大鼠局灶性脑缺血再灌注早期血脑屏障通透性变化的研究 被引量：22

1

作者 王振华 刘云会 +2 位作者 马腾 喻博 薛一雪 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1073-1076,共4页

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注早期血脑屏障通透性及紧密连接蛋白claudin-5、occludin和蛋白激酶Cδ(PKCδ)表达的变化。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,伊文思蓝法检测血脑屏障的通透性变化,免疫组化和Western blot... 目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注早期血脑屏障通透性及紧密连接蛋白claudin-5、occludin和蛋白激酶Cδ(PKCδ)表达的变化。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,伊文思蓝法检测血脑屏障的通透性变化,免疫组化和Western blot方法检测脑缺血组织claudin-5和occludin的表达,Western blot方法检测脑缺血组织PKCδ蛋白的表达。结果伊文思蓝法结果表明,与假手术组比较,血脑屏障通透性在缺血1 h、缺血2 h、再灌注0.5 h、1 h、2 h时显著升高(P<0.01)。免疫组化和Western blot结果显示,与假手术组比较,脑缺血组织血管内皮细胞claudin-5和occludin的表达亦在缺血1 h、缺血2 h、再灌注0.5 h、1 h、2 h时显著下降(P<0.01);而PKCδ蛋白在缺血1 h、缺血2 h、再灌注0.5 h、1 h、2 h时表达显著上调(P<0.01)。结论大鼠局灶性脑缺血再灌注早期血脑屏障通透性的增加可能与claudin-5、occludin表达下降和PKCδ蛋白激活有关。 展开更多

关键词 血脑屏障 缺血再灌注 cLAUDIN-5 OccLUDIN 蛋白激酶cδ

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益气健脾抗癌法对结肠癌组织PKC及亚型PKCδ、PKCε蛋白表达的影响 被引量：15

2

作者 唐广义 韩涛 +2 位作者 殷东风 李秋华 刘兆喆 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期366-370,共5页

目的:探索益气健脾抗癌法对大肠癌组织蛋白激酶C(protein kinase C;PKC)及亚型PKCδ、PKCε表达的影响及其作用机制。方法:建立人大肠癌细胞HT-29裸鼠皮下移植瘤模型后,随机分为模型组、益气健脾组和益气健脾抗癌组。益气健脾中药由太... 目的:探索益气健脾抗癌法对大肠癌组织蛋白激酶C(protein kinase C;PKC)及亚型PKCδ、PKCε表达的影响及其作用机制。方法:建立人大肠癌细胞HT-29裸鼠皮下移植瘤模型后,随机分为模型组、益气健脾组和益气健脾抗癌组。益气健脾中药由太子参、茯苓、白术、甘草、半夏、陈皮等组成,益气健脾抗癌中药由益气健脾中药加山慈菇、土茯苓、浙贝母和白花蛇舌草等组成。给药14 d后,应用Real-time PCR和Western blotting法检测肿瘤组织PKC及其亚型PKCδ、PKCε的mRNA及蛋白的表达。结果:益气健脾抗癌法治疗后,移植瘤组织中:(1)PKC mRNA和PKC蛋白表达低于模型组和益气健脾组[(0.412±0.040)vs(0.596±0.021)、(0.540±0.015)和(0.261±0.019)vs(0.665±0.016)、(0.498±0.018),P<0.05或P<0.01];(2)PKCδ mRNA和PKCδ蛋白表达高于模型组和益气健脾组[(0.410±0.030)vs(0.233±0.025)、(0.261±0.034)和(0.516±0.029)vs(0.301±0.041)、(0.361±0.044),均P<0.01];(3)PKCε mRNA和PKCε蛋白表达低于模型组和益气健脾组[(0.215±0.021)vs(0.362±0.021)、(0.314±0.031)和(0.224±0.029)vs(0.368±0.044)、(0.359±0.029),均P<0.01)。结论:益气健脾抗癌法对大肠癌组织PKC、PKCε的抑制及PKCδ的促进作用,可能是益气健脾抗癌法治疗大肠癌的作用机制之一。 展开更多

关键词 结肠癌 益气健脾 蛋白激酶c 蛋白激酶cδ 蛋白激酶cΕ

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PKCδ与MALT1对HIV-TB共感患者细胞免疫应答的作用

