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半夏及掌叶半夏毒针晶中共性毒蛋白的研究 被引量:24
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作者 郁红礼 朱法根 吴皓 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期1037-1042,共6页
目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应。方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽... 目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应。方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽段,将质谱分析数据与BIOWORKS软件搜索的NCBI绿色植物Viridiplantae蛋白库比对进行蛋白质检索分析。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对半夏、掌叶半夏毒针晶蛋白进行分析,同时采用胶内酶解后液相色谱与串联质谱偶联的方法,分析并鉴定约13kDa蛋白。提取分离半夏中的凝集素蛋白,并采用中性粒细胞迁移试验和测定腹腔渗出液中PGE2的含量,考察毒针晶及凝集素的炎症刺激性效应。结果:半夏及掌叶半夏毒针晶中均含约13kDa的蛋白条带,此条带经鉴定为凝集素类蛋白,且此13kDa蛋白条带为毒针晶中的主要蛋白之一,凝集素类蛋白可诱导中性粒细胞向大鼠腹腔迁移,可显著增加小鼠腹腔渗出液中PGE2的含量。结论:天南星科有毒中药半夏及掌叶半夏毒针晶蛋白中均含有凝集素类蛋白,且此类凝集素蛋白具有显著的致炎作用,是半夏与掌叶半夏毒针晶中的共性毒蛋白。 展开更多
关键词 半夏 掌叶半夏 毒针晶 蛋白鉴定 凝集素蛋白 致炎效应
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Identification of immunoreactive proteins of Brucella melitensis by immunoproteomics 被引量:12
2
作者 ZHAO ZhongPeng YAN Fang +8 位作者 JI WenHui LUO DeYan LIU Xin XING Li DUAN YueQiang YANG PengHui SHI XiuMin LI Zhong WANG XiLiang 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2011年第9期880-887,共8页
Infection with Brucella causes brucellosis, a chronic disease in humans, which induces abortion and sterility in livestock. Among the different Brucella species, Brucella melitensis is considered the most virulent and... Infection with Brucella causes brucellosis, a chronic disease in humans, which induces abortion and sterility in livestock. Among the different Brucella species, Brucella melitensis is considered the most virulent and is the predominant species associated with outbreaks in China. To date, no safe human vaccine is available against Brucella infection. The currently used live vaccines against Brucella in livestock induce antibodies that interfere with the diagnosis of field infection in vaccinated ani- mals, which is harmful to eradication programs. However, there is as yet no complete profile of immunogenic proteins of B. melitensis. Towards the development of a safer, equally efficacious, and field infection-distinguishable vaccine, we used immunoproteomics to identify novel candidate immunogenic proteins from B. melitensis M5. Eighty-eight immunoreactive protein spots from B. melitensis M5 were identified by Western blotting and were assigned to sixty-one proteins by mass spectrometry, including many new immunoreactive proteins such as elongation factor G, FOFI ATP synthase subunit beta, and OMPI. These provide many candidate immunoreactive proteins for vaccine development. 展开更多
