
紫茎泽兰具有强烈的化感作用,可抑制周围其他植物生长。类黄酮3’-羟化酶(F3’H)属于细胞色素P450(CYP)单加氧酶,具有催化多种依赖NADPH或NADH的底物氧化反应的功能,在植物化感作用中行使一定的功能。利用转F3’H基因的烟草为实验材料,... 紫茎泽兰具有强烈的化感作用,可抑制周围其他植物生长。类黄酮3’-羟化酶(F3’H)属于细胞色素P450(CYP)单加氧酶,具有催化多种依赖NADPH或NADH的底物氧化反应的功能,在植物化感作用中行使一定的功能。利用转F3’H基因的烟草为实验材料,分别测定转F3’H基因植株、转pB I121空载体植株和野生型植株的过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,结果表明,转F3’H基因植株的POD活性分别是野生型植株和转空载体植株的3.8倍和2.0倍,而PAL活性则相应为4.0倍和2.0倍。由此推断F3’H基因在抵御伤害方面具有重要作用。 展开更多
关键词 类黄酮3’-羟化酶 过表达 POD PAL
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飞机草类黄酮3’-羟化酶基因(CoF3’H)的克隆及其在烟草中的表达 被引量:6
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作者 何海旺 潘华清 +1 位作者 张铙丹 何龙飞 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期479-486,共8页
利用RT-PCR和RACE技术从飞机草中克隆得到1628 bp的类黄酮3’-羟化酶c DNA的全长序列,命名为Co F3’H,Gen Bank登录号为HQ268505.1。Co F3’H基因的编码区长度为1524 bp,编码507个氨基酸。氨基酸序列含P450蛋白结构域和半胱氨酸亚铁血... 利用RT-PCR和RACE技术从飞机草中克隆得到1628 bp的类黄酮3’-羟化酶c DNA的全长序列,命名为Co F3’H,Gen Bank登录号为HQ268505.1。Co F3’H基因的编码区长度为1524 bp,编码507个氨基酸。氨基酸序列含P450蛋白结构域和半胱氨酸亚铁血红素结合域保守区(F××G×R×C×G),利用DNAMAN软件比对显示,Co F3’H与其他植物的F3’H蛋白的同源性很高。通过农杆菌介导成功地将Co F3’H基因导入烟草,T2代的转Co F3’H基因烟草植株的黄酮含量显著高于野生型。说明Co F3’H在黄酮的生物合成中起重要作用,为后续研究飞机草的化感作用及综合利用提供基础。 展开更多
关键词 飞机草 类黄酮3’-羟化酶 克隆 表达
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橡胶树F3’H基因克隆及其功能分析 被引量:6
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作者 范月婷 辛士超 +4 位作者 NAYCHI Koko 畅娇 黄天带 黄华孙 华玉伟 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2020年第9期1733-1740,共8页
从橡胶树叶片转录组数据库中调取花青素合成途径中的关键酶类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因序列信息,通过RT-PCR扩增得到2个橡胶树F3’H基因,分别命名为HbF3’H1和HbF3’H2。通过荧光定量PCR分析发现,只有HbF3’H1基因在不同发育时期的橡... 从橡胶树叶片转录组数据库中调取花青素合成途径中的关键酶类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因序列信息,通过RT-PCR扩增得到2个橡胶树F3’H基因,分别命名为HbF3’H1和HbF3’H2。通过荧光定量PCR分析发现,只有HbF3’H1基因在不同发育时期的橡胶树叶片和嫩茎中的表达水平与花青素的合成积累趋势完全一致。HbF3’H1所编码的蛋白属于P450超家族,具有保守的F3’H结构域,而且HbF3’H1基因的启动子中包含多种环境效应元件,说明HbF3’H1基因的表达受环境因子调控。通过农杆菌转化烟草发现,过表达HbF3’H1基因的烟草花瓣大量累积花青素,其颜色较非转基因烟草显著加深,同时,荧光定量PCR发现HbF3’H1表达水平与转基因烟草花瓣颜色呈正相关,说明HbF3’H1基因表达促进花青素的累积。本研究为阐明橡胶树花青素代谢途径奠定基础。 展开更多
关键词 橡胶树 花青素 类黄酮3’-羟化酶 转基因烟草