3

作者 李邦跃 李黎 +1 位作者 钟雪梅 邹小广 《医学信息》 2024年第1期103-108,共6页

目的分析艾滋病与结核病双重感染(HIV-TB)患者外周血单个核细胞中PKCδ与MALT1对Th17细胞水平、炎症因子水平及mRNA表达水平的影响。方法收集2021年6月-2022年8月喀什地区第一人民医院收治的HIV-TB共感患者4例,分离外周血单个核细胞(PB... 目的分析艾滋病与结核病双重感染(HIV-TB)患者外周血单个核细胞中PKCδ与MALT1对Th17细胞水平、炎症因子水平及mRNA表达水平的影响。方法收集2021年6月-2022年8月喀什地区第一人民医院收治的HIV-TB共感患者4例,分离外周血单个核细胞(PBMC)培养后分为空白对照组和B106组[PKCδ抑制剂(B106)处理细胞]、MI-2组[MALT1抑制剂(MI-2)处理细胞]、B106+MI-2组[PKCδ抑制剂(B106)与MALT1抑制剂(MI-2)共同处理细胞]3个试验组。应用流式细胞术检测Th17细胞水平;采用ELISA法检测IL-6、IL-17、IL-23、IFN-γ、TNF-α、IL-10以及IL-22的水平及运用qPCR检测MALT1、Iκbα、P65以及IL-17、IL-23的mRNA表达水平,探讨PKCδ与MALT1对HIV-TB共感患者中细胞免疫应答的影响,并初步分析其作用机制。结果3个试验组中Th17细胞的数量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3个试验组中IL-6、IL-17、IL-23、IFN-γ、TNF-α、IL-10以及IL-22的浓度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但3个试验组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);3个试验组中IL-17、IL-23的mRNA表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);B106组MALT1、P65表达低于对照组,Iκbα表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),MI-2组Iκbα表达高于对照组,P65表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);B106+MI-2组与其他2个试验组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制PKCδ或MALT1可拮抗HIV-TB共感患者的Th17细胞数量下降,抑制HIV-TB的炎症反应,抑制SYK/PKCδ/CARMA1-Bcl10-MALT1(CBM)复合物通路,可通过抑制NF-κB炎症通路拮抗HIV-TB的炎症反应。 展开更多

关键词 艾滋病 结核病 艾滋病与结核病双重感染 蛋白激酶cδ 黏膜相关淋巴组织淋巴瘤异位基因1

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PKCδ、Nrf2表达在燃煤污染型砷中毒大鼠肝损伤中的作用 被引量：6

4

作者 胡勇 王胜利 +3 位作者 王蕾 于春 姚茂琳 张爱华 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期375-380,共6页

目的观察燃煤污染型砷中毒大鼠肝组织中蛋白激酶Cδ(PKCδ)、核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达,并探讨其作用。方法采用成组设计,将30只Wistar大鼠(雌雄各半)按体质量(80~100 g)采用随机数字表法分为对照组、饮水型砷中毒组(水砷组)和低... 目的观察燃煤污染型砷中毒大鼠肝组织中蛋白激酶Cδ(PKCδ)、核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达,并探讨其作用。方法采用成组设计,将30只Wistar大鼠(雌雄各半)按体质量(80~100 g)采用随机数字表法分为对照组、饮水型砷中毒组(水砷组)和低、中、高砷粮食污染组(低、中、高砷组),每组6只。对照组常规喂养,水砷组自由饮用100 mg/L三氧化二砷(As2O3)水溶液,低、中、高砷组分别喂饲病区高砷煤烘烤玉米粉所配制的饲料(砷含量分别为25、50、100 mg/kg),均喂养3个月。大鼠处死前,抽取外周静脉血2 ml,检测血清丙二醛(MDA)含量,铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力;处死后,分离肝脏,检测肝脏二酯酰甘油(DAG)含量、PKCδ和Nrf2 mRNA和蛋白表达;采用Pearson相关分析方法,对蛋白表达进行相关性分析。结果大鼠血清MDA含量,SOD1、GPx活力组间比较差异有统计学意义(F=26.441、3.327、120.645,P均< 0.05),其中各染砷组血清MDA含量均高于对照组(P均< 0.05);SOD1、GPx活力均低于对照组(P均< 0.05)。大鼠肝组织DAG含量,Nrf2 mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=8.237、8.656,P均< 0.05),其中各染砷组肝组织DAG含量分别为(2.67 ± 0.25)、(2.36 ± 0.19)、(2.54 ± 0.22)、(2.69 ± 0.32)μg/L,均高于对照组[(2.05 ± 0.24)μg/L,P均< 0.05];各染砷组肝组织Nrf2 mRNA表达分别为1.16 ± 0.09、1.09 ± 0.12、1.14 ± 0.15、1.27 ± 0.16,均明显高于对照组(0.94 ± 0.08,P均< 0.05)。大鼠肝组织细胞膜和细胞质中磷酸化PKCδ(pPKCδ)蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=15.925、6.699,P均< 0.05),各染砷组肝组织细胞膜pPKCδ蛋白表达分别为0.49 ± 0.06、0.33 ± 0.05、0.37 ± 0.06、0.50 ± 0.08,除低砷组外均高于对照组(0.28 ± 0.04,P均< 0.05);各染砷组肝组织细胞质中pPKCδ蛋白表达分别为0.38 ± 0.06、0.31 ± 0.05、0.35 ± 0.05、0.36 ± 0.05,均高于对照组(0.24 ± 0.05,P均< 0.05)。� 展开更多

关键词 砷中毒 煤 肝损伤 蛋白激酶cδ 核因子E2相关因子2

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高糖对血管内皮细胞蛋白激酶Cα和δ表达及功能的影响 被引量：5

5

作者 万沁 童南伟 +1 位作者 刘小菁 吴惠 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期505-506,共2页

以高糖培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)研究显示,高糖可诱导血管内皮细胞(EC)功能紊乱,凋亡增加,NO浓度降低,可溶性细胞间黏附分子1水平增加;高糖可诱导HUVECs的蛋白激酶C(PKC)α及PKCδ表达位置转移,PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响... 以高糖培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)研究显示,高糖可诱导血管内皮细胞(EC)功能紊乱,凋亡增加,NO浓度降低,可溶性细胞间黏附分子1水平增加;高糖可诱导HUVECs的蛋白激酶C(PKC)α及PKCδ表达位置转移,PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显。高糖所致EC功能异常,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的。 展开更多