关键词 BRUCELLA IMMUNOPROTEOMICS immunoreactive protein
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双向凝胶电泳图像分析方法的建立 被引量:3
3
作者 熊兴东 许丽艳 +5 位作者 沈忠英 蔡唯佳 韩溟 牛永东 韩雅莉 李恩民 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2002年第3期139-143,共5页
目的 :建立一套双向凝胶电泳图像分析方法 ,为下一步差别蛋白的鉴定提供依据。方法 :采用一步法分别提取人永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的可溶性总蛋白。经双向凝胶电泳分离后 ,应用Bio Rad公司的双向... 目的 :建立一套双向凝胶电泳图像分析方法 ,为下一步差别蛋白的鉴定提供依据。方法 :采用一步法分别提取人永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的可溶性总蛋白。经双向凝胶电泳分离后 ,应用Bio Rad公司的双向电泳凝胶图像分析软件PDQuest 6 .2分析SHEE与SHEEC之间可溶性总蛋白的差异表达情况。结果 :SHEE和SHEEC细胞的双向电泳图谱经背景消减、点检测和匹配后 ,获得了各自的差异蛋白点。其中有 7个蛋白点只出现在SHEE细胞中 ,有 2个蛋白点只出现在SHEEC细胞中。结论 :利用PDQuest 6 .2凝胶图像分析软件可快速有效地对两个密切相关的生物系统之间蛋白质样品双向凝胶电泳结果的差别进行分析处理。 展开更多
关键词 双向凝胶电泳 凝胶图像分析 蛋白质组 PDQuest软件 蛋白鉴定
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卵巢癌患者血清中肿瘤特异标志物的鉴定研究 被引量:2
4
作者 胡利华 庞红艳 +3 位作者 李欣 吴尔若 马旭 于和鸣 《中国计划生育学杂志》 北大核心 2005年第4期230-233,共4页
目的:通过分析卵巢癌患者血清中的蛋白质组分,寻找可能的肿瘤相关蛋白并对该蛋白鉴定,以期确定其作为卵巢癌血清学诊断的特异标志物。方法:采用双向凝胶电泳方法分离6例卵巢癌患者及2例正常健康妇女血清总蛋白,经考马斯亮蓝染色后对比... 目的:通过分析卵巢癌患者血清中的蛋白质组分,寻找可能的肿瘤相关蛋白并对该蛋白鉴定,以期确定其作为卵巢癌血清学诊断的特异标志物。方法:采用双向凝胶电泳方法分离6例卵巢癌患者及2例正常健康妇女血清总蛋白,经考马斯亮蓝染色后对比找出差异蛋白斑点,该蛋白斑点经蛋白酶水解后进行液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,用SEQUEST搜索软件查询Finngan公司提供的FASTA格式蛋白序列数据库。采用WesternBlotting、ELISA、斑点印迹及亲和层析等方法对目标蛋白作进一步的分析。结果:经双向电泳分离,卵巢癌患者血清中有3-4个组分显示含量高于正常健康妇女血清,选其中最明显的一个差异斑点进行质谱分析,对库检索确定为结合珠蛋白。进一步的分析证实,卵巢癌患者血清中结合珠蛋白总含量有高于正常健康妇女的趋势。此外,通过凝集素斑点印迹法检测发现,岩藻糖基化结合珠蛋白成分明显增加是该蛋白总量增高的主要特性。结论:检测血清结合珠蛋白总量以及特异的岩藻糖基化组分可能成为卵巢癌的血清诊断指标之一,可与其它检测方法相结合,提高卵巢癌早期诊断的有效性。 展开更多
关键词 卵巢癌患者 标志物 鉴定研究 特异 BLOTTING Western 血清结合珠蛋白 肿瘤相关蛋白 健康妇女 蛋白质组分 血清学诊断 血清总蛋白 ELISA 斑点印迹法 蛋白鉴定 电泳方法 差异蛋白 串联质谱 液质联用 蛋白序列 亲和层析 电泳分离
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基于马尔科夫链的胰蛋白酶肽段蛋白酶切位点概率预测 被引量:6
5
作者 刘辉 张纪阳 +5 位作者 孙汉昌 徐长明 张伟 马海滨 朱云平 谢红卫 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期528-536,共9页
在基于质谱技术的蛋白质鉴定过程中,数据库搜索是主要的方法。漏切位点和酶切规则决定了图谱候选肽段的范围,是数据库搜索算法的重要参数。对于常用的胰蛋白酶切来说,除了局部构象、三维结构、实验条件,以及其它偶然因素会影响赖氨酸K... 在基于质谱技术的蛋白质鉴定过程中,数据库搜索是主要的方法。漏切位点和酶切规则决定了图谱候选肽段的范围,是数据库搜索算法的重要参数。对于常用的胰蛋白酶切来说,除了局部构象、三维结构、实验条件,以及其它偶然因素会影响赖氨酸K或者精氨酸R后的位点能否被酶切外,该位点附近的其它氨基酸也会影响蛋白水解酶的酶切效果。从质谱图谱中时常会鉴定出包含漏切位点的肽段,因此,预测蛋白质的酶切位点能够为数据库搜索算法提供更为可靠的模型,也能够为了解和分析蛋白质的酶切规律提供依据。本文提出了一种基于马尔科夫(Markov)链的预测方法,能够利用蛋白质的序列信息来预测候选酶切位点的酶切概率,在蛋白酶切过程中,预测肽段的覆盖率可以达到85%以上。 展开更多
关键词 蛋白鉴定 蛋白酶肽段 酶切/漏切肽段 马尔科夫链 概率预测
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蓝舌病病毒VP7抗原在重组杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
