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重组人白细胞介素21表达条件的探讨 被引量：1
1
作者 郑瑞 许晓群 +6 位作者 张彩 刘金生 张建华 余德荣 牛家峰 王义平 王郡甫 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2007年第5期294-296,共3页
目的探讨重组人白细胞介素21工程菌诱导表达的最佳条件。方法用摇瓶发酵的方法探索不同诱导条件(诱导温度、诱导时间、接种量I、PTG浓度等)对目的蛋白质表达的影响。结果该工程菌表达目的蛋白质的最佳温度是42℃;高密度接种更有利于目... 目的探讨重组人白细胞介素21工程菌诱导表达的最佳条件。方法用摇瓶发酵的方法探索不同诱导条件(诱导温度、诱导时间、接种量I、PTG浓度等)对目的蛋白质表达的影响。结果该工程菌表达目的蛋白质的最佳温度是42℃;高密度接种更有利于目的蛋白质的表达。结论建立了BL21/pET-30a(+)-IL21工程菌最佳诱导表达条件,为重组人白细胞介素21的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 基因工程菌 重组人白细胞介素21 发酵 表达
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重组人IL-21对人外周血淋巴细胞的活化作用 被引量：1
2
作者 刘勇 陈军浩 吴超 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期544-546,共3页
目的观察重组人白细胞介素21(IL-21)对健康人外周血淋巴细胞的活化作用,检测IL-21对外周血B细胞表面抗原提呈相关分子的表达及对淋巴细胞亚群的影响。方法重组人IL-21与健康人外周血单个核细胞(PBMC)共培养48h,用流式细胞技术检测T、B... 目的观察重组人白细胞介素21(IL-21)对健康人外周血淋巴细胞的活化作用,检测IL-21对外周血B细胞表面抗原提呈相关分子的表达及对淋巴细胞亚群的影响。方法重组人IL-21与健康人外周血单个核细胞(PBMC)共培养48h,用流式细胞技术检测T、B淋巴细胞表面CD69的表达,并与未加IL-21组进行比较;同时用流式细胞术检测B细胞表面主要组织相容性复合体Ⅰ及Ⅱ类分子(MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ)、CD80及CD86的表达量。细胞培养96h后检测淋巴细胞亚群的变化。结果重组人IL-21能显著提高T、B淋巴细胞表面CD69的表达量,与未加IL-21组相比差异有统计学意义(P<0.05),但却不能提高B细胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80及CD86的表达量。经IL-21刺激后人淋巴细胞亚群中自然杀伤细胞(NK)细胞及自然杀伤T细胞(NKT)细胞比例明显增加。结论重组人IL-21可以活化人的T、B淋巴细胞,同时IL-21刺激后人淋巴细胞亚群中自然杀伤细胞(NK)细胞及NKT细胞比例明显增加。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素21 淋巴细胞
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RhIL-21对NK-92MI细胞生物学活性的影响
3
作者 郑瑞 陈葆国 +3 位作者 颜卫华 李伯利 章卫国 干灵红 《医学研究杂志》 2012年第3期120-124,共5页
目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25～100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24～72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受... 目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25～100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24～72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受体及胞内颗粒酶-B蛋白的表达;细胞杀伤试剂盒检测NK-92MI细胞对靶细胞K-562的细胞毒效应;RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D,效应分子颗粒酶-B、穿孔素及细胞因子IFN-γ基因mRNA的表达;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。结果 RhIL-21虽能抑制NK-92 MI细胞的增殖(P<0.05),但不会促进细胞的凋亡(P<0.05)。RhIL-21能促进NK-92MI细胞穿孔素、IFN-γ、颗粒酶-B、NKG2D受体基因及相应蛋白质的表达上调(P<0.05)。rhIL-21预处理组NK-92MI对K-562细胞的细胞毒效应也明显增强(P<0.05)。结论 RhIL-21能增强NK-92 MI细胞的细胞毒效应,IL-21在肿瘤的免疫治疗中有潜在临床应用价值。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-21 NK-92MI细胞 干扰素-Γ NKG2D 颗粒酶 穿孔素
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重组人白细胞介素-21的原核表达及其复性与纯化
4
作者 郑瑞 许晓群 +4 位作者 张建华 张彩 刘金生 苏庆红 王郡甫 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2008年第4期233-236,共4页
目的构建工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21表达体系,表达并纯化出具有生物学活性的目的蛋白质。方法用基因工程方法构建表达质粒pET30a(+)-IL-21;在BL21大肠杆菌中诱导表达基因重组人白细胞介素-21(rhIL-21);提取包涵体并建立复性条件;用Ni-... 目的构建工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21表达体系,表达并纯化出具有生物学活性的目的蛋白质。方法用基因工程方法构建表达质粒pET30a(+)-IL-21;在BL21大肠杆菌中诱导表达基因重组人白细胞介素-21(rhIL-21);提取包涵体并建立复性条件;用Ni-NTA凝胶纯化出rhIL-21;以NK92为效应细胞,观察rhIL-21对NK92的生物学作用,以此检测其活性。结果构建了重组质粒pET30a(+)-IL-21,工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21能大量表达目的蛋白质;经复性和纯化得到具有生物学活性的rhIL-21。结论成功建立了人IL-21的原核表达体系,得到了有生物学活性的rhIL-21蛋白质。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-21 表达 复性 蛋白纯化
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