关键词 高血糖 内皮 血管 蛋白激酶cΑ 蛋白激酶cδ

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宫颈细胞DNA倍体分析联合B7-H4和PKCδ对宫颈癌的诊断价值

6

作者 张宁宁 杨哲 +3 位作者 檀丽梅 李振宁 王迪 魏永志 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2024年第5期286-291,共6页

目的探讨宫颈细胞DNA倍体分析联合负性共刺激分子B7同源物4(B7-H4)和蛋白激酶Cδ(PKCδ)对宫颈癌的诊断价值。方法选取2018年1月到2022年1月在石家庄市人民医院诊治的宫颈癌患者160例作为宫颈癌组,同期在本院做宫颈癌前筛查的女性160例... 目的探讨宫颈细胞DNA倍体分析联合负性共刺激分子B7同源物4(B7-H4)和蛋白激酶Cδ(PKCδ)对宫颈癌的诊断价值。方法选取2018年1月到2022年1月在石家庄市人民医院诊治的宫颈癌患者160例作为宫颈癌组,同期在本院做宫颈癌前筛查的女性160例作为对照组,根据检查结果分为正常或炎症组(n=52)、低级别宫颈上皮内瘤变(CIN)组(n=68)、高级别CIN组(n=40)。采用全自动细胞图像分析系统分析宫颈细胞DNA倍体情况。采用酶联免疫吸附法测定血清B7-H4、PKCδ水平。采用Pearson相关分析探讨血清B7-H4、PKCδ的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线评估宫颈细胞DNA倍体分析联合血清B7-H4、PKCδ对宫颈癌的诊断价值;采用logistic多因素回归进行宫颈癌的危险因素分析。结果正常或炎症组、低级别CIN组、高级别CIN组、宫颈癌组DNA倍体阳性例数分别为16(30.8%)、27(39.7%)、26(65.0%)、127(79.4%),差异有统计学意义(H=55.86,P<0.001)。进一步两两比较发现,与正常或炎症组比较,高级别CIN组、宫颈癌组DNA倍体阳性比例均高(均P<0.05);与低级别CIN组比较,宫颈癌组DNA倍体阳性比例高(P<0.05)。正常或炎症组、低级别CIN组、高级别CIN组、宫颈癌组血清B7-H4水平分别为(57.21±10.21)、(79.17±11.34)、(92.73±15.36)、(126.56±20.25)ng/ml,差异有统计学意义(F=285.45,P<0.001),血清PKCδ水平分别为(89.34±18.29)、(71.79±15.82)、(53.39±11.84)、(40.23±10.21)ng/ml,差异有统计学意义(F=216.28,P<0.001),进一步两两比较发现,正常或炎症组、低级别CIN组、高级别CIN组、宫颈癌组血清B7-H4水平依次升高(均P<0.05);正常或炎症组、高级别CIN组、宫颈癌组血清PKCδ水平依次降低(均P<0.05)。Pearson检验分析结果显示,宫颈癌患者血清B7-H4、PKCδ水平呈负相关(r=-0.47,P<0.001)。ROC曲线分析显示,宫颈细胞DNA倍体诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)为0.82(95%CI为0.78~0.86),敏感性、特异性分别� 展开更多

关键词 宫颈肿瘤 蛋白激酶cδ 早期诊断 宫颈细胞DNA倍体 负性共刺激分子B7同源物4

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蛋白激酶Cδ对燃煤污染型砷中毒肝损伤的调控机制 被引量：6

7

作者 胡勇 张爱华 +2 位作者 姚茂琳 唐旭东 黄晓欣 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期777-782,共6页

目的 探讨蛋白激酶Cδ（protein kinase C8,PKCδ） mRNA转录和蛋白表达在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用.方法 人群研究：选取符合条件的贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者纳入砷暴露组,包括病区非病例组（25例）、无明显肝病组（3... 目的 探讨蛋白激酶Cδ（protein kinase C8,PKCδ） mRNA转录和蛋白表达在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用.方法 人群研究：选取符合条件的贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者纳入砷暴露组,包括病区非病例组（25例）、无明显肝病组（38例）、轻度（43例）和中重度（27例）肝病组；选取非砷污染村34名健康居民纳入对照组.采集上述研究对象的尿液和外周血,测定尿砷含量及外周血PKCδ mRNA表达水平.动物实验：采用随机数字表法将30只Wistar大鼠分为对照组、饮水型砷中毒组和燃煤污染型砷中毒组（即低、中、高砷粮食污染组）,每组6只.对照组常规喂养,饮水型砷中毒组给予10 mg/kg As2O3水溶液,燃煤污染型砷中毒组喂饲用病区高砷煤烘烤的玉米粉所配制的饲料（砷含量分别为25、50和100 mg/kg）,均喂养3个月.测定其尿砷含量、外周血和肝组织PKCδ mRNA表达水平及肝组织磷酸化蛋白激酶C8 （phosphorylated protein kinase C8,pPKCδ）表达水平.结果 非病例组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组尿砷含量中位数（四分位数）分别为25.58（18.62 ～ 40.73）、56.66（38.93 ～ 76.77）、64.90（39.55 ～98.37）和75.47（41.30～109.70） μg/g肌酐,除病区非病例组外,其余组均高于对照组[23.34（17.84～37.45） μg/g肌酐]（P值均＜0.05）.大鼠饮水型砷中毒组和低、中、高砷粮食污染组尿砷含量分别为2223.61（472.98～3976.73）、701.16（194.01～1300.27）、1060.94（246.33～2585.47）和3101.11 （1919.97～5407.07） μg/g肌酐,均高于对照组[94.32（22.65 ～ 195.25） μg/g肌酐]（P值均＜0.05）；肝组织中pPKCδ蛋白表达水平分别为324.83±25.06、278.50±30.57、308.83±34.67、326.33±35.09,均高于对照组（240.17±28.07）（P值均＜0.05）；肝组织细胞膜中pPKCδ蛋白表达水平分别为0.49±0.06、0.33±0.05、0.37±0.06、0.50±0.08,均高于对照组（0.28±0.04）� 展开更多