6
作者 王乃福 刘志玲 +4 位作者 吴冬雪 孙雨 孙航 宋晓晖 张海滨 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第5期31-36,共6页
本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原,为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化... 本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原,为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pFastBacHTA载体上,并构建相应的重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac,转染sf9昆虫细胞后获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达制备蓝舌病病毒VP7抗原。结果显示,重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac转染sf9昆虫细胞并连续盲传5代后,成功获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,并成功表达纯化出VP7蛋白,大小约为43 kDa,蛋白纯度约为94%;VP7重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。综上,重组VP7蛋白能够与BTV阳性血清呈现特异性反应,具有良好的反应原性,蛋白纯度高,并且具有病毒蛋白的生物学活性,将其作为诊断抗原,后期可用于开发系列免疫学抗体诊断检测技术。 展开更多
关键词 蓝舌病 重组VP7抗原 杆状病毒 真核表达 蛋白鉴定
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冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱主峰右侧峰2蛋白鉴定
7
作者 张秋菊 杨雪 +7 位作者 冯子祎 赵博 林洪娟 田丽媛 杨光 刘畅 李子莉 孙宏亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期801-805,共5页
目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将... 目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)进行SEC-HPLC分析,收集主峰右侧峰2,经超滤浓缩后,进行二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)还原、碘代乙酰胺(iodoacetamide,IAM)烷基化和胰蛋白酶(Trypsin)酶解,产物进行nanoLC-MS/MS串联质谱分析。结果冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2成功鉴定4个蛋白,单个蛋白匹配肽段数在59~79个之间;单个蛋白匹配特征肽段种数在6~12种之间;单个蛋白匹配特征肽段检出次数在20~36次之间;鉴定蛋白的序列覆盖率在37.40%~64.31%之间。参与统计的肽段共280个,质谱偏差均小于0.15 Da。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2均来源于狂犬病病毒株4aGV,为疫苗颗粒解离物。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白) 狂犬病病毒株4aGV 体积分子排阻-高效液相色谱 蛋白鉴定 nanoLC-MS/MS分析 疫苗病毒颗粒
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应用鸟枪法LC-MS/MS鉴定烟粉虱唾液蛋白 被引量:6
8
作者 邵若玄 徐红星 +1 位作者 刘树生 王晓伟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期433-439,共7页
烟粉虱是一种刺吸式口器小型昆虫,每年对我国农业生产造成巨大危害。烟粉虱在取食植物时分泌多种唾液蛋白帮助其取食,同时唾液中的效应因子在调控植物防御反应过程中发挥重要作用。由于烟粉虱个体微小,唾液收集十分困难,有关其唾液蛋白... 烟粉虱是一种刺吸式口器小型昆虫,每年对我国农业生产造成巨大危害。烟粉虱在取食植物时分泌多种唾液蛋白帮助其取食,同时唾液中的效应因子在调控植物防御反应过程中发挥重要作用。由于烟粉虱个体微小,唾液收集十分困难,有关其唾液蛋白的研究难以开展。本研究收集了3万头烟粉虱唾液,利用高精度Q-Exactive质谱,采用shotgun的方法首次鉴定了烟粉虱唾液中蛋白组分。应用双层膜收集装置收集到的烟粉虱唾液经浓缩等处理后其蛋白浓度约为1.698 g/L。唾液蛋白样品经胶内酶解、LC-MS/MS检测、序列分析,最终鉴定出42个烟粉虱唾液蛋白。功能分析表明烟粉虱唾液蛋白组分与蚜虫唾液蛋白组分具有一定的相似性,但多数蛋白为功能未知蛋白。通过质谱鉴定烟粉虱唾液蛋白组分为深入研究烟粉虱唾液蛋白的功能奠定了基础,有利于明确烟粉虱危害寄主植物的分子机制,为开发害虫防治新方法提供新思路。 展开更多
关键词 烟粉虱 唾液 Q-Exactive SHOTGUN LC-MS/MS 蛋白鉴定
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猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白的原核表达与纯化 被引量:1
