西门塔尔牛肌肉生成抑制素基因编码序列的克隆与序列分析 被引量：2

1

作者 吕文发 赵静 袁天祥 《中国牛业科学》 2006年第1期19-20,23,共3页

本研究根据Genbank中牛肌肉生成抑制素基因序列设计引物,在设计的引物两端分别加上限制性内切酶BamHI和EcoRI的识别位点序列。利用RT-PCR技术从西门塔尔牛肌肉组织的总RNA中扩增出MSTN基因的CDNA序列,扩增出1 125 bp片段,该片段与pMD18-... 本研究根据Genbank中牛肌肉生成抑制素基因序列设计引物,在设计的引物两端分别加上限制性内切酶BamHI和EcoRI的识别位点序列。利用RT-PCR技术从西门塔尔牛肌肉组织的总RNA中扩增出MSTN基因的CDNA序列,扩增出1 125 bp片段,该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行酶切和PCR鉴定,并进行了测序分析,得到的克隆序列与设计的序列基本一致,表明成功地克隆了西门塔尔牛的肌肉生成抑制素基因的蛋白编码序列。 展开更多

关键词 西门塔尔牛 肌肉生成抑制素 克隆 蛋白编码序列

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棘腹蛙线粒体局部重复序列非排序聚类

2

作者 曹跃 夏云 郑渝池 《四川动物》 北大核心 2018年第3期261-267,共7页

动物线粒体基因组发生局部串联复制后,涉及区域具有多基因拷贝、假基因化、大量插入缺失的特点,难以排序和构建基因树。而不依赖排序的聚类方法理论上可用来归纳和展示这类序列的差异,但未见相关评估和运用。本研究选取棘腹蛙Quasipaa b... 动物线粒体基因组发生局部串联复制后,涉及区域具有多基因拷贝、假基因化、大量插入缺失的特点,难以排序和构建基因树。而不依赖排序的聚类方法理论上可用来归纳和展示这类序列的差异,但未见相关评估和运用。本研究选取棘腹蛙Quasipaa boulengeri 19号个体,以3类常用的基于特定长度(k)子序列集的非排序算法,依次设k值为4、6、8……20,对其轻链复制起点邻近复制区域583~695 bp的序列进行聚类。构建相同个体线粒体1 518 bp蛋白编码序列最大似然树为参照,计算和考查两者间拓扑结构距离和差异。所评估的28种算法中,半数可在主要为8的特定k值下产生和最大似然树拓扑结构相差仅2个节点(11.8%)的聚类树,部分算法在不同k值下均表现不佳,较小的k值(4)适合解析差异程度相对较高的序列间关系。这些结果例证了动物线粒体重复序列非排序聚类的可行性,其中的算法、k值理想组合可能适合类似系统。建议对其他类型的复制重排系统进行类似评估。 展开更多

关键词 棘腹蛙 线粒体DNA 非排序比对 聚类 重复序列 拓扑结构距离 蛋白编码序列 最大似然树

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猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化 被引量：2

3

作者 张锐 孙美榕 +5 位作者 张红莲 杨捷 黄燕 陈绍红 杜慧 欧阳红生 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第9期53-56,共4页

　猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA在去除信号肽后,对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆,并测序分析,结果表明其与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用... 　猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA在去除信号肽后,对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆,并测序分析,结果表明其与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamH 和Sal 内切酶识别序列的另1对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建的表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,表达的MSTN分子质量为41.4513ku。因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92.5%。 展开更多

关键词 猪肌生成抑制素基因 成熟蛋白编码序列 表达 纯化

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猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化 被引量：2

4

作者 张锐 孙美榕 +1 位作者 欧阳红生 张玉静 《生物技术通讯》 CAS 2004年第1期23-25,共3页

猪肌生成抑制素(myostatin,MSTN)基因的cDNA去除信号肽后PCR扩增出成熟蛋白编码序列1.2kb片段熏将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞;筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHI和... 猪肌生成抑制素(myostatin,MSTN)基因的cDNA去除信号肽后PCR扩增出成熟蛋白编码序列1.2kb片段熏将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞;筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHI和SalI内切酶识别序列的另一对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了编码猪肌生成抑制素成熟蛋白的原核表达载体。LB液体培养基中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示重组菌表达的MSTN蛋白以包涵体形式存在;经薄层扫描仪扫描分析SDS-PAGE凝胶,表达的MST包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,其相对分子质量为41451.3。所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签HisTrap亲和柱纯化后纯度可达92.5%。该试验为获得较好的猪肌生成抑制素并制备抗体打下了良好的基础。 展开更多

关键词 表达 纯化 成熟蛋白编码序列 猪肌生成抑制素基因

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牛乳蛋白的遗传密码子使用频率分析 被引量：1

5

作者 刘晶 于浩 +4 位作者 杨润军 鲍永华 李俊雅 戴蕴平 赵志辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期267-271,共5页