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橄榄类黄酮3'-羟化酶CaF3'H基因的克隆及其表达特性分析 被引量:5
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作者 黄敏杰 文志丰 +2 位作者 池毓斌 彭真汾 陈清西 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期839-847,共9页
以‘清榄一号’橄榄(Canarium album)果肉为材料,通过RACE技术克隆得到橄榄类黄酮3'-羟化酶(F3'H)cDNA序列全长,命名为CaF3'H(GenBank登录号KY189088.1)。CaF3'H全长为1 649 bp,包含一个1 554 bp开放阅读框(ORF),编码51... 以‘清榄一号’橄榄(Canarium album)果肉为材料,通过RACE技术克隆得到橄榄类黄酮3'-羟化酶(F3'H)cDNA序列全长,命名为CaF3'H(GenBank登录号KY189088.1)。CaF3'H全长为1 649 bp,包含一个1 554 bp开放阅读框(ORF),编码517个氨基酸,5'和3'非编码区(UTR)长度分别为40 bp和55 bp,编码的氨基酸序列含有P450结构域和半胱氨酸亚铁血红素结合域保守区。氨基酸多重比较分析表明:橄榄和芒果的氨基酸序列相似性为78.89%,较之于其他物种相对最高。蛋白结构预测结果显示,CaF3'H蛋白呈弱亲水性,存在跨膜结构域,没有信号肽。实时荧光定量PCR分析显示,CaF3'H在‘清榄一号’和‘檀香’2个橄榄栽培品种的表达量在花后50 d达到最大值,此后其表达量随果实的成熟呈现出波动,总体表达量比花后50 d都低,这与橄榄生长发育时期多酚含量的变化趋势相符,推测CaF3'H基因在调控果实多酚含量过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 橄榄 类黄酮3'-羟化酶(F3'H) 基因克隆 实时荧光定量PCR
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水芹类黄酮3'-羟化酶基因的克隆与表达特性分析 被引量:5
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作者 康美玲 冯凯 +3 位作者 段希 王柯文 王枫 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期282-290,共9页
类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3'H)属于细胞色素P450家族(cytochromeP450,CYP450),在植物主要成色物质花青素的合成中发挥重要作用。本实验以‘八卦洲水芹’以及紫色叶柄突变型水芹为实验材料,利用RT-PCR方法,... 类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3'H)属于细胞色素P450家族(cytochromeP450,CYP450),在植物主要成色物质花青素的合成中发挥重要作用。本实验以‘八卦洲水芹’以及紫色叶柄突变型水芹为实验材料,利用RT-PCR方法,从紫色叶柄突变型水芹的cDNA中克隆得到编码类黄酮3'-羟化酶的基因,命名为OjF3'H1。序列分析显示,OjF3'H1基因全长1575bp,共编码524个氨基酸。OjF3'H1蛋白相对分子质量为58292.59,理论等电点为6.77。系统进化分析显示,OjF3'H1蛋白具有高度保守性,与同属伞形科的胡萝卜F3'H1进化关系最近。OjF3'H1编码的蛋白属于疏水蛋白,无序化比例为5.53%,空间结构主要由α-螺旋和β-折叠组成。实时定量PCR分析显示,OjF3'H1在不同品种水芹茎中相对表达量有明显差异,紫色叶柄突变型水芹中OjF3'H1的表达量明显比‘八卦洲水芹’中高。 展开更多
关键词 水芹 类黄酮3'-羟化酶基因 克隆 叶柄 表达分析
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苦荞类黄酮3′-羟化酶基因的克隆及其冷胁迫下的组织表达 被引量:5
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作者 李双江 朱冬寅 +3 位作者 秦东 李成磊 陈惠 吴琦 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1300-1306,共7页
