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反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导恶变细胞中miR-494和miR-22的功能及PTEN的表达 被引量:10
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作者 刘林华 蒋义国 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期379-382,共4页
目的分析反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化人支气管上皮细胞第30代(16HBE-T30)及其前期第15代细胞(16HBE-T15)miR-494及miR-22的表达水平,探讨其在化学致癌过程中的作用及对靶基因PTEN抑癌基因的调控。方法以16HBE-T30... 目的分析反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化人支气管上皮细胞第30代(16HBE-T30)及其前期第15代细胞(16HBE-T15)miR-494及miR-22的表达水平,探讨其在化学致癌过程中的作用及对靶基因PTEN抑癌基因的调控。方法以16HBE-T30和16HBE-T15细胞为实验组,溶剂处理组分别为其相应的对照组细胞(16HBE-N30和16HBE-N15),用茎环结构逆转录引物定量RT-PCR检测四组细胞miR-494及miR-22成熟体表达水平。运用定量RT-PCR和Western blotting分别检测四组细胞PTEN mRNA和蛋白表达水平。运用miRNA前体及抑制剂对miNRA表达进行调控后,再检测PTEN的表达改变,并进行报告基因信号改变、细胞凋亡、软琼脂集落形成率等分析。结果 16HBE-T30中miR-494和miR-22表达水平分别是16HBE-N30的12.6和2.3倍,而16HBE-T15中miR-494、miR-22表达水平较16HBE-N15下降。16HBE-T30中PTEN蛋白表达量低于16HBE-N30。与前体阴性对照组相比,上调的miR-494和miR-22分别将PTEN蛋白的表达量降低至0.8和0.5倍,而降低的miR-494和miR-22分别将PTEN蛋白的表达量上调至1.3和1.5倍。在16HBE-T30细胞中,miR-494和miR-22表达下调均增强caspase-3/7活力,miR-494和miR-22表达上调则减弱其活力。miR-494和miR-22下调能够降低转化细胞的恶性程度。结论 anti-BPDE恶性转化细胞中miR-494和miR-22在转录后水平反向调控靶基因PTEN的表达,这两种miRNA在anti-BPDE致癌过程中发挥类癌基因作用。 展开更多
关键词 反式-7 8-二羟-9 10-环氧苯并芘 microRNA PTEN基因 人支气管上皮细胞
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叶绿酸对反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘抗细胞转化活性的影响 被引量:5
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作者 纪卫东 蒋义国 +1 位作者 王敏 冯苏妹 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期335-337,共3页
目的 研究叶绿酸对反式 7,8 二羟 9,10 环氧苯并芘 (反式 BPDE)诱发的SV40 largeT抗原永生化的人支气管上皮细胞系 (16HBE)恶性转化的抑制作用。方法 在反式 BPDE诱导的细胞转化整个过程中 ,分别加入浓度为 10、5 0和 10 0 μmol/L... 目的 研究叶绿酸对反式 7,8 二羟 9,10 环氧苯并芘 (反式 BPDE)诱发的SV40 largeT抗原永生化的人支气管上皮细胞系 (16HBE)恶性转化的抑制作用。方法 在反式 BPDE诱导的细胞转化整个过程中 ,分别加入浓度为 10、5 0和 10 0 μmol/L的叶绿酸 ,应用刀豆凝集素 (ConA)凝集实验、软琼脂集落形成实验和裸鼠成瘤实验进行细胞恶性度鉴定。结果 细胞培养至 2 5代 ,发现叶绿酸和反式 BPDE共处理组细胞与反式 BPDE单独处理组细胞相比 ,前者ConA凝集时间延长 ;叶绿酸和反式 BPDE共处理组细胞在软琼脂中集落形成率分别为 7 4‰、11 4‰和 14 4‰ ,明显低于反式 BPDE单独处理组 (19 6‰ ) ,且有剂量反应关系 ;各处理组细胞均能在裸鼠体内成瘤 ,叶绿酸和BPDE共处理组在裸鼠体内生长的肿瘤体积分别为 (0 4 3± 0 13)cm3 、(0 2 2± 0 0 4 )cm3 、(0 10± 0 0 6 )cm3 ,明显小于BPDE单独处理组的 (1 71± 0 37)cm3 ,并有剂量依赖关系 ,肿瘤组织经病理学证实为低分化鳞状细胞癌。结论 体外试验显示叶绿酸具有一定的抗细胞恶变能力。 展开更多
关键词 叶绿酸 反式-7 8-二羟-9 10-环氧苯并芘 抗细胞转化活性 肿瘤 实验
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miR-542-3p在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导致癌中的作用 被引量:4
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作者 赵垚 刘焕英 +1 位作者 李远奇 蒋义国 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期416-421,共6页