9
作者 刘之睿 黄嘉瑶 +4 位作者 苏荣 陈濛濛 彭春婷 唐青海 唐斯萍 《湖南畜牧兽医》 2023年第5期30-36,共7页
为制备高致病性的TGEV毒株重组S蛋白,试验将重组质粒pET28a-TGEV-S2、pET28a-TGEV-S3,转化至E.coli BL21(DE3)表达菌株,设置不同的诱导温度、IPTG浓度和诱导时长对其进行表达条件的优化,并使用纯化试剂盒将其纯化,采用SDS-PAGE和Western... 为制备高致病性的TGEV毒株重组S蛋白,试验将重组质粒pET28a-TGEV-S2、pET28a-TGEV-S3,转化至E.coli BL21(DE3)表达菌株,设置不同的诱导温度、IPTG浓度和诱导时长对其进行表达条件的优化,并使用纯化试剂盒将其纯化,采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果表明,重组TGEV毒株S蛋白的分子量分别约为28 kDa、30 kDa,在不同诱导条件下均以包涵体形式存在,在28℃条件下以终浓度为1 mmoL·L^(-1)IPTG诱导4 h表达量达到最高。结果表明:试验成功制备了TGEV重组S蛋白,为TGEV抗体检测试剂盒和基因工程疫苗、检测试剂的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 原核表达 蛋白鉴定 纯化
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pQE-EGFP原核表达载体的构建及其表达和鉴定 被引量:3
10
作者 李欢 胡晓梅 +6 位作者 杨杰 饶贤才 丛延广 黎庶 周莹冰 朱军民 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2008年第4期349-352,449,共5页
目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转... 目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定表达蛋白质。结果:PCR扩增得到了EGFP全长结构基因。所构建的pQE-EGFP重组质粒经酶切及测序鉴定结果与设计序列一致;转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导后,目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量约为28 500,与理论预期值一致。结论:pQE-EGFP重组质粒的成功构建、表达和鉴定为TAT-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白 基因克隆 蛋白表达 蛋白鉴定
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人S100A2-GST融合蛋白原核表达和纯化 被引量:3
11
作者 卫佳 王胜 +6 位作者 苗静琨 陈英华 李星星 吴丽美 左国伟 何通川 周兰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第12期1427-1430,共4页
目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-mo... 目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量。结果:XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300bp和5kb,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36kD的蛋白,产率达5mg/L菌液;Glutathion-Sepharose4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;Western Blot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白。结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白。为后续有关hS100A2的研究打下了基础。 展开更多
关键词 人S100A2-GST融合蛋白 诱导表达 蛋白纯化 蛋白鉴定
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GST-hS100A9融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定 被引量:3
12
作者 游莉 徐兰兰 +5 位作者 郭元元 邹正渝 黎玉叶 孙双双 罗进勇 周兰 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期253-256,共4页
目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂... 目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(GS4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36 000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20 mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖。结论成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用。 展开更多