目的克隆苦荞Fagopyrum tataricum类黄酮3′-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3′H)基因全长cDNA序列,对该基因进行序列分析和原核表达,以及冷胁迫条件下该基因表达量和花青素定量测定。方法采用同源克隆和RACE技术从苦荞花蕾中克隆... 目的克隆苦荞Fagopyrum tataricum类黄酮3′-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3′H)基因全长cDNA序列,对该基因进行序列分析和原核表达,以及冷胁迫条件下该基因表达量和花青素定量测定。方法采用同源克隆和RACE技术从苦荞花蕾中克隆苦荞F3′H(FtF3′H);构建FtF3′H原核表达载体pET-30b(+)-FtF3′H,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达;采用半定量RT-PCR分析FtF3′H基因在冷胁迫下芽期苦荞不同组织的表达量,并采用分光光度计法测量花青素量。结果苦荞FtF3′H基因含有一个1 470 bp的ORF,编码489个氨基酸,编码蛋白属于细胞色素P450家族;SDS-PAGE分析表明,目的蛋白相对分子质量54 000;芽期苦荞冷胁迫处理前后子叶和胚轴中FtF3′H表达量以及花青素量的变化分析表明,冷胁迫显著增强了FtF3′H的表达和花青素的积累(P<0.05)。结论成功克隆FtF3′H基因,并实现了FtF3′H基因的异源表达;芽期苦荞在冷胁迫下,可能通过提高FtF3′H基因表达量进而促进花青素的合成,参与其抗逆生理过程。 展开更多
关键词 苦荞 类黄酮3’-羟化酶 基因克隆 原核表达 冷胁迫 花青素
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比利时杜鹃花类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因克隆及功能分析
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作者 吴泽航 杨中义 +3 位作者 鄢毅铖 贾永红 吴月燕 谢晓鸿 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期251-259,共9页
【目的】类黄酮3’-羟化酶(flavanone 3’-hydroxylase,F3’H)是植物花青素合成过程中的关键酶,探究比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort)F3’H基因的功能及表达特性。【方法】以比利时杜鹃花不同发育时期的花瓣及盛花期的根、茎... 【目的】类黄酮3’-羟化酶(flavanone 3’-hydroxylase,F3’H)是植物花青素合成过程中的关键酶,探究比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort)F3’H基因的功能及表达特性。【方法】以比利时杜鹃花不同发育时期的花瓣及盛花期的根、茎、叶为实验材料,从比利时杜鹃花转录本数据库中筛选类黄酮生物合成通路关键酶类黄酮3’-羟化酶基因序列信息并进行生物信息学分析,利用反转录(RT-PCR)技术克隆RhF3’H基因;利用紫外分光光度计测定了比利时杜鹃花花瓣不同时期的花青素含量,利用RT-qPCR技术对不同发育时期花瓣和成熟期的不同组织进行RhF3’H基因表达量分析;采用Gateway技术构建过表达载体35S:RhF3’H-GFP重组载体进行亚细胞定位验证;构建p1302-RhF3’H过表达载体对比利时杜鹃花花瓣进行侵染。【结果】成功获得比利时杜鹃花RhF3’H基因长度为1557 bp,编码518个氨基酸,具有保守的F3’H结构域,属于P450超家族;系统进化树分析显示,比利时杜鹃花RhF3’H与龙眼和荔枝F3’H蛋白亲缘关系最近;RT-qPCR结果显示,RhF3’H在比利时杜鹃花不同花瓣时期和根、茎、叶组织中均有表达,在不同花瓣发育时期中,盛开期和衰败期中RhF3’H基因的表达量较高,与花青素含量结果相一致;亚细胞定位分析显示,RhF3’H主要存在于细胞膜上;成功构建P1302-RhF3’H瞬时过表达载体,相较于CK和p1302,p1302-RhF3’H在杜鹃花花瓣中显著高表达,其花青素含量也显著增加。【结论】RhF3’H基因在花瓣细胞膜中表达,表达模式与花青素积累趋势一致;过表达RhF3’H基因促进了花青素的合成。 展开更多
关键词 比利时杜鹃花 类黄酮3’-羟化酶(F3’H) 花青素 亚细胞定位 瞬时表达
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国产龙血竭基原植物类黄酮3'-羟化酶基因(F3'H)克隆及表达分析
