多效生长因子对人骨髓间充质细胞趋化、分化及骨形成的诱导作用 被引量：1

1

作者 吴凡 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2014年第2期259-263,267,共6页

目的:研究多效生长因子(PTN)对人骨髓间充质细胞趋化、分化及骨形成的影响。方法:用含有PTN(1pg/ml-50ng/ml)的PLGA支架培养人骨髓细胞,以不含PTN的培养支架作为对照。使用光镜检测总细胞群落,碱性磷酸酶阳性细胞群落数。使用扫描电镜... 目的:研究多效生长因子(PTN)对人骨髓间充质细胞趋化、分化及骨形成的影响。方法:用含有PTN(1pg/ml-50ng/ml)的PLGA支架培养人骨髓细胞,以不含PTN的培养支架作为对照。使用光镜检测总细胞群落,碱性磷酸酶阳性细胞群落数。使用扫描电镜观察成骨状况。荧光染色法观察细胞活性。免疫组织化学检测碱性磷酸酶活性,Ⅰ型胶原蛋白,cbfa-1,骨钙蛋白和PTN的表达。动物体内实验验证PTN诱导成骨的作用。结果:不含PTN的PLGA培养支架上只有极少量细胞生长。含PTN的支架上观察到细胞黏附,分化。PTN具有趋化和刺激骨细胞分化的能力,这种作用呈时间依赖性。与对照组相比,PTN(10pg/ml)可以显著的增加总细胞群落或碱性磷酸酶阳性细胞群落的数目。免疫组织化学检测到碱性磷酸酶活性,还发现Ⅰ型胶原蛋白,cbfa-1,骨钙蛋白和PTN的表达。体外和体内试验均观察到骨骼的形成。结论:PTN可以促进人骨前体细胞的黏附、迁移和分化。这表明PTN或许可以用于开发新的组织工程骨合成方法以用于骨骼修复。 展开更多

关键词 骨前体细胞 骨髓 多效生长因子 成骨细胞刺激因子-1

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左归丸含药血清通过ERK/Smads信号通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达 被引量：19

2

作者 蒿长英 任艳玲 赵金茹 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期872-876,共5页

目的研究ERK1/2信号通路在左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞基因表达中的作用。方法以倍美力为阳性对照药,对SD♀大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,d7腹主动脉取血分离含药血清。采用MTT法检测左归丸含药血清和PD98059对MC3T3-E1细... 目的研究ERK1/2信号通路在左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞基因表达中的作用。方法以倍美力为阳性对照药,对SD♀大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,d7腹主动脉取血分离含药血清。采用MTT法检测左归丸含药血清和PD98059对MC3T3-E1细胞增殖作用的影响,采用Western blot法检测ERK1/2蛋白的磷酸化水平及TGF-β1、Smad4蛋白表达,采用Real Time RT-PCR法检测Cbfα1、COLⅠmRNA表达。结果左归丸含药血清和倍美力能促进MC3T3-E1细胞增殖,诱导ERK1/2蛋白的磷酸化,促进TGF-β1、Smad4蛋白分泌,上调其Cbfα1、COLⅠmRNA表达;加入PD98059后MC3T3-E1细胞增殖下降、ERK1/2蛋白的磷酸化水平降低、TGF-β1蛋白表达进一步升高、Smad4蛋白表达降低、Cbfα1、COLⅠmRNA表达下调。结论左归丸能有效促进成骨细胞增殖和分化;左归丸可能是通过发挥雌激素样作用调控了ERK/Smads信号通路,从而达到防治骨质疏松的目的。 展开更多

关键词 左归丸 成骨前体细胞系 血清药理学 ERK/Smads信号通路 核结合因子α1 Ⅰ型胶原 倍美力

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重组人骨保护素与重组核因子κb活化因子受体蛋白对破骨前体细胞分化的影响 被引量：13

3

作者 熊琦 张里程 +2 位作者 张立海 姚琦 唐佩福 《中国骨伤》 CAS 2013年第4期324-327,共4页

目的:对比重组人骨保护素(rhOPG-Fc)与重组核因子κb活化因子受体蛋白(rhRANK)对破骨前体细胞分化的影响。方法:采用成骨细胞与破骨前体细胞RAW264.7混合培养,在地塞米松、1,25(OH)2VitD3诱导下生成破骨细胞的方法。研究分3组:rhRANK组:... 目的:对比重组人骨保护素(rhOPG-Fc)与重组核因子κb活化因子受体蛋白(rhRANK)对破骨前体细胞分化的影响。方法:采用成骨细胞与破骨前体细胞RAW264.7混合培养,在地塞米松、1,25(OH)2VitD3诱导下生成破骨细胞的方法。研究分3组:rhRANK组:10-5g/L;rhOPG-Fc组:10-5g/L;空白对照组。作用9d后观察破骨细胞数目和形态,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数。结果:在空白对照组,小鼠成骨细胞与破骨前体细胞RAW264.7混合培养6d后,开始出现多核细胞,9d时可见大量成熟多核细胞,经TRAP染色证实为成熟破骨细胞,而rhRANK组及rhOPG-Fc组TRAP染色阳性多核细胞数较对照组均减少,特别是rhRANK组减少更明显。骨片吸收陷窝计数显示rhRANK组及rhOPG-Fc组较对照组也明显减少,而相对来说,rhRANK组较rhOPG-Fc组更少。结论:rhOPG-Fc与rhRANK均可以有效抑制破骨前体细胞分化成为成熟破骨细胞,且rhRANK较rhOPG-Fc抑制效果更明显。 展开更多

