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β_1-AR持久兴奋通过CaMKIIδ-内质网应激凋亡通路导致心力衰竭的机制 被引量：6
1
作者 周昌清 倪黎 +3 位作者 关红菁 晏小妮 陈琛 汪道文 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2008年第6期319-327,共9页
目的研究β_1-AR持久兴奋通过CaMKIIδ-内质网应激(ERS)凋亡通路导致心力衰竭的机制。方法30只SD大鼠随机分成三组,正常对照组(Control)、异丙肾上腺组(Iso)和、异丙肾上腺+美托洛尔组(Iso+Meto),每组10只,所有动物均自由进食进水。(1)... 目的研究β_1-AR持久兴奋通过CaMKIIδ-内质网应激(ERS)凋亡通路导致心力衰竭的机制。方法30只SD大鼠随机分成三组,正常对照组(Control)、异丙肾上腺组(Iso)和、异丙肾上腺+美托洛尔组(Iso+Meto),每组10只,所有动物均自由进食进水。(1)Iso组大鼠背部皮下注射Iso 5 mg/(kg·d),连续10 d;Control组背部皮下注射相同体积的生理盐水;Iso+Meto组大鼠背部皮下注射Iso 5 mg/(kg·d),连续10 d,在背部皮下注射Iso前一天开始Meto 10 mg/(kg·d)灌胃,连续4周;(2)所有大鼠饲养4周后,采用美国Millar公司P-V Loop导管经颈动脉插管至左心室,使用Pow- erlab生理记录系统测量血流动力学相关指标;统计各组大鼠心脏重量和心脏重量/体重比值;(3) TUNEL法和Caspase-3活性检测心肌细胞凋亡;(4)Western blot分析CaMKIIδ、ERS相关基因(GRP78、CHOP和caspase-12)和凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达水平。结果30只SD大鼠实验过程精神状态好,进食进水正常。(1)与Control组比较,Iso组SD大鼠心脏重塑和血流动力学指标有显著性差异(P<0.05);而Iso+Meto组心脏重塑和血流动力学指标与Iso组相比明显改善(P<0.05);(2)TUNEL法原位检测各组大鼠心肌细胞凋亡示与Control组比较,Iso组TUNEL阳性细胞数明显增高(P<0.05);而Iso+Met组明显低于Iso组(P<0.05)。心肌细胞Caspase-3活性和TUNEL凋亡阳性细胞核指数各组变化一致。Western blot检测心肌细胞凋亡相关基因bcl-2/Bax蛋白表达。与Con- trol组相比,Iso组bcl-2蛋白表达明显降低和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);而Iso+Met组与Iso组相比,bcl-2明显增高和Bax明显降低(P<0.05);(3)Western blot分析CaMKIIδ及p-CaMKIIδ蛋白表达显示,与Control组比较,Iso组CAMKII活性和p-CaMKIIδ蛋白表达明显增加;而Iso+Meto组与Iso组相比,CAMKII活性和p-CaMKIIδ蛋白表达明显减少;(4)Western blot检测ERS凋亡蛋白显示,Iso组与Control组相比,GRF78、CHOP和Cleaved caspase-12蛋白表达均明显高于Control组 展开更多
关键词 Β1肾上腺素受体 凋亡 钙/钙调蛋白激酶iiδ 内质网应激
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鹿茸提取物对VD大鼠海马CaM、CaMKII的干预效应 被引量：2
2
作者 高玲 胡亚男 +2 位作者 赵建军 李萍 尚晓玲 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1587-1590,共4页
目的探讨鹿茸提取物对血管性痴呆(VD)大鼠海马的保护作用。方法健康Wistar大鼠以两血管阻断法(2-VO)复制VD模型,造模成功后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、高浓度鹿茸组、中浓度鹿茸组、低浓度鹿茸组,每组10只。另选取10只健康大鼠只... 目的探讨鹿茸提取物对血管性痴呆(VD)大鼠海马的保护作用。方法健康Wistar大鼠以两血管阻断法(2-VO)复制VD模型,造模成功后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、高浓度鹿茸组、中浓度鹿茸组、低浓度鹿茸组,每组10只。另选取10只健康大鼠只分离颈总动脉,不结扎者为假手术组。假手术组、模型组灌服蒸馏水,盐酸多奈哌齐组灌服0.45mg/(kg·d)盐酸多奈哌齐溶液,高、中、低浓度鹿茸组分别以20,10,5 mL/(kg·d)灌胃鹿茸提取物,给药30d后,水迷宫检测各组大鼠法行为学;HE染色检测大鼠海马神经元病理结构;免疫组化及Western Blot检测海马组织钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白激酶II(CaMKII)蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力与探索能力下降,表现为逃避潜伏期明显延长,穿越原平台次数及在原平台象限停留时均明显减少(P<0.05),海马病理结构明显受损,海马CaM蛋白表达水平上调,CaMKII蛋白表达水平下调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,高、中浓度鹿茸组大鼠空间学习记忆能力与探索能力明显改善,表现为逃避潜伏期明显缩短,穿越原平台次数及在原平台停留时间均明显增加(P<0.05),海马CaM蛋白表达水平明显下调、CaMKII蛋白表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论鹿茸提取物可干预大鼠海马CaM、CaMKII蛋白表达,保护大鼠海马神经元,改善VD大鼠学习与记忆能力。 展开更多