关键词 GST-hS100A9融合蛋白 诱导表达 蛋白纯化 蛋白鉴定
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基因工程的下游技术 被引量:2
13
作者 周思翔 华慧 王正荣 《国外医学(生物医学工程分册)》 CAS 2003年第4期173-179,共7页
基因工程的下游技术是现代生物技术的关键技术 ,它的重要性已越来越为人们所重视。生物技术产品的下游处理技术包括基因工程产物的分离、纯化及分析鉴定。本文综述了基因工程产物的分离。
关键词 基因工程产物 下游技术 蛋白分离纯化 蛋白鉴定
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转录组和蛋白质组在动物毒素研究中的应用 被引量:3
14
作者 曹园 高美风 孔毅 《药物生物技术》 CAS 2018年第4期340-344,共5页
动物毒素因其结构新颖、生物活性强等特点一直以来都是研究的热点,是药物开发和临床应用等多领域重要的资源。随着转录组测序技术的快速发展和成本降低,使得转录组学研究更加深入,生物质谱技术的不断更新和完善,蛋白质组学研究进入了新... 动物毒素因其结构新颖、生物活性强等特点一直以来都是研究的热点,是药物开发和临床应用等多领域重要的资源。随着转录组测序技术的快速发展和成本降低,使得转录组学研究更加深入,生物质谱技术的不断更新和完善,蛋白质组学研究进入了新的高度。动物毒素的研究最初是通过分离单一组分进行结构和功能分析,而如今将转录组测序分析和基于质谱的蛋白质组学技术联合运用到动物毒素的研究中,并通过数据库搜索软件实现质谱数据到蛋白的鉴定,使得动物毒素的研究进入了新的发展阶段,在动物毒素蛋白鉴定,新活性蛋白发现,进化分析等多方面发挥了重要作用。文章综述了近年来通过转录组学和蛋白质组学联用在多种动物毒素研究中的具体应用。 展开更多
关键词 转录组 测序技术 蛋白质组 生物质谱 动物毒素 蛋白鉴定
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橡胶树胶乳C-乳清死皮相关蛋白的鉴定及分析 被引量:3
15
作者 周雪梅 杨礼富 +2 位作者 王真辉 邹智 袁坤 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期37-41,共5页
橡胶树死皮是影响天然橡胶产量的重要限制因子。通过双向凝胶电泳技术(2-DE)研究了橡胶死皮树与健康树胶乳C-乳清蛋白表达谱的差异。以软件分析后共获得31个差异表达的蛋白点,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析后,... 橡胶树死皮是影响天然橡胶产量的重要限制因子。通过双向凝胶电泳技术(2-DE)研究了橡胶死皮树与健康树胶乳C-乳清蛋白表达谱的差异。以软件分析后共获得31个差异表达的蛋白点,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析后,搜索NCBInr数据库,结果有10个蛋白点被成功鉴定,其中6个为未知蛋白,其余4个蛋白分别为chain A,struc-ture of ubiquitin-like protein,Rub1;β-1,3-glucanase;AIR9 protein和flagellar inner dynein arm heav-y chain 11。这些蛋白可能在橡胶树死皮发生过程中扮演重要角色。 展开更多
关键词 橡胶树死皮 胶乳C-乳清 蛋白鉴定 双向凝胶电泳 MALDI-TOFMS
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应用蛋白质组学技术筛选急性心肌梗死早期标志蛋白的研究 被引量:3
16
作者 张丽 谢建洪 +2 位作者 劳迪波 郦卫星 陈莹 《浙江医学》 CAS 2014年第24期1985-1989,共5页
目的检测急性心肌梗死早期(发病到就诊时间<2h)患者血清中的蛋白表达谱,筛选并鉴定出特异的标志蛋白。方法选取20例急性心肌梗死早期患者(早期急性心肌梗死组)和40例稳定性心绞痛患者(稳定性心绞痛组),采用激光解析电离飞行时间质谱... 目的检测急性心肌梗死早期(发病到就诊时间<2h)患者血清中的蛋白表达谱,筛选并鉴定出特异的标志蛋白。方法选取20例急性心肌梗死早期患者(早期急性心肌梗死组)和40例稳定性心绞痛患者(稳定性心绞痛组),采用激光解析电离飞行时间质谱技术,检测两组患者血清中的蛋白峰强度,寻找差异表达蛋白并建立蛋白分类模式,确定诊断的特异度和敏感度。采用液相质谱技术进一步鉴定已筛选出来的蛋白。结果早期急性心肌梗死组有5个蛋白显著高表达,质荷比分别为1530.32、4 301.46、8 683.44、23 386.1、23 625.5Da,与稳定性心绞痛组患者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。建立决策树,早期诊断急性心肌梗死的敏感度为93.33%,特异度为85.00%,阳性预测值为93.33%。经过鉴定,phosphoglycerate mutase 1在急性心肌梗死早期患者中高表达。结论通过蛋白质组学技术可以早期发现急性心肌梗死,phosphoglycerate mutase 1为早期特异表达蛋白。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 质谱 生物学标记 蛋白鉴定
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Expasy数据库与基因数据库交联比对法初步分析SELDI蛋白质荷峰 被引量:3
17
作者 赖梅生 《中国中医药现代远程教育》 2009年第10期7-8,共2页