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作者 李爽 赵宏友 +5 位作者 杨春勇 王艳芳 李戈 彭建明 严珍 王延谦 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第19期6310-6317,共8页
类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)作为植物类黄酮代谢的关键酶之一,参与龙血树中龙血竭树脂的生物合成。为了揭示国产龙血竭基原龙血树中F3'H基因序列和表达模式等信息,本研究以剑叶龙血树、海南龙血树... 类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)作为植物类黄酮代谢的关键酶之一,参与龙血树中龙血竭树脂的生物合成。为了揭示国产龙血竭基原龙血树中F3'H基因序列和表达模式等信息,本研究以剑叶龙血树、海南龙血树和岩棕为研究对象,采用同源克隆法克隆3种龙血竭基原植物的F3'H基因序列并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分析其在不同组织的表达量。结果表明,在3种龙血树中均获得一条编码区长1533 bp的F3'H基因序列,编码510个氨基酸残基。生物信息学分析表明,它们的序列同源性达到99.57%,氨基酸序列的理化性质、二级结构和三级结构几乎完全一致。系统进化分析表明龙血树属植物F3'H基因聚为一支且进化上非常接近,在F3'H进化树上龙血树属并未与同科植物聚为一类,单子叶植物和双子叶植物亦并未分别聚为一类。RT-qPCR分析发现,剑叶龙血树中F3'H在茎中的表达量远高于根和叶,海南龙血树和岩棕中F3'H在茎中的表达量低于根和叶。本研究有利于揭示F3'H在龙血竭生物合成中的潜在作用,为龙血竭人工结脂技术开发提供一定分子基础。 展开更多
关键词 龙血树 龙血竭 类黄酮3'-羟化酶
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芡叶类黄酮-3'-羟化酶(F3'H)基因表达分析及功能验证 被引量:4
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作者 景宗慧 尹梦娇 +4 位作者 王前 鲍锞 周佩娜 刘潺潺 吴啟南 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第18期4712-4720,共9页
芡叶中含有丰富的花青素,花青素合成是类黄酮合成路径重要分支之一,其中类黄酮-3'-羟化酶(F3'H)可参与生成花青素合成所需的重要的中间产物。该研究依据芡Euryale ferox叶转录组数据,克隆获得芡叶F3'H的cDNA序列,命名为EfF3... 芡叶中含有丰富的花青素,花青素合成是类黄酮合成路径重要分支之一,其中类黄酮-3'-羟化酶(F3'H)可参与生成花青素合成所需的重要的中间产物。该研究依据芡Euryale ferox叶转录组数据,克隆获得芡叶F3'H的cDNA序列,命名为EfF3'H。通过生物信息学与qRT-PCR技术检测EfF3'H在芡的不同栽培种及不同时期基因表达,进而分析该基因与黄酮类物质合成的相关性,并通过真核表达系统验证了EfF3'H的生物学功能。结果显示,EfF3'H包含长1566 bp开放阅读框,编码521个氨基酸,属亲水性跨膜蛋白,预测定位于细胞质膜,结合保守结构域预测分析,该蛋白属于细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)家族;qRT-PCR结果表明,EfF3'H表达在不同栽培种之间具有显著差异性,且其表达水平与芡叶中的相关类黄酮物质含量呈高度相关性。真核表达研究表明,EfF3'H蛋白具有将山柰酚转化为槲皮素的生物活性。该研究首次克隆了芡中EfF3'H的cDNA序列,并验证了其生物功能,为进一步开发芡叶资源提供科学依据,同时为进一步解析药用植物中黄酮类物质的生物合成途径奠定了基础。 展开更多
关键词 类黄酮-3'-羟化酶 QRT-PCR 真核表达 槲皮素
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一个类黄酮3'-羟化酶参与多星韭花色素生物合成的功能解析
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作者 孔德静 梁进丽 +4 位作者 宫秋玲 俞沙沙 梁琳 孙威 鞠志刚 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2024年第4期581-587,共7页