关键词 骨保护素 核因子κb活化因子受体蛋白 破骨前体细胞 细胞分化

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不同细胞来源外泌体在骨质疏松小鼠体内的骨靶向性比较 被引量：8

4

作者 顾亚 李毅 +3 位作者 陈铭 尹鹏滨 张里程 唐佩福 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2021年第3期310-314,共5页

背景外泌体广泛参与细胞间交流和信息通讯,不同来源外泌体的靶向性和功能可能有所不同。不同细胞来源外泌体对骨质疏松骨组织的靶向性目前研究较少。目前已有研究发现某些细胞来源的外泌体对损伤的骨组织具有靶向性和修复作用。目的探... 背景外泌体广泛参与细胞间交流和信息通讯,不同来源外泌体的靶向性和功能可能有所不同。不同细胞来源外泌体对骨质疏松骨组织的靶向性目前研究较少。目前已有研究发现某些细胞来源的外泌体对损伤的骨组织具有靶向性和修复作用。目的探索不同细胞来源外泌体在骨质疏松小鼠体内的骨靶向性。方法体外培养间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)、成骨前体细胞(MC-3T3-E1)、乳腺癌细胞(4T1)、肾上皮细胞(293T),提取上清液中的外泌体。利用DiR荧光染料进行外泌体染色,静脉注射至骨质疏松小鼠体内并进行活体、离体外泌体分布的观察,比较不同细胞来源外泌体在小鼠股骨的聚集情况。结果活体荧光动态观察显示MSC、MC-3T3-E1来源外泌体在小鼠股骨显著聚集,且在第3天达到聚集高峰。4T1和293T来源外泌体则未观察到聚集。第3天处死小鼠,离体解剖下肢骨做活体成像和股骨病理切片染色,结果证明MSC来源外泌体在股骨聚集最多,MC-3T3-E1次之,而4T1和293T为阴性。结论MSC、MC-3T3-E1来源外泌体具有骨靶向性,4T1、293T来源外泌体则无骨靶向性。 展开更多

关键词 间充质干细胞 成骨前体细胞 外泌体 骨靶向 骨质疏松小鼠

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雷公藤红素对类风湿关节炎小鼠骨侵蚀的影响 被引量：7

5

作者 周伟 刘志刚 宋卫中 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第18期2476-2480,共5页

目的研究雷公藤红素(CSL)在胶原诱导性类风湿关节炎(CIA)小鼠骨侵蚀中的作用及其可能的作用机制。方法将24只DBA/1小鼠分为空白组、模型组(CIA小鼠模型)和实验组(腹腔注射2 mg·kg^(-1)CSL的CIA小鼠)。统计各组小鼠的关节炎指数评分... 目的研究雷公藤红素(CSL)在胶原诱导性类风湿关节炎(CIA)小鼠骨侵蚀中的作用及其可能的作用机制。方法将24只DBA/1小鼠分为空白组、模型组(CIA小鼠模型)和实验组(腹腔注射2 mg·kg^(-1)CSL的CIA小鼠)。统计各组小鼠的关节炎指数评分,用苏木精-伊红(HE)染色法评估滑膜炎浸润及骨侵蚀情况,用TRAP染色检测骨组织破骨细胞(OC)数量。从小鼠股骨中分离诱导破骨细胞前体细胞(osteoclast precursors cells,OCPs),采用M-CSF+RNAKL诱导OC分化,分为OCPs组、诱导分化组和CSL低、中、高剂量组(分别用含有0.1,0.25,0.5μmol·L^(-1)CSL的诱导分化培养基培养)。用流式细胞仪检测OCPs的凋亡率;用TRAP染色观察OC数量;用蛋白质印迹(Western blot)法检测Fas/FasL死亡受体途径相关蛋白Fas、FasL、cleaved-caspase-8和cleaved-caspase-3的表达。结果CSL能够缓解CIA小鼠的关节炎症,抑制炎性细胞的浸润和骨侵蚀,减少OC的数量。OCPs组、诱导分化组和CSL低、中、高剂量组中细胞凋亡率分别为(1.82±0.24)%,(7.98±0.94)%,(8.41±0.84)%,(8.87±0.95)%,(12.57±1.53)%,OC细胞数分别为(0.8±0.7),(84.8±8.9),(70.0±6.6),(46.5±8.2),(32.5±4.6)个。与OCPs组相比,诱导分化组中细胞凋亡率和OC细胞增多(P<0.05)。与诱导分化组相比,CSL高剂量组细胞凋亡率升高,而OC细胞数量减少(P<0.05)。CSL高剂量组中Fas、FasL、cleaved-caspase-8和cleaved-caspase-3的表达水平显著高于诱导分化组(P<0.05)。结论CSL能够有效缓解CIA小鼠的骨侵蚀作用,其机制可能是CSL激活Fas/FasL死亡受体途径诱导OCPs的凋亡并抑制OC分化,抑制骨破坏的发生。 展开更多

