免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血调节性T细胞数量减少伴随自噬的降低 被引量：8

1

作者 王琦 计雪强 +3 位作者 邵惠江 季正华 朱宏 邵雪君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期834-838,共5页

目的检测自身抗体阳性的免疫性血小板减少症(ITP)患儿CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞(Treg)数量以及自噬相关蛋白的表达。方法通过流式细胞术分选出初诊ITP患儿和健康对照儿童外周血中的Treg,根据抗体的平均荧光强度分别统计自噬相关基... 目的检测自身抗体阳性的免疫性血小板减少症(ITP)患儿CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞(Treg)数量以及自噬相关蛋白的表达。方法通过流式细胞术分选出初诊ITP患儿和健康对照儿童外周血中的Treg,根据抗体的平均荧光强度分别统计自噬相关基因5(ATG5)和ATG7蛋白水平,Western blot法检测CD4^+CD25^+Treg的蛋白激酶B(AKT)和细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化水平。结果与健康对照儿童相比,ITP患儿Treg数量显著降低,ATG5和ATG7表达降低,AKT和ERK的磷酸化水平均显著降低。结论在初诊自身抗体阳性的ITP患儿中,Treg数量降低,伴随增殖相关蛋白磷酸化水平及细胞自噬水平的降低。 展开更多

关键词 免疫性血小板减少症(ITP) 调节性T细胞(Treg) 自噬相关基因5(atg5) 自噬相关基因7(atg7)

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芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制 被引量：20

2

作者 程建超 童佳兵 +5 位作者 朱洁 张星星 高雅婷 陈杨 李泽庚 郑莉莉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期29-35,共7页

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用... 目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg^-1灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80.48 g·kg^-1灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 mL;联合组每日按80.48 g·kg^-1灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0.4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31.2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P<0.01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。 展开更多

关键词 芪玉三龙汤 肺癌 自噬 自噬关键分子酵母atg6同系物(Beclin1) 自噬相关基因5(atg5) 微管相关蛋白1轻链3(LC3B)

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miR-148b-3p通过靶向自噬相关基因14(ATG14)抑制急性髓系白血病细胞增殖与自噬 被引量：2

3

作者 蒋雪坷 敬一佩 +6 位作者 雷力 彭美茜 肖巧玲 任俊 陶永红 黄军鹏 张伶 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期881-890,共10页

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和自噬的影响及其机制。方法基于基因表达数据集(GEO)和癌症基因组图谱(TCGA),采用生物信息学软件分析miR-148b-3p在AML细胞中的表达及其与患者临床预后的关系;实时... 目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和自噬的影响及其机制。方法基于基因表达数据集(GEO)和癌症基因组图谱(TCGA),采用生物信息学软件分析miR-148b-3p在AML细胞中的表达及其与患者临床预后的关系;实时荧光定量PCR检测AML细胞中miR-148b-3p表达。用脂质体法将miR-148b-3p模拟物(miR-148b-3p mimic)和miR-148b-3p抑制物(miR-148b-3p inhibitor)分别瞬时转入THP-1和NB4细胞,采用CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测细胞增殖,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62和自噬相关基因14(ATG14)蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-148b-3p对ATG14的靶向结合,回复实验观察miR-148b-3p/ATG14轴对AML细胞表型的影响。结果AML患者细胞低表达miR-148b-3p,miR-148b-3p低表达的AML患者总体生存率较对照组显著降低;过表达miR-148b-3p可抑制THP-1细胞增殖和促进凋亡、并下调LC3Ⅱ、ATG14及上调P62蛋白水平,而抑制NB4细胞中miR-148b-3p表达则观察到相反的作用;此外,miR-148b-3p能显著降低野生型ATG14表达载体的荧光素酶活性,回复实验结果显示过表达ATG14可逆转miR-148b-3p上调对细胞增殖和自噬的抑制作用,而抑制ATG14表达则能减弱miR-148b-3p下调对细胞表型的促进作用。结论miR-148b-3p通过靶向结合ATG14抑制AML细胞的体外增殖和自噬。 展开更多