类黄酮3'-羟化酶(F3'H)在花色素苷生物合成过程中起关键作用。明确多星韭F3'H在花色素苷生物合成中的功能,将为多星韭花色形成及改良研究提供基因资源。基于转录组数据从多星韭花朵中克隆获得AwF3'H,并对其进行生物信... 类黄酮3'-羟化酶(F3'H)在花色素苷生物合成过程中起关键作用。明确多星韭F3'H在花色素苷生物合成中的功能,将为多星韭花色形成及改良研究提供基因资源。基于转录组数据从多星韭花朵中克隆获得AwF3'H,并对其进行生物信息学分析,利用Real time PCR对AwF3'H1的表达模式进行分析,并利用蘸花法将AwF3'H转入拟南芥中,同时对转基因植株进行表型观察及花色素苷检测分析。结果表明,Aw F3'H的ORF全长为1545 bp,编码514个氨基酸,属于细胞色素P450家族成员,与洋葱AcF3'H的亲缘关系最近;在所检测组织均有表达,但在雄蕊中表达最高,根中表达最低;与野生型拟南芥相比,转AwF3'H拟南芥T2代幼苗子叶及下胚轴颜色明显加深,矢车菊素与天竺葵素类花色苷积累量显著增加。表明AwF3'H具有类黄酮3'-羟化酶的功能。 展开更多
关键词 多星韭 基因功能验证 类黄酮3'-羟化酶 表达分析 花青素
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梅花南京红须F3′H全长基于gDNA的TAIL-PCR法克隆(英文) 被引量:3
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作者 赵昶灵 郭维明 +1 位作者 杨清 陈俊愉 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期2378-2385,共8页
根据从基因组DNA扩增到的梅花‘南京红须’类黄酮3'-羟化酶基因片段(469 bp)没计3条嵌套的特异性引物,与6条短的随机简并引物组成的引物库分别用热不对称交错PCR法从‘南京红须’基因组DNA扩增该片段的5'和3'旁侧序列。获... 根据从基因组DNA扩增到的梅花‘南京红须’类黄酮3'-羟化酶基因片段(469 bp)没计3条嵌套的特异性引物,与6条短的随机简并引物组成的引物库分别用热不对称交错PCR法从‘南京红须’基因组DNA扩增该片段的5'和3'旁侧序列。获得的5'和3'旁侧序列分别长1443 bp和1200 bp。将两个旁侧序列在469 bp片段的基础上拼接得到‘南京红须’全长为2 144 bp的类黄酮3'-羟化酶基因,被命名为pmhxF3'H。序列分析表明:该基因与11条正式发表的、已递交到GenBank的类黄酮3'-羟化酶基因的cDNA序列在总体上有52.21%的一致性.具有3个内含子,其启动子含有1个“AGGA盒”、1个“GC盒”和3个“TATA盒”。这是首次用热不对称交错PCR法从木本植物的基因组DNA克隆到类黄酮3'-羟化酶基因。本研究将为梅花花色的分子生物学机理探索、花色的基因工程改良提供参考。 展开更多
关键词 梅花 '南京红须’ 类黄酬3’羟化酶基因 全长 基因组DNA TAIL-PCR 克隆
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芜菁类黄酮3'-羟化酶基因的功能鉴定及启动子初步分析 被引量:4
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作者 许志茹 马静 +2 位作者 崔国新 刘通 刘关君 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期572-582,共11页
类黄酮3'-羟化酶(Flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)是细胞色素P450单加氧酶,在花青素合成途径中催化二氢山奈酚生成二氢槲皮素,进而形成矢车菊色素。利用津田芜菁Br F3'H1和赤丸芜菁Br F3'H2基因构建过量表达载体后... 类黄酮3'-羟化酶(Flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)是细胞色素P450单加氧酶,在花青素合成途径中催化二氢山奈酚生成二氢槲皮素,进而形成矢车菊色素。利用津田芜菁Br F3'H1和赤丸芜菁Br F3'H2基因构建过量表达载体后遗传转化烟草,转基因植株的花色加深。通过染色体步移法克隆了Br F3'H1和Br F3'H2基因上游846和851 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,Br F3'H1P和Br F3'H2P均包含TATA box、CAAT box、光调控元件、MRE、ABRE、ATGCAAAT-motif、ERE、O2-site、RY-element、LTR等多个顺式作用元件;二者的核苷酸序列在7个位点存在差异。