研究牛乳蛋白不同氨基酸的密码子使用频率对利用乳腺生物反应器表达目标蛋白过程中密码子的优化具有重要意义。本试验运用ENBOSS的CHIPS和SMS中的密码子使用工具对7种牛乳蛋白编码的基因进行了分析,并将这7个编码序列拼接在一起进行了... 研究牛乳蛋白不同氨基酸的密码子使用频率对利用乳腺生物反应器表达目标蛋白过程中密码子的优化具有重要意义。本试验运用ENBOSS的CHIPS和SMS中的密码子使用工具对7种牛乳蛋白编码的基因进行了分析,并将这7个编码序列拼接在一起进行了乳蛋白全基因组的密码子偏爱性研究,同时与绵羊、猪及小鼠的乳蛋白密码子偏爱性进行了比较。结果表明:牛乳蛋白的CHIPS分析Nc值为51.867,αs1-CN、αs2-CN、-βCN、-κCN、α-LB、-βLG、LTF的Nc值分别为52.005、49.967、48.746、58.113、55.514、36.274、47.646,编码牛乳蛋白氨基酸的密码子出现频率较均一;牛乳蛋白V、A、R、I、T、L、Q、P等氨基酸的密码子使用频率与其他物种有较大差异。牛乳蛋白的密码子偏爱性与绵羊最为接近。 展开更多

关键词 牛乳蛋白 密码子使用频率 蛋白编码序列的密码子异质性 密码子偏爱性

原文传递

乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究 被引量：1

6

作者 郑旭晨 郑浩 +6 位作者 郭亦非 刘飞 梁超 童武 单同领 于海 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第4期17-22,共6页

为了探求乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定遗传的影响因子，本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1-2913 bp为研究对象，分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用。在... 为了探求乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定遗传的影响因子，本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1-2913 bp为研究对象，分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用。在5＇端，分析片段中潜在的原核启动子序列，通过PCR扩增得到不同长度的cDNA片段；在3＇端，通过内切酶酶切截断基因组prM蛋白或E蛋白编码区，获得3＇末端不同的cDNA片段。将各片段克隆入pCR-BluntII-TOPO载体，转化大肠杆菌，于37℃条件下培养。结果显示，片段73-2913 bp、97-2913 bp、355-2913 bp及1-933 bp、1-1275 bp能够在转化菌中稳定遗传；含有其他片段39-2913 bp、54-2913 bp及1-1800 bp、1-1971 bp的重组细菌不能在37℃条件下生长；片段1-1600 bp虽然能够在转化菌中传代，但是出现不规律突变。以上结果表明：软件所预测各原核启动子片段中，基因组73-118 bp区域与cDNA克隆稳定性有关，且上游的54 bp至73 bp的序列对该区域启动子存在影响；在JEV基因组1275 bp至1600 bp之间可能存在毒性蛋白编码序列。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 遗传不稳定性 潜在启动子 毒性蛋白编码序列位置

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SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性

7

作者 赵百慧 钱冬萌 +3 位作者 闫志勇 侯伟 付强 王斌 《青岛大学医学院学报》 CAS 2003年第2期118-120,122,共4页

①目的　了解SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。②方法　分别将具有明确致病性的 2 2种冠状病毒 (包括 6株SARS病毒 )S蛋白编码序列和 2 2种冠状病毒全基因序列 (包括 1 1株SARS病毒 )进行对排并绘制系统发生树 ,观察具有不同组织嗜性... ①目的　了解SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。②方法　分别将具有明确致病性的 2 2种冠状病毒 (包括 6株SARS病毒 )S蛋白编码序列和 2 2种冠状病毒全基因序列 (包括 1 1株SARS病毒 )进行对排并绘制系统发生树 ,观察具有不同组织嗜性和宿主范围的冠状病毒所处的位置 ,预测SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。③结果　在依据编码S蛋白序列和全基因序列所绘制的系统发生树中各冠状病毒的分支明确 ,与其在美国国立医学图书馆 (NCBI)中的分类相一致。④结论　SARS病毒是冠状病毒的一个新的变种 。 展开更多