关键词 微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p) 自噬相关基因14(atg14) 急性髓系白血病(AML) 细胞增殖 细胞自噬

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牛ATG10基因的克隆、原核表达、纯化和生物信息学分析

4

作者 贺渊秀 付强 +3 位作者 塞力克·杰恩斯 李丹 葛丽娟 史慧君 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第11期15-20,137,共7页

为了获得牛自噬相关基因10(ATG10)蛋白,试验参照GenBank中牛ATG10基因设计引物,PCR扩增ATG10基因,与pET-N-His-TEV载体连接,测序鉴定正确后用IPTG诱导ATG10蛋白表达,利用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化,Western-blot鉴定ATG10蛋白表达情... 为了获得牛自噬相关基因10(ATG10)蛋白,试验参照GenBank中牛ATG10基因设计引物,PCR扩增ATG10基因,与pET-N-His-TEV载体连接,测序鉴定正确后用IPTG诱导ATG10蛋白表达,利用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化,Western-blot鉴定ATG10蛋白表达情况,通过生物信息学在线软件对ATG10蛋白进行分析,获得其相应的理化性质及参数。结果表明:克隆得到的ATG10基因序列长度约为705 bp,测序鉴定正确后得到pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体,IPTG成功诱导表达了ATG10蛋白,分子量为28 ku;ATG10蛋白与兔抗ATG10抗体特异性结合;ATG10蛋白是一种较为稳定的、含38个潜在的磷酸化位点、无跨膜区及信号肽的亲水性蛋白,二级结构中无规则卷曲占比44.44%,与ATG5、ATG12、ATG16L1、ATG3等多个自噬相关蛋白相互作用。说明试验成功构建出pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体,并获得ATG10蛋白。 展开更多

关键词 自噬相关基因10(atg10) 基因克隆 原核表达 纯化 生物信息学分析

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自噬相关基因Atg3在埃博拉病毒组装过程中的作用研究

5

作者 刘鑫 王斌 +2 位作者 姚晓雨 郑永辉 范春玲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期888-894,共7页

自噬是真核细胞清除胞内冗余物质的降解机制,也是细胞针对病原体入侵的一种天然免疫机制。自噬相关基因3(Autophagy-related gene 3,Atg3)在细胞自噬发生过程中起决定性作用。为研究Atg3对埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)组装的影响,本研... 自噬是真核细胞清除胞内冗余物质的降解机制,也是细胞针对病原体入侵的一种天然免疫机制。自噬相关基因3(Autophagy-related gene 3,Atg3)在细胞自噬发生过程中起决定性作用。为研究Atg3对埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)组装的影响,本研究首先根据CRISPR/Cas9技术构建了携带有Atg3基因靶向向导RNA(guide RNA,gRNA)、表达Cas9的重组质粒pSpCas-Atg3,将此质粒转染至人胚胎肾细胞293T中,之后采用流式分选结合有限稀释法筛选单细胞克隆。细胞基因测序及Western Blot试验表明成功获得了Atg3基因敲除的细胞系。在Agt3基因敲除细胞系和野生型细胞中分别共同转染表达EBOV囊膜蛋白(Glycoprotein,GP)和基质蛋白的重组质粒,包装病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP);同时在两种细胞中组装整合有EBOV的重组HIV假病毒,获得的假病毒感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),通过测定报告基因的活性判定病毒对细胞的侵入能力。结果显示Atg3基因缺失后,VLP所整合的GP蛋白显著增多,假病毒对细胞的侵染能力也明显增强(P<0.001),表明Agt3能够负调控EBOV的组装和入侵。本研究为开发新抗病毒药物提供了新思路。 展开更多

关键词 自噬(Autophagy) 自噬相关基因3(atg3) 埃博拉病毒(EBOV) 囊膜蛋白(GP)