利用Br F3'H1P和Br F3'H2P序列替换p CAMBIA1301植物表达载体的35S启动子后遗传转化烟草。GUS组织化学染色结果表明,Br F3'H1P和Br F3'H2P序列均能驱动GUS基因表达。通过PCR方法获得了Br F3'H1P和Br F3'H2P的一系列缺失片段,融合GUS基因后转化烟草。染色结果显示,Br F3'H1P和Br F3'H2P系列缺失片段均具有起始GUS基因表达的活性。Br F3'H1和Br F3'H2基因的功能鉴定及启动子的初步分析将为揭示津田芜菁和赤丸芜菁F3'H基因的光诱导表达调控机理奠定研究基础。 展开更多
关键词 芜菁 类黄酮3'-羟化酶基因 遗传转化 启动子 功能分析
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水稻赤霉素3β羟化酶基因(OsGA3ox1)同源基因的生物信息学分析 被引量:4
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作者 殷小林 张超 +3 位作者 王有成 袁定阳 谭炎宁 段美娟 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1054-1060,共7页
赤霉素3β-双氧化酶(GA3ox)是赤霉素(GA)生物合成过程中的关键酶,它通过催化活性GA的形成来影响植物生长发育。为了了解水稻GA3ox家族成员的基本情况,本研究利用生物信息学方法对其家族成员进行了预测、蛋白结构及其聚类分析。结果表明... 赤霉素3β-双氧化酶(GA3ox)是赤霉素(GA)生物合成过程中的关键酶,它通过催化活性GA的形成来影响植物生长发育。为了了解水稻GA3ox家族成员的基本情况,本研究利用生物信息学方法对其家族成员进行了预测、蛋白结构及其聚类分析。结果表明:第一,以OsGA3ox1 (LOC_Os05g08540)作为靶序列,利用BlastP在gramene数据库中共查询到了24个同源基因,同源性为80%~90%;第二,经NCBI在线分析发现,各同源基因的蛋白产物都含有2OG-FeII_Oxy和DIOX_N两个保守结构域,其结构域中都具有与Fe^(2+)结合的2个组氨酸残基(H)和1个天冬氨酸残基(D)以及能结合α-酮戊二酸的1个精氨酸残基(R)和1个丝氨酸残基(S),并且还观察到这些蛋白间具有相同或相似的α-螺旋和β-转角等二级结构,因此,推测它们同属于GA3ox家族;第三,进一步地,利用MEGA7.0构建了该家族的系统进化树,并将该家族分成ClassⅠ和ClassⅡ两个亚族,各亚族分别包括了16个和8个成员。本研究结果为深入研究水稻OsGA3ox基因的生物学功能提供参考依据。 展开更多
关键词 水稻 赤霉素(GA) 赤霉素3β羟化酶基因(OsGA3ox1) 生物信息学分析
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芸薹属类黄酮3′-羟化酶基因家族RNA干扰载体的构建 被引量:4
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作者 陈倩 闫楠 +1 位作者 马丽娟 柴友荣 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期8-11,共4页
目的:构建芸薹属类黄酮3′羟化酶(F3′H)基因家族的RNAi载体。方法:采用PCR克隆了607bp的芸薹属F3’H基因家族的RNAi片段,将其反义片段、正义片段分别采用NcoⅠ+AatⅡ、BamHⅠ+XbaⅠ插入到改进型植物RNAi基础载体pF-GC5941M的启动子与... 目的:构建芸薹属类黄酮3′羟化酶(F3′H)基因家族的RNAi载体。方法:采用PCR克隆了607bp的芸薹属F3’H基因家族的RNAi片段,将其反义片段、正义片段分别采用NcoⅠ+AatⅡ、BamHⅠ+XbaⅠ插入到改进型植物RNAi基础载体pF-GC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成11366bp的重组载体pFGC5941M-BF3′HI(简称为pBF3′HI),复合PCR鉴定后转化根癌农杆菌,获得工程菌株。结果:载体构建成功。结论:构建了RNAi载体pBF3′HI,可用于芸薹属植物花色、种皮色泽、茎叶色彩等性状的机理研究和遗传修饰。 展开更多
关键词 芸薹属 类黄酮3′-羟化酶(F3′H) RNAI 载体
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