关键词 雷公藤红素 破骨前体细胞 破骨细胞 骨侵蚀

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脯氨酰羟化酶2抑制剂cpd17对小鼠成骨前体细胞的影响

6

作者 杜忠秋 戚晓阳 +4 位作者 杨平 于江林 陈一心 张林坚 邱旭升 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第2期238-244,共7页

背景:脯氨酰羟化酶2抑制剂能够调节骨代谢,改善卵巢切除大鼠骨质疏松。cpd17是中国药科大学最新研发的一款小分子口服脯氨酰羟化酶2抑制剂,用于治疗肾性贫血疗效肯定,不良反应小,但是对骨形成和骨吸收的作用还不清楚。目的:探讨脯氨酰... 背景:脯氨酰羟化酶2抑制剂能够调节骨代谢,改善卵巢切除大鼠骨质疏松。cpd17是中国药科大学最新研发的一款小分子口服脯氨酰羟化酶2抑制剂,用于治疗肾性贫血疗效肯定,不良反应小,但是对骨形成和骨吸收的作用还不清楚。目的:探讨脯氨酰羟化酶2抑制剂cpd17对成骨前体细胞的影响。方法:采用cpd17处理C57BL/6小鼠成骨前体细胞,检测碱性磷酸酶活性和细胞外基质矿化程度,检测成骨、破骨相关标志物以及脯氨酰羟化酶2、低氧诱导因子1α的表达水平。使用低氧诱导因子1α通路抑制剂LW6抑制低氧诱导因子1α通路后,再次检测碱性磷酸酶活性和细胞外基质矿化程度,以及成骨和破骨分化相关标志物以及脯氨酰羟化酶2、低氧诱导因子1α的表达水平。结果与结论:cpd17能显著增强碱性磷酸酶活性和基质矿化程度,上调成骨分化相关标志物的表达,下调破骨分化相关标志物的表达,并上调低氧诱导因子1α表达,下调脯氨酰羟化酶2的表达。而LW6能明显减弱cpd17的作用。结果表明,脯氨酰羟化酶2抑制剂cpd17可通过激活低氧诱导因子1α信号通路促进成骨分化和抑制破骨分化。 展开更多

关键词 脯氨酰羟化酶2抑制剂 cpd17 低氧诱导因子 成骨前体细胞 成骨分化 骨质疏松

微米级煅烧羟基磷灰石/壳聚糖复合膜的制备及性能 被引量：7

7

作者 李瑞欣 张西正 +6 位作者 郝庆新 刘璐 郭勇 侍才洪 李昊 关静 武继民 《复合材料学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期103-111,共9页

将猪松质骨脱脂脱蛋白、煅烧后再进行球磨制备羟基磷灰石(HA),与壳聚糖(CS)共混制备成HA/CS复合膜。通过正交设计考察了球磨条件对HA粒径的影响,在复合膜上接种MC3T3-E1前体成骨细胞,采用SEM及四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测细胞在膜表面... 将猪松质骨脱脂脱蛋白、煅烧后再进行球磨制备羟基磷灰石(HA),与壳聚糖(CS)共混制备成HA/CS复合膜。通过正交设计考察了球磨条件对HA粒径的影响,在复合膜上接种MC3T3-E1前体成骨细胞,采用SEM及四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测细胞在膜表面的形态及增殖,评价了材料的细胞相容性。结果表明,所制备HA为粒径较均一的微米级球形粒子,中值粒径D50为1.21～1.67μm。共混膜内HA在基质中分布均匀,二者结合紧密,复合膜具有较好的力学性能,MC3T3-E1细胞能在复合膜上很好地黏附生长。细胞增殖结果表明,复合膜制备条件煅烧温度为1000℃,球配比4∶4∶2,球磨速率为230r.min-1,球磨时间为2.5h,HA∶CS=5∶5(质量比)时最利于细胞增殖。 展开更多

关键词 羟基磷灰石 煅烧 壳聚糖 复合膜 MC3T3-E1成骨前体细胞

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胎牛血清外泌体对成骨细胞增殖的作用 被引量：5

8

作者 徐慧君 张咪 +4 位作者 史东梅 吴赛璇 陆颖 董明 牛卫东 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第31期4961-4965,共5页