原文传递

日本三角涡虫细胞自噬基因Atg5的克隆和功能研究

6

作者 马克学 郭芳莹 +4 位作者 李睿 宋鸽鸽 吴萌 陈广文 刘德增 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1233-1240,共8页

细胞自噬相关基因Atg5在细胞自噬过程中发挥重要作用,其功能丧失损坏神经发生和轴突再生。涡虫是研究脑再生的良好模型,其头部切除后1周就能再生出1个新的脑结构。因此,研究Atg5基因在涡虫脑再生中的作用对探究自噬调控神经再生具有重... 细胞自噬相关基因Atg5在细胞自噬过程中发挥重要作用,其功能丧失损坏神经发生和轴突再生。涡虫是研究脑再生的良好模型,其头部切除后1周就能再生出1个新的脑结构。因此,研究Atg5基因在涡虫脑再生中的作用对探究自噬调控神经再生具有重要意义。本研究克隆了日本三角涡虫Atg5基因(DjAtg5)的全长cDNA序列,并利用RNAi技术研究了其在涡虫再生中作用。结果显示,DjAtg5 cDNA全长1014 bp,编码284个氨基酸。DjATG5含有ATG5蛋白质家族的Pfam结构域和高度保守的ATG5-ATG12相互结合位点。切割虫体后,DjAtg5表达显著增加。再生3~5天,其转录本主要在新再生的脑结构表达。但是,敲降DjAtg5并未引起涡虫脑再生异常,且对涡虫干细胞的增殖也未见明显影响。研究结果表明,DjAtg5参与涡虫脑结构的重新形成,但不是涡虫再生的重要调控因子。然而,自噬抑制剂3-MA能够阻止涡虫再生,说明细胞自噬机制对涡虫再生非常重要。 展开更多

关键词 日本三角涡虫 细胞自噬 自噬相关基因5(atg5) 脑再生 RNA干扰

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细胞自噬与凋亡相互作用分子机制的研究进展 被引量：19

7

作者 张杨 孙弯弯 +1 位作者 陆丽丹 冯晓玲 《基础医学与临床》 2021年第9期1342-1346,共5页

细胞自噬与细胞凋亡是两个不同的生理现象,但其在功能上有着密切的联系。本文主要介绍细胞自噬和凋亡的分类及发生过程,并就自噬体形成过程中的一些关键调节蛋白以及凋亡和抗凋亡蛋白的双重作用对自噬和凋亡的影响进行论述,从而探讨细... 细胞自噬与细胞凋亡是两个不同的生理现象,但其在功能上有着密切的联系。本文主要介绍细胞自噬和凋亡的分类及发生过程,并就自噬体形成过程中的一些关键调节蛋白以及凋亡和抗凋亡蛋白的双重作用对自噬和凋亡的影响进行论述,从而探讨细胞自噬与凋亡之间的关系,以期为进一步研究自噬与凋亡相关疾病提供理论基础。 展开更多

关键词 分子机制 自噬相关基因(atg) CASPASE

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自噬相关基因LC3和ATG5在胃癌中的表达及临床意义 被引量：12

8

作者 许祥云 陈书昌 +3 位作者 孔德九 侯欣欣 陈强 陈静 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第14期1939-1945,共7页