关键词 砷中毒 煤 蛋白激酶cδ 肝损伤

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蛋白激酶Cδ可能参与肥大心肌细胞转向凋亡 被引量：4

8

作者 郭万刚 余志斌 谢满江 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期269-274,共6页

为了探讨肥大心肌细胞对凋亡刺激的易感性及蛋白激酶Cδ(protein kinase Cδ,PKCδ)在其中的作用,以内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)处理原代培养的新生大鼠心肌细胞,诱导心肌细胞肥大；再用血管紧张素Ⅱ(angiotensin II,Ang II)作为细胞... 为了探讨肥大心肌细胞对凋亡刺激的易感性及蛋白激酶Cδ(protein kinase Cδ,PKCδ)在其中的作用,以内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)处理原代培养的新生大鼠心肌细胞,诱导心肌细胞肥大；再用血管紧张素Ⅱ(angiotensin II,Ang II)作为细胞凋亡诱导因子,采用鬼笔环肽(phalloidin)荧光染色与细胞面积测量两种方法检测心肌肥大,Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡。结果显示：(1)1与10 nmol/L ET-1作用48h,心肌细胞肌原纤维排列整齐、染色增浓,随ET-1浓度增加而愈加明显,心肌细胞表面积分别增加42．5%和67．3%,以此作为轻度和中度心肌细胞肥大模型。(2)正常、轻度肥大与中度肥大心肌细胞受1nmol/L AngⅡ处理24h后,凋亡率分别为(15．54±1．32)%、(20．65±1．40)%与(29．33±3．52)%,三组之间有显著差异(P＜0．05)。(3)受AngⅡ刺激后,PKCδ特异性抑制剂rottlerin不影响正常心肌细胞的凋亡率,却有效抑制了轻度和中度肥大心肌细胞的凋亡。肥大心肌细胞凋亡易感性明显高于正常心肌细胞,抑制PKCδ可以抑制肥大心肌细胞凋亡,提示PKCδ参与肥大心肌细胞凋亡过程。 展开更多

关键词 心肌细胞 肥大 细胞凋亡 蛋白激酶cδ ROTTLERIN

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化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PKCδ、PKCθ和PKCε表达的影响 被引量：4

9

作者 田军彪 李希 +7 位作者 万溪 高晶晶 牟萍 赵层闪 许斐 刘学飞 杨丽静 徐丽娟 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期2867-2870,共4页

目的探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠蛋白激酶(PK)Cδ、PKCθ和PKCε表达的影响及其神经保护机制。方法以改进后的Zea-Longa线栓法制造局部梗死性脑缺血再灌注模型。随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,中药高... 目的探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠蛋白激酶(PK)Cδ、PKCθ和PKCε表达的影响及其神经保护机制。方法以改进后的Zea-Longa线栓法制造局部梗死性脑缺血再灌注模型。随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,中药高剂量组、中剂量组、低剂量组,以Longa评分法进行神经功能评分,免疫组化法观察PKCδ、PKCθ和PKCε的分布及表达。Western印迹法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中的表达量。结果免疫组化结果显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。Western印迹法显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方可能通过降低PKCδ、PKCθ的表达、上调PKCε的表达,降低CIRI的程度。 展开更多

关键词 化浊解毒活血通络方 脑缺血再灌注损伤 蛋白激酶cδ 蛋白激酶cΘ 蛋白激酶cΕ

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蛋白激酶Cδ参与帕金森大鼠模型中6-OHDA的神经毒性作用 被引量：3

10

作者 韩飞 李成朋 +4 位作者 董智慧 禹文峰 张春林 焦玲 官志忠 《中风与神经疾病杂志》 北大核心 2017年第11期969-972,共4页

目的研究蛋白激酶Cδ(PKCδ)细胞核转移在帕金森大鼠模型神经元丢失中的病理作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为Sham组(10只)和PD组(30只),立体定位右侧纹状体注射生理盐水或6-OHDA溶液并通过阿朴吗啡(APO)诱导旋转进行模型筛选,免疫组... 目的研究蛋白激酶Cδ(PKCδ)细胞核转移在帕金森大鼠模型神经元丢失中的病理作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为Sham组(10只)和PD组(30只),立体定位右侧纹状体注射生理盐水或6-OHDA溶液并通过阿朴吗啡(APO)诱导旋转进行模型筛选,免疫组化检测黑质致密部(SNpc)酪氨酸羟化酶(TH)表达情况。采用Western blotting检测PKCδ蛋白表达并通过共聚焦观察PKCδ在细胞核的表达。结果 PD组SNpc部位TH阳性神经元形态发生了病理改变且密度显著下降(P<0.05);Western blotting显示PD组SNpc组织中PKCδ及Cleaved PKCδ的表达较Sham组显著上调(P<0.05);共聚焦显微镜提示PD组SNpc部位PKCδ与细胞核有共定位。结论 PKCδ的酶解激活及细胞核转位可能参与了PD的神经病理发生。 展开更多