目的探索确定SELDI识别出的蛋白质荷峰性质的方法。方法应用基因数据库与Expasy等蛋白数据库交联比对分析方法来初步分析SELDI得到系统性红斑狼疮淋巴细胞候选质荷峰的蛋白性质。结果应用基因数据库与Expasy等蛋白数据库交联比对分析方... 目的探索确定SELDI识别出的蛋白质荷峰性质的方法。方法应用基因数据库与Expasy等蛋白数据库交联比对分析方法来初步分析SELDI得到系统性红斑狼疮淋巴细胞候选质荷峰的蛋白性质。结果应用基因数据库与Expasy等蛋白数据库交联比对分析方法可以初步明确SELDI法建立的蛋白质荷峰的蛋白可能属性的较小范围,为进一步确定蛋白质荷峰的性质提供更加明确的方向,为进一步研究打下基础,该方法有待进一步完善与验证。 展开更多
关键词 SELDI 蛋白鉴定 基因数据库
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角倍蚜唾液的提取和蛋白鉴定 被引量:3
18
作者 马琳 杨子祥 +1 位作者 唐翊峰 刘平 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期302-307,共6页
唾液是蚜虫与寄主植物相互作用的关键因子,蚜虫唾液研究对于作物抗蚜品种选育、防治技术开发和虫瘿形成机理研究等具有重要意义,但唾液的提取和浓缩是研究中的难点。本研究根据角倍蚜体型微小、体表有蜡粉的特点,对蚜虫唾液研究中常用... 唾液是蚜虫与寄主植物相互作用的关键因子,蚜虫唾液研究对于作物抗蚜品种选育、防治技术开发和虫瘿形成机理研究等具有重要意义,但唾液的提取和浓缩是研究中的难点。本研究根据角倍蚜体型微小、体表有蜡粉的特点,对蚜虫唾液研究中常用的双层Parafilm膜夹营养液方法进行了改进,改进的方法能够成功提取角倍蚜干雌的唾液,用于质谱分析和蛋白鉴定。 展开更多
关键词 角倍蚜 唾液提取 浓缩方法 蛋白鉴定
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1株高滴度噬斑型三型副流感病毒野毒株的分离纯化及鉴定 被引量:3
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作者 火文 关文竹 +7 位作者 王云瑾 韩平 马超 包红 寇桂英 李雄雄 巩晗博 白慕群 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1170-1177,1183,共9页
目的从临床标本中分离1株人三型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)野毒株,并进行鉴定。方法将下呼吸道感染患儿下呼吸道分泌物通过人胚肺二倍体细胞(WI-38)传代培养分离并噬斑克隆纯化病毒。二代基因测序测定病毒全... 目的从临床标本中分离1株人三型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)野毒株,并进行鉴定。方法将下呼吸道感染患儿下呼吸道分泌物通过人胚肺二倍体细胞(WI-38)传代培养分离并噬斑克隆纯化病毒。二代基因测序测定病毒全基因序列;蔗糖密度超速离心纯化病毒,电镜观察病毒大小和形态;SDS-PAGE和Western blot鉴定病毒蛋白;检测病毒在不同宿主细胞上的增殖能力和噬斑形成能力以及在体外传代的遗传稳定性和增殖稳定性。结果通过大量临床标本的传代筛选和克隆纯化,得到1株去除特定外源因子的HPIV-3野毒株HPIV3LZ17-28C19,全基因测序显示此毒株与HPIV-3基因组核苷酸序列的同源性高达99.14%;蔗糖密度超速离心纯化的毒株在电镜下可见长轴径150-300 nm的具有脂质外膜的HPIV-3病毒颗粒,含有HPIV-3的结构蛋白HN和F,在WI-38、Vero和MA104细胞中高滴度增殖,滴度在10^(7)-10^(9)copies/mL,可在Vero和MA104细胞上形成明显均一的噬斑,且在有限传代中具有遗传稳定性和增殖稳定性。结论本研究获得了1株高滴度噬斑型无特定外源因子的HPIV-3野毒株,对HPIV-3疫苗的研发以及HPIV-3感染动物模型和各种检测方法的建立具有重要意义。 展开更多
关键词 人三型副流感病毒 病毒分离 遗传特征分析 蛋白鉴定 细胞培养特性
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叶酸受体α原核载体的构建及表达 被引量:3
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作者 张梅 邱郑 +3 位作者 邢黎军 强旭 张娟 王旻 《药物生物技术》 CAS 2016年第1期26-29,共4页
PCR法扩增叶酸受体α基因片段,经NcoⅠ和EcoRⅠ双酶切后克隆到原核表达载体pet22b,并进行双酶切和测序鉴定;将测序正确的重组质粒通过Ca Cl2法转入BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE,Western blot和ELISA... PCR法扩增叶酸受体α基因片段,经NcoⅠ和EcoRⅠ双酶切后克隆到原核表达载体pet22b,并进行双酶切和测序鉴定;将测序正确的重组质粒通过Ca Cl2法转入BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE,Western blot和ELISA鉴定蛋白表达;免疫小鼠,血清效价检测蛋白免疫原性。经双酶切和测序验证,成功构建FRα-pet22b表达载体。Western blot验证表明,叶酸受体α基因能在BL21中表达目的蛋白,但ELISA值较低。经免疫后小鼠血清与市售叶酸受体α亲和力差,预示原核表达虽能得到叶酸受体α,但其构象可能与真核表达蛋白不同。 展开更多
关键词 叶酸受体Α 构建 原核表达 蛋白鉴定 亲和力 构象
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