目的探讨自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和自噬相关基因-5(autophagy related gene-5,ATG5)在胃癌细胞发生发展不同阶段的表达情况并分析其临床意义。方法选取胃黏膜正常细胞、... 目的探讨自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和自噬相关基因-5(autophagy related gene-5,ATG5)在胃癌细胞发生发展不同阶段的表达情况并分析其临床意义。方法选取胃黏膜正常细胞、胃黏膜不典型增生细胞、胃癌细胞共58例,分别记为正常组(17例)、不典型组(19例)、胃癌组(22例),采用qRT-PCR、Western Blot、免疫组织化学法检测每组中自噬相关基因LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达水平,应用SPSS 23.0软件分析正常组、不典型组、胃癌组3组间LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达情况,并分析LC3和ATG5蛋白表达的相关性以及LC3和ATG5蛋白表达与胃癌患者临床病理学参数的关系。结果正常组、不典型组、胃癌组中LC3和ATG5 mRNA及蛋白表达水平逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。LC3蛋白表达情况与性别、年龄、浸润深度、分化程度及淋巴结状态均不存在相关性。ATG5蛋白表达情况与浸润深度、分化程度及淋巴结状态均有相关性。LC3和ATG5蛋白在3组中均呈正相关(P<0.05)。结论细胞自噬可促进胃癌的发生发展,其机制可能与LC3、ATG5过度表达有关。LC3、ATG5在促进胃癌的发生发展中起相互协同的作用。 展开更多

关键词 胃癌 自噬 微管相关蛋白1轻链3(LC3) 自噬相关基因-5(atg5)

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结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响 被引量：5

9

作者 赵勇 师长宏 +4 位作者 张彩勤 毛峰峰 白冰 伍静 张海 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第6期13-16,共4页

目的研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。方法H37Rv菌株感染小鼠巨噬细胞后加入纯化的重组ESAT6-CFP10融合蛋白,通过透射电镜检测自噬体的形成。提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR及Western b... 目的研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。方法H37Rv菌株感染小鼠巨噬细胞后加入纯化的重组ESAT6-CFP10融合蛋白,通过透射电镜检测自噬体的形成。提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR及Western blot方法检测自噬相关基因(atg)分子水平和蛋白表达水平。结果ESAT6-CFP10融合蛋白可抑制小鼠巨噬细胞自噬体的形成,并导致atg分子表达水平下降,其中atg8表达量下降最为明显。结论MTB ESAT6-CFP10融合蛋白通过调控atg分子表达水平影响小鼠巨噬细胞自噬功能。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 ESAT6-CFP10融合蛋白 自噬 自噬相关基因(atg)

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石榴ATG基因家族鉴定及其在非生物胁迫下的表达模式分析 被引量：4

10

作者 刘司瑜 林艺灵 +5 位作者 王令宇 夏家欣 杨毓贤 房经贵 王晨 上官凌飞 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期37-49,共13页

利用生物信息学方法,从石榴(Punica granatum Linn.)品种‘突尼斯’(‘Tunisia’)基因组中鉴定自噬相关基因(ATG)家族成员,并对其蛋白质理化性质、染色体定位、基因结构、系统进化、共线关系和表达模式进行了分析。结果表明:从石榴基因... 利用生物信息学方法,从石榴(Punica granatum Linn.)品种‘突尼斯’(‘Tunisia’)基因组中鉴定自噬相关基因(ATG)家族成员,并对其蛋白质理化性质、染色体定位、基因结构、系统进化、共线关系和表达模式进行了分析。结果表明:从石榴基因组中共鉴定出58个ATG基因,定位在8条染色体上。58个石榴ATG家庭成员可分为6个亚族。58个石榴ATG基因中3对基因存在共线关系;石榴与拟南芥[Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.]和葡萄(Vitis vinifera Linn.)ATG基因家族成员间分别存在45和41对共线关系。转录组数据挖掘显示:PgVTI12b-1、PgATG1b-1、PgATG8h-1、PgATG8c-2和PgATG8c-35个基因在ABA缓解干旱胁迫的响应中差异表达;NaCl胁迫下,石榴根和叶中分别有11和8个ATG基因差异表达,且PgATG6b、PgTORb和PgATG1b-2基因在根和叶中均差异表达。实时荧光定量PCR验证发现石榴ATG基因的表达模式与转录组结果基本一致。综合分析结果表明:PgVTI12b-1、PgATG1b-1、PgATG8h-1、PgATG8c-2和PgATG8c-3基因参与石榴叶对ABA缓解干旱胁迫的响应,而PgATG6b、PgTORb和PgATG1b-2基因则同时参与石榴根和叶对NaCl胁迫的响应。 展开更多