关键词 SARS病毒 组织嗜性 宿主趋向性 冠状病毒 S蛋白编码序列 全基因序列 急性严重呼吸系统综合征

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节肢动物中PGI蛋白编码序列的结构分析

8

作者 王露甘 苏国连 +1 位作者 李正跃 和淑琪 《安徽农业科学》 CAS 2015年第4期22-25,共4页

[目的]探究节肢动物中PGI蛋白编码序列的相关规律。[方法]对Genbank中已报道的节肢动物PGI蛋白编码序列进行初步分析。[结果]节肢动物中PGI蛋白编码序列均以ATG作为起始密码子,终止密码子有3种类型,主要以TAA为主;膜翅目、同翅目、虱目... [目的]探究节肢动物中PGI蛋白编码序列的相关规律。[方法]对Genbank中已报道的节肢动物PGI蛋白编码序列进行初步分析。[结果]节肢动物中PGI蛋白编码序列均以ATG作为起始密码子,终止密码子有3种类型,主要以TAA为主;膜翅目、同翅目、虱目的人体虱、直翅目的维特勒蟋及甲壳纲的大型蚤与鲑疮痂鱼虱等序列中AT含量较高,达54.3%-69.6%,鞘翅目的赤拟谷盗与中欧山松大小蠹的序列中GC含量较高,为50.6%-51.9%;PGI蛋白编码序列长度存在较大差异,介于255-1 800 bp;组成Pgi基因的外显子数目从甲壳纲大型蚤到昆虫纲各目呈减少趋势,且各外显子大小在同一目中具有一定的相似性;蛋白质结构域分析显示,节肢动物PGI蛋白质中普遍含有2个糖异构酶结构域,且各结构域的长度范围在不同种类中相近。[结论]为进一步探究PGI作为节肢动物适应性分子标记的机制提供理论基础。 展开更多

关键词 节肢动物 PGI蛋白编码序列 结构分析

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猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化

9

作者 张锐 孙美榕 +1 位作者 欧阳红生 张玉静 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期255-259,共5页

猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA去除信号肽后对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHI和... 猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA去除信号肽后对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHI和SalI内切酶识别序列的另一对引物进行PCR扩增,将回收的1 2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27 9%,表达的MSTN分子量为41451 3D.因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,则用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92 5%.该试验为获得较好的猪肌生成抑制素基因抗原、制备抗体打下了良好的基础。 展开更多

关键词 猪肌生成抑制索基因 成熟蛋白编码序列 表达与纯化

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人类基因组中蛋白质编码序列数目随其长度的分布研究 被引量：1

10

作者 冯立芹 李宏 《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》 2009年第1期58-64,共7页

分析了人类24条染色体基因组中蛋白质编码序列的数目随长度的分布,发现分布规律有明显的相似性;用Г(α,β)分布对实际分布进行拟合,其特征参数α均小于1,即蛋白质编码序列是呈随长度减少而其数目一直增加的分布.而研究的其它生物(15种... 分析了人类24条染色体基因组中蛋白质编码序列的数目随长度的分布,发现分布规律有明显的相似性;用Г(α,β)分布对实际分布进行拟合,其特征参数α均小于1,即蛋白质编码序列是呈随长度减少而其数目一直增加的分布.而研究的其它生物(15种真细菌,10种古核菌和5种真核生物)均是α>1的Г(α,β)分布.经过分析比较,推测人类蛋白质编码序列的分布也应该是α>1的Г(α,β)分布.在对短序列补充了推测数据后,重新对数据拟合,效果很好,α值在1.19～1.85之间.生物基因所遵从的Г(α,β)分布规律对研究基因组进化及评估理论预测的基因准确性具有积极意义. 展开更多

关键词 人类基因组 蛋白质编码序列 Г(α β)分布 染色体进化速率

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出芽酵母蛋白激酶TOS3的过量表达及其在热胁迫应答中的作用

11

作者 钟彦 黄鹏 +4 位作者 郄蓓蓓 刘立永 刘科 Bei-Bei Li-Yong 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1811-1816,共6页

出芽酵母SNF1蛋白激酶参与葡萄糖阻遏和细胞胁迫应答.TOS3可通过磷酸化激活SNF1,参与SNF1调控的信号途径.本研究利用PCR方法扩增tos3基因的蛋白质编码序列,克隆到多拷贝表达载体pYES2/NTA上构建真核表达载体,转化酵母细胞并诱导TOS3过... 出芽酵母SNF1蛋白激酶参与葡萄糖阻遏和细胞胁迫应答.TOS3可通过磷酸化激活SNF1,参与SNF1调控的信号途径.本研究利用PCR方法扩增tos3基因的蛋白质编码序列,克隆到多拷贝表达载体pYES2/NTA上构建真核表达载体,转化酵母细胞并诱导TOS3过量表达.带HIS6标签的重组TOS3蛋白通过免疫印迹得以鉴定.进一步研究了过量表达TOS3对细胞热胁迫耐受性的影响,发现在热胁迫处理条件下,TOS3过量表达可恢复△_(sn)f1突变体细胞的生长缺陷,表明TOS3可能通过不依赖SNF1的其他信号途径参与细胞对热胁迫应答的调控. 展开更多

关键词 出芽 酵母细胞 蛋白激酶 过量表达 胁迫应答 SACCHAROMYCES cerevisiae STRESS response heat STRESS recombinant plasmid 热胁迫耐受性 treatment expression vector 信号途径 真核表达载体 蛋白质编码序列 PROTEIN kinase fusion PROTEIN cell GROWTH the GROWTH 生长缺陷

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