关键词 鹿茸提取物 血管性痴呆 钙调蛋白 钙调蛋白激酶ii
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钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂对心肌细胞电生理特性的调节作用 被引量：3
3
作者 黄燕 黄从新 +3 位作者 王丹丹 王鑫 唐艳红 王腾 《中华心律失常学杂志》 2016年第3期229-235,共7页
目的：研究钙调蛋白激酶Ⅱ（ CaMK Ⅱ）抑制剂（ KN－93）对异丙肾上腺素（ ISO）作用下心肌细胞电生理特性的影响。方法酶解法急性分离小鼠心室肌细胞，将心肌细胞分为4组：正常对照组、异丙肾上腺素干预组（ ISO组）、异丙肾上腺素＋K... 目的：研究钙调蛋白激酶Ⅱ（ CaMK Ⅱ）抑制剂（ KN－93）对异丙肾上腺素（ ISO）作用下心肌细胞电生理特性的影响。方法酶解法急性分离小鼠心室肌细胞，将心肌细胞分为4组：正常对照组、异丙肾上腺素干预组（ ISO组）、异丙肾上腺素＋KN－92干预组（ ISO＋KN－92组）、异丙肾上腺素＋KN－93干预组（ ISO＋KN－93组）；应用全细胞膜片钳技术研究ISO及KN－93对心肌细胞L－型钙电流（ ICaL ）的影响；应用激光扫描共聚焦显微技术记录ISO及KN－93作用下心肌细胞钙瞬变；western bolt检测相关蛋白的表达水平。结果与对照组相比，ISO使ICaL峰值电流密度增大[ISO组：（－4．25±0．99） pA／pF，对照组：（－2．66±1．31） pA／pF，P＝0．01]：L型钙通道激活加速[ISO组半数激活电压：（－0．43±0．66） mV，对照组半数激活电压：（3．94±1．58） mV，P＜0．01]、失活加速[ISO组半数失活电压：（－10．91±1．11） mV，对照组半数失活电压：（－8．03±0．58） mV， P＜0．01]，并缩短失活后恢复时间[ ISO组恢复时间常数：（82．74±2．21） ms，对照组恢复时间常数：（119．32±4．24） ms，P＜0．01]；ISO使钙瞬变幅值增大（0．5 HZ：ISO组2．08±0．72，对照组1．05±0．43，P＜0．01；1．0 HZ：ISO组1．95±0．75，对照组1．07±0．41，P＜0．01），易诱发钙紊乱（P＜0．01）。 KN－93减弱ISO引起的钙稳态变化，使ICaL峰值电流密度减小（P＜0．05），激活减慢（P＜0．01），延长失活后恢复时间（P＜0．01）；并使钙瞬变幅值减小（0．5 HZ：P＜0．05，1．0 HZ：P＜0．05），减少钙紊乱。结论 KN－93能调节ISO引起的心肌细胞电生理特性的改变，在预防心律失常中发挥作用。 展开更多
关键词 异丙肾上腺素 钙调蛋白激酶ii抑制剂 L型钙电流 钙瞬变
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钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ RNA干扰载体构建及对破骨细胞分化和骨吸收的影响 被引量：3
4
作者 王艺睿 王会 +3 位作者 戚孟春 董伟 冯晓洁 孙红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期557-561,共5页
目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响。方法构建3个CaMKⅡγ RNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适转染滴度值(MOI)和转染效率。用重组载体转染细胞,确定干扰效果最佳的... 目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响。方法构建3个CaMKⅡγ RNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适转染滴度值(MOI)和转染效率。用重组载体转染细胞,确定干扰效果最佳的重组载体用于后续实验。细胞分为对照组、阴性载体组、干扰载体组;病毒转染5 d后通过TRAP染色及牙本质磨片骨吸收陷窝检测3组破骨细胞生成及骨吸收情况。结果成功构建了3个CaMKⅡγ重组干扰载体;最适MOI值为30,转染效率>80%。#3重组载体干扰效果最佳,干扰效率在mRNA及蛋白水平分别为78.16%和67.02%(P <0.01)。3组细胞中,干扰载体组多核破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数和面积较对照组分别下降了59.99%、54.19%和57.94%(P <0.01),而阴性载体组和对照组比较差异无显著性(P> 0.05)。结论 CaMKⅡγ RNA干扰可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收功能。 展开更多