关键词 石榴 自噬相关基因(atg) 基因家族鉴定 非生物胁迫 表达模式

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miR-543调控ATG-7影响肝癌细胞HepG2凋亡 被引量：1

11

作者 余涛 吴琪芳 《江西医药》 CAS 2023年第3期271-276,共6页

目的探讨microRNA-543(miR-543)通过调控其靶基因自噬相关基因7(ATG-7)对肝癌细胞凋亡的影响。方法通过荧光定量PCR及western blot实验观察多株肝癌细胞株里miR-543和ATG-7的表达情况;选取与人源胚胎肾细胞(293T)相比ATG-7高表达的HepG... 目的探讨microRNA-543(miR-543)通过调控其靶基因自噬相关基因7(ATG-7)对肝癌细胞凋亡的影响。方法通过荧光定量PCR及western blot实验观察多株肝癌细胞株里miR-543和ATG-7的表达情况;选取与人源胚胎肾细胞(293T)相比ATG-7高表达的HepG2肝癌细胞分组,瞬时转染miR-543摸拟物和miR-543抑制剂,在HepG2细胞中使用Western blot方法检测ATG-7蛋白表达变化,再使用qRT-PCR检测miR-543和ATG-7的mRNA水平;经过microRNA数据库预测miR-543与ATG-7的结合区域,构建ATG-73’UTR野生型及突变型的荧光素酶质粒和miR-543质粒后,通过荧光素酶报告基因实验观察野生型及突变型的荧光素酶活性变化;用流式细胞仪检测转染miR-543模拟物和ATG-7质粒的HepG2细胞凋亡情况。结果多株肝癌细胞株中ATG-7蛋白水平表达情况不一,ATG-7的mRNA和miR-543表达水平呈负相关;选用ATG-7相对高表达的HepG2细胞,过表达miR-543后发现miR-543 mRNA升高后,ATG-7蛋白和mRNA水平随之降低;降低miR-543,ATG-7蛋白和mRNA水平随之升高;通过荧光素酶报告基因证实miR-543结合ATG-7 mRNA 3’UTR区域的特定序列来降低ATG-7的mRNA水平;通过细胞凋亡实验证实miR-543通过下调ATG-7抑制肝癌细胞凋亡。结论在肝癌细胞中miR-543下调ATG-7抑制肝癌细胞的凋亡。 展开更多

关键词 自噬相关基因7(atg-7) 肝癌 细胞凋亡

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ATG3 rs2638029、rs3732817基因多态性与广西地区抗中性粒细胞胞质抗体相关性小血管炎的相关性

12

作者 韦静思 饶金兰 +4 位作者 朱艳 黄山珊 黎伟 黄莉 薛超 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期2645-2649,共5页

目的探讨广西地区人群自噬相关基因(ATG)3 rs2638029、rs3732817位点多态性与原发抗中性粒细胞胞质抗体相关性小血管炎(AAV)的关联关系。方法采用多重PCR结合高通量测序技术检测194例AAV患者(AAV组)和195例健康成人(对照组)ATG3 rs2638... 目的探讨广西地区人群自噬相关基因(ATG)3 rs2638029、rs3732817位点多态性与原发抗中性粒细胞胞质抗体相关性小血管炎(AAV)的关联关系。方法采用多重PCR结合高通量测序技术检测194例AAV患者(AAV组)和195例健康成人(对照组)ATG3 rs2638029、ATG3 rs3732817位点的基因型,并收集受试者相关临床资料,分析其基因多态性与AAV易感性、临床症状的关系。结果ATG3 rs2638029、ATG3 rs3732817等位基因和基因型在AAV组和对照组分布差异无统计学意义(P>0.05),两位点存在连锁不平衡(D′=0.969,r^(2)=0.249),两位点可构建3个常见单体型,在AAV组和对照组中,各单体型分布差异无统计学意义(P>0.05)。ATG3 rs2638029及rs3732817不同基因型之间,水肿、血尿、蛋白尿症状发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。ATG3 rs2638029位点不同基因型IgG水平分布差异有统计学意义(P<0.05)。ATG3 rs3732817位点不同基因型白蛋白水平分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论广西人群中的AAV患者ATG3基因多态性可能与IgG水平升高、低白蛋白血症相关联,但可能与AAV患者的遗传易感性无明显关联性。 展开更多

