Part 5＇ UTR region of pig SRPK1 gene was cloned by inverse PCR （I-PCR）, then a 425 bp gene sequence was acquired. A promoter region in -1--309 bp was predicted by online tool （TFSEARCH） and 32 binding sites of tr...Part 5＇ UTR region of pig SRPK1 gene was cloned by inverse PCR （I-PCR）, then a 425 bp gene sequence was acquired. A promoter region in -1--309 bp was predicted by online tool （TFSEARCH） and 32 binding sites of transcription with scores higher than 85 were getten, of which scores of Spl, MyoD, and HSF2 were over 90. Some of these binding sites of transcription factors were connected with promoters, but TATA-box, which was important to gene expression, hadn＇t been found in this region. By using PCR-SSCP method to search SNPs this part （5＇ UTR of SRPK1 in pig）, total of 40 Large White pigs were obtained as the research objects, but no polymorphism were found. Thus, 5＇ UTR of SRPK1 was speculated with a characteristic of high conservation, while it might have been directly or indirectly selected in commercial breeding. The paper provided a further feature of SRPK1 gene in molecular genetics.展开更多
目的利用SYBR Green I荧光PCR反应方法建立一种准确、快速、便捷检测溶藻弧菌的方法。方法根据溶藻弧菌toxR基因保守区域设计引物,建立检测溶藻弧菌SYBR Green I荧光PCR检测方法,利用8株溶藻分离株以及26株其他种属细菌进行特异性和灵...目的利用SYBR Green I荧光PCR反应方法建立一种准确、快速、便捷检测溶藻弧菌的方法。方法根据溶藻弧菌toxR基因保守区域设计引物,建立检测溶藻弧菌SYBR Green I荧光PCR检测方法,利用8株溶藻分离株以及26株其他种属细菌进行特异性和灵敏度评价。利用含不同溶藻弧菌基因组拷贝数(自2×106拷贝/μl至2×100拷贝/μl)的样品进行灵敏度评价。同时,对平行样品分别应用普通PCR法和TaqMan探针实时PCR法进行检测,并对3种检测方法的特异度及灵敏度进行比较。结果基于toxR基因的SYBR Green I荧光PCR检测对全部8株溶藻弧菌检测为阳性,检测下限为2×101拷贝/μl,而26株其他种属细菌均为阴性。与普通PCR法和TaqMan探针实时PCR法比较,SYBR Green I荧光PCR检测方法灵敏度更高。结论用toxR基因作为靶基因检测溶藻弧菌的单重SYBR Green I荧光PCR检测方法,提升了检测速度,有良好的实际应用前景。展开更多
根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR!Green I实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR Green I实时PCR方法。同时针对油菜FatA基因设计出内源基因。结果表明:应用实时PCR技术,利用SYB...根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR!Green I实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR Green I实时PCR方法。同时针对油菜FatA基因设计出内源基因。结果表明:应用实时PCR技术,利用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为80.2(±0.5)。SYBR Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是鉴定转基因油菜RT73品系的新方法。展开更多
目的基于SYBR Green I荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium.MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插人序列ISI311为检测靶标设计引物,在60 C的退火温度下,建立鉴...目的基于SYBR Green I荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium.MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插人序列ISI311为检测靶标设计引物,在60 C的退火温度下,建立鉴定MA的SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA.检测限为5.6x 102 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列ISI311为基础建立的SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。展开更多
为建立灵敏、可靠的食品中鸭源性成分鉴定方法,确定了一对可特异地检测出牛肉中所掺杂鸭肉成分的引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时PCR技术检测鸭肉的方法。结果表明:利用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术可检测到鸭肉DNA,通过熔解曲线能有效地区...为建立灵敏、可靠的食品中鸭源性成分鉴定方法,确定了一对可特异地检测出牛肉中所掺杂鸭肉成分的引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时PCR技术检测鸭肉的方法。结果表明:利用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术可检测到鸭肉DNA,通过熔解曲线能有效地区分特异性产物,检测灵敏度可达到1pg DNA。同时利用该方法可检测出熟牛肉、鸭肉混合样品中的鸭肉成分。SYBR Green Ⅰ实时PCR方法能快速、特异、灵敏的检测鸭肉成分。展开更多
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文摘Part 5＇ UTR region of pig SRPK1 gene was cloned by inverse PCR （I-PCR）, then a 425 bp gene sequence was acquired. A promoter region in -1--309 bp was predicted by online tool （TFSEARCH） and 32 binding sites of transcription with scores higher than 85 were getten, of which scores of Spl, MyoD, and HSF2 were over 90. Some of these binding sites of transcription factors were connected with promoters, but TATA-box, which was important to gene expression, hadn＇t been found in this region. By using PCR-SSCP method to search SNPs this part （5＇ UTR of SRPK1 in pig）, total of 40 Large White pigs were obtained as the research objects, but no polymorphism were found. Thus, 5＇ UTR of SRPK1 was speculated with a characteristic of high conservation, while it might have been directly or indirectly selected in commercial breeding. The paper provided a further feature of SRPK1 gene in molecular genetics.
文摘目的利用SYBR Green I荧光PCR反应方法建立一种准确、快速、便捷检测溶藻弧菌的方法。方法根据溶藻弧菌toxR基因保守区域设计引物,建立检测溶藻弧菌SYBR Green I荧光PCR检测方法,利用8株溶藻分离株以及26株其他种属细菌进行特异性和灵敏度评价。利用含不同溶藻弧菌基因组拷贝数(自2×106拷贝/μl至2×100拷贝/μl)的样品进行灵敏度评价。同时,对平行样品分别应用普通PCR法和TaqMan探针实时PCR法进行检测,并对3种检测方法的特异度及灵敏度进行比较。结果基于toxR基因的SYBR Green I荧光PCR检测对全部8株溶藻弧菌检测为阳性,检测下限为2×101拷贝/μl,而26株其他种属细菌均为阴性。与普通PCR法和TaqMan探针实时PCR法比较,SYBR Green I荧光PCR检测方法灵敏度更高。结论用toxR基因作为靶基因检测溶藻弧菌的单重SYBR Green I荧光PCR检测方法,提升了检测速度,有良好的实际应用前景。
文摘根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR!Green I实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR Green I实时PCR方法。同时针对油菜FatA基因设计出内源基因。结果表明:应用实时PCR技术,利用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为80.2(±0.5)。SYBR Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是鉴定转基因油菜RT73品系的新方法。
文摘目的基于SYBR Green I荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium.MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插人序列ISI311为检测靶标设计引物,在60 C的退火温度下,建立鉴定MA的SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA.检测限为5.6x 102 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列ISI311为基础建立的SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。
文摘为建立灵敏、可靠的食品中鸭源性成分鉴定方法,确定了一对可特异地检测出牛肉中所掺杂鸭肉成分的引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时PCR技术检测鸭肉的方法。结果表明:利用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术可检测到鸭肉DNA,通过熔解曲线能有效地区分特异性产物,检测灵敏度可达到1pg DNA。同时利用该方法可检测出熟牛肉、鸭肉混合样品中的鸭肉成分。SYBR Green Ⅰ实时PCR方法能快速、特异、灵敏的检测鸭肉成分。