关键词 钙调蛋白依赖性激酶iiγ 破骨细胞 RNA干扰 慢病毒
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鞘内注射m—AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响 被引量：3
5
作者 崔银 石寒 +1 位作者 马正良 顾小萍 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期581-583,共3页
目的观察鞘内注射钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ特异性抑制剂m—AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响。方法sD雄性大鼠18只按随机数字表法分为3组（每组n=6）：假手术对照Sham组（S组）、坐骨神经结扎模型对照Control组（C组）、... 目的观察鞘内注射钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ特异性抑制剂m—AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响。方法sD雄性大鼠18只按随机数字表法分为3组（每组n=6）：假手术对照Sham组（S组）、坐骨神经结扎模型对照Control组（C组）、m-AIP组。C组和m—AIP组制备坐骨神经慢性挤压伤（CCI）模型，S组仅显露坐骨神经不结扎。术后7dS组和C组鞘内注射0．9％NaCl20μl，m-AlP组鞘内注射溶于0．9％NaCl的m—AIP0．5nmo/20μl。各组于给药后1．5h行反映痛情绪的大鼠位置逃避实验（Placeescape／avoidanceparadigm，PEAP），给药前及给药后2h、4h、8h检测大鼠的热缩足反射潜伏期（Pawwithdrawalthermallatency，PWTL）和机械性缩足反射阈值（Pawwithdrawalmechanicalthreshold，PWMT）。结果鞘内给予m—AIP0．5nmol能够改善大鼠痛行为反应，减少位置逃避行为。给药后2h、4hm—AlP组PwTL[（11．45±2．04）S，（10．26±1．48）S]，PWMT[（21．15±4．32）g，（20．45±4．09）g]比c组PwTL[（9．63±1．65）S，（9．30±0．73）S]，PWMT[（13．87±2．36）g，（14．804-3．12）g]升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。给药前及给药后8hm—AIP组PWTL，PWMT与C组PWTL，PWMT相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CaMKII在坐骨神经痛的感觉分辨和情绪体验中起重要作用，鞘内注射m—AIP能够改善CCI大鼠痛行为和痛相关负性情绪。 展开更多
关键词 钙 钙调蛋白依赖性激酶ii m-AIP 神经病理性疼痛 痛相关负性情绪
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CaMKⅡδ慢病毒过表达载体构建及其对破骨细胞分化的影响 被引量：1
6
作者 张艳波 戚孟春 +4 位作者 董伟 张广峰 冯晓洁 温黎明 孙红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第13期2123-2127,共5页
目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)过表达对破骨细胞分化的影响。方法筛选破骨细胞分化中CaMKⅡδ高表达转录本,构建过表达载体。RAW264.7细胞分成对照组、空载体组和过表达组,检测CaMKⅡδ表达情况;并在分化诱导5 d后... 目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)过表达对破骨细胞分化的影响。方法筛选破骨细胞分化中CaMKⅡδ高表达转录本,构建过表达载体。RAW264.7细胞分成对照组、空载体组和过表达组,检测CaMKⅡδ表达情况;并在分化诱导5 d后检测破骨细胞生成及骨吸收情况。结果 CaMKⅡδ转录本2和3在破骨细胞分化中高表达;用转录本2构建了过表达载体,建立了稳定转染株。过表达组CaMKⅡδ mRNA水平较对照组、空载体组分别上升107.8%和85.7%(P<0.05),蛋白水平分别上升37.2%和37.1%(P<0.05),证实重组CaMKⅡδ在细胞中得到有效表达。CaMKⅡδ过表达组破骨细胞数目、牙本质吸收陷窝数和面积与对照组和空载体组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CaMKⅡδ过表达对破骨细胞分化和骨吸收无明显影响。 展开更多
关键词 钙离子/钙调蛋白依赖性激酶iiδ 基因重组 破骨细胞 慢病毒 核因子ΚB受体活化因子配体
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