背景:研究表明外泌体具有促进骨再生的能力,但从胎牛血清中提取的外泌体是否可以促进骨形成仍存在争议。目的:观察胎牛血清外泌体对成骨细胞增殖能力的影响,从而为临床治疗骨破坏提供新思路。方法:通过超速离心法从胎牛血清中提取外泌体... 背景:研究表明外泌体具有促进骨再生的能力,但从胎牛血清中提取的外泌体是否可以促进骨形成仍存在争议。目的:观察胎牛血清外泌体对成骨细胞增殖能力的影响,从而为临床治疗骨破坏提供新思路。方法:通过超速离心法从胎牛血清中提取外泌体,采用透射电子显微镜和Western blot法验证外泌体是否提取成功;然后用10 mg/L胎牛血清外泌体干预成骨前体细胞MC3T3-E1,通过CCK-8实验检测外泌体对成骨细胞增殖能力的影响,Western blot检测外泌体对成骨细胞骨形态发生蛋白2和骨桥蛋白表达的影响。以不含外泌体的胎牛血清培养的MC3T3-E1细胞为对照组。结果与结论:①胎牛血清外泌体具有典型的脂质双层膜结构,大小在30-150 nm之间,外泌体表面标记因子CD81表达呈阳性,而微囊表面标记物CD40表达呈阴性;②外泌体组的增殖能力明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);外泌体组成骨标志性因子骨形态发生蛋白2和骨桥蛋白的表达水平明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,胎牛血清外泌体对成骨细胞的增殖起促进作用,可为临床治疗骨破坏提供新思路。 展开更多

关键词 外泌体 胎牛血清 成骨前体细胞 骨破坏 骨形态发生蛋白2 骨桥蛋白 CD81 CD40

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梯度流体剪应力下细胞膜张力的数值模拟

9

作者 曹淑婷 赵森 +2 位作者 张笑 高颜 霍波 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期600-606,共7页

目的分析梯度流体剪应力(fluid shear stress,FSS)流场中细胞膜张力分布。方法构建梯度平板流动腔模型,采用流固耦合数值模拟方法,研究不同FSS梯度和幅值、不同静水压下细胞膜的膜张力分布。结果当流动腔入口流量增大时,FSS流场梯度呈... 目的分析梯度流体剪应力(fluid shear stress,FSS)流场中细胞膜张力分布。方法构建梯度平板流动腔模型,采用流固耦合数值模拟方法,研究不同FSS梯度和幅值、不同静水压下细胞膜的膜张力分布。结果当流动腔入口流量增大时,FSS流场梯度呈正比例增大。梯度FSS流场下,细胞膜张力由贴壁侧向顶部呈先减小后增大的趋势。在正常人体血压下,静水压越大,细胞膜张力越大。当FSS幅值一定时,增加FSS梯度,细胞高、低FSS区域平均膜张力差值增大;当FSS梯度一定时,增加FSS幅值,细胞高、低FSS区域平均膜张力差值增大。结论梯度FSS流场会引起细胞膜张力的局部差异,其可能是破骨前体细胞在梯度流场中定向迁移的重要原因。 展开更多

关键词 梯度平板流动腔 梯度流体剪应力 破骨前体细胞 膜张力

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纳米羟基磷灰石颗粒对成骨前体细胞的增殖和分化影响 被引量：6

10

作者 吴苑 席咏梅 +3 位作者 刘玉侃 赵小立 姚行 张铭 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期664-667,共4页

对纳米羟基磷灰石颗粒对成骨前体细胞MC3T3E1的增殖和分化的影响进行了研究.采用四唑盐比色法(MTT)、碱性磷酸酶检测及矿化结节染色的方法分析了羟基磷灰石纳米颗粒悬液对成骨前体细胞的增殖和分化的影响.同时用纳米羟基磷灰石悬液的浸... 对纳米羟基磷灰石颗粒对成骨前体细胞MC3T3E1的增殖和分化的影响进行了研究.采用四唑盐比色法(MTT)、碱性磷酸酶检测及矿化结节染色的方法分析了羟基磷灰石纳米颗粒悬液对成骨前体细胞的增殖和分化的影响.同时用纳米羟基磷灰石悬液的浸出液及吸附条件培养液后的纳米颗粒制备悬液分别处理细胞,探讨钙离子释放和蛋白吸附在成骨前体细胞增殖和分化过程中的作用.结果表明:在0～50μg.mL-1,纳米羟基磷灰石颗粒对成骨前体细胞的增殖有一定抑制作用,且随着浓度的增加抑制作用也相应加强.10μg.mL-1的纳米羟基磷灰石悬液对成骨前体细胞的分化具有促进作用.纳米羟基磷灰石颗粒悬液对成骨前体细胞分化的促进作用不受到钙离子释放或蛋白吸附作用的影响. 展开更多

关键词 纳米羟基磷灰石颗粒 成骨前体细胞 增殖 分化

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血清白细胞介素-34在银屑病关节炎骨破坏中的作用研究 被引量：6

11

作者 任洁 薛愉 +2 位作者 孔宁 邹和建 万伟国 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期663-668,共6页