目的 探讨反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导恶变的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中miR-542-3p在细胞恶性转化中的作用.方法 运用实时荧光定量PCR法验证miR-542-3p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)中的表达水平... 目的 探讨反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导恶变的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中miR-542-3p在细胞恶性转化中的作用.方法 运用实时荧光定量PCR法验证miR-542-3p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)中的表达水平.瞬时转染化学合成的miR-542-3p模拟物上调16HBE-T的miR-542-3p成熟体表达水平,检测miR-542-3p表达水平改变对16HBE-T细胞的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡、软琼脂克隆形成率及细胞迁移能力的影响.结果 转染前16HBE-T中miR-542-3p成熟体表达水平是16HBE-N的(39.08±6.95)%(t=15.18,P<0.05).瞬时转染化学合成的miR-542-3p模拟物上调16HBE-T的miR-542-3p成熟体表达水平后,16HBE-T中miR-542-3p成熟体表达水平是转染前的(5.23±0.55)倍(t=17.37,P<0.05).miR-542-3p模拟物组(mimic组)与16HBE-T组(100%)相比,增殖率下降到(62.06±5.61)%(t=-17.28,P<0.05),G0/G1期比例上升到(74.76±4.86)%(t=4.53,P<0.05),克隆形成率降低为(5.87±0.67)%(t=-6.66,P<0.05).mimic组生长细胞覆盖区面积比(0.31±0.08)明显降低(t=-6.78,P<0.05),凋亡无改变.结论 miR-542-3p表达水平升高会降低anti-BPDE恶性转化细胞的增殖能力和恶性程度,推断miR-542-3p是类抑癌基因,在anti-BPDE诱导致癌过程中低表达的miR-542-3p可能是促成恶性转化的重要因素. 展开更多
关键词 反式-7 8-二羟-9 10-环氧苯并芘 MICRORNA miR-542-3p 人支气管上皮细胞 细胞转化
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抑制性消减杂交技术检测反式二羟环氧苯并芘转化细胞与正常细胞基因表达差异 被引量:2
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作者 安社娟 陈家堃 +2 位作者 陈学敏 赵艳丰 刘莉莉 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期651-653,共3页
目的 筛选 7,8 二羟 9,10 环氧苯并芘 (BPDE)转化细胞与正常细胞的基因表达差异。方法 以BPDE转化支气管上皮细胞 (16HBE)细胞为检测子 (tester) ,正常 16HBE细胞为驱动子 (driver) ,应用抑制性消减杂交方法构建cDNA消减文库 ,经 2... 目的 筛选 7,8 二羟 9,10 环氧苯并芘 (BPDE)转化细胞与正常细胞的基因表达差异。方法 以BPDE转化支气管上皮细胞 (16HBE)细胞为检测子 (tester) ,正常 16HBE细胞为驱动子 (driver) ,应用抑制性消减杂交方法构建cDNA消减文库 ,经 2次消减杂交和 2次PCR后 ,将巢式PCR产物插入TA载体克隆 ,随机挑选克隆进行鉴定和测序 ,并用斑点杂交法验证其同源性 ,将所得序列进行GenBank的BLAST分析。结果 发现了 7个在BPDE转化细胞中高表达的基因 ,为翻译延长因子 1α1、线粒体基因、溶解物载体家族 2 5、EphA2、酪氨酸 3 加单氧酶 色氨酸 - 5 -加单氧酶活化蛋白、乳酸脱氢酶A、TRIM2 8等 ,尚有一条在GenBank的已知基因中找不到对应序列 ,在EST序列中找到全长对应序列。结论 发现的高表达基因可能在BPDE的致癌机制中起作用 ,另外 ,可能有未知基因与BPDE的恶性转化作用有关。 展开更多
关键词 7 8-二羟-9 10-环氧苯并芘 基因 抑制性消减杂交
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miR-17-5p与反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导转化的人支气管上皮细胞生物学特性的关系研究 被引量:2
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作者 吴延 蒋义国 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期383-386,共4页