关键词 6-羟基多巴胺 帕金森病 蛋白激酶cδ 转位

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脂肪分化相关蛋白通过抑制中性胆固醇酯水解酶表达促进RAW264.7细胞内脂质积蓄 被引量：3

11

作者 袁旭 孟磊 +2 位作者 陈雁斌 张瑞 袁中华 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2018年第2期115-121,共7页

目的 探讨RAW264.7巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白（adipophilin）调控中性胆固醇酯水解酶（nCEH）表达进而介导脂质积蓄的作用机制。方法 用已成功构建的沉默与高表达Adipophilin的逆转录病毒质粒载体转染包装细胞PA317,继而收集病毒液感... 目的 探讨RAW264.7巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白（adipophilin）调控中性胆固醇酯水解酶（nCEH）表达进而介导脂质积蓄的作用机制。方法 用已成功构建的沉默与高表达Adipophilin的逆转录病毒质粒载体转染包装细胞PA317,继而收集病毒液感染RAW264.7巨噬细胞,筛选出Adipophilin沉默细胞株和高表达细胞株。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹分析技术（Western blot）分别检测nCEH的mRNA和蛋白表达水平,液体闪烁计数仪、高效液相色谱法检测细胞内胆固醇流出及胆固醇酯含量。结果 （1）高表达Adipophilin的细胞组胆固醇、胆固醇酯含量明显高于空白对照组（P〈0.01）,而沉默Adipophilin表达的细胞组则显著低于空白对照组（P〈0.01）,Adipophilin可抑制nCEH mRNA和蛋白的表达。（2）用100 nmol/L蛋白激酶Cδ（PKCδ）激动剂佛波酯（PMA）孵育高表达Adipophilin的RAW264.7细胞30 min后,nCEH的mRNA与蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）,而用100 nmol/L PKCδ抑制剂卡马拉素（Rottlerin）同样孵育30 min后,nCEH的表达水平较对照组增高（P〈0.05）。结论 Adipophilin促进巨噬细胞内脂质积蓄可能通过抑制nCEH表达来实现,在这一调控机制中PKCδ发挥了重要作用。 展开更多

关键词 脂肪分化相关蛋白 中性胆固醇酯水解酶 蛋白激酶cδ 动脉粥样硬化

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PKCδ抑制剂减轻6-OHDA诱导的多巴胺能神经细胞凋亡 被引量：1

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作者 李志伟 张艳桥 +2 位作者 范鹰 李呼伦 张一娜 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期132-135,共4页

目的观察蛋白激酶Cδ抑制剂在6-OHDA诱导多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y细胞凋亡过程中所起的作用,探讨帕金森病可能的分子发病机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,观察PKC抑制剂对6-OHDA毒性作用的影响,分别用台盼蓝染色、流式细胞仪和透射电... 目的观察蛋白激酶Cδ抑制剂在6-OHDA诱导多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y细胞凋亡过程中所起的作用,探讨帕金森病可能的分子发病机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,观察PKC抑制剂对6-OHDA毒性作用的影响,分别用台盼蓝染色、流式细胞仪和透射电镜法观察细胞凋亡。结果PKCδ抑制剂Rottlerin可减轻6-OHDA引起的细胞凋亡。而总PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(Bis)和钙依赖性PKC(α和β)抑制剂G 6976不能减轻6-OHDA引起的细胞凋亡。结论PKCδ抑制剂对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡产生保护作用,PKCδ可能直接参与了帕金森病人的神经元凋亡过程。 展开更多

关键词 6-羟基多巴胺 蛋白激酶cδ 蛋白激酶c抑制剂 帕金森病

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蛋白激酶Cδ在6-OHDA诱导大鼠多巴胺能神经元损伤过程中的作用 被引量：2

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作者 韩飞 夏克明 +3 位作者 杨斌 李成朋 吴昌学 禹文峰 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2021年第3期323-328,共6页

目的:探究蛋白激酶Cδ(PKCδ)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)模型大鼠多巴胺能神经元损伤的影响及其机制。方法:50只2月龄雄性SD大鼠,随机分为对照组(control)和6-羟基多巴胺注射组(6-OHDA)。通过大鼠右侧纹状体注射6-OHDA... 目的:探究蛋白激酶Cδ(PKCδ)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)模型大鼠多巴胺能神经元损伤的影响及其机制。方法:50只2月龄雄性SD大鼠,随机分为对照组(control)和6-羟基多巴胺注射组(6-OHDA)。通过大鼠右侧纹状体注射6-OHDA溶液构建PD模型。运用旋转实验和圆筒实验检测平均旋转速率和右上肢使用率,利用免疫组化染色观察大鼠黑质致密部(SNc)酪氨酸羟化酶(TH)的表达,利用Western Blot检测大鼠SNc部位线粒体中PKCδ和胞质中细胞色素c(Cyt c)及TH的表达情况,通过免疫荧光染色观察PKCδ定位。结果:6-OHDA组大鼠平均旋转速率及右上肢使用率明显增加,TH阳性神经元形态及分布异常且TH蛋白表达减少,线粒体PKCδ表达增多,胞质中Cyt c增多,免疫荧光染色显示PKCδ与线粒体蛋白发生共定位现象。结论:PKCδ可能通过线粒体转移参与调节6-OHDA诱导的大鼠多巴胺能神经元损伤。 展开更多