关键词 自噬相关基因(atg)3 抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎 自噬 多态性 单核苷酸

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自噬相关基因4a在超氧化物歧化酶1- G93A突变型肌萎缩侧索硬化症转基因鼠大脑皮层和纹状体的表达

13

作者 梁婵婵 陈燕春 +7 位作者 刘金梦 张雅雯 王巧真 王箐 蒋欣 林宝勇 原萌 刘焕彩 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期2462-2466,共5页

目的检测自噬相关基因(Atg)4a在不同时期超氧化物歧化酶(SOD)1-G93A突变型肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠大脑皮层和纹状体中表达以探究Atg4a与ALS发病的关系。方法 SOD1-G93A突变型ALS转基因鼠和同窝野生型WT鼠于95 d(发病早期)、108 d... 目的检测自噬相关基因(Atg)4a在不同时期超氧化物歧化酶(SOD)1-G93A突变型肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠大脑皮层和纹状体中表达以探究Atg4a与ALS发病的关系。方法 SOD1-G93A突变型ALS转基因鼠和同窝野生型WT鼠于95 d(发病早期)、108 d(中期)和122 d(晚期)分别取材,运用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大脑皮层和纹状体中Atg4a mRNA水平,运用Western印迹技术检测蛋白水平,运用免疫荧光双标技术进行形态学检测。结果与WT鼠相比,ALS鼠大脑皮层中Atg4a mRNA和蛋白在发病95 d和108 d表达上调,122 d下调,而纹状体中Atg4a mRNA在95 d、108 d和122 d均上调,Atg4a蛋白则在95 d、108 d表达上调,122 d下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。Atg4a在大脑皮层和纹状体中与神经元共表达。108 d,与WT鼠相比,ALS鼠大脑皮层和纹状体中Atg4a免疫反应性均显著增强(P<0.05)。结论 Atg4a在大脑皮层和纹状体中的异常表达与SOD1-G93A突变型ALS转基因鼠发病关系密切。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 自噬 转基因鼠 自噬相关基因(atg)4a 大脑皮层 纹状体

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miR-23b通过调控ATG12抑制宫颈癌细胞自噬并逆转顺铂耐药性

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作者 杨晓钟 马文霞 +1 位作者 葛鹏 郑明 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2021年第10期877-884,共8页