目的 探讨血清IL-34水平与PsA骨破坏的相关性.方法 以40例PsA患者为实验组,以20例银屑病患者（银屑病组）及20名健康志愿者为健康对照组,检测3组研究对象外周血IL-34及破骨细胞相关细胞因子,包括TNF-α、细胞NF-κB受体活化因子配体（RA... 目的 探讨血清IL-34水平与PsA骨破坏的相关性.方法 以40例PsA患者为实验组,以20例银屑病患者（银屑病组）及20名健康志愿者为健康对照组,检测3组研究对象外周血IL-34及破骨细胞相关细胞因子,包括TNF-α、细胞NF-κB受体活化因子配体（RANKL）和骨保护素（OPG）的水平,分析IL-34与外周血破骨前体细胞（OCP）的数量、疾病活动度及影像学评分间的相关性.所有数据均采用GraphPad Prism 6软件进行分析.采用多因素方差分析进行多组比较,两两比较采用q检验,采用Spearman相关分析评估各指标间的相关性.结果 PsA组患者血清IL-34的水平[（328±476） pg/ml]高于银屑病组[（33±52）pg/ml,q=3.92,P＜0.01]及健康对照组[（32±32） pg/ml,q=3.93,P＜0.01],侵蚀性PsA组高于非侵蚀性PsA组[（449±527） pghrd与（47±24） pg/ml,q=4.04,P＜0.01].PsA组患者外周血TNF-α、RANKL水平及OCP计数[（125±79） pg/ml、（488±475） pg/ml及17.7±4.8（5个视野）]均高于银屑病组[（40±22） pg/rnl、（26±3） pg/ml及5.2±0.8（5个视野）,q=7.32、6.14及2.94,P均＜0.01]及健康对照组[（41±19） pg/ml、（65±8） pg/ml及6.2±1.8（5个视野）,q=6.67、5.62及2.71,P均＜0.01],PsA组的OPG/RANKL比值（0.5±0.4）显著低于银屑病组（4.3±2.7,q=-3.30,P＜0.01]及健康对照组（1.8±0.6,q=-1.72,P＜0.01）,IL-34、TNF-α及RANKL的水平均与OCP呈正相关（r=0.10,P＜0.05;r=0.12,P＜0.05;r=0.13,P＜0.05）.结论 PsA患者尤其是侵蚀性PsA患者外周血中存在较高水平的IL-34,与OCP数量呈正相关,IL-34参与了OCP及破骨细胞的分化,进而促进骨破坏过程.因此,IL-34有望成为治疗PsA的新靶点. 展开更多

关键词 银屑病关节炎 白细胞介素-34 肿瘤坏死因子-α 细胞核因子-κB受体活化因子配体 破骨前体细胞 银屑病关节炎关节活动度指数 Sharp评分 巴氏强直性脊柱炎放射学指数

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灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响 被引量：5

12

作者 刘长庚 罗启贤 +4 位作者 凌天牖 莫业跃 程自力 黄生高 莫晖 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1658-1664,共7页

目的研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制。方法体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组... 目的研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制。方法体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT-PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达。结果灯盏花随浓度(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低(P<0.05);MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加(P<0.05);RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加(P<0.05),但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加(P<0.05)。1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低(P<0.05)、RANKL蛋白表达随时间逐步增加(P<0.05);RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加(P<0.05)。结论灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用。 展开更多

关键词 灯盏花 成骨细胞 破骨前体细胞 护骨素 细胞核因子-κB受体活化因子配体 细胞核因子-κB受体活化因子

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高糖环境对小鼠成骨前体细胞及脂肪干细胞成骨分化的影响 被引量：5

13

作者 杨卉馨 黄小会 +3 位作者 董晓惠 王玉涵 江小霞 曹均凯 《解放军医学院学报》 CAS 2019年第5期449-453,469,共6页

目的研究不同葡萄糖浓度对小鼠成骨前体细胞(primary osteoblasts,POBs)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)成骨分化的影响。方法分离培养小鼠成骨前体细胞、棕色脂肪干细胞(brown adipose-derived stem cells,B-ASCs)、白... 目的研究不同葡萄糖浓度对小鼠成骨前体细胞(primary osteoblasts,POBs)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)成骨分化的影响。方法分离培养小鼠成骨前体细胞、棕色脂肪干细胞(brown adipose-derived stem cells,B-ASCs)、白色脂肪干细胞(white adipose-derived stem cells,W-ASCs),复苏MC3T3-E1细胞系,分别给予不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、25 mmol/L和55 mmol/L)刺激,常规成骨诱导分化7d,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色观察不同细胞成骨分化程度。取成骨前体细胞分别成骨诱导分化3d、7d,采用定量PCR 检测各组细胞Runx2、碱性磷酸酶、Osterix 及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)等成骨分化标记物的表达水平。采用Western blot检测成骨相关蛋白的表达。结果在不同浓度葡萄糖刺激下,MC3T3-E1、POBs和W-ASCs的成骨分化能力随着糖浓度的升高而升高,而B-ASCs的成骨分化能力则受到抑制。对POBs成骨诱导培养3d和7d后,25mmol/L、55mmol/L组成骨分化程度显著高于5.5mmol/L组。Real-timePCR结果显示3d和7d时,25mmol/L、55mmol/L组Runx2、ALP、Osterix和OPN的表达也显著高于5.5mmol/L组。Westernblot检测结果证明高糖在成骨诱导过程中可激活骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达。结论高糖对成骨前体细胞的成骨分化起促进作用。 展开更多

关键词 成骨前体细胞 成骨分化 高糖

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二苯乙烯苷对H_2O_2诱导的MC3T3-E1凋亡的保护作用及机制研究 被引量：5

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作者 张金康 李松林 +4 位作者 魏琳岚 郑子阳 王斌 刘东洲 杜俊杰 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1596-1600,共5页