关键词 蛋白激酶cδ 线粒体转位 6-羟基多巴胺 帕金森病 大鼠

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PKC α,βⅡ,δ在大鼠视网膜发育过程中的表达

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作者 朱益华 张姬慧 +2 位作者 马少青 韩晓丽 王婷婷 《福建医科大学学报》 2010年第6期408-411,共4页

目的研究蛋白激酶C(PKC)3种同工酶PKC α、βⅡ和δ在正常大鼠出生后视网膜发育过程中的表达及意义。方法采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法及免疫组织化学方法检测正常大鼠视网膜发育过程中PKC α、βⅡ、δ mRNA及蛋... 目的研究蛋白激酶C(PKC)3种同工酶PKC α、βⅡ和δ在正常大鼠出生后视网膜发育过程中的表达及意义。方法采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法及免疫组织化学方法检测正常大鼠视网膜发育过程中PKC α、βⅡ、δ mRNA及蛋白的表达水平。结果大鼠出生后至第14天,视网膜组织中PKC α、βⅡmRNA表达逐渐升高,14 d后有所下降;PKC δ mRNA在生后早期高表达;视网膜切片免疫组织化学染色光密度测定结果与mRNA表达相符。细胞定位显示,随着视网膜的发育,PKC α染色阳性产物逐渐集中在外丛状层和内核层;PKC βⅡ的阳性产物逐渐表达于视网膜神经节细胞层(RGCs);PKC δ的阳性产物在早期高表达,主要分布在外界膜。结论 PKC α、βⅡ和δ在大鼠出生后视网膜发育过程中均有表达,并有一定的规律性,提示这3种同工酶在大鼠出生后视网膜的发育中起重要作用。 展开更多

关键词 蛋白激酶c 蛋白激酶cΑ 蛋白激酶cδ 视网膜 同工酶类 逆转录聚合酶链反应 免疫组织化学

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人生长激素型垂体腺瘤细胞PKCδ相关信号通路因子的激活及其对细胞增殖的作用 被引量：2

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作者 白崧 杜莹磊 +2 位作者 王宇 谢珊 姜之全 《中华全科医学》 2020年第6期923-926,共4页

目的分析蛋白激酶C(protein kinase C,PKCs)相关信号通路因子在人生长激素(growth hormone,GH)型垂体腺瘤细胞的表达及调节细胞增殖的作用机制。方法收集2016年5月-2018年3月蚌埠医学院第一附属医院收治的8例GH型垂体腺瘤患者术中切除... 目的分析蛋白激酶C(protein kinase C,PKCs)相关信号通路因子在人生长激素(growth hormone,GH)型垂体腺瘤细胞的表达及调节细胞增殖的作用机制。方法收集2016年5月-2018年3月蚌埠医学院第一附属医院收治的8例GH型垂体腺瘤患者术中切除肿瘤组织进行原代培养,免疫组化法检测PKCδ、CREB、ERK1/2在细胞内的表达。将原代培养的细胞分为对照组(空白)、激动剂组(PMA)、抑制剂组(Rottlerin)、联合组(PMA+Rottlerin),各8株细胞,ELISA法检测各组GH分泌水平;CCK-8法检测细胞活性;Western blotting检测各组因子及磷酸化水平,使用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。结果 PKCδ、CREB、ERK1/2均较多见于GH型垂体腺瘤细胞质。与对照组比较,激动剂组GH分泌及细胞活性升高,抑制剂组明显降低(均P<0.01),联合组GH分泌及细胞活性低于激动剂组,高于抑制剂组(均P<0.01)。与对照组比较,激动剂组p-PKCδ、p-CREB、p-ERK1/2水平升高,抑制剂组三者水平降低(均P<0.01),联合组p-CREB、p-ERK1/2水平低于激动剂组,高于抑制剂组(均P<0.01)。结论 PKCδ、CREB、ERK1/2在GH型垂体腺瘤细胞中存在明显高表达,激活PKCδ表达可提高p-CREB水平促进GH分泌,同时提高p-ERK1/2水平促进细胞增殖。 展开更多

关键词 人生长激素型垂体腺瘤细胞 蛋白激酶cδ cAMP反应元件结合蛋白 细胞外调节激酶1/2 增殖

原文传递

甘油二酯激酶ζ、蛋白激酶Cδ和Tis21在发育中大鼠脑的表达和定位 被引量：2

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作者 李佳 牛宝贝 +3 位作者 刘慧霞 李海荣 乔从进 崔慧林 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期609-615,共7页