目的探讨microRNA-23b(miR-23b)通过调控自噬相关基因-12(ATG12)的表达抑制宫颈癌细胞自噬并逆转顺铂耐药性的作用机制。方法采用顺铂长期浓度梯度递增法体外建立HeLa/DDP耐药细胞株,分别转染阴性空质粒(miR-NC组)和miR-23b mimics(miR-... 目的探讨microRNA-23b(miR-23b)通过调控自噬相关基因-12(ATG12)的表达抑制宫颈癌细胞自噬并逆转顺铂耐药性的作用机制。方法采用顺铂长期浓度梯度递增法体外建立HeLa/DDP耐药细胞株,分别转染阴性空质粒(miR-NC组)和miR-23b mimics(miR-23b mimics组),另将未经处理的HeLa/DDP细胞作为空白对照组,将自噬诱导剂雷帕霉素干预细胞作为miR-23b mimics+雷帕霉素组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法和Western blotting法检测miR-23b和ATG12表达。双荧光素酶报告实验分析miR-23b的靶基因。采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测各组细胞对顺铂的敏感性。另外采用电镜和共聚焦显微镜观察各组细胞自噬体的形成情况。结果历时6个月,成功建立HeLa/DDP细胞,其耐药指数为14.613±0.319。与HeLa细胞比较,HeLa/DDP细胞中miR-23b表达量下降(1.02±0.13 vs.0.45±0.08),而ATG12蛋白表达量升高(0.31±0.03 vs.0.90±0.08),差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,ATG12是miR-23b下游靶基因。与空白对照组和miR-NC组比较,miR-23b mimics组HeLa/DDP细胞中GFP-LC3绿色荧光的细胞质小点明显减少,且ATG12蛋白表达量降低(P<0.05);但是miR-23b mimics+雷帕霉素组细胞中出现大量GFP-LC3荧光小泡。经流式细胞术检测,miR-23b mimics组HeLa/DDP细胞凋亡率明显高于空白对照组和miR-NC组,而miR-23b mimics+雷帕霉素组细胞凋亡率则低于miR-23b mimics组(P<0.05)。结论miR-23b与宫颈癌细胞对顺铂获得性耐药有关,而ATG12是miR-23b抑制耐药细胞自噬的下游蛋白。 展开更多

关键词 宫颈癌 miR-23b 顺铂耐药 自噬相关基因-12(atg12) 自噬

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自噬相关基因Atg7的表达对乙型肝炎病毒复制的影响 被引量：6

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作者 王阳 车阳 +4 位作者 高玉雪 杨通旺 张玉林 陈德喜 石英 《中国医药导报》 CAS 2020年第2期4-8,共5页

目的探讨Atg7的表达对乙型肝炎病毒感染肝细胞中HBV复制的影响。方法选取2019年4~5月首都医科大学附属北京市佑安医院慢性乙型肝炎病毒感染者的肝组织石蜡切片,采用免疫荧光染色观察Atg7、LC3和HBs的表达情况;利用Atg7表达质粒和小干扰... 目的探讨Atg7的表达对乙型肝炎病毒感染肝细胞中HBV复制的影响。方法选取2019年4~5月首都医科大学附属北京市佑安医院慢性乙型肝炎病毒感染者的肝组织石蜡切片,采用免疫荧光染色观察Atg7、LC3和HBs的表达情况;利用Atg7表达质粒和小干扰RNA在HepG2.2.15细胞中建立Atg7过表达组及Atg7减少组,给予不同时间段的饥饿处理,利用蛋白质免疫印迹和实时定量PCR观察两组模型中自噬及HBV病毒复制水平的变化。采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。结果在HBs阳性细胞中,Atg7和LC3的表达量高于HBs阴性细胞;Atg7过表达饥饿处理后,自噬水平、HBc和HBV-DNA表达量高于对照,且自噬和HBV的复制水平在饥饿6 h增加最显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Atg7敲减饥饿处理后,细胞自噬水平、HBc和HBV DNA表达量均低于对照,在饥饿6 h减少最为显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论HBV感染引起Atg7的表达增加,自噬增强;在自噬早期干预Atg7的表达会显著影响HBV复制。 展开更多

关键词 自噬相关基因atg7 乙型肝炎病毒 自噬 乙肝病毒脱氧核糖核酸

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细胞自噬相关蛋白在大鼠脾脏撞击伤后12小时内脾组织中的表达 被引量：1

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作者 欧阳骏骏 牛玉林 《中国临床研究》 CAS 2019年第1期18-22,共5页