目的探讨miR-17-5p对反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)的生物学特性方面的影响。方法运用逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)的相对... 目的探讨miR-17-5p对反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)的生物学特性方面的影响。方法运用逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)的相对表达水平。通过瞬时转染miRNA模拟物及抑制剂,改变16HBE-T中miR-17-5p的表达,分析转染后16HBE-T的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡和软琼脂集落形成率等。结果转染前,16HBE-T中miR-17-5p表达水平是16HBE-N的2.35倍;转染后,转染miR-17-5p抑制剂组和转染miR-17-5p模拟物组中的miR-17-5p表达水平分别是16HBE-T的0.45和1.71倍。与抑制剂阴性对照组相比,转染了miR-17-5p抑制剂的试验组出现增殖能力下降、细胞周期阻滞和凋亡上升、克隆形成率下降。相反,转染了miR-17-5p模拟物的试验组与模拟物阴性对照组相比出现了增殖能力上调、凋亡减少,克隆形成率升高。结论 anti-BPDE恶性转化细胞中miR-17-5p成熟体表达水平改变能够影响16HBE-T的增殖能力、细胞周期和凋亡、克隆形成率,推断miR-17-5p在anti-BPDE致癌过程中发挥类癌基因作用。 展开更多
关键词 反式-7 8-二羟-9 10-环氧苯并芘 MICRORNA miR-17-5p 人支气管上皮细胞
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E-cadherin、Cyclin D1和Cyclin E在叶绿酸抗细胞恶变中表达研究 被引量:1
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作者 傅娟 蒋义国 +1 位作者 宾晓农 陈学敏 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期678-681,共4页
目的研究叶绿酸干预反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(反式-BPDE)恶性转化人支气管上皮细胞系16HBE中的细胞周期相关基因及蛋白的影响。方法应用半定量RT-PCR技术检测叶绿酸干预反式-BPDE恶性转化细胞中各组细胞E-cadherin基因mRNA表达差... 目的研究叶绿酸干预反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(反式-BPDE)恶性转化人支气管上皮细胞系16HBE中的细胞周期相关基因及蛋白的影响。方法应用半定量RT-PCR技术检测叶绿酸干预反式-BPDE恶性转化细胞中各组细胞E-cadherin基因mRNA表达差异;荧光细胞免疫化学技术检测E-cadherin、Cyclin D1及Cyclin E蛋白水平。结果反式-BPDE诱导恶变细胞组出现E-cadherin基因在mRNA和蛋白水平表达缺失,而经叶绿酸抗转化组该基因表达正常。Cyclin D1、Cyclin E蛋白在正常对照组中表达阴性,而在反式-BPDE恶性转化组中上述两种蛋白呈现高表达,通过叶绿酸干预抗转化组中其表达明显下调。结论叶绿酸抗反式-BPDE致细胞恶变作用与其避免抑癌基因E-cadherin的表达缺失有关。叶绿酸在拮抗反式-BPDE致癌中具有影响细胞周期素CyclinD1和CyclinE表达作用。 展开更多
关键词 叶绿酸反式-7 8-二羟-9 10-环氧苯并芘 细胞周期素 抗恶变
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miR-493-5p在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导恶变细胞中的功能研究 被引量:1
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作者 赵垚 《科技信息》 2011年第29期46-47,共2页
目的:探讨在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中低表达的mir-493-5p在化学致癌物致癌过程中的作用。方法:运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miR-493-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16... 目的:探讨在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中低表达的mir-493-5p在化学致癌物致癌过程中的作用。方法:运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miR-493-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)的表达水平。瞬时转染miRNA的模拟物,改变16HBE-T中miR-493-5p的表达,检测转染后16HBE-T细胞的增殖能力。结果:16HBE-N细胞中mir-493-5p的表达水平是16HBE-T的0.28倍,在16HBE-T组过表达mir-493-5p后实验组细胞增殖能力下降。结论:mir-493-5p表达水平的改变对细胞的增殖能力有影响,在anti-BPDE恶性转化细胞中低表达的mir-493-5p可能发挥着类抑癌基因的作用。 展开更多
关键词 反式-7 8-二羟-9 10-环氧苯并芘 MICRORNA mir-493-5p 人支气管上皮细胞
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