目的 探讨甘油二酯激酶ζ（DGKζ）、蛋白激酶Cδ（PKCδ）和Tis21在大鼠胚胎脑的时空表达模式以及与脑发育的关系。方法 胚龄（E）9.5-E18.5大鼠胚胎各5只,连续切片用于免疫组织化学方法检测DGKζ、p-PKCδ和Tis21在大鼠胚胎脑的表达;2... 目的 探讨甘油二酯激酶ζ（DGKζ）、蛋白激酶Cδ（PKCδ）和Tis21在大鼠胚胎脑的时空表达模式以及与脑发育的关系。方法 胚龄（E）9.5-E18.5大鼠胚胎各5只,连续切片用于免疫组织化学方法检测DGKζ、p-PKCδ和Tis21在大鼠胚胎脑的表达;22只胚龄E11.5、E12.5、E14.5、E16.5和E18.5大鼠胚胎用于Western blotting,检测DGKζ、磷酸化PKCδ（p-PKCδ）、PKCδ和Tis21在大鼠胚胎脑组织的表达。结果 免疫组织化学显示,于E9.5 p-PKCδ和Tis21在神经沟神经上皮呈阳性表达,DGKζ为阴性;E10.5-E11.5,DGKζ、p-PKCδ和Tis21在脑泡壁均呈阳性表达;在E12.5三者均表达于端脑、间脑、中脑腹侧和脑桥处神经上皮,而中脑背侧、峡部和小脑原基仅DGKζ呈阳性表达,p-PKCδ和Tis21呈阴性;于E13.5三者沿海马、隔、苍白球及嗅脑呈阳性分布,在新皮质呈阴性,p-PKCδ和Tis21在峡部和小脑原基出现阳性表达;于E14.5 DGKζ表达延伸到新皮质,在脑的各个区域呈现出全阳性。而p-PKCδ和Tis21表达仅延伸到中脑顶盖,在新皮质仍为阴性;于E15.5 p-PKCδ和Tis21在新皮质出现阳性表达,在脑的各个区域均呈阳性;E16.5-E18.5,三者在小脑和脑桥表达范围缩小;DGKζ和p-PKCδ可表达在神经上皮细胞的胞质,或胞质和细胞核。Western blotting显示,DGKζ和Tis21在E11.5-E14.5表达逐渐增多,E12.5较E11.5显著增多,在E16.5和E18.5逐渐下降;p-PKCδ/PKCδ显示PKCδ活性变化趋势与DGKζ表达趋势一致。结论 DGKζ、p-PKCδ和Tis21时空表达与脑发育模式一致,DGKζ和p-PKCδ在神经上皮细胞的亚细胞分布提示它们主要通过DGKζ/Tis21和PKCδ/Tis21途径参与脑的发育。 展开更多

关键词 甘油二酯激酶ζ 蛋白激酶cδ Tis21 脑 免疫组织化学 免疫印迹法 胚胎 大鼠

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蛋白激酶Cδ在高糖致人脐静脉内皮细胞周期阻滞和凋亡中的作用及机制 被引量：1

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作者 孙芳 周波 +1 位作者 林雪波 陈芳芳 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1155-1159,共5页

目的探讨蛋白激酶C(PKC)δ在高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)周期阻滞和凋亡中的作用及机制。方法实验按以下分组方式处理细胞:正常葡萄糖对照组(NG,D-葡萄糖5.6mmol/L),Ad5-null转染+正常葡萄糖培养组(NN,D-葡萄糖5.6mmol/L),高糖培... 目的探讨蛋白激酶C(PKC)δ在高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)周期阻滞和凋亡中的作用及机制。方法实验按以下分组方式处理细胞:正常葡萄糖对照组(NG,D-葡萄糖5.6mmol/L),Ad5-null转染+正常葡萄糖培养组(NN,D-葡萄糖5.6mmol/L),高糖培养组(HG,D-葡萄糖25mmol/L),Ad5-PKCδ转染+高糖培养组(PHG,D-葡萄糖25mmol/L),Ad5-PKCδ转染+高糖+PKCδ抑制剂Rottlerin处理组(PHR,10μmol/LRottlerin)。激光共聚焦显微镜下观察高糖刺激的PKCδ表达变化,流式细胞技术检测各组细胞周期分布、凋亡率。免疫印迹检测磷酸化叉头蛋白O1(p-FOXO1)(S256)及P27kip1蛋白表达水平。结果与NG组比较,NN组的空载体转染对细胞无明显生物学意义(P>0.05)。与NG组比较,HG组PKCδ在HUVECs内的表达显著增加,细胞质与细胞核荧光比值下降,细胞G0/G1期阻滞增加,凋亡率上升,p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平升高(P<0.05)。与HG比较,PHG组过表达PKCδ后,细胞质与细胞核荧光比值明显下降(P<0.05),G0/G1期阻滞增加,凋亡率上升(P<0.05),p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平进一步升高(P<0.05)。与PHG组比较,PHR组特异性抑制PKCδ活性后,细胞质与细胞核荧光比值增加(P<0.05),细胞周期阻滞及凋亡改善,p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平降低(P<0.05)。结论高糖负荷可使HUVECs中PKCδ表达增加并发生核转位激活,导致p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平升高,使细胞阻滞于G0/G1期并发生凋亡。 展开更多

关键词 蛋白激酶cδ 脐静脉 内皮细胞 葡萄糖 细胞周期阻滞 细胞凋亡

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大鼠局灶性脑缺血再灌注血脑屏障通透性变化及对Occludin、ZO-1和PKCδ蛋白水平的影响 被引量：2

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作者 周红军 王彬 +1 位作者 沈光建 张云东 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2021年第22期5067-5070,共4页