目的观察自噬基因相关蛋白在大鼠脾脏撞击伤后12 h内脾组织内的表达情况。方法选用清洁级健康SD大鼠20只,随机分为正常对照组(A组)、创伤后2 h组(B组)、创伤后8 h组(C组)、创伤后12 h组(D组),每组5只。B、C、D组利用生物撞击机建立脾脏... 目的观察自噬基因相关蛋白在大鼠脾脏撞击伤后12 h内脾组织内的表达情况。方法选用清洁级健康SD大鼠20只,随机分为正常对照组(A组)、创伤后2 h组(B组)、创伤后8 h组(C组)、创伤后12 h组(D组),每组5只。B、C、D组利用生物撞击机建立脾脏撞击伤模型,A组只麻醉不撞击,麻醉后立即处死取出脾脏,B、C、D组分别于撞击后相应时间取出脾脏,评估脾脏出现损伤的程度。创伤脾组织标本进行HE染色,显微镜下观察受损脾组织的特征。大体标本观察造模是否成功。采用免疫组织化学法及Western blot法检测各组脾组织酵母自噬相关基因Atg6的同源物(Beclin1)、酵母自噬相关基因Atg8的同源物微管相关蛋白1轻链蛋白3(LC3)蛋白的表达。结果 (1)脾撞击伤模型均造模成功。同一撞击力度下不同受伤时间模型组大鼠脾脏裂伤长度和深度基本一致(P均> 0. 05)。(2) HE染色显示模型组脾组织符合脾破裂征象。(3)免疫组织化学法及Western blot法检测显示,模型大鼠随创伤后时间推移(2 h组→8 h组→12 h组),其脾组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白相对表达量递升(P均<0. 05),且模型大鼠各时间组均高于对照组(P均<0. 05)。结论脾脏撞击伤可导致脾组织自噬水平的上升;脾脏撞击伤后12 h内脾组织自噬相关蛋白水平随时间的推移,表达逐渐升高。 展开更多

关键词 脾脏撞击伤 自噬 酵母自噬相关基因atg6的同源物 酵母自噬相关基因atg8的同源物微管相关蛋白1轻链蛋白3

原文传递

饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答观察 被引量：1

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作者 刘宇坤 胡杨 +5 位作者 卯升义 许安永 邹迪 熊喆 成文敏 赵红业 《山东医药》 CAS 2020年第18期21-24,共4页

目的观察饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答情况,并探讨其相关分子机制。方法将MDA-MB-231细胞分为四组,对照组加入DMEM培养液正常培养;Baf-A1组在DMEM培养液中加入100 nM的Baf-A1;EBSS(饥饿)组加入EBSS培养液;EBSS+Baf-... 目的观察饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答情况,并探讨其相关分子机制。方法将MDA-MB-231细胞分为四组,对照组加入DMEM培养液正常培养;Baf-A1组在DMEM培养液中加入100 nM的Baf-A1;EBSS(饥饿)组加入EBSS培养液;EBSS+Baf-A1(自噬阻断)组在EBSS培养液中加入100 nM的Baf-A1,四组均处理8 h后,分别采用实时荧光定量法和Western blotting法检测各组微管相关蛋白轻链3(LC3B)、自噬相关蛋白7(ATG7)和自噬相关蛋白4A(ATG4A)的mRNA及蛋白。结果与对照组比较,EBSS组LC3B、ATG7 mRNA相对表达量升高,ATG4A mRNA相对表达量降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3B mRNA相对表达量升高、ATG7 mRNA相对表达量降低,与Baf-A1组对比,EBSS+Baf-A1组中LC3B mRNA相对表达量增加,ATG7和ATG4A mRNA相对表达量降低。与对照组比较,EBSS组LC3BⅡ/LC3BⅠ升高,ATG4A蛋白表达降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低;与Baf-A1组相比,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低。结论EBSS处理的MDA-MB-231细胞自噬水平升高,细胞自噬体形成增多,在此过程中EBSS可能通过增加ATG7 mRNA的表达量增加细胞自噬水平。 展开更多

关键词 细胞自噬 饥饿 微管相关蛋白轻链3 自噬相关基因atg7 自噬相关蛋白4A 三阴性乳腺癌

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