目的研究二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对氧化应激导致的成骨前体细胞MC3T3-E1凋亡的保护作用,并初步探讨相关机制。方法不同浓度TSG预处理MC3T3-E1 24 h后,300μmol/L H_2O_2作用24 h。实验分组:①空白对照组;②单纯... 目的研究二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对氧化应激导致的成骨前体细胞MC3T3-E1凋亡的保护作用,并初步探讨相关机制。方法不同浓度TSG预处理MC3T3-E1 24 h后,300μmol/L H_2O_2作用24 h。实验分组:①空白对照组;②单纯H_2O_2处理组;③H_2O_2+TSG 0.1μmol/L处理组;④H_2O_2+TSG 1μmol/L处理组;⑤H_2O_2+TSG 10μmol/L处理组;⑥阳性对照抗氧化剂NAC 1 mmol/L处理组,通过MTT法、Hoechst33258染色来评价细胞凋亡情况及TSG对氧化损伤的保护作用;利用荧光酶标仪和MDA检测试剂盒来检测细胞中ROS及MDA的水平来评价细胞的氧化应激状态;Western-blot和RT-PCR分别从蛋白水平和基因水平评价Bcl-2和Bax的表达水平。结果单纯H_2O_2处理可以导致细胞死亡,显微镜下可见许多细胞死亡,脱壁;Hoechst33258染色可见有较多的细胞出现核固缩、核浓集现象;不同浓度的TSG预处理后,细胞凋亡现象得到改善。单独H_2O_2作用可以导致成骨前体细胞出现较大程度的凋亡,不同浓度TSG预处理后,细胞凋亡率有所降低;单纯H_2O_2作用可以导致细胞水平的ROS和脂质氧化产物MDA产生增加,TSG(1～10μmol/L)可以显著降低细胞水平ROS和MDA水平(P<0.05),改善细胞的氧化应激状态;Western-blotting和实时定量RT-PCR结果 TSG预处理可以减少H_2O_2处理后,促凋亡蛋白Bax的表达,增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论氧化应激可以导致成骨前体细胞MC3T3-E1凋亡增加,TSG可以通过降低氧化应激水平。其机理可能是TSG通过促凋亡蛋白Bax的表达及增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达起到保护作用。 展开更多

关键词 二苯乙烯苷 氧化应激 成骨前体细胞 细胞凋亡

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可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)重组铁蛋白富集Pb^(2+)等重金属特性和功能研究 被引量：5

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作者 初双双 张云云 +6 位作者 苏倡 王颖 陈丽萍 周君 张迪骏 司开学 苏秀榕 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1358-1364,共7页

利用可口革囊星虫重组铁蛋白富集Pb^(2+)、Fe^(3+)、Cd^(2+)、Cr^(3+)、Cu^(2+)、Mn^(2+)、Sn^(2+)和Zn^(2+)等8种重金属离子后,通过透射显微镜和傅里叶红外光谱测定蛋白的超微结构变化和内部基团特性。以天然的马脾铁蛋白为对照,观察... 利用可口革囊星虫重组铁蛋白富集Pb^(2+)、Fe^(3+)、Cd^(2+)、Cr^(3+)、Cu^(2+)、Mn^(2+)、Sn^(2+)和Zn^(2+)等8种重金属离子后,通过透射显微镜和傅里叶红外光谱测定蛋白的超微结构变化和内部基团特性。以天然的马脾铁蛋白为对照,观察重组铁蛋白与天然铁蛋白的差别。结果显示,重组铁蛋白富集Pb2+和其它7种重金属离子后蛋白体积大小与重金属离子种类直接相关。重组铁蛋白相对天然铁蛋白来说在富集不同种类重金属离子后,除了非特异性酰胺特征峰和蛋白特征峰外,还出现一些专门富集某些重金属离子的特异基团,如:-CH_3、-CH_2-、-CH-、-NH-、-SO_3-、-COOH、-S=S-和-C-S-C等。通过细胞实验进一步验证了铁结合蛋白能够通过富集重金属离子Pb2+来保护小鼠成骨前体细胞MRC3T3-E1,使细胞的死亡率明显降低(P<0.05)。 展开更多

关键词 可口革囊星虫 重组铁蛋白 富集铅离子 超微结构 小鼠成骨前体细胞

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淫羊藿苷对MC3T3-E1成骨前体细胞的成骨诱导作用及意义 被引量：3

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作者 王建茹 张育敏 韩波 《山东医药》 CAS 2018年第16期17-20,共4页