目的探索大鼠局灶性脑缺血再灌注血脑屏障通透性的变化及可能的相关机制。方法Wistar健康雄性大鼠60只,制备局灶性脑缺血模型,观察并比较脑缺血再灌注6 h、12 h、24 h、48 h的血脑屏障通透性及紧密连接蛋白(Occludin)、胞质紧密黏连蛋白... 目的探索大鼠局灶性脑缺血再灌注血脑屏障通透性的变化及可能的相关机制。方法Wistar健康雄性大鼠60只,制备局灶性脑缺血模型,观察并比较脑缺血再灌注6 h、12 h、24 h、48 h的血脑屏障通透性及紧密连接蛋白(Occludin)、胞质紧密黏连蛋白1抗体(ZO-1)和蛋白激酶(PK)Cδ表达的差异。结果脑缺血再灌注后脑组织含水量明显高于空白对照组,且随时间而升高(P<0.05);脑缺血再灌注后脑组织伊文思蓝(EB)含量明显高于空白对照组,且随时间而升高(P<0.05);脑缺血再灌注后脑组织Occludin蛋白、ZO-1蛋白表达量明显低于空白对照组(P<0.05);脑缺血再灌注后脑组织PKCδ蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注后脑组织含水量和血脑屏障通透性增加,可能与Occludin蛋白低表达、ZO-1蛋白和PKCδ蛋白高表达有关。 展开更多

关键词 局灶性脑缺血 血脑屏障通透性 紧密连接蛋白(Occludin) 蛋白激酶cδ 胞质紧密黏连蛋白1抗体(ZO)-1

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蛋白激酶Cδ的克隆表达纯化及其在药物先导化合物筛选中的初步应用

19

作者 陈樑 张红锋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期300-304,共5页

蛋白激酶C家族是一类磷脂酰丝氨酸依赖丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶。PKCδ(蛋白激酶Cδ)是蛋白激酶C家族成员。PKCδ的异常激活将会导致糖尿病和多种癌症的发生 ,因此 ,PKCδ的特异性抑制剂能成为治疗这些疾病的潜在药物 ,如能以PKCδ为分... 蛋白激酶C家族是一类磷脂酰丝氨酸依赖丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶。PKCδ(蛋白激酶Cδ)是蛋白激酶C家族成员。PKCδ的异常激活将会导致糖尿病和多种癌症的发生 ,因此 ,PKCδ的特异性抑制剂能成为治疗这些疾病的潜在药物 ,如能以PKCδ为分子靶点来筛选特异性抑制剂 ,就可以建立癌症及糖尿病的药物先导化合物筛选模型。通过RT_PCR的方法 ,克隆了鼠源的PKCδ,并构建了哺乳动物细胞表达载体 ,获得了可稳定表达PKCδ的COS1细胞株。通过亲和吸附的方法获得了较为纯净的PKCδ ,并对酶学活性作了进一步的分析 ,建立了以PKCδ为靶点的药物先导化合物筛选模型。 展开更多

关键词 蛋白激酶cδ 表达纯化 激酶活性分析

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游泳训练对小鼠心肌PKCδ/P66shc蛋白表达的影响 被引量：1

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作者 谢文杰 周刚 +3 位作者 李鹏飞 杨帆 安静芳 李航 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期688-693,704,共7页

目的:探究不同强度的游泳训练对小鼠心肌P66shc蛋白的影响。方法:将50只昆明小鼠随机分为对照组(C组)、负重游泳组(E组)、负重游泳+药物组(ER组)、非负重游泳组(P组)、非负重游泳+药物组(PR组),10只/组。C组不运动,E组、ER组、P组、PR... 目的:探究不同强度的游泳训练对小鼠心肌P66shc蛋白的影响。方法:将50只昆明小鼠随机分为对照组(C组)、负重游泳组(E组)、负重游泳+药物组(ER组)、非负重游泳组(P组)、非负重游泳+药物组(PR组),10只/组。C组不运动,E组、ER组、P组、PR组进行4周游泳训练,其中E组、ER组以体重3%负荷进行负重游泳,P组、PR组无负重游泳,60 min/d,每周6次。ER组、PR组小鼠在最后2次运动前腹腔注射PKCδ抑制剂Rottlerin(0.3 mg/kg),C组、E组、P组注射同等剂量生理盐水。在训练结束24 h后取样,Western blot测定小鼠心肌PKCδ、P-PKCδ、P66shc、P-P66shc、NOX2蛋白表达;免疫共沉淀测PKCδ和P66shc;生化分析心肌及血清丙二醛(MDA)、心肌活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)。结果:与C组比较,E组的PKCδ、P-PKCδ、P66shc、P-P66shc、NOX2蛋白表达均明显增加(P<0.01),血清和心肌MDA水平、心肌ROS明显增加(P<0.05或P<0.01),心肌SOD活性降低(P<0.01),P组的PKCδ、P-PKCδ、P-P66shc和NOX2明显增加(P<0.05或P<0.01),心肌SOD活性增强(P<0.05);与E组比较,ER组PKCδ(P<0.01)、P-PKCδ(P<0.01)、P66shc(P<0.05)、P-P66shc(P<0.01)、NOX2(P<0.05)蛋白表达明显减少,P组P66shc蛋白表达显著减少(P<0.05),心肌MDA(P<0.01)和ROS(P<0.05)减少,SOD活性增强(P<0.01);与P组比较,PR组的PKCδ、P-PKCδ、P-P66shc蛋白表达明显减少(P<0.01),NOX2增加(P<0.05)。结论:两种强度的游泳训练均促使小鼠心肌细胞内PKCδ蛋白及其磷酸化增加;高强度游泳训练可显著增强P66shc蛋白表达及磷酸化水平,导致ROS大量生成,抗氧化酶活性下降;低强度游泳训练增强P66shc磷酸化但不促进其蛋白表达,心肌抗氧化能力增强,产生运动适应。 展开更多

关键词 蛋白激酶cδ 游泳训练 P66SHc 心肌 活性氧 小鼠

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