目的观察淫羊藿苷对MC3T3-E1成骨前体细胞的细胞毒性及成骨诱导作用,为其用于骨组织再生提供依据。方法将MC3T3-E1成骨前体细胞随机分为观察组、阴性对照组及阳性对照组。观察组分别加入终浓度为1×10^(-6)、10^(-5)、1×10^(-4... 目的观察淫羊藿苷对MC3T3-E1成骨前体细胞的细胞毒性及成骨诱导作用,为其用于骨组织再生提供依据。方法将MC3T3-E1成骨前体细胞随机分为观察组、阴性对照组及阳性对照组。观察组分别加入终浓度为1×10^(-6)、10^(-5)、1×10^(-4)、1×10^(-3)、1×10^(-2)mmol/L的淫羊藿苷溶液100μL,阴性对照组及阳性对照组分别加入等体积含DMSO的培养基及骨形态发生蛋白2(rh BMP-2)。采用MTT法检测各组培养第3、7天的细胞增殖率,死/活细胞荧光染色法检测细胞存活率,茜素红钙结节染色观察细胞钙化结节形成情况,细胞超声裂解法检测碱性磷酸酶(ALP)活性、钙含量及骨钙素表达。结果培养第3天,加入1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞增殖率明显低于阴性对照组及阳性对照组(P均<0.05)。培养第7天,加入1×10^(-3)、1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞增殖率明显低于阴性对照组及阳性对照组(P均<0.05)。加入1×10^(-3)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞存活率明显低于阳性对照组,加入1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞存活率明显低于阴性对照组及阳性对照组(P均<0.05)。阴性对照组未见明显红染钙化结节,阳性对照组有明显的钙化结节,观察组随着加入淫羊藿苷浓度的升高红染钙化结节面积逐渐增大。加入不同浓度淫羊藿苷溶液的观察组细胞ALP活性、骨钙素表达均高于阴性对照组(P均<0.05)。加入1×10^(-4)、1×10^(-3)、1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷的观察组细胞钙含量均高于阴性对照组,加入1×10^(-6)、1×10^(-5)mmol/L淫羊藿苷的观察组细胞钙含量均低于阳性对照组(P均<0.05)。结论 1×10^(-4)mmol/L淫羊藿苷溶液对MC3T3-E1成骨前体细胞的细胞毒性较低,其成骨诱导作用与rh BMP-2接近,可作为一种骨诱导生长因子替代剂联合骨修复材料用于促进骨组织再生。 展开更多

关键词 淫羊藿苷 成骨前体细胞 细胞毒性 骨缺损 成骨诱导 骨修复材料

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成骨分化促进小鼠胚胎成骨前体细胞中压电型机械敏感离子通道组件1的表达

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作者 宋继东 刘暾 +3 位作者 赵家鑫 胡书刚 党晓谦 王伟 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期1792-1794,共3页

目的研究小鼠胚胎成骨前体细胞MC3T3-E1经成骨诱导后压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)的表达变化及意义。方法成骨诱导MC3T3-E1细胞后,于第0、14、21天分别进行茜素红染色观察钙结节和细胞形态,利用蛋白质印迹法(Western blot)、实... 目的研究小鼠胚胎成骨前体细胞MC3T3-E1经成骨诱导后压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)的表达变化及意义。方法成骨诱导MC3T3-E1细胞后,于第0、14、21天分别进行茜素红染色观察钙结节和细胞形态,利用蛋白质印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测成骨诱导对各时间点PIEZO1蛋白和PIEZO1 mRNA表达的影响,组间比较采用One-way ANOVA检验。结果MCET3-E1成骨诱导0 d时基本未见红色钙化结节,细胞呈梭形;诱导14 d时出现钙化结节,细胞呈聚集样和层叠样生长,且随着诱导时间延长钙化结节数量增多,形状逐渐增大,细胞层叠样生长加重;同时MC3T3-E1中PIEZO1蛋白及mRNA的表达量随着成骨诱导时间的延长而逐渐增高(PIEZO1蛋白0 d组0.26±0.04、14 d组0.42±0.16、21 d组0.81±0.04,F=24.05,P<0.001;PIEZO1 mRNA 0 d组1.00±0.03、14 d组1.45±0.11、21 d组4.51±0.44,F=161.90,P<0.001),差异有统计学意义。结论成骨分化可促进MC3T3-E1在矿化结节形成期PIEZO1蛋白的表达。 展开更多

关键词 成骨分化 胚胎成骨前体细胞 压电型机械敏感离子通道组件1 机械敏感离子通道

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Wnt5a对成骨前体细胞分泌和分化功能的影响 被引量：4

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作者 牛梦林 佟玉龙 +3 位作者 曹伟 杜雨轩 袁慧慧 赵文明 《微生物学免疫学进展》 2016年第2期10-15,共6页

目的研究Wnt5a对成骨前体细胞分泌和分化功能的影响,并对其分子机制进行初步探讨。方法 Wnt5a刺激成骨前体细胞(MC3T3-E1)后,用双抗体夹心ELISA法检测细胞上清中骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、IL-6、IL-1β及TNF-α的表达水平;用碱性... 目的研究Wnt5a对成骨前体细胞分泌和分化功能的影响,并对其分子机制进行初步探讨。方法 Wnt5a刺激成骨前体细胞(MC3T3-E1)后,用双抗体夹心ELISA法检测细胞上清中骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、IL-6、IL-1β及TNF-α的表达水平;用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)检测试剂盒及实时定量PCR法检测ALP的表达量及活性;通过实时定量PCR方法检测Ror2基因表达水平,应用Western blot检测细胞JNK蛋白表达变化。结果 Wnt5a抑制了OPG的表达,增加了IL-6的分泌,但并没有改变IL-1β和TNF-α的表达量;Wnt5a上调了ALP的表达量及活性,促进了Ror2基因水平的表达,并上调了细胞内JNK蛋白水平。结论 Wnt5a通过调节成骨前体细胞OPG、IL-6、ALP和JNK的表达和分泌,可加重骨破坏和关节炎症,Wnt5a与类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)骨破坏和关节炎症进展有关。 展开更多

关键词 WNT5A 成骨前体细胞 分泌功能 分化功能 类风湿关节炎

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雷公藤甲素促进TNF转基因小鼠破骨前体细胞凋亡及c-IAP1/2降解的研究 被引量：4

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作者 蔡灯塔 王新春 +1 位作者 王景春 李宝印 《新中医》 CAS 2019年第1期1-5,共5页

目的:用雷公藤甲素(Triptolide,TPL)诱导破骨前体细胞(Osteoclast precursor cells,OCPs)凋亡,评价凋亡抑制蛋白1/2 (cellular inhibitors of apoptosis proteins 1/2,c-IAP1/2)在OCPs凋亡中的参与性。方法:从具有人类类风湿关节炎(Rheu... 目的:用雷公藤甲素(Triptolide,TPL)诱导破骨前体细胞(Osteoclast precursor cells,OCPs)凋亡,评价凋亡抑制蛋白1/2 (cellular inhibitors of apoptosis proteins 1/2,c-IAP1/2)在OCPs凋亡中的参与性。方法:从具有人类类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)临床症状的肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)转基因RA小鼠骨髓中分离、诱导OCPs,分为OCPs组、RANKL/OCPs组、TNF/OCPs组、TPL/RANKL/OCPs组和TPL/TNF/OCPs组。TPL作用于核因子受体激活因子(Receptor activator of nuclear factor,RANKL)或TNF诱导的OCPs,用流式细胞法检测早期细胞凋亡,用Western blot法检测cIAP1/2表达,以及用Luminescence法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3/7 (Aspartate specific cysteine protease 3/7,Caspase3/7)表达。结果:与OCPs组比较,RANKL/OCPs组和TNF/OCPs组中凋亡细胞、Caspase3/7水平显著增加(P <0.05),RANKL/OCPs组中c-IAP1/2蛋白水平显著升高(P <0.05)。与RANKL/OCPs组比较,TPL/RANKL/OCPs组凋亡细胞数、Caspase3/7水平显著升高,c-IAP1/2蛋白水平显著降低(P <0.05)。与TNF/OCPs组比较,TPL/TNF/OCPs组凋亡细胞、Caspase3/7水平显著增加、c-IAP1/2蛋白水平显著降低(P <0.05)。与TPL/RANKL/OCPs组比较,TPL/TNF/OCPs组凋亡细胞显著增加,Caspase3/7水平显著降低,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:TPL在OCPs分化过程中可诱导OCPs发生早期凋亡,而c-IAP1/2参与其中,本研究为RA治疗靶点提供实验资料。 展开更多

关键词 类风湿关节炎(RA) 雷公藤甲素(TPL) 破骨前体细胞(OCPs) 凋亡抑制蛋白1/2 (c-IAP1/2) 动物实验 TNF转基因小鼠

原文传递

小分子肽对成骨前体细胞MC3T3-E1骨保护素和核转录因子κB受体活化因子配体表达的影响 被引量：3

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作者 吴昆鹏 杨巧珠 +2 位作者 马凤燕 戴永武 刘义 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期4375-4378,共4页

背景:体内实验显示,小分子肽能明显增加去卵巢大鼠的骨钙含量,使其骨密度增加,能很好地预防骨质疏松。同时体外实验显示,小分子肽能促进小鼠成骨细胞和成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化,并且可能是通过抑制核转录因子p50和p65的表... 背景:体内实验显示,小分子肽能明显增加去卵巢大鼠的骨钙含量,使其骨密度增加,能很好地预防骨质疏松。同时体外实验显示,小分子肽能促进小鼠成骨细胞和成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化,并且可能是通过抑制核转录因子p50和p65的表达来起作用。而小分子肽对骨保护素/核转录因子κB受体活化因子配体的影响尚不明确。目的:观察小分子肽对MC3T3-E1在增殖、分化、矿化过程中骨保护素和RANKL表达的影响。方法:以体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液为空白对照组,50,100mg/L质量浓度小分子肽作用小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1,分别于作用3,6,12,18,24,30d后,收集细胞提取蛋白,Western Blot检测骨保护素和核转录因子κB受体活化因子配体蛋白的表达。结果与结论:50,100mg/L小分子肽作用MC3T3-E1后能明显促进作用骨保护素的表达(P<0.01),而对核转录因子κB受体活化因子配体无明显影响。小分子肽作用后MC3T3-E1中骨保护素/核转录因子κB受体活化因子配体的比值要明显高于空白对照组(P<0.01)。因此,认为小分子肽可以通过增加骨保护素的表达来影响骨保护素/核转录因子κB受体活化因子配体系统,间接地抑制破骨细胞的数量和功能。 展开更多

关键词 小分子肽 骨保护素 核转录因子κB受体活化因子配体 成骨前体细